專利名稱：一株可用于生物防腐保鮮的乳酸菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株可用于生物防腐保鮮的乳酸菌及其在水果防腐保鮮中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前，果實(shí)采后損失是一個(gè)全球性問題，已引起世界范圍內(nèi)的極大關(guān)注。我國(guó)每年 約有8000萬(wàn)噸蔬菜、水果腐爛，果蔬采后損失率達(dá)20% 40%，損失總價(jià)值近800億元。在世界范圍內(nèi)，新鮮水果貯藏過(guò)程中有25%的產(chǎn)品因腐爛變質(zhì)而不能利用。有些 易腐水果采后腐爛損失達(dá)30%以上。1992年我國(guó)水果產(chǎn)量達(dá)2440萬(wàn)噸，估計(jì)因采后病害 所致?lián)p失達(dá)610萬(wàn)噸。1998年果品總產(chǎn)量達(dá)5452. 9萬(wàn)噸，估計(jì)損失1363萬(wàn)噸。近年來(lái)， 隨著產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，我國(guó)果業(yè)迅猛發(fā)展，水果栽培面積為1. 54億畝，總產(chǎn)量達(dá)8500萬(wàn)余 噸，占世界總產(chǎn)量40%，但出口量不足我國(guó)總產(chǎn)量1%，貯藏保鮮量不足產(chǎn)量的20%。因此 保證采后果蔬的品質(zhì)、延長(zhǎng)其保存期限、防止其腐敗變質(zhì)、減小腐爛損失是我國(guó)果蔬采后保 鮮亟待解決的問題。隨著科技的發(fā)展，利用設(shè)施設(shè)備控制外部條件(如氣調(diào)、低溫、減壓貯藏等)將成 為果蔬貯藏保鮮技術(shù)的主流。但從目前的情況看，我國(guó)水果的冷藏能力不足總產(chǎn)量的5%， 氣調(diào)貯藏能力不足總產(chǎn)量的1%，減壓貯藏還處于研究階段，而且，當(dāng)這些措施通過(guò)市場(chǎng)系 統(tǒng)運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，如果冷鏈系統(tǒng)不完善，果蔬一旦處于常態(tài)下，其帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失相當(dāng)嚴(yán)重。因此， 使用保鮮劑無(wú)疑成為采后保鮮的一項(xiàng)獨(dú)立而不可或缺的措施，它將引起人們廣泛的關(guān)注。防腐劑根據(jù)其來(lái)源不同，可分為天然防腐劑和化學(xué)合成防腐劑兩大類。隨著社會(huì) 生活水平的不斷提高和消費(fèi)者對(duì)健康的日益關(guān)注，人們對(duì)防腐劑之類的食品添加劑在安全 性能上提出了更高的要求。長(zhǎng)期的研究表明，化學(xué)合成防腐劑存在致癌性、致畸性和易引起 食物中毒等問題；天然防腐劑不但對(duì)人體健康無(wú)害，而且還具有一定的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，所以越來(lái) 越多的研究者開始把目光投向天然防腐劑的開發(fā)。在天然防腐劑中，有一大類肽類防腐劑， 由于其安全無(wú)毒害，甚至某些成分對(duì)人體有保健作用而受到人們的廣泛關(guān)注。如乳酸鏈球 菌素(Nisin)就是其中比較有代表性的一類防腐劑，其研究開發(fā)將會(huì)對(duì)我國(guó)乃至世界食品 業(yè)的發(fā)展做出卓越貢獻(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明旨在篩選出一株高效乳酸菌，與安全高效的酸化劑混 合使用，通過(guò)梨和草莓的體外保鮮模擬試驗(yàn)，來(lái)研究乳酸菌在水果防腐保鮮上的作用，為研 究天然的生物保鮮劑提供參考價(jià)值和理論依據(jù)。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一株可用于生物防腐保鮮的乳酸菌，該菌株命名為L(zhǎng)actobacillus plantarum，已 于2010年06月21日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC M 2010150。所述乳酸菌的菌種生物學(xué)特性如下該菌種的細(xì)胞大小為(0.6 μπι 0. 9 μ m) X (1. 5 μ m 5. 0 μ m)，短桿或近球狀，無(wú)鞭毛，不產(chǎn)芽孢，單個(gè)或呈鏈狀排列；該菌
4種能在MRS瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，菌落呈乳白色，圓形，規(guī)則，中央凸起，表面光滑，質(zhì)地均勻， 而且在挑取菌體時(shí)有一定的黏性；該菌種屬于同型發(fā)酵乳酸菌，能夠發(fā)酵果糖、半乳糖、乳 糖、麥芽糖、甘露糖、蔗糖，不能發(fā)酵鼠李糖、棉籽糖、阿拉伯糖；接觸酶試驗(yàn)、產(chǎn)氨試驗(yàn)、水解 淀粉試驗(yàn)、乙酰甲基甲醇試驗(yàn)(V. P.反應(yīng))和甲基紅反應(yīng)(M.R.反應(yīng))等均為陰性；最適生 長(zhǎng)溫度為30 37°C，能在10°C生長(zhǎng)，45°C不生長(zhǎng)，兼性厭氧，在pH值4. 5 9. 5生長(zhǎng)，最適 pH值6.0左右。所述乳酸菌可用于水果防腐保鮮，具體應(yīng)用時(shí)，方法為先將酸化劑加熱溶解于 水，降溫至常溫后加入菌粉混勻，噴霧方式噴灑到水果上，然后將水果在常溫(10 25°C ) 或低溫(4 6V )下儲(chǔ)存。在常溫(10 25°C )條件下，水果可保鮮3個(gè)月；低溫(4 6°C )條件下，水果可保鮮6個(gè)月。所述酸化劑為蔗糖、酒石酸和山梨酸鉀三者的混合物，蔗糖、酒石酸和山梨酸鉀三 者的質(zhì)量比為100 4 3 ；溶解于水時(shí)，每IOOOmL水中，溶解有蔗糖100g、酒石酸4g、山 梨酸鉀3g;酸化劑與菌粉的用量比例為112 5(質(zhì)量比)，混勻后，菌的濃度為5X106 5X107CFU/mL。所述菌粉是通過(guò)以下步驟得到的(i)菌種選用植物乳桿菌 Lactobacillus plantarum, CCTCC M 2010150 ；(ii)斜面培養(yǎng)將凍干粉菌種接種于固體斜面培養(yǎng)基上，在30 42°C培養(yǎng)22 26h ；(iii) 一級(jí)種子培養(yǎng)取培養(yǎng)好的斜面，在無(wú)菌條件下接種于50mL IOOmL種子 液體培養(yǎng)基中，在30 42°C條件下，靜置培養(yǎng)12 16h，制得一級(jí)種子液；(iv)擴(kuò)大培養(yǎng)以5%的接種量，將一級(jí)種子液接于500mL IOOOmL種子液體培 養(yǎng)基中，在30 42°C條件下，靜置培養(yǎng)6 16h，制得二級(jí)種子液；(ν)發(fā)酵罐培養(yǎng)以5%的接種量，將二級(jí)種子液接于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，于30 42 °C條件下，靜置培養(yǎng)14 22h ；(vi)收集發(fā)酵產(chǎn)物待步驟(ν)之發(fā)酵液黏度達(dá)12000 15000cP時(shí)，收集發(fā)酵 液；(vii)發(fā)酵結(jié)束后，立即將發(fā)酵液離心并用清水清洗，如此反復(fù)2 3遍后冷凍干 燥，粉碎，即為菌粉成品；或發(fā)酵結(jié)束后，立即噴霧干燥，即得菌粉成品。上述步驟(iii)、(iv)中所述種子液體培養(yǎng)基配方為葡萄糖20g/L、蛋白胨IOg/ L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L，使用時(shí)，調(diào)節(jié)pH至5. 5 6. 5，115°C條件下滅菌20min ；步驟 ( )所述固體斜面培養(yǎng)基為上述種子液體培養(yǎng)基中添加1. 5 2. 0%的瓊脂粉；步驟(ν) 中所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、乙 酸鈉5g/L、檸檬酸銨2g/L、磷酸氫二鉀5g/L、硫酸鎂0. 5g/L、硫酸錳0. 2g/L、吐溫_801mL/ L,使用時(shí)，調(diào)節(jié)pH至5. 5 6. 5。一種防腐保鮮制劑，是由以下原料組成的蔗糖、酒石酸、山梨酸鉀、菌粉和水，其 中，每IOOOmL水中，溶解有蔗糖100g、酒石酸4g、山梨酸鉀3g，菌粉5g ；所述菌為可用于生 物防腐保鮮的乳酸菌，命名為L(zhǎng)actobacillus plantarum，已于2010年06月21日保藏于中 國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC M 2010150。使用時(shí)，將防腐保鮮制劑以噴霧方式噴灑到水果上即可。
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本發(fā)明的植物乳桿菌Lactobacillus plantarum,CCTCC M 2010150是從眾多乳酸 菌中篩選得到的，其不但可以防治果皮褐變，降低果實(shí)發(fā)病率，還可以適當(dāng)減少果實(shí)水分揮 發(fā)，抑制水果的新陳代謝，延長(zhǎng)保鮮期。


本發(fā)明提供的可用于生物防腐保鮮的乳酸菌命名為L(zhǎng)actobacillus plantarum, 已于2010年06月21日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC M 2010150。圖1為病原菌(Li)病變及孢子示意圖，其中，a為病原菌Ll對(duì)梨的病害圖，b為將 病原菌Ll回接梨后發(fā)病圖，c為病原菌Ll的孢子圖。圖2為病原菌(L2)病變及孢子示意圖，其中，a為病原菌L2對(duì)梨的病害圖，b為將 病原菌L2回接梨后發(fā)病圖，c為病原菌L2的孢子圖。圖3為病原菌(Pl)病變及孢子示意圖，其中，a為病原菌Pl對(duì)蘋果的病害圖，b為 將病原菌Pl回接蘋果后發(fā)病圖，C為病原菌Pl的孢子圖。圖4為病原菌(P2)病變及孢子示意圖，其中，a為病原菌P2對(duì)蘋果的病害圖，b為 將病原菌P2回接蘋果后發(fā)病圖，c為病原菌P2的孢子圖。圖5為病原菌(Tl)病變及孢子(T1、T2)示意圖，其中，a為病原菌Tl對(duì)桃的病害 圖，b為病原菌T2的孢子圖，c為病原菌T2的孢子圖。圖6為梨的失重率變化圖。圖7為梨保鮮試驗(yàn)中各組總糖含量變化圖。圖8為梨保鮮試驗(yàn)中各組糖酸比變化圖。圖9為梨保鮮試驗(yàn)中各組保鮮效果示意圖。圖10為草莓保鮮試驗(yàn)中第一批各組處理對(duì)草莓好果率的影響。圖11為草莓保鮮試驗(yàn)中第二批各組處理對(duì)草莓好果率的影響。圖12為草莓保鮮試驗(yàn)中補(bǔ)充試驗(yàn)的前3d各處理組好果率。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。實(shí)驗(yàn)1菌株的篩選1病原菌的分離與純化取發(fā)病但未產(chǎn)孢的蘋果、梨、桃子果品組織，切成0. 5cmX0. 5cmX0. 5cm的小塊， 然后依次用75%的酒精消毒30s、0. 升汞消毒Imin后，再用無(wú)菌水清洗3次，放到PDA 培養(yǎng)基上，30°C下恒溫培養(yǎng)。2病原菌的鑒定2. 1病原菌回接將上述病原菌純化后的培養(yǎng)物在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5d，用打孔器(Φ6πιπι)打餅，用 針刺傷果實(shí)(蘋果、梨、桃子)表面，將菌餅回接到果實(shí)上，用無(wú)菌棉加無(wú)菌水保濕，30°C培 養(yǎng)，觀察其發(fā)病情況是否與分離前相同，如果發(fā)病情況相同，由柯赫氏法則可知，此病癥就 是由分離純化的病原菌引發(fā)的。2. 2 鑒定
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挑取分離純化后的培養(yǎng)物在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7d，觀察其孢子形狀，大小，初步確 定出病原菌的屬，按陸家云《植物病原真菌學(xué)》進(jìn)行鑒定。3拮抗菌的篩選由于實(shí)驗(yàn)室對(duì)不同拮抗菌對(duì)病原菌的抑菌試驗(yàn)方法不同，故通過(guò)篩選，確定最佳 培養(yǎng)基及最佳培養(yǎng)方式。3. 1供試菌株拮抗劑芽孢菌Y1 Y3 ；乳酸菌R1 RlO ；酵母菌油脂酵母、畢赤酵母、粘紅 酵母、熱帶假絲酵母、絲孢酵母。上述菌種均由山東寶來(lái)利來(lái)生物工程股份有限公司生物研 究院菌種保藏室保存。病原菌鏈格孢L1、L2、P1、P2、T1和T2，從蘋果、桃和梨上分離純化獲得(即步驟 1中所得)。3. 2拮抗菌發(fā)酵液對(duì)病原菌的抑菌試驗(yàn)各種拮抗菌發(fā)酵液中產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)的抑菌試驗(yàn)及培養(yǎng)基的篩選。3. 2. 1將分離所得病原菌制成1 X 105CFU/mL孢子懸浮液，吸取0. 5mL制好的孢子 懸浮液均勻涂布到PDA培養(yǎng)基上，將牛津杯置于含有孢子懸液的PDA培養(yǎng)基上，加入255 μ L 的拮抗菌發(fā)酵液，將平板置于30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 3d，測(cè)定其抑菌圈直徑大小，并用無(wú)菌 水做空白對(duì)照，確定抑菌效果；其中，每組試驗(yàn)處理做3個(gè)平行。3. 2. 2為了篩選培養(yǎng)基，另在培養(yǎng)皿中倒入15mL營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，晾干后加0. 5mL 制好的病原菌孢子懸浮液和6mL冷卻至45°C的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，搖勻后放置晾干。然后將 牛津杯置于平板上加入255 μ L的拮抗菌發(fā)酵液，培養(yǎng)方法同3. 2. 1。3. 2. 3對(duì)于產(chǎn)孢較少的病原菌P1打餅(Φ 6mm)放置在PDA平板中央，距離菌絲塊 中央2. 5cm處放牛津杯，加入255 μ L的拮抗菌發(fā)酵液，培養(yǎng)方法同3. 2. 1。3. 3拮抗菌菌體對(duì)病原菌的抑菌試驗(yàn)3. 3. 1點(diǎn)接法篩選乳酸菌、芽孢菌在培養(yǎng)皿中倒入15mL營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，晾干后加0. 5mL制好的孢子懸浮液和6mL 冷卻至45°C的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，取適量拮抗菌的純培養(yǎng)物點(diǎn)于平板上，于30°C培養(yǎng)2 3d 后測(cè)量抑菌圈大小。3. 3. 2打餅法篩選酵母菌選用無(wú)菌水將培養(yǎng)Id的酵母洗下，吸取ImL涂布到酵母平板上，待長(zhǎng)滿整皿后用 直徑為6mm的打孔器打餅，用接種針接到含0. 5mL 1 X 105CFU/mL病原菌孢子懸浮液酵母培 養(yǎng)基上，2 3d后測(cè)量菌落直徑和抑菌帶寬度。3. 4混菌試驗(yàn)通過(guò)混菌試驗(yàn)來(lái)確定最低抑菌濃度。用無(wú)菌水將酵母菌配成5X 105CFU/mL、5X 106CFU/mL、5X 107CFU/mL、5X IO8CFU/ mL四種濃度，分別對(duì)103CFU/mL、104CFU/mL、105CFU/mL病原菌的孢子懸浮液進(jìn)行抑制，分別 吸取ImL混合于20mL營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，測(cè)定其抑菌情況。乳酸菌以109CFU/mL和108CFU/mL對(duì)105CFU/mL病原菌進(jìn)行抑制。4試驗(yàn)結(jié)果4，1病原菌分離結(jié)果
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4. 1. 1從梨上分離出2株病原菌，編號(hào)分別為L(zhǎng)i、L2。如圖1、圖2所示。4. 1.2從蘋果上分離出2株病原菌，編號(hào)分別為P1、P2，如圖3、圖4所示。4. 1. 3從桃上分離出2株病原菌，編號(hào)分別為Tl和T2，如圖5所示。由柯赫氏法則和陸家云的《植物病原真菌學(xué)》鑒定方法，得出引起蘋果、梨和桃黑 斑病的主要病原菌為鏈格孢。 4. 2拮抗菌發(fā)酵液抑菌試驗(yàn)結(jié)果4. 2. IPDA培養(yǎng)基涂布法培養(yǎng)鏈格孢時(shí)容易被細(xì)菌污染，且未污染的培養(yǎng)基其抑菌 圈不明顯，不易測(cè)量。故不用PDA涂布法做抑菌試驗(yàn)。4. 2. 2營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基牛津杯法對(duì)拮抗菌產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的能力進(jìn)行了篩選，芽孢 菌樣品編號(hào)依次為Y1、Y2、Y3，乳酸菌樣品編號(hào)依次為Rl R10，結(jié)果如表1所示。表1芽孢菌、乳酸菌發(fā)酵液對(duì)病原菌抑制作用 注“_”表示無(wú)抑菌帶。試驗(yàn)結(jié)果表明，芽孢菌對(duì)鏈格孢抑菌試驗(yàn)中產(chǎn)生抑菌圈，其中Y3對(duì)各病原菌的抑 菌作用較明顯，除T外都有抑菌圈，且較大。Yl作用較不明顯。乳酸菌對(duì)各鏈格孢的抑菌作 用表現(xiàn)為抑菌帶，抑制病原菌的菌絲生長(zhǎng)，使其顏色由灰白色變?yōu)辄S色，無(wú)透明抑菌圈。由 表1可知，R4和RlO產(chǎn)生的抑菌帶較寬。研究資料表明，酵母菌的拮抗機(jī)理一般為營(yíng)養(yǎng)競(jìng) 爭(zhēng)和寄生，抗生作用較少，故此試驗(yàn)未闡述酵母發(fā)酵液對(duì)病原菌的拮抗作用。4. 3拮抗菌菌體抑菌試驗(yàn)結(jié)果4. 3. 1點(diǎn)接法篩選乳酸菌和芽孢菌試驗(yàn)結(jié)果通過(guò)點(diǎn)接法篩選出拮抗菌菌體對(duì)病原菌抑制作用較強(qiáng)的菌株，如表2所示。
表2乳酸菌和芽孢菌抑菌試驗(yàn)結(jié)果
注“_”表示無(wú)抑菌帶。因酵母生長(zhǎng)速度較快，涂布法培養(yǎng)的酵母菌在平板上長(zhǎng)滿平皿且較均勻，故用菌 餅法測(cè)定其菌體對(duì)鏈格孢的抑制作用。由表3可知，油脂酵母和熱帶假絲酵母生長(zhǎng)速度較 快，具有較強(qiáng)的空間競(jìng)爭(zhēng)能力。熱帶假絲酵母生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生較大抑菌圈，其他菌株未產(chǎn)生 抑菌圈。綜合兩個(gè)數(shù)據(jù)結(jié)果，故選擇油脂酵母和熱帶假絲酵母做為后續(xù)試驗(yàn)備選菌株。4. 4混菌試驗(yàn)結(jié)果當(dāng)熱帶假絲酵母5 X 106CFU/mL和油脂酵母5 X 107CFU/mL濃度時(shí)，可完全抑制 105CFU/mL、104CFU/mL、103CFU/mL三種濃度的鏈格孢生長(zhǎng)；當(dāng)油脂酵母為5 X 106CFU/mL 時(shí)，前2d能抑制住病原菌，但第3d病原菌又長(zhǎng)出，不能完全抑制；當(dāng)兩株酵母菌的濃度為 5X 105CFU/mL時(shí)都不能抑制105CFU/mL、104CFU/mL鏈格孢的生長(zhǎng)。由此可知，在濃度相同情 況下，熱帶假絲酵母比油脂酵母的抑菌能力更強(qiáng)，故酵母菌中選擇熱帶假絲酵母為下一步 體外拮抗試驗(yàn)的候選菌株。乳酸菌以109CFU/mL和108CFU/mL對(duì)105CFU/mL病原菌進(jìn)行抑制，但乳酸菌在固體 培養(yǎng)基上培養(yǎng)菌落較小，病原菌長(zhǎng)勢(shì)較乳酸菌快，故其體外抑菌濃度可參照酵母菌進(jìn)行，比 酵母菌濃度高一個(gè)數(shù)量級(jí)。由高濃度篩選，逐漸降低抑菌濃度。芽孢菌與酵母菌平板生長(zhǎng)速度、菌落大小相似，且液體發(fā)酵菌濃度相同，故可以酵 母菌的最低抑菌濃度為參考濃度，做下一步保鮮試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)2水果的防腐保鮮體外模擬試驗(yàn)1梨的保鮮試驗(yàn) 注“_”表示無(wú)抑菌帶。從拮抗菌發(fā)酵液對(duì)病原菌的抑制試驗(yàn)知，對(duì)每株菌的抑制作用大小基本一致，故 以下試驗(yàn)選用致病性和產(chǎn)孢能力均較強(qiáng)的L2、T2和P2菌株。由表2可知，乳酸菌菌落較 小，對(duì)不同的病原菌的抑制作用不同。部分表現(xiàn)出抗生作用，但抑菌帶寬度較小，RlO和R4 是10株乳酸菌中菌落直徑和抑菌帶寬度均較大的2株菌。芽孢菌3株菌中，Y3菌落直徑 較大，具有較強(qiáng)的空間競(jìng)爭(zhēng)能力。抑菌帶寬度Y3與Y2差異不顯著。綜合兩個(gè)指標(biāo)，篩選出 R4、RlO和Y3作為后續(xù)體外拮抗試驗(yàn)候選菌株。4. 3. 2酵母菌菌餅抑菌試驗(yàn)結(jié)果如表3所示表3抑菌試驗(yàn)中酵母菌菌落及對(duì)病原菌抑菌帶寬度表
酵母菌
^jt油脂酵母畢赤酵母粘紅酵母熱帶假絲酵母絲孢酵母
.f丙原菌
11.7 9.3
0.0
.5 .3
2 0
0.6
1.011.
9 10.
O 3 7
3.6.5.- - · 2 11
L2T2P2L2PP2
菌落直徑 抑菌寬度 /m 彐 /mm
1. 1梨河北水晶梨，從市場(chǎng)買回。1. 2處理將梨用洗潔精清洗，自然晾干。分設(shè)10個(gè)組，每組30個(gè)果，各組按表4 所示處理，貯存3個(gè)月，期間測(cè)定其失重率、總糖、總酸、維生素C(Vc)、硬度和可溶性固形物 的含量等理化指標(biāo)，每隔2d測(cè)一次，每次測(cè)兩個(gè)果。記錄其色澤、氣味、肉質(zhì)、口感等感官指 標(biāo)，以及腐爛率、好果率等。表4各組處理方法 2草莓的保鮮試驗(yàn)2. 1草莓江蘇大棚種植草莓，采摘24h內(nèi)運(yùn)往山東，從市場(chǎng)買回。2. 2試驗(yàn)設(shè)計(jì)1:試驗(yàn)設(shè)14個(gè)試驗(yàn)組，CKl為未處理試驗(yàn)組，CK2為噴水對(duì)照組；其他按表5所示配 方設(shè)計(jì)。每組30個(gè)果，記錄每天草莓的好果率，腐爛果率，色澤，口感等。表5試驗(yàn)方案
1 設(shè)11個(gè)試驗(yàn)組，其中兩個(gè)對(duì)照組，CKl為未處理對(duì)照組，CK2為噴水對(duì)照組；其他按 表6所示配方設(shè)計(jì)。每組30個(gè)果，記錄每天草莓的好果率，腐爛果率，色澤，口感，氣味等。表6試驗(yàn)方案 注表中“酸化劑”為表5中的酸化劑2。2. 4補(bǔ)充試驗(yàn)為了進(jìn)一步摸索菌粉與酸化劑的比例，補(bǔ)充試驗(yàn)以保鮮效果比較 好的Lp和酸化劑2為主，做不同濃度的篩選，以確定最佳使用濃度，筆者設(shè)計(jì)了如下方案。 表7試驗(yàn)方案
試驗(yàn)組號(hào)
處理
3統(tǒng)計(jì)分析方法
對(duì)上述試驗(yàn)所得到的數(shù)據(jù)，采用DPS分析軟件進(jìn)行分析。 4結(jié)果
4. 1梨的保鮮試驗(yàn)結(jié)果
4.1.1失重率如表8所示，根據(jù)表8的數(shù)據(jù)，繪制圖6。 表8失重率隨時(shí)間的變化
11
殼聚糖J
從表8和圖6可知，隨著時(shí)間的變化，梨的失重率越來(lái)越大。第0、1、4、9組即對(duì)照、 .乳酸菌和酸化劑組的失重率較其他組小，36d時(shí)失重率分別是3. 3%,3.5%,3.6% 和3. 7%，從外觀看，梨較飽滿，口感脆度較好，色澤較好。而第6，7，8組有部分果皮失水皺 縮，感官較差，口感脆度下降。4. 1. 2總糖如表9所示，根據(jù)表9中的數(shù)據(jù)繪制圖7。表9總糖含量的變化 由表9和圖7可知，總糖含量隨著時(shí)間的變化有曲折下降的趨勢(shì)。4、5組變化幅度 較對(duì)照組及其他組較小，較平穩(wěn)。且4，5，6組總糖含量較大，說(shuō)明這三組的保鮮劑抑制了梨 的呼吸強(qiáng)度，減緩了淀粉轉(zhuǎn)化為糖的速度。各組第49d達(dá)到較大值，筆者推測(cè)可能是貯存溫 度在10°C左右，呼吸躍變時(shí)間較晚，第49d才產(chǎn)生呼吸躍變，糖含量在呼吸躍變之后又呈下 降趨勢(shì)。4. 1.3總酸如表10所示。表10總酸含量的變化
12 從表10可知，總酸含量有曲折下降的變化趨勢(shì)。9組的酸度變化幅度較其他組小， 且總酸含量均值高于其他各組，說(shuō)明酸化劑對(duì)梨果實(shí)內(nèi)的有機(jī)酸有一定的保護(hù)作用；第1， 4，5組次之，各組之間無(wú)顯著差異。4. 1. 4糖酸比如表11所示，根據(jù)表11中所示的數(shù)據(jù)，繪制圖8。
表11糖酸比變化 由表11和圖8可知，0對(duì)照組、1殼聚糖、7乳酸菌+芽孢菌+酵母菌和8殼聚糖+ 酸化劑組糖酸比第40d達(dá)到最大值，3殼聚糖+乳酸菌、4乳酸菌、5芽孢菌、6酵母菌和9酸 化劑組第46天達(dá)到最大值，比對(duì)照延遲了 6d ；4、5組變化幅度較小，且第4組糖酸比平均值 較其他各組都小，說(shuō)明第4組保鮮劑減緩了淀粉等轉(zhuǎn)化成糖的速率，減小了酸的消耗。第6 組緩慢上升，第46d達(dá)到最大值，后慢慢下降；0、1、2、3組變化幅度較大。4. 1. 5維生素C含量如表12所示。 表12Vc含量變化 由表12可知，Vc的含量隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，含量降低較快。由前9d梨的Vc含量 看，第9組和第8組Vc較高。由此可得，酸化劑對(duì)Vc具有一定的保護(hù)作用。IOd以后的梨 Vc含量均較低，故IOd之后的Vc含量不作為試驗(yàn)的保鮮參考指標(biāo)。 由表13可知，第9組酸化劑組硬度整體較大，且果肉脆度較好，其次是第1組殼聚 糖，第6組酵母菌組硬度最小，其他各組硬度與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。由此可知，酸化劑 組和殼聚糖組對(duì)梨的果肉硬度和脆度有一定的保護(hù)作用。4. 1. 7可溶性固形物如表14所示。表14可溶性固形物 由表14可知，第3組殼聚糖+乳酸菌組可溶性固形物的均值最高，其次是第四組 乳酸菌組，可溶性固形物較高，且變化較穩(wěn)定，與對(duì)照組有極顯著差異，由此可知，第3組殼 聚糖+乳酸菌組及第4組乳酸菌組，可減少可溶性固形物的消耗，減緩呼吸作用。
4. 1.8感官評(píng)價(jià)如表15所示c 表15綜合評(píng)價(jià) 注黑斑為表皮病癥，未傷及果肉。從表15可知，從色澤看，第4，5，6組即乳酸菌、芽孢菌、酵母菌組較好，都表現(xiàn)為鮮 黃色，而第1、2、3和8組色澤較差，呈現(xiàn)暗黃色，色澤暗淡無(wú)光，果皮褐變較嚴(yán)重；從好果率 看，貯藏IOOd后，第4組乳酸菌組最高，為100 %，硬度較硬，果肉脆度較好，果皮未發(fā)生皺 縮現(xiàn)象。第9組果皮色澤次之，果肉脆度較好，但隨著時(shí)貯存時(shí)間的延長(zhǎng)，果實(shí)發(fā)病率較高， 尤其是蒂腐病發(fā)病率較高。整體比較0、4、5組色澤、手感最好；9組次之；2、6較好；3、7、8、 1果皮褐變嚴(yán)重，手感較軟。4. 1.9效果圖如圖9所示。由圖9可知，第4、5、6組腐爛率較小，且色澤較好，果皮未發(fā)生褐變；而第8組及第 1組褐變最為嚴(yán)重，且失水軟化，果皮皺褶。第2、7組次之。第9組色澤較好，但隨貯藏時(shí)間 的增長(zhǎng)，其蒂腐病發(fā)病率較高。4. 2草莓保鮮試驗(yàn)結(jié)果4. 2. 1第一批草莓保鮮試驗(yàn)結(jié)果如表16所示，根據(jù)表16中的數(shù)據(jù)繪制圖10表16處理后草莓的保鮮效果 由表16和圖10可知，各處理后的草莓經(jīng)3d放置，顏色部分加深，香味變化不大； 從飽滿度指標(biāo)看，對(duì)照組、7340、7348及Lp等菌處理組水浸斑較嚴(yán)重，且有部分腐爛，可能 是處理過(guò)程中噴水較多導(dǎo)致，酸化劑1，2和殼+Lp、Lp+酸化劑2和殼+苯甲酸鈉組較好，水 浸斑較輕，光澤度較好，好果率較高，分別為40. 0%、40. 0%、46. 7%、76. 7%和46. 7%。從 圖10和表16可知，保鮮效果Lp+酸化劑2 (第11組)保鮮效果最好，比對(duì)照延長(zhǎng)3d，效果 顯著好于其他各組。故保鮮試驗(yàn)以Lp和酸化劑2為主，做不同濃度的篩選，以確定最佳使 用濃度。4. 2. 2第二批草莓保鮮試驗(yàn)結(jié)果如表17所示，根據(jù)表17中的數(shù)據(jù)繪制圖11。表17第二批處理后草莓的保鮮效果 由表17和圖11可知，用Lp+酸化劑處理的試驗(yàn)組草莓好果率保鮮效果都比對(duì)照 高。以Lp 5 X IO7+酸化劑原濃度試驗(yàn)組效果最好，第2d好果率仍為80%，飽滿度高，色澤 鮮亮，氣味酸甜，口感正常，可比對(duì)照延長(zhǎng)保鮮期Id。Lp 2.5Χ107+1/2濃度酸化劑試驗(yàn)組前3d保鮮鮮果亦較好，但第Id好果率高于其他各組許多，而第2d和第3d都較Lp 5 X IO7+ 酸化劑原濃度低，故本次試驗(yàn)推薦選用Lp 5X IO7+酸化劑原濃度最為保鮮劑參考濃度。草 莓在保鮮劑內(nèi)浸泡lOmin，取出自然晾干，其保鮮效果較噴霧保鮮效果差，且經(jīng)浸泡的草莓 晾干過(guò)程時(shí)間較長(zhǎng)，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。經(jīng)殼聚糖浸泡過(guò)的草莓保鮮Id后酸味較大，而經(jīng)酸化劑浸 泡過(guò)的草莓氣味較正常。
4. 2. 3補(bǔ)充試驗(yàn)結(jié)果如表18所示，根據(jù)表18中的數(shù)據(jù)繪制圖 表18補(bǔ)充試驗(yàn)草莓的保鮮效果 參照寶來(lái)利來(lái)生物工程股份有限公司產(chǎn)品青貯寶中乳酸菌的使用濃度，補(bǔ)充試驗(yàn) 補(bǔ)充了 LP 5X IO7以下的濃度5X107至5X105。由表18和圖12可知，處理第Id以第3、 7和11組較高，好果率分別為73. 3%、70. 0%和第66. 7%，第2d以第5、8和11組較好，好 果率分別為60. 0%,50. 0%和50. 0%;M 3d以第5、8和9組較高，分別為46. 7%,30. 0%和 30. 0%，均高于對(duì)照組；使用1/2酸的組整體比原濃度酸的組好果率低，建議酸化劑使用原 濃度；Lp濃度由5X IO7降低到IO6濃度，其保鮮效果好果率有上升趨勢(shì)，濃度到5X IO5時(shí)又 下降，故LP最佳使用濃度為5 X IO6 107，綜合三批草莓的保鮮試驗(yàn)，建議使用LP 5 X IO6+ 酸化劑原濃度。5 結(jié)論綜合上述實(shí)驗(yàn)1和實(shí)驗(yàn)2，得出以下結(jié)論(1)對(duì)蘋果、梨和桃的采后病害病原菌進(jìn)行分離，得到6株致病力較強(qiáng)的病原菌， 鑒定得知，其均為鏈格孢。(2)最佳篩選培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基。處理方法為先將培養(yǎng)皿中倒入15mL營(yíng)養(yǎng) 肉湯培養(yǎng)基，凝固后，吸ImLlO5CFUAiL的病原菌孢子懸浮液和6mL冷卻至45°C的營(yíng)養(yǎng)肉湯 培養(yǎng)基，混勻凝固。置于30°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)。此方法不容易污染，且病原菌長(zhǎng)勢(shì)均勻，抑菌圈 明顯。(3)通過(guò)拮抗菌發(fā)酵液和菌體對(duì)鏈格孢的抑菌試驗(yàn)，測(cè)定其菌落生長(zhǎng)直徑和抑菌帶寬度，從5株酵母菌、3株芽孢菌和10株乳酸菌中各篩選出1株酵母菌熱帶假絲酵母、1 株芽孢菌Y3和2株乳酸菌R4和RlO。(4)通過(guò)混菌試驗(yàn)，確定熱帶假絲酵母對(duì)105CFU/mL鏈格孢的最低抑制濃度為 5X 106CFU/mL。芽孢菌和乳酸菌的最低抑菌濃度參照酵母菌。(5)由梨的保鮮試驗(yàn)結(jié)果知酸化劑對(duì)梨的Vc含量和果肉硬度、水分含量及脆度 具有一定的保護(hù)作用，乳酸菌、酵母菌和芽孢菌可顯著抑制梨的腐爛及防治果皮的褐變。殼 聚糖可適當(dāng)抑制梨的失重率。保持采后梨的品質(zhì)和風(fēng)味，處理后對(duì)果實(shí)原有風(fēng)味未產(chǎn)生任 何不良影響，并可減少梨的總酸的消耗。由防效試驗(yàn)結(jié)果可以得出，生物防治保鮮方法不但可以防治果皮褐變，且降低果 實(shí)發(fā)病率，又可以適當(dāng)減少果實(shí)水分揮發(fā)，抑制梨的新陳代謝，延長(zhǎng)梨的保鮮期。Vc含量從初期保鮮效果看，酸化劑可有效保護(hù)梨的Vc。硬度酸化劑可保護(hù)其硬度和脆度。色澤經(jīng)乳酸菌，芽孢菌和酵母菌處理過(guò)的梨的果皮褐變較輕，顏色保持鮮黃。發(fā)病率貯藏初期除個(gè)別凍傷之外，沒有腐爛病發(fā)生，但隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，到第 90d時(shí)，乳酸菌一組腐爛病發(fā)病率為零，酸化劑一組蒂腐病發(fā)生率較高，由此可知，乳酸菌可 有效的抑制霉菌，鏈格孢等果蔬病原菌的發(fā)病率。硬度變化用果實(shí)硬度計(jì)測(cè)定結(jié)果看，各組果實(shí)硬度相差較小，酸化劑和乳酸菌、 芽孢菌可對(duì)梨的硬度及果肉脆度有一定的保護(hù)作用?？扇苄怨绦挝锶樗峋?、芽孢菌可降低可溶性固形物的消耗速度，延緩果實(shí)衰老。(6)草莓保鮮試驗(yàn)結(jié)論根據(jù)梨的保鮮試驗(yàn)結(jié)果，將LP和酸化劑復(fù)配，其混合物對(duì) 草莓的保鮮具有協(xié)同作用，較單獨(dú)使用Lp和酸化劑效果好?？山档筒葺麑?shí)腐爛率，常溫 下延長(zhǎng)草莓的保鮮期1 3d。對(duì)草莓的保鮮，噴霧保鮮方法比浸泡好果率高，旦方便快捷。綜合以上試驗(yàn)結(jié)論，最終確定出一種防腐保鮮效果最佳的配方，即植物乳桿菌 (Lactobacillus plantarum) LP，已于2010年06月21日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心， 其保藏編號(hào)為CCTCC M 2010150，菌粉的使用濃度在5X IO6 5X 107CFU/mL范圍內(nèi)，菌粉 與酸化劑(蔗糖、酒石酸和山梨酸鉀)進(jìn)行復(fù)配，酸化劑與菌粉的比例為112 5。配方如 下在IOOOmL水中，加入蔗糖100g、酒石酸4g和山梨酸鉀3g，加熱溶解，降至常溫后加入菌 粉(濃度在IO9) 5g混勻，噴霧方式噴灑到水果上6產(chǎn)品說(shuō)明書1主導(dǎo)成分植物乳桿菌，酸化劑及載體等多種成分組成，活菌總數(shù)> 109cfu/g。2 作用:2. 1防治果蔬表皮褐變，保持果蔬原有色澤。2. 2顯著抑制病原菌的入侵，降低果實(shí)的自然發(fā)病率。在常溫下貯存3個(gè)月，梨的 好果率為100%。2. 3保持果蔬的感官性狀，增加香甜口感。2. 4減緩果蔬貯存期間總糖、總酸及VC含量的下降。有利于果蔬中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的保 存和原有風(fēng)味的保持。2. 5抑制乙烯的生成，有效的降低自身催熟的程度。2. 6常溫延長(zhǎng)水果保鮮期3 100d，時(shí)間因果蔬品種而異。
3使用方法先將保鮮劑加熱溶解，降至常溫后加入菌粉混勻，噴霧使用。4使用量每IOOg兌IL水，混勻噴霧，可處理0. IT草莓(水果)。注漿果類不易 噴得過(guò)多。5 規(guī)格IOOg/袋。實(shí)施例1配制一種防腐保鮮制劑一、菌種配制方法(i)菌種選用植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)，CCTCC M 2010150 ；(ii)斜面培養(yǎng)將凍干粉菌種接種于固體斜面培養(yǎng)基上，在37°C培養(yǎng)24h ；(iii) 一級(jí)種子培養(yǎng)將培養(yǎng)好的斜面，在無(wú)菌條件下用接種環(huán)接2環(huán)于IOOmL種 子液體培養(yǎng)基中，在37°C條件下，靜置培養(yǎng)14h，制得一級(jí)種子液；(iv)擴(kuò)大培養(yǎng)以5%的接種量，將一級(jí)種子液接于IOOOmL種子液體培養(yǎng)基中，在 37°C條件下，靜置培養(yǎng)10h，制得二級(jí)種子液；(ν)發(fā)酵罐培養(yǎng)以5%的接種量，將二級(jí)種子液接于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，于37°C 條件下，靜置培養(yǎng)18h;(vi)收集發(fā)酵產(chǎn)物待步驟(ν)之發(fā)酵液黏度達(dá)13000cP時(shí)，收集發(fā)酵液；(vii)發(fā)酵結(jié)束后，立即噴霧干燥，即得菌粉成品。上述步驟(iii)、(iv)所述種子液體培養(yǎng)基配方為葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、 牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L，調(diào)節(jié)pH6.0，115°C條件下滅菌20min ；步驟(ii)所述固體斜面 培養(yǎng)基為上述種子液體培養(yǎng)基中添加2.0%的瓊脂粉；步驟(ν)中所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基配 方為葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、乙酸鈉5g/L、檸檬酸銨2g/ L、磷酸氫二鉀 5g/L、硫酸鎂 0. 5g/L、硫酸錳 0. 2g/L、吐溫-80 lmL/L, pH 6. 0。二、配制產(chǎn)品保鮮制劑配方為蔗糖、酒石酸和山梨酸鉀和菌粉，配制方法如下在IOOOmL水 中，加入蔗糖100g、酒石酸4g和山梨酸鉀3g，配方見表19，加熱溶解，降至常溫后加入菌粉 (濃度在IO9) 5g混勻，噴霧方式噴灑到水果上。例包裝112g/袋表19產(chǎn)品配方 注菌粉單獨(dú)包裝，其他試劑單獨(dú)包裝。使用方法先將酸化劑加熱溶解，降至常溫后加入菌粉混勻，噴霧使用。每IOOg兌 IL水，混勻噴霧，可處理0. IT草莓(水果)。三、應(yīng)用將市場(chǎng)買回的草莓，挑取無(wú)病、無(wú)蟲和無(wú)傷且成熟度色澤一致的草莓按照市場(chǎng)包 裝方式進(jìn)行保鮮，在木板上墊4層報(bào)紙，然后將草莓放置到其上方，用以上產(chǎn)品進(jìn)行噴霧， 晾干后加保鮮膜。共分4個(gè)組，2個(gè)對(duì)照組，2個(gè)使用產(chǎn)品組。每組30個(gè)草莓。其效果以好果率表示，如下表表20產(chǎn)品應(yīng)用效果表
將菌粉和酸化劑復(fù)配，其混合物對(duì)草莓的保鮮具有協(xié)同作用，較單獨(dú)使用Lp和酸 化劑效果好?？山档筒葺麑?shí)腐爛率，常溫下延長(zhǎng)草莓的保鮮期1 3d。對(duì)草莓的保鮮，噴 霧保鮮方法比浸泡好果率高，且方便快捷。
權(quán)利要求
一株可用于生物防腐保鮮的乳酸菌，其特征在于該菌株命名為L(zhǎng)actobacillus plantarum，已于2010年06月21日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC M2010150。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可用于生物防腐保鮮的乳酸菌，其特征在于所述乳酸菌的 菌種生物學(xué)特性如下該菌種的細(xì)胞大小為(0. 6 μ m 0. 9 μ m) X (1. 5 μ m 5. 0 μ m)，短 桿或近球狀，無(wú)鞭毛，不產(chǎn)芽孢，單個(gè)或呈鏈狀排列；該菌種能在MRS瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，菌 落呈乳白色，圓形，規(guī)則，中央凸起，表面光滑，質(zhì)地均勻，而且在挑取菌體時(shí)有一定的黏性； 該菌種屬于同型發(fā)酵乳酸菌，能夠發(fā)酵果糖、半乳糖、乳糖、麥芽糖、甘露糖、蔗糖，不能發(fā)酵 鼠李糖、棉籽糖、阿拉伯糖；接觸酶試驗(yàn)、產(chǎn)氨試驗(yàn)、水解淀粉試驗(yàn)、乙酰甲基甲醇試驗(yàn)和甲 基紅反應(yīng)均為陰性；最適生長(zhǎng)溫度為30 37°C，能在10°C生長(zhǎng)，45°C不生長(zhǎng)，兼性厭氧，在 pH值4. 5 9. 5生長(zhǎng)，最適pH值6. 0左右。
3.權(quán)利要求1所述的可用于生物防腐保鮮的乳酸菌在水果防腐保鮮中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用時(shí)，先將酸化劑加熱溶解于水，降溫 至常溫后加入菌粉混勻，噴霧方式噴灑到水果上，然后將水果在常溫或低溫下儲(chǔ)存。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述酸化劑為蔗糖、酒石酸和山梨酸鉀三 者的混合物，蔗糖、酒石酸和山梨酸鉀三者的質(zhì)量比為100 4 3 ；溶于水時(shí)，每IOOOmL 水中，溶解有蔗糖100g、酒石酸4g、山梨酸鉀3g;酸化劑與菌粉的用量比例為112 5，混勻 后，菌的濃度為5 X IO6 5X107CFU/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述菌粉是通過(guò)以下步驟得到的(i)菌種選用植物乳桿菌 Lactobacillus plantarum, CCTCC M 2010150 ；( )斜面培養(yǎng)將凍干粉菌種接種于固體斜面培養(yǎng)基上，在30 42°C培養(yǎng)22 26h ；(iii)一級(jí)種子培養(yǎng)取培養(yǎng)好的斜面，在無(wú)菌條件下接種于50mL IOOmL種子液體 培養(yǎng)基中，在30 42°C條件下，靜置培養(yǎng)12 16h，制得一級(jí)種子液；(iv)擴(kuò)大培養(yǎng)以5%的接種量，將一級(jí)種子液接于500mL IOOOmL種子液體培養(yǎng)基 中，在30 42°C條件下，靜置培養(yǎng)6 16h，制得二級(jí)種子液；(ν)發(fā)酵罐培養(yǎng)以5%的接種量，將二級(jí)種子液接于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，于30 42°C 條件下，靜置培養(yǎng)14 22h;(vi)收集發(fā)酵產(chǎn)物待步驟(ν)之發(fā)酵液黏度達(dá)12000 15000cP時(shí)，收集發(fā)酵液；(vii)發(fā)酵結(jié)束后，立即將發(fā)酵液離心并用清水清洗，如此反復(fù)2 3遍后冷凍干燥，粉 碎，即為菌粉成品；或發(fā)酵結(jié)束后，立即噴霧干燥，即得菌粉成品；上述步驟(iii)、(iv)中所述種子液體培養(yǎng)基配方為葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、牛 肉膏10g/L、酵母膏5g/L，使用時(shí)，調(diào)節(jié)pH至5. 5 6. 5，115°C條件下滅菌20min ；步驟(ii) 中所述固體斜面培養(yǎng)基為上述種子液體培養(yǎng)基中添加1. 5 2. 0%的瓊脂粉；步驟(ν)中 所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、乙酸 鈉5g/L、檸檬酸銨2g/L、磷酸氫二鉀5g/L、硫酸鎂0. 5g/L、硫酸錳0. 2g/L、吐溫-80 lmL/L, 使用時(shí)，調(diào)節(jié)pH至5. 5 6. 5。
7.一種防腐保鮮制劑，其特征在于是由以下原料組成的蔗糖、酒石酸、山梨酸鉀、菌 粉和水，其中，每IOOOmL水中，溶解有蔗糖100g、酒石酸4g、山梨酸鉀3g，菌粉5g ；所述菌為 可用于生物防腐保鮮的乳酸菌，命名為L(zhǎng)actobacillus plantarum，已于2010年06月21日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC M 2010150。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株可用于生物防腐保鮮的乳酸菌，該菌株命名為L(zhǎng)actobacillus plantarum，已于2010年06月21日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC M 2010150。所述乳酸菌可用于水果防腐保鮮，具體應(yīng)用時(shí)，方法為先將酸化劑加熱溶解于水，降溫至常溫后加入菌粉混勻，噴霧方式噴灑到水果上，然后將水果在常溫或低溫下儲(chǔ)存。在常溫條件下，水果可保鮮3個(gè)月；低溫條件下，水果可保鮮6個(gè)月。本發(fā)明的植物乳桿菌是從眾多乳酸菌中篩選得到的，其不但可以防治果皮褐變，降低果實(shí)發(fā)病率，還可以適當(dāng)減少果實(shí)水分揮發(fā)，抑制水果的新陳代謝，延長(zhǎng)保鮮期。
文檔編號(hào)C12N1/20GK101914475SQ20101024072
公開日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2010年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月30日
發(fā)明者單寶龍, 吳琦琦, 孫合美, 張彩芳, 徐海燕, 谷巍 申請(qǐng)人:山東寶來(lái)利來(lái)生物工程股份有限公司