專利名稱：一種體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型及其建立方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及傳染性疾病的體外感染模型，具體涉及性傳播 疾病預(yù)防、以及粘膜免疫中感染模型及其建立方法，尤其涉及一種體外培養(yǎng)人體黏膜活組 織模型及其建立方法和應(yīng)用
背景技術(shù)：
據(jù)報道，我國男性接觸人群(Men who have sex with men, MSM)艾滋病病毒 (Human immunodeficiency virus type 1，HIV_1)感染的比例迅速地增長。2009 年新發(fā)感 染者中，MSM感染者的比例已高達30%。諸多研究顯示，MSM間無保護的肛腸性行為發(fā)生感 染HIV的風(fēng)險是生殖道性行為的十幾倍甚至數(shù)十倍之多。此外，異性之間也有采用直腸性 接觸的報告，該種行為方式，明顯促進了 HIV的粘膜感染與傳播。因此，阻斷HIV粘膜的傳 播和局部生殖道播撒是預(yù)防感染和最終遏制HIV流行的關(guān)鍵。目前，完成這個目標(biāo)的最佳 策略是通過設(shè)計和實施有效的疫苗與局部微生物殺菌劑，抑或暴露后預(yù)防用藥的時機與時 效的研究，而這些均要求深刻理解HIV粘膜感染的機制，準(zhǔn)確評價生物預(yù)防技術(shù)的安全性。目前，國內(nèi)外粘膜感染研究所采用的動物模型絕大多數(shù)是HIV和猴免疫缺陷病毒 SIV的嵌和病毒SHIV/非人類靈長類(猴子)模型，實驗需要在大動物生物安全三級實驗 室(P3)進行，成本較高，而且動物的來源與實驗設(shè)施的可及性均受到很大限制。近年來，有 學(xué)者開始探索建立新型粘膜活組織模型如女性生殖道組織以及腸道粘膜活組織模型等，但 是培養(yǎng)組織結(jié)構(gòu)完整性與高活性一般維持3-7天，時間較短，無法滿足模擬HIV感染生物軌 跡需求(一般細(xì)胞培養(yǎng)7-10天以上，才會觀察到明顯的病毒復(fù)制增加)。此外，國外在研 究中采用的病毒株絕大多數(shù)具有多重復(fù)制周期(包括HIV-1病毒臨床分離株或?qū)嶒炇覙?gòu)建 的感染性克隆)，相關(guān)實驗需要在普通的P3實驗室中完成，實驗仍然受到一定限制。假病 毒感染體系由編碼病毒包膜蛋白的質(zhì)粒與病毒骨架質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞系而制備 的單一感染周期的病毒，感染靶細(xì)胞之后不具有復(fù)制能力，不形成子代感染性病毒顆粒，因 此，相關(guān)實驗可以在生物安全二級實驗室(P2)中進行。迄今為止，國內(nèi)尚無有關(guān)采用假病 毒感染體系進行此類研究的報告。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對HIV-1感染宿主研究的適宜動物模型的局限性，提供一種 體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型，尤其是建立一種HIV粘膜感染活組織模型及其建立方法和 應(yīng)用本發(fā)明建立的HIV粘膜感染活組織模型可再現(xiàn)HIV-1感染人體靶細(xì)胞的真實軌 跡，為HIV-1粘膜感染機制研究、以及阻斷粘膜感染的新型生物預(yù)防技術(shù)和粘膜局部應(yīng)用 的抗病毒藥物的安全性和有效性的臨床前評價研究提供技術(shù)平臺。本發(fā)明的一種體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型，其特征在于，通過病毒感染離體后 體外培養(yǎng)的粘膜組織，模擬病毒粘膜感染的生物學(xué)軌跡，建立了體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型。該模型可作為研究艾滋病病毒(HIV)粘膜免疫的體外模型。本發(fā)明中，所述的離體粘膜組織包括但不限于HIV性傳播途徑的生殖道/器或消 化道組織如腸道粘膜等；本發(fā)明中，所述的病毒包括但不限于HIV的單一感染周期的假病毒、感染性克隆、 實驗室株、臨床分離株或其他種類病毒。具體而言，本發(fā)明的體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型，通過下述方法和步驟制備1、對離體組織樣本預(yù)處理
對離體的臨床手術(shù)標(biāo)本組織進行預(yù)處理，本發(fā)明中(以腸粘膜為例)，腸道手術(shù)男 性患者控制年齡范圍在40-60歲之間(與MSM的HIV性傳播高危人群年齡段之一近似)，如 為腫瘤患者則選取行mills術(shù)且病理診斷所取標(biāo)本無癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移及其他異常病變的癌旁 組織；非腫瘤患者(如直腸脫垂、腸梗阻等)則取離體標(biāo)本病灶遠(yuǎn)端的正常組織；標(biāo)本離體 后盡快取下組織塊，浸入器官移植保護液，1-2小時內(nèi)運至實驗室。用含高劑量抗生素(青 鏈霉素2000U/ml)的DMEM培養(yǎng)基沖擊并清除組織塊中附著的細(xì)菌、真菌等污染物，保證培 養(yǎng)期間無污染現(xiàn)象發(fā)生。以上取材要求及培養(yǎng)環(huán)節(jié)均是延長組織高活性培養(yǎng)時間并保持組 織結(jié)構(gòu)完整的重要條件。2、組織培養(yǎng)采用下述培養(yǎng)方式(I)TransweIl小室培養(yǎng)(如圖1所示)將預(yù)處理的組織鉆取成塊，粘膜面向上置 于transwell上室中孔徑為3.0 μ m的濾膜上，用含3%瓊脂糖的培養(yǎng)基將組織四周封閉，露 出粘膜面，使之形成上下相對獨立的空間(即當(dāng)向上室內(nèi)加入病毒液時，HIV-I只能通過粘 膜層進入下室)，上室加入50-100ulDMEM培養(yǎng)液，下室中液面高于上室底部濾膜，使粘膜底 部與培養(yǎng)基能充分接觸。37°C，5% C02培養(yǎng)；或，(2)海綿筏支撐培養(yǎng)將預(yù)處理的組織鉆取成塊，粘膜面向上置于預(yù)先在DMEM培 養(yǎng)基中浸泡的海綿筏上，放入12孔板中，培養(yǎng)基液面不超過海綿筏。37°C，5% C02培養(yǎng)；或，(3)浸入培養(yǎng)將預(yù)處理的組織鉆取成塊，直接浸入DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。以上方法，均每2-3天更換半量新鮮DMEM培養(yǎng)基?；?，采用本領(lǐng)域公知組織培養(yǎng)方法。
3、觀察組織形態(tài)變化取培養(yǎng)后不同天數(shù)的組織塊，經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，通過蘇木精一伊紅(HE)染 色法，在顯微鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)。4、噻唑藍(MTT)法檢測組織存活力.取培養(yǎng)不同天數(shù)的組織塊置于干凈的48孔板中，每孔含一個組織塊，并加入 400ul含0. 5mg/ml MTT的DMEM培養(yǎng)基，37°C ,5% C02培養(yǎng)3小時，棄去上清液，用PBS沖洗 組織塊，加入等體積的溶解液過夜浸泡，將組織塊中的甲瓚溶出，570nm波長處測定吸光度 值，以新鮮組織的MTT值為基數(shù)，計算組織活力百分?jǐn)?shù)。5、病毒感染粘膜組織本發(fā)明中，采用的感染病毒株包括HIV-I病毒株(多復(fù)制周期)與假病毒株(單病毒，37°C,5% C02孵育過夜，次日用PBS清洗粘膜組 織，充分去除游離病毒，換新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，假病毒株感染者在實驗結(jié)束時收集組織進 行P24核酸檢測；HIV病毒株感染者在實驗中定期收集培養(yǎng)上清，ELISA法檢測p24含量。6.評價組織對藥物濃度變化的敏感性.取離體的直徑6mm新鮮的組織塊，分別放入48孔培養(yǎng)板中，對照組和每個藥物濃 度均設(shè)3復(fù)孔，將待測藥物(以阻斷HIV粘膜感染的第一代微生物殺菌劑N-9為例)10倍 梯度稀釋，加入孔中，與組織塊孵育過夜。次日用PBS洗去粘膜上殘留藥物，換干凈培養(yǎng)板 及新鮮400ul含0. 5mg/ml MTT的培養(yǎng)基，37°C,5% C02培養(yǎng)3小時，棄去上清液，用PBS沖 洗組織塊，更換成等體積的溶解液將組織塊中的甲瓚溶出，570nm波長處測定吸光度值，以 不加藥物的孔作為對照，計算組織活力百分?jǐn)?shù)。結(jié)果顯示，本發(fā)明的體外粘膜感染模型能成功培養(yǎng)人腸粘膜組織，并保持完整結(jié) 構(gòu)和高活性近14天。本發(fā)明的模型可被HIV病毒株及其假病毒感染，其中浸入法較海綿筏 支撐培養(yǎng)法更為易感。同時，該模型可敏感的反映出粘膜用藥物濃度的變化；已知N-9臨床 實驗評價濃度為4%，本模型實驗結(jié)果顯示，當(dāng)使用的藥物濃度為0. 5%時，本發(fā)明所建立 的活組織模型的活性已降到10%以下，能靈敏地反映出N-9對組織的毒性，提示N9不是一 種安全的粘膜用藥物，該一結(jié)論與N-9臨床實驗結(jié)果一致。證明本發(fā)明的體外培養(yǎng)人體黏 膜活組織模型可以作為粘膜用藥的安全評價技術(shù)平臺之一。本發(fā)明所建立的模型其應(yīng)用范圍包括但不限于HIV粘膜感染機制的研究、待測藥 物臨床前安全性與有效性評價、粘膜局部免疫學(xué)研究等。本發(fā)明中，所述的待測藥物包括但不局限于化學(xué)合成藥物、生物藥物、微生物殺菌 劑與粘膜疫苗等。本發(fā)明中，所述的待測藥物臨床前安全性包括但不限于藥物對直接施用部位粘膜 以及非直接施用部位的毒性、對粘膜免疫系統(tǒng)的激活與致病作用、以及粘膜被致病原感染 的敏感性增加作用等。本發(fā)明所采用的離體組織可在普通的P3實驗室中開展感染實驗，明顯降低了實 驗成本。當(dāng)感染的病毒采用假病毒體系時，可顯著降低實驗的生物安全風(fēng)險，在P2實驗室 即可完成。同時，采用單一感染周期的假病毒，病毒進入首感細(xì)胞后不再擴散，有利于HIV 粘膜感染機制的研究；本發(fā)明在維持活組織的結(jié)構(gòu)完整性與組織活性的前提下，顯著延長了人體黏膜組 織體外培養(yǎng)的時間。本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，解決下述技術(shù)問題1)活組織體外培養(yǎng)模型的建立控制組織內(nèi)源性或外源性污染并在體外培養(yǎng)過 程中保持較為完整的組織結(jié)構(gòu)，盡可能維持較高的組織活性；2)活組織模型對再現(xiàn)HIV粘膜感染的適用性采用HIV-1病毒株(多復(fù)制周期) 與假病毒株(單一感染周期)，接種活組織模型；在感染后不同培養(yǎng)時間，或通過報告基因 或直接檢測病毒P24蛋白/核酸水平的增長變化。提供一種HIV體外粘膜感染模型的建立 方法；3)所建立的組織模型對粘膜外用藥物的敏感性系列藥物濃度下，MTT法檢測組 織活力的變化，可提供一種粘膜局部用藥的安全性評價方法；
若同時結(jié)合2)和3)中提供的粘膜感染方法和粘膜局部用藥的方法，還可提供一種粘膜局部用藥的有效性的評價方法。本發(fā)明的有益效果在于1、與現(xiàn)有技術(shù)的細(xì)胞模型相比本活組織模型具有局部組織完整的粘膜表皮及 下層復(fù)雜的細(xì)胞構(gòu)成，可從多細(xì)胞綜合作用的角度來觀測病毒感染軌跡以及對藥物的敏感 性，彌補了細(xì)胞系種類單一的不足；2、與現(xiàn)有技術(shù)的動物模型相比由于HIV-I對小動物不敏感的特殊情況，目前常 用動物模型僅限于非人靈長類猴子模型，成本昂貴，來源有限，同時必須在大動物P3實驗 室中進行。本發(fā)明的離體組織直接來源于人體，可更為真實的反映病毒感染的體內(nèi)情況；同 時實驗可在普通的P3實驗室進行，有效降低了實驗的成本；3、同時模型采用的假病毒體系進行感染，在P2實驗室中即可進行，操作更加便 禾IJ，成本也大幅降低；假病毒具有單輪感染周期特性，當(dāng)其進入首個靶細(xì)胞后不會發(fā)生進一 步的傳播，因此，利用假病毒來定位HIV粘膜感染的首感靶細(xì)胞較病毒株更為可信。為了便于理解，以下將通過具體的附圖和實施例對本發(fā)明的HIV體外感染模型的 建立方法進行詳細(xì)地描述。需要特別指出的是，具體實例和附圖僅是為了說明，顯然本領(lǐng)域 的普通技術(shù)人員可以根據(jù)本文說明，在本發(fā)明的范圍內(nèi)對本發(fā)明做出各種各樣的修正和改 變，這些修正和改變也納入本發(fā)明的范圍內(nèi)。


圖1 不同培養(yǎng)天數(shù)的結(jié)腸粘膜(HE染色，IOOx)，其中，D0-D13分別代表培養(yǎng)第0天至第13天。圖2 =MTT法檢測結(jié)腸粘膜組織活性。圖3 結(jié)直腸粘膜活組織模型的N9反應(yīng)性。(A)為10倍濃度稀釋的初篩；(B)為 精細(xì)分析。圖4 =ELISA檢測培養(yǎng)上清中p24含量，其中，A兩種培養(yǎng)方式的比較，B同一方式不同劑量的比較，T為TCID50。
具體實施例方式實施例1采用本發(fā)明所述方法和步驟，以腸道粘膜組織培養(yǎng)為例，采用海綿筏支撐培養(yǎng) 方式；藥物敏感性實驗中選擇藥物為第一代微生物殺菌劑粘膜微生物殺菌劑壬苯醇醚 (N-9)；感染實驗采用CCR5嗜性包膜的假病毒，同上述步驟操作取離體的腸道手術(shù)腸粘膜標(biāo)本組織取下組織塊，浸入器官移植保護液，1-2小時內(nèi) 用含青鏈霉素2000U/ml的DMEM培養(yǎng)基沖擊并清除組織塊中附著的細(xì)菌、真菌等污染物， 保證無污染發(fā)生；將預(yù)處理的組織鉆取成塊，粘膜面向上置于預(yù)先在DMEM培養(yǎng)基中浸泡的海綿筏 上，放入12孔板中，培養(yǎng)基液面不超過海綿筏。37°C，5% C02培養(yǎng)；取培養(yǎng)后不同天數(shù)的組織塊，經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，通過蘇木精一伊紅(HE)染 色法，在顯微鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)形態(tài)變化；
噻唑藍(MTT)法檢測組織存活力取培養(yǎng)不同天數(shù)的組織塊置于干凈的48孔板 中，每孔含一個組織塊，并加入400ul含0. 5mg/ml MTT的DMEM培養(yǎng)基，37°C,5% C02培養(yǎng) 3小時，棄去上清液，用PBS沖洗組織塊，加入等體積的溶解液過夜浸泡，將組織塊中的甲瓚 溶出，570nm波長處測定吸光度值，以新鮮組織的MTT值為基數(shù)，計算組織活力百分?jǐn)?shù)；向粘膜培養(yǎng)孔中接種CCR5嗜性包膜的假病毒，37V,5% C02孵育過夜，次日用PBS 清洗粘膜組織，充分去除游離病毒，換新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，實驗結(jié)束時收集組織進行P24 核酸檢測；取離體的直徑6mm新鮮的組織塊，分別放入48孔培養(yǎng)板中，對照組和每個藥物濃 度均設(shè)3復(fù)孔，將待測藥物第一代微生物殺菌劑粘膜微生物殺菌劑壬苯醇醚(N-9) 10倍梯 度稀釋，加入孔中，與組織塊孵育過夜。次日用PBS洗去粘膜上殘留藥物，換干凈培養(yǎng)板及 新鮮400ul含0. 5mg/ml MTT的培養(yǎng)基，37°C,5% C02培養(yǎng)3小時，棄去上清液，用PBS沖洗 組織塊，更換成等體積的溶解液將組織塊中的甲瓚溶出，570nm波長處測定吸光度值，以不 加藥物的孔作為對照，計算組織活力百分?jǐn)?shù)，評價組織對藥物濃度變化的敏感性。結(jié)果顯示1)培養(yǎng)中結(jié)腸粘膜的組織形態(tài)與活力通過HE染色觀察培養(yǎng)第0天可見清晰腸粘膜上皮腺體及粘膜固有層結(jié)構(gòu)，培養(yǎng)5 天時組織結(jié)構(gòu)依然良好，13天時粘膜組織結(jié)構(gòu)依然可見(如圖1所示)。經(jīng)MTT法檢測粘膜 培養(yǎng)10天內(nèi)組織活性，結(jié)果顯示培養(yǎng)4天時組織活性高于80%，7天的活性可保持在50% 左右(如圖2所示)。2)結(jié)腸粘膜模型對不同濃度藥物的毒性反應(yīng)以第一代粘膜微生物殺菌劑壬苯醇醚(N-9)為例，本發(fā)明檢測了粘膜活組織模型 對外用藥物的濃度依賴性反應(yīng)。如圖3A所示，采用10倍稀釋藥物濃度梯度(從0.5%開始 稀釋，計5個濃度點)，對本發(fā)明模型的藥物反應(yīng)性進行分析。結(jié)果顯示，隨著N-9的濃度變 化，組織模型的活性也呈現(xiàn)明顯的變化。N-9濃度在0. 005%以下時，組織模型維持良好的 活性(90%以上)，高于該濃度時，對組織模型產(chǎn)生毒性。當(dāng)N-9濃度超過0. 05%時，粘膜組 織的活性急劇降低，N-9濃度為0.5%時，組織活性降至10%以下。本發(fā)明在組織活性急劇 下降的濃度區(qū)間(0.005%至0.05% )，進一步稀釋了 3個藥物濃度(0. 01625%/0. 0275% /0. 03875%)以探索N-9影響該模型組織活性的精細(xì)濃度范圍(圖3B)，結(jié)果顯示，所培養(yǎng) 的結(jié)腸粘膜組織的安全性(維持90-100%的組織活性)N-9藥物濃度上限為0. 01625%, 50%的組織活性濃度點為0. 03875%。3)結(jié)腸粘膜模型對HIV病毒的易感性本發(fā)明檢測了浸入法和海綿筏法培養(yǎng)方式建立的模型的HIV-1病毒的易感性。因 為HIV-1性途徑感染的病毒多為輔助受體CCR5嗜性的病毒(R5病毒)，故本實驗所采用 的病毒株亦為R5病毒包膜蛋白構(gòu)建的單一感染周期的假病毒。初始感染劑量為4500個 TCID50，通過檢測感染后第1，4和8天的培養(yǎng)上清中p24的含量，監(jiān)測粘膜活組織模型感 染的建立。如圖4A所示，采用浸入法培養(yǎng)的粘膜活組織在第一天的培養(yǎng)上清中即可檢測到 P24的濃度在80pg/ml以上，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，一直維持在100pg/ml的水平。而采用海 綿伐的培養(yǎng)方法，在4500個TCID50的感染劑量下，直至至第8天時培養(yǎng)基中p24含量僅為 10pg/ml以下。當(dāng)增加感染劑量10倍(45000個TCID50)對海綿伐培養(yǎng)法的活組織進行感
7染(如圖4B所示)，結(jié)果顯示，在感染后第一天的培養(yǎng)上清 中即檢測到較高的P24表達(約 75pg/ml以上)，其后一直保持與浸入法培養(yǎng)的活組織在4500個TCID50感染劑量下相似的 趨勢。上述結(jié)果提示，活組織模型培養(yǎng)的浸入法比海綿筏法相對易感。
權(quán)利要求
1.一種體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型，其特征在于，通過病毒感染離體后體外培養(yǎng)的 粘膜組織，模擬病毒粘膜感染的生物學(xué)軌跡，建立體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型。
2.按權(quán)利要求1所述的體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型，其特征在于，所述的離體粘膜 組織包括但不限于涉及HIV性傳播途徑的生殖道/器或消化道組織粘膜。
3.按權(quán)利要求1或2所述的體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型，其特征在于，所述的離體粘 膜組織是離體腸道粘膜。
4.按權(quán)利要求1所述的體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型，其特征在于，所述的病毒包括 但不限 于HIV的單一感染周期的假病毒、感染性克隆、實驗室株、臨床分離株或其他種類病
5.權(quán)利要求1的體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型的建立方法，其特征在于，其包括步驟1)對離體組織樣本預(yù)處理離體后組織塊，浸入器官移植保護液，1-2小時內(nèi)用含高劑量抗生素的DMEM培養(yǎng)基沖 擊并清除組織塊中附著的細(xì)菌、真菌污染物，保證無污染發(fā)生；2)組織培養(yǎng)采用Transwell小室培養(yǎng)，或海綿筏支撐培養(yǎng)，或浸入培養(yǎng)方式，37°C，5% C02培養(yǎng)培 養(yǎng)上述預(yù)處理的組織塊；3)觀察組織形態(tài)變化取培養(yǎng)后不同天數(shù)的組織塊，經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，通過蘇木精一伊紅(HE)染色法， 在顯微鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)。4)噻唑藍法檢測組織存活力.取培養(yǎng)不同天數(shù)的組織塊分別置48孔板中，加入含0. 5mg/ml MTT的DMEM培養(yǎng)基， 37°C,5% C02培養(yǎng)3小時，棄上清，PBS沖洗組織塊，加溶解液過夜浸泡，溶出甲瓚，570nm波 長處測定吸光度值，，計算組織活力百分?jǐn)?shù)；5)病毒感染粘膜組織采用HIV-I病毒株與假病毒株，接種于粘膜培養(yǎng)孔，37V,5% C02孵育過夜，次日用PBS 清洗粘膜組織，去除游離病毒，換培養(yǎng)基培養(yǎng)，實驗結(jié)束時收集組織進行P24核酸檢測；HIV 病毒株實驗中定期收集培養(yǎng)上清，ELISA法檢測p24含量。
6.權(quán)利要求1的體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型在制備HIV粘膜感染機制研究、待測藥 物臨床前安全性與有效性評價或粘膜局部免疫學(xué)研究平臺中的用途。
7.按權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于所述的待測藥物包括但不局限于化學(xué)合成藥 物、生物藥物或微生物殺菌劑與粘膜疫苗。
8.按權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于所述的待測藥物臨床前安全性包括但不限 于藥物對直接施用部位粘膜以及非直接施用部位的毒性、對粘膜免疫系統(tǒng)的激活與致病作 用、以及粘膜被致病原感染的敏感性增加作用。
全文摘要
本發(fā)明屬生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及傳染性疾病的體外感染模型，具體涉及性傳播疾病預(yù)防、以及粘膜免疫中感染模型及其建立方法，尤其涉及一種體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型及其建立方法和應(yīng)用。本發(fā)明通過對離體組織樣本預(yù)處理，采用不同組織培養(yǎng)方式及觀察不同培養(yǎng)天數(shù)的組織形態(tài)變化、檢測組織存活力、評價組織對藥物濃度變化的敏感性和采用假病毒感染粘膜組織提供一種體外培養(yǎng)人體黏膜活組織模型。本發(fā)明模型適用于離體人體活組織的體外感染，為探索高活性長期體外培養(yǎng)，再現(xiàn)HIV-1感染人體靶細(xì)胞的真實軌跡，為HIV-1粘膜感染機制研究以及新型生物預(yù)防技術(shù)的安全性和有效性的臨床前評價研究提供技術(shù)平臺。本發(fā)明方法可在生物安全二級實驗室中開展。
文檔編號C12Q1/02GK102002476SQ201010260159
公開日2011年4月6日 申請日期2010年8月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月20日
發(fā)明者劉愛平, 張曉燕, 徐建青, 楊瑜 申請人:上海市公共衛(wèi)生臨床中心