專利名稱：一種白藜蘆醇的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種利用釀酒酵母發(fā)酵葡萄酒渣制備白藜蘆醇的方法，屬生物工程領 域。
背景技術：
每年世界葡萄總產(chǎn)量中80%用于釀酒，由葡萄的世界產(chǎn)量可知，葡萄酒的世界年 產(chǎn)量也是個龐大的數(shù)字。中國的葡萄酒產(chǎn)業(yè)發(fā)展歷史較短，但隨著中國經(jīng)濟的騰飛，其葡萄 酒生產(chǎn)的發(fā)展速度也是相當驚人。據(jù)統(tǒng)計，從1996年至2004年，中國葡萄酒的產(chǎn)量從17 刀噸增長到40萬噸，年平均增長率為11. 3%。據(jù)報道，2010年我國葡萄酒年產(chǎn)量有望達 到80萬噸。由于葡萄酒的大量生產(chǎn)和消費，同時也產(chǎn)生了大量的葡萄釀酒后的副產(chǎn)品—— 葡萄酒渣(葡萄皮渣、籽、梗)。一些發(fā)達國家如法國、意大利、西班牙等這些葡萄酒生產(chǎn)大 國，其葡萄廢棄物的70%以上均能得到很好的利用，但我國常年來由于葡萄酒生產(chǎn)季節(jié)性 強、生產(chǎn)集中，導致這些廢棄物往往來不及處理就被隨意拋棄或作為廢料處理掉，這不僅影 響環(huán)境衛(wèi)生，而且也是對資源的極度浪費。研究表明，釀酒后的葡萄廢棄物中含有大量以植 物多酚為主的生物活性物質，如白藜蘆醇、酚酸、黃酮、原花青素等，這些物質具有非常重要 的生理功能特性，因此有極大的開發(fā)前景。本發(fā)明采用釀酒酵母發(fā)酵葡萄酒渣，經(jīng)過酒精提取、精致后制備白藜蘆醇，本產(chǎn)品 可以廣泛應用于保健食品中。白藜蘆醇具有抗癌、保護心血管、抗氧化、抗自由基、抗血小板 聚集、雌激素樣、抗炎等生理作用，因此，開發(fā)和利用白藜蘆醇不僅為葡萄皮渣的綜合利用 開辟了新途徑，還可帶來巨大的經(jīng)濟效益和社會效益，具有廣闊的開發(fā)前景。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于提供一種白藜蘆醇的制備方法。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的本發(fā)明中所涉及的百分比除另有注明之外為質量 比，本發(fā)明的產(chǎn)品采用這樣的方法來制備的1.釀酒酵母的選擇及培養(yǎng)基的制備本發(fā)明選擇的釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)購置于中國工業(yè)微生物菌 種包藏中心，編號為31482，培養(yǎng)基為5° Β 麥芽汁。2.發(fā)酵菌株的誘變及馴化過程菌種的誘變采用紫外線照射原生質體的方法。取經(jīng)0. 6u/mL青霉素預處理1. 5h 的菌液5mL于離心管中，4000r/min離心，棄上清液，用高滲液洗滌菌體2次，配成高滲菌懸 液，加入1. Orag/mL溶菌酶于34°C保溫15h，離心洗滌，用高滲液懸浮，制成原生質體高滲懸 浮液。采用15W紫外燈，距離30cm，照射O 30s，邊攪拌邊照射，力求使菌體均勻吸收紫 外線光波，以上照射過程在暗室中進行，以免光修復。將經(jīng)過紫外線誘變后的菌體轉入到無 菌試管中，并立即浸入冰水中l(wèi)h，在低溫條件下，細胞內參與對突變體修復的各種酶類活性受到抑制，使修復難以進行，有利于提高突變率。采用夾層法于32°C恒溫箱中培養(yǎng)48h，從培養(yǎng)至對數(shù)生長期的平板上隨機挑取若 干個單菌落接種到試管瓊脂斜面中，在28°C培養(yǎng)5d后，挑取菌體生長相對較好的試管中的 菌體用搖瓶進行復篩。復篩將菌體生長相對較好的試管中的菌體分別接種到盛有200mL發(fā)酵培養(yǎng)基的 500mL三角瓶中，在28°C，150轉/分鐘條件下培養(yǎng)3d，檢測葡萄糖苷酶活，選擇酶活500u 以上的菌種均可作為發(fā)酵葡萄酒渣出發(fā)菌株。葡萄糖苷酶活檢測方法β 一葡萄糖苷酶活力國際單位定義為以P-NPG (對-硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷) 為底物，在一定的分析條件下，每min釋放Inmol對一硝基苯酚所需要的酶量為一個活力單 位。在一定條件，β -葡萄糖苷酶能夠水解對-硝基苯酚-β -D-葡萄糖苷中的糖苷 鍵，生成對-硝基苯酚，在堿性條件下顯黃色，可以通過比色法定量測定該黃色物質的含 量，進而計算出葡萄糖苷酶的活力。準確稱量對-硝基苯酚139. Omg，用蒸餾水定容至 1000ml。分別吸取該溶液l，2，3，4，5，6mL至IOOmL容量瓶中，用lmol/L Na2CO3溶液定容后 混勻，使每mL稀釋液分別含有對-硝基苯酚0. 01，0. 02，0. 03，0. 04，0. 05，0. 06 μ mol。以蒸 餾水為空白，在400nm吸收波長下測定其吸光值，以對一硝基苯酚濃度為橫坐標，吸光度為 縱坐標，繪制標準曲線。在三個IOmL具塞試管中順次加入0. 6mLpH7. 2檸檬酸一磷酸氫二鈉緩沖液，0. 2mL 粗酶提取液，0. 2mL10mMp-NPG，迅速蓋上試管塞立即放到37°C的水浴鍋中反應30min，然后 立即加入2. OmL IMNa2CO3溶液終止反應，在對-硝基苯酚的最佳吸收波長處檢測吸光值。 空白對照0. 2mL的IOmMp-NPG用0. 2mLpH7. 2檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液代替粗酶液。酶活計算
酶活=YXV2XV/KXV1XMXT其中Y為酶促反應的吸光度；V為酶液的提取總量(mL) 為反應體系中酶液量 (mL) ；V為總反應液量(mL) ;V2為總反應液量(mL) ；K為對一硝基苯酚標準曲線的斜率；M為 試樣重(g) ；T為反應時間(min)。3.直投式粉末凍干菌種的制備3.1母發(fā)酵劑的制備量取釀酒酵母培養(yǎng)基200ml于1只500ml三角瓶內，121 °C滅菌20分鐘冷卻至 30°C，用接種環(huán)接種誘變后的出發(fā)酵母菌株斜面一環(huán)，在30°C、150轉/分鐘搖床培養(yǎng)培養(yǎng) 36小時，作為母發(fā)酵劑。3. 2生產(chǎn)發(fā)酵劑的制備首先配置10%的脫脂奶乳濁液，121 °C滅菌20分鐘冷卻至28°C，分別按2%體積比 例接種母發(fā)酵劑，28°C、150轉/分鐘搖床培養(yǎng)培養(yǎng)，檢測發(fā)酵液酵母活菌數(shù)≥ IO9個/ml， 視同為發(fā)酵成熟，如果活菌數(shù)< IO9個/ml，繼續(xù)培養(yǎng)，直至達到IO9個/ml，結束培養(yǎng)，凍干 待用。
3. 3粉末凍干菌種的制備將成熟的生產(chǎn)發(fā)酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加蓋瓶塞 后放入-30°C冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥，制得直 投式粉末凍干菌種。4.白藜蘆醇的制備4. 1葡萄酒渣的預處理將葡萄酒渣(水分含量< 5% )加入其重量5倍的去離子水，通過膠體磨超微粉 碎，100目過篩后制成葡萄酒渣漿料，每噸漿料添加20公斤蔗糖，經(jīng)過121°C高溫滅菌20分 鐘，然后冷卻至28°C，準備接種釀酒酵母。4. 2葡萄酒渣發(fā)酵將經(jīng)過4. 1步驟預處理的葡萄酒渣漿料添加3. 3步驟制備的粉末凍干菌種，添加 量為每噸葡萄酒渣漿料添加粉末凍干菌種125-130克，然后攪拌均勻，28°C、攪拌速度120 轉/分鐘，保溫發(fā)酵55-60小時，110°C滅酶10分鐘，結束發(fā)酵。4. 3白藜蘆醇的提取4. 3. 1渣漿分離用10000轉/分鐘的管式離心機分離漿渣，保存漿料備用。4. 3. 2乙醇提取用百分比濃度為40-45% (V/V)的乙醇作為提取溶劑，乙醇與經(jīng)過4. 3. 1步驟處 理的漿料體積比為10 1，提取溫度40-42°C，提取時間40分鐘，提取過程中每5分鐘攪拌 30秒，攪拌速度120轉/分鐘。4. 3. 3白藜蘆醇收集用15000轉/分鐘的管式離心機，分離經(jīng)過4. 3. 2步驟處理的漿料，獲得的固體即 為白藜蘆醇粗品。4. 3. 4白藜蘆醇精致用90-95% (V/V)的乙醇浸泡洗滌經(jīng)過4. 3. 3步驟處理的白藜蘆醇粗品，90-95% (V/V)的乙醇用量為待處理的白藜蘆醇粗品重量的3-4倍，浸泡洗滌時間為50-60分鐘， 15000轉/分鐘管式離心機分離后，獲得精致白藜蘆醇，然后95°C烘干去除水分，直至檢測 產(chǎn)品中水分小于1%，即可獲得白藜蘆醇。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明作更詳細的描述實施例一1.釀酒酵母的選擇及培養(yǎng)基的制備本發(fā)明選擇的釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)購置于中國工業(yè)微生物菌 種包藏中心，編號為31482，培養(yǎng)基為5° Β 麥芽汁。2.發(fā)酵菌株的誘變及馴化過程菌種的誘變采用紫外線照射原生質體的方法。取經(jīng)0. 6u/mL青霉素預處理1. 5h 的菌液5mL于離心管中，4000r/min離心，棄上清液，用高滲液洗滌菌體2次，配成高滲菌懸 液，加入1. Orag/mL溶菌酶于34°C保溫15h，離心洗滌，用高滲液懸浮，制成原生質體高滲懸
5浮液。采用15W紫外燈，距離30cm，照射0 30s，邊攪拌邊照射，力求使菌體均勻吸收紫 外線光波，以上照射過程在暗室中進行，以免光修復。將經(jīng)過紫外線誘變后的菌體轉入到無 菌試管中，并立即浸入冰水中l(wèi)h，在低溫條件下，細胞內參與對突變體修復的各種酶類活性 受到抑制，使修復難以進行，有利于提高突變率。采用夾層法于32°C恒溫箱中培養(yǎng)48h，從培養(yǎng)至對數(shù)生長期的平板上隨機挑取若 干個單菌落接種到試管瓊脂斜面中，在28°C培養(yǎng)5d后，挑取菌體生長相對較好的試管中的 菌體用搖瓶進行復篩。復篩將菌體生長相對較好的試管中的菌體分別接種到盛有200mL發(fā)酵培養(yǎng)基的 500mL三角瓶中，在28°C，150轉/分鐘條件下培養(yǎng)3d，檢測葡萄糖苷酶活，選擇酶活500u 以上的菌種均可作為發(fā)酵葡萄酒渣出發(fā)菌株。葡萄糖苷酶活檢測方法β 一葡萄糖苷酶活力國際單位定義為以P-NPG(對-硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷) 為底物，在一定的分析條件下，每min釋放Inmol對一硝基苯酚所需要的酶量為一個活力單 位。在一定條件，β -葡萄糖苷酶能夠水解對_硝基苯酚_ β -D-葡萄糖苷中的糖苷 鍵，生成對-硝基苯酚，在堿性條件下顯黃色，可以通過比色法定量測定該黃色物質的含 量，進而計算出葡萄糖苷酶的活力。準確稱量對-硝基苯酚139. Omg，用蒸餾水定容至 1000ml。分別吸取該溶液l，2，3，4，5，6mL至IOOmL容量瓶中，用lmol/L Na2CO3溶液定容后 混勻，使每mL稀釋液分別含有對-硝基苯酚0. 01，0. 02，0. 03，0. 04，0. 05，0. 06 μ mol。以蒸 餾水為空白，在400nm吸收波長下測定其吸光值，以對一硝基苯酚濃度為橫坐標，吸光度為 縱坐標，繪制標準曲線。在三個IOmL具塞試管中順次加入0. 6mLpH7. 2檸檬酸一磷酸氫二鈉緩沖液，0. 2mL 粗酶提取液，0. 2mL10mMp-NPG，迅速蓋上試管塞立即放到37°C的水浴鍋中反應30min，然后 立即加入2. OmLlMNa2CO3溶液終止反應，在對-硝基苯酚的最佳吸收波長處檢測吸光值?？?白對照0. 2mL的IOmMp-NPG用0. 2mLpH7. 2檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液代替粗酶液。酶活計算
YXV2XV
酶活=_
KXV1XMXT其中Y為酶促反應的吸光度；V為酶液的提取總量(mL) 為反應體系中酶液量 (mL) ；V為總反應液量(mL) ;V2為總反應液量(mL) ；K為對一硝基苯酚標準曲線的斜率；M為 試樣重(g) ；T為反應時間(min)。3.直投式粉末凍干菌種的制備3. 1母發(fā)酵劑的制備量取釀酒酵母培養(yǎng)基200ml于1只500ml三角瓶內，121 °C滅菌20分鐘冷卻至 30°C，用接種環(huán)接種誘變后的出發(fā)酵母菌株斜面一環(huán)，在30°C、150轉/分鐘搖床培養(yǎng)培養(yǎng) 36小時，作為母發(fā)酵劑。3. 2生產(chǎn)發(fā)酵劑的制備
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首先配置10%的脫脂奶乳濁液，121 °C滅菌20分鐘冷卻至28°C，分別按2%體積比 例接種母發(fā)酵劑，28°C、150轉/分鐘搖床培養(yǎng)培養(yǎng)，檢測發(fā)酵液酵母活菌數(shù)，^ IO9個/ml， 視同為發(fā)酵成熟，如果活菌數(shù)< IO9個/ml，繼續(xù)培養(yǎng)，直至達到IO9個/ml，結束培養(yǎng)，凍干 待用。3. 3粉末凍干菌種的制備將成熟的生產(chǎn)發(fā)酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加蓋瓶塞 后放入-30°C冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥，制得直 投式粉末凍干菌種。4.白藜蘆醇的制備4. 1葡萄酒渣的預處理將葡萄酒渣(水分含量< 5% )加入其重量5倍的去離子水，通過膠體磨超微粉 碎，100目過篩后制成葡萄酒渣漿料，每噸漿料添加20公斤蔗糖，經(jīng)過121°C高溫滅菌20分 鐘，然后冷卻至28°C，準備接種釀酒酵母。4. 2葡萄酒渣發(fā)酵將經(jīng)過4. 1步驟預處理的葡萄酒渣漿料添加3. 3步驟制備的粉末凍干菌種，添加 量為每噸葡萄酒渣漿料添加粉末凍干菌種125克，然后攪拌均勻，28°C、攪拌速度120轉/ 分鐘，保溫發(fā)酵55-60小時，110°C滅酶10分鐘，結束發(fā)酵。4. 3白藜蘆醇的提取4. 3. 1渣漿分離用10000轉/分鐘的管式離心機分離漿渣，保存漿料備用。4. 3. 2乙醇提取用百分比濃度為40-45% (V/V)的乙醇作為提取溶劑，乙醇與經(jīng)過4. 3. 1步驟處 理的漿料體積比為10 1，提取溫度40-42°C，提取時間40分鐘，提取過程中每5分鐘攪拌 30秒，攪拌速度120轉/分鐘。4. 3. 3白藜蘆醇收集用15000轉/分鐘的管式離心機，分離經(jīng)過4. 3. 2步驟處理的漿料，獲得的固體即 為白藜蘆醇粗品。4. 3. 4白藜蘆醇精致用90-95% (V/V)的乙醇浸泡洗滌經(jīng)過4. 3. 3步驟處理的白藜蘆醇粗品，90-95% (V/V)的乙醇用量為待處理的白藜蘆醇粗品重量的3-4倍，浸泡洗滌時間為50-60分鐘， 15000轉/分鐘管式離心機分離后，獲得精致白藜蘆醇，然后95°C烘干去除水分，直至檢測 產(chǎn)品中水分小于1 %，即可獲得白藜蘆醇。實施例二 1.釀酒酵母的選擇及培養(yǎng)基的制備本發(fā)明選擇的釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)購置于中國工業(yè)微生物菌 種包藏中心，編號為31482，培養(yǎng)基為5° Β 麥芽汁。2.發(fā)酵菌株的誘變及馴化過程菌種的誘變采用紫外線照射原生質體的方法。取經(jīng)0. 6u/mL青霉素預處理1. 5h 的菌液5mL于離心管中，4000r/min離心，棄上清液，用高滲液洗滌菌體2次，配成高滲菌懸液，加入1. Orag/mL溶菌酶于34°C保溫15h，離心洗滌，用高滲液懸浮，制成原生質體高滲懸 浮液。采用15W紫外燈，距離30cm，照射O 30s，邊攪拌邊照射，力求使菌體均勻吸收紫 外線光波，以上照射過程在暗室中進行，以免光修復。將經(jīng)過紫外線誘變后的菌體轉入到無 菌試管中，并立即浸入冰水中l(wèi)h，在低溫條件下，細胞內參與對突變體修復的各種酶類活性 受到抑制，使修復難以進行，有利于提高突變率。采用夾層法于32°C恒溫箱中培養(yǎng)48h，從培養(yǎng)至對數(shù)生長期的平板上隨機挑取若 干個單菌落接種到試管瓊脂斜面中，在28°C培養(yǎng)5d后，挑取菌體生長相對較好的試管中的 菌體用搖瓶進行復篩。復篩將菌體生長相對較好的試管中的菌體分別接種到盛有200mL發(fā)酵培養(yǎng)基的 500mL三角瓶中，在28°C，150轉/分鐘條件下培養(yǎng)3d，檢測葡萄糖苷酶活，選擇酶活500u 以上的菌種均可作為發(fā)酵葡萄酒渣出發(fā)菌株。葡萄糖苷酶活檢測方法β 一葡萄糖苷酶活力國際單位定義為以P-NPG(對-硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷) 為底物，在一定的分析條件下，每min釋放Inmol對一硝基苯酚所需要的酶量為一個活力單 位。在一定條件，β-葡萄糖苷酶能夠水解對-硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷中的糖苷 鍵，生成對-硝基苯酚，在堿性條件下顯黃色，可以通過比色法定量測定該黃色物質的含 量，進而計算出葡萄糖苷酶的活力。準確稱量對-硝基苯酚139. Omg，用蒸餾水定容至 1000ml。分別吸取該溶液l，2，3，4，5，6mL至IOOmL容量瓶中，用lmol/L Na2CO3溶液定容后 混勻，使每mL稀釋液分別含有對-硝基苯酚0. 01，0. 02，0. 03，0. 04，0. 05，0. 06 μ mol。以蒸 餾水為空白，在400nm吸收波長下測定其吸光值，以對一硝基苯酚濃度為橫坐標，吸光度為 縱坐標，繪制標準曲線。在三個IOmL具塞試管中順次加入0. 6mLpH7. 2檸檬酸一磷酸氫二鈉緩沖液，0. 2mL 粗酶提取液，0. 2mL10mMp-NPG，迅速蓋上試管塞立即放到37°C的水浴鍋中反應30min，然后 立即加入2. OmLlMNa2CO3溶液終止反應，在對-硝基苯酚的最佳吸收波長處檢測吸光值?？?白對照0. 2mL的IOmMp-NPG用0. 2mLpH7. 2檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液代替粗酶液。酶活計算
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酶活_
KXV1XMXT其中Y為酶促反應的吸光度；V為酶液的提取總量(mL) 為反應體系中酶液量 (mL) ；V為總反應液量(mL) ;V2為總反應液量(mL) ；K為對一硝基苯酚標準曲線的斜率；M為 試樣重(g) ；T為反應時間(min)。3.直投式粉末凍干菌種的制備3. 1母發(fā)酵劑的制備量取釀酒酵母培養(yǎng)基200ml于1只500ml三角瓶內，121 °C滅菌20分鐘冷卻至 30°C，用接種環(huán)接種誘變后的出發(fā)酵母菌株斜面一環(huán)，在30°C、150轉/分鐘搖床培養(yǎng)培養(yǎng) 36小時，作為母發(fā)酵劑。
3. 2生產(chǎn)發(fā)酵劑的制備首先配置10%的脫脂奶乳濁液，121 °C滅菌20分鐘冷卻至28°C，分別按2%體積比 例接種母發(fā)酵劑，28°C、150轉/分鐘搖床培養(yǎng)培養(yǎng)，檢測發(fā)酵液酵母活菌數(shù)，^ IO9個/ml， 視同為發(fā)酵成熟，如果活菌數(shù)< IO9個/ml，繼續(xù)培養(yǎng)，直至達到IO9個/ml，結束培養(yǎng)，凍干 待用。3. 3粉末凍干菌種的制備將成熟的生產(chǎn)發(fā)酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加蓋瓶塞 后放入-30°C冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥，制得直 投式粉末凍干菌種。4.白藜蘆醇的制備4.1葡萄酒渣的預處理將葡萄酒渣(水分含量< 5% )加入其重量5倍的去離子水，通過膠體磨超微粉 碎，100目過篩后制成葡萄酒渣漿料，每噸漿料添加20公斤蔗糖，經(jīng)過121°C高溫滅菌20分 鐘，然后冷卻至28°C，準備接種釀酒酵母。4. 2葡萄酒渣發(fā)酵將經(jīng)過4. 1步驟預處理的葡萄酒渣漿料添加3. 3步驟制備的粉末凍干菌種，添加 量為每噸葡萄酒渣漿料添加粉末凍干菌種130克，然后攪拌均勻，28°C、攪拌速度120轉/ 分鐘，保溫發(fā)酵55-60小時，110°C滅酶10分鐘，結束發(fā)酵。4. 3白藜蘆醇的提取4. 3.1渣漿分離用10000轉/分鐘的管式離心機分離漿渣，保存漿料備用。4. 3. 2乙醇提取用百分比濃度為40-45% (V/V)的乙醇作為提取溶劑，乙醇與經(jīng)過4. 3. 1步驟處 理的漿料體積比為10 1，提取溫度40-42°C，提取時間40分鐘，提取過程中每5分鐘攪拌 30秒，攪拌速度120轉/分鐘。4. 3. 3白藜蘆醇收集用15000轉/分鐘的管式離心機，分離經(jīng)過4. 3. 2步驟處理的漿料，獲得的固體即 為白藜蘆醇粗品。4. 3. 4白藜蘆醇精致用90-95% (V/V)的乙醇浸泡洗滌經(jīng)過4. 3. 3步驟處理的白藜蘆醇粗品，90-95% (V/V)的乙醇用量為待處理的白藜蘆醇粗品重量的3-4倍，浸泡洗滌時間為50-60分鐘， 15000轉/分鐘管式離心機分離后，獲得精致白藜蘆醇，然后95°C烘干去除水分，直至檢測 產(chǎn)品中水分小于1 %，即可獲得白藜蘆醇。
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權利要求
一種白藜蘆醇的制備方法，其特征是制備釀酒酵母生產(chǎn)發(fā)酵劑，生產(chǎn)發(fā)酵劑活菌數(shù)≥109個/ml，然后進行凍干處理獲得釀酒酵母凍干菌種，將葡萄酒渣加入其重量5倍的去離子水，通過膠體磨超微粉碎，100目過篩后制成葡萄酒渣漿料，每噸漿料添加20公斤蔗糖，經(jīng)過121℃高溫滅菌20分鐘，然后冷卻至28℃，每噸葡萄酒渣漿料接種釀酒酵母凍干菌種125 130克，保溫發(fā)酵55 60小時，離心除渣后，取上清液用40 45％(V/V)的乙醇進行醇沉，取沉淀用90 95％(V/V)的乙醇洗滌精致、烘干后獲得白藜蘆醇。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種白藜蘆醇的制備方法。首先采用紫外線照射原生質體的方法誘變釀酒酵母，選擇葡萄糖苷酶活500u以上的誘變菌株，以10％脫脂乳粉液作為發(fā)酵培養(yǎng)基，培養(yǎng)酵母活菌數(shù)≥109個/ml后，制備釀酒酵母凍干菌種。將葡萄酒渣加入其重量5倍的去離子水，通過膠體磨超微粉碎，100目過篩后制成葡萄酒渣漿料，每噸漿料添加20公斤蔗糖，經(jīng)過121℃高溫滅菌20分鐘，然后冷卻至28℃，接種釀酒酵母凍干菌種，保溫發(fā)酵55-60小時，離心除渣后，取上清液用40-45％(V/V)的乙醇進行醇沉，取沉淀用90-95％(V/V)的乙醇洗滌精致、烘干后獲得白藜蘆醇。
文檔編號C12N13/00GK101914579SQ20101022933
公開日2010年12月15日 申請日期2010年7月19日 優(yōu)先權日2010年7月19日
發(fā)明者滕春紅, 郭興罡, 陳成, 陳杰 申請人:哈爾濱市海澳斯生物科技開發(fā)有限公司