專利名稱：功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)及其凍干產(chǎn)品的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及乳桿菌培養(yǎng)及其凍干產(chǎn)品的制備方法。
背景技術(shù)：
乳桿菌屬于乳酸菌，革蘭氏染色陽性、無芽孢桿菌。分解糖的主要終產(chǎn)物是乳酸， 不發(fā)酵乳酸鹽，很少致病，廣泛分布于含有碳水化合物的動(dòng)植物發(fā)酵產(chǎn)品中，也見于溫血?jiǎng)?物的口腔、陰道和腸道內(nèi)；分解糖的能力強(qiáng)，分解蛋白質(zhì)類的能力極低。目前，乳桿菌生產(chǎn)，多是采用離心濃縮的方式，存在處理量較小、離心機(jī)取料程序 繁雜、菌體死亡率較高及收獲率較低的缺點(diǎn)，致使產(chǎn)品中活菌含量小、用量大、發(fā)酵效果差； 且其產(chǎn)品主要為凍干制劑，制造和使用成本均較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有乳桿菌生產(chǎn)存在產(chǎn)品中活菌含量小、用量大、發(fā)酵 效果差，而且其凍干制劑的制造和使用成本均較高的問題，而提供功能性益生性乳桿菌高 密度培養(yǎng)及其凍干產(chǎn)品的制備方法。功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)按以下步驟進(jìn)行一、將經(jīng)過耐氧馴化的功能性 益生性乳桿菌接種到發(fā)酵罐的增菌培養(yǎng)基中，在溫度為35 37°C、pH值為6. 5 6. 8的條 件下培養(yǎng)15 17h，得發(fā)酵液；二、發(fā)酵液在0 20°C時(shí)，加入與發(fā)酵液等重量的質(zhì)量濃度 為10%的檸檬酸鈉溶液或質(zhì)量濃度為10%的磷酸鈉溶液對發(fā)酵液進(jìn)行蛋白的洗脫，再加 入質(zhì)量濃度為0. 2 2%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝；三、絮凝后的發(fā)酵液使用孔徑為100 200nm、面積為0. 5m2的陶瓷膜，在跨膜壓力為IlOKPa進(jìn)行膜濃縮處理至絮凝后的發(fā)酵液的 濃縮倍數(shù)達(dá)到6，得到含有功能性益生性乳桿菌的膜濃縮產(chǎn)物，即完成功能性益生性乳桿菌 高密度培養(yǎng)；其中步驟一中接種量為2% ；步驟一中增菌培養(yǎng)基由80 120g的脫脂乳粉， 40 60g的胰蛋白酶水解乳清粉，30 60g的番茄汁、30 60g的麥芽汁、10 30g乳糖、 0. 50 0. 70g的酵母膏或酵母粉、6. 8 7. 2mg的腺嘌呤和50 54mg的L-半胱氨酸鹽酸 鹽加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成；步驟三中膜濃縮處理的方式為兩個(gè)陶瓷膜管串聯(lián)。功能性益生性乳桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法按以下步驟進(jìn)行一、按重量比1 1 2將含有功能性益生性乳桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合，在溫度0 10°C的條件 下進(jìn)行10 12h的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物；二、將混合物置于_70°C冷凍機(jī)的冷凍盤 中進(jìn)行預(yù)凍，直至混合物的溫度達(dá)到_45°C，保持30min，然后以5°C /30min的速率升溫 至-28°C，并維持此溫度至真空度達(dá)到0. 05MPa完成主干燥階段，再升溫至10°C并維持此溫 度至真空度達(dá)到0. 03MPa完成解析干燥階段，取出后用顆粒機(jī)粉碎，再用無菌鋁箔紙盒包 裝并置于-20°C的環(huán)境中貯藏，即完成功能性益生性乳桿菌凍干產(chǎn)品的制備；其中步驟一 中冷凍保護(hù)劑10 20g的脫脂乳粉、1 3g的甘油、1 2g的維生素C、0. 5 Ig的谷氨 酸或甘氨酸、5g的蔗糖和3 15g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成；步驟二中混 合物置于_70°C冷凍機(jī)的冷凍盤中的大小為長40cmX寬50cmX高20mm。
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本發(fā)明中功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)，所得含有功能性益生性乳桿菌的膜濃 縮產(chǎn)物中乳桿菌的活菌數(shù)為5. 4X1010CFU/g,比現(xiàn)有的活菌數(shù)提高10倍以上，乳桿菌用量 減少，僅取0. 005% 0. 010%與酸奶發(fā)酵劑配合使用即可滿足益生菌發(fā)酵乳生產(chǎn)的要求， 可以作為優(yōu)質(zhì)的益生菌直投式發(fā)酵劑，且發(fā)酵效果好，同時(shí)增菌培養(yǎng)基中所用的腺嘌呤，為 后續(xù)凍干產(chǎn)品的制備過程中增加了功能性益生性乳桿菌的存活率。本發(fā)明可以適合于益生 功能的嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌或副干酪乳桿菌。本發(fā)明中功能性益生性乳桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法，將功能性益生性乳桿菌高密 度培養(yǎng)所得的膜濃縮產(chǎn)物進(jìn)行加工，這樣減小冷凍處理的負(fù)荷，同時(shí)，優(yōu)化后的冷凍保護(hù) 劑，也可以提高功能性益生性乳桿菌的存活率，與凍干制品相比具有生產(chǎn)成本低而活性高 的優(yōu)點(diǎn)，達(dá)到直接使用目的，而且工藝簡單；此外，本發(fā)明中功能性益生性乳桿凍干產(chǎn)品還 可以作為輔料添加到奶粉中，在12個(gè)月的保質(zhì)期內(nèi)益生菌奶粉的益生乳桿菌的活菌數(shù)均 大于 1. 0X106CFU/g。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
間的 任意組合。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)按以下步驟進(jìn)行 一、將經(jīng)過耐氧馴化的功能性益生性乳桿菌接種到發(fā)酵罐的增菌培養(yǎng)基中，在溫度為35 37°C、pH值為6. 5 6. 8的條件下培養(yǎng)15 17h，得發(fā)酵液；二、發(fā)酵液在0 20°C時(shí)，加入 與發(fā)酵液等重量的質(zhì)量濃度為10%的檸檬酸鈉溶液或質(zhì)量濃度為10%的磷酸鈉溶液對發(fā) 酵液進(jìn)行蛋白的洗脫，再加入質(zhì)量濃度為0. 2 2%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝；三、絮凝后 的發(fā)酵液使用孔徑為100 200nm、面積為0. 5m2的陶瓷膜，在跨膜壓力為IlOKPa進(jìn)行膜濃 縮處理至絮凝后的發(fā)酵液的濃縮倍數(shù)達(dá)到6，得到含有功能性益生性乳桿菌的膜濃縮產(chǎn)物， 即完成功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)；其中步驟一中接種量為2%;步驟一中增菌培養(yǎng)基 由80 120g的脫脂乳粉，40 60g的胰蛋白酶水解乳清粉，30 60g的番茄汁、30 60g 的麥芽汁、10 30g乳糖、0. 50 0. 70g的酵母膏或酵母粉、6. 8 7. 2mg的腺嘌呤和50 54mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成；步驟三中膜濃縮處理的方式 為兩個(gè)陶瓷膜管串聯(lián)。本實(shí)施方式步驟一中耐氧馴化的功能性益生性乳桿菌，是從自然發(fā)酵食品或人類 腸道中分離出功能性益生性乳桿菌，為嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌或副干酪乳桿菌，然后通 過連續(xù)在微氧條件下馴化篩選所得，具體操作參照張旭，魏仲珊，李華麗.雙歧桿菌的分 離鑒定與耐氧馴化.現(xiàn)代食品科技，2009，Vol. 25，No. 1 :31_37 ；馴化挑選革蘭氏染色陽 性、接觸酶試驗(yàn)陰性、明膠液化試驗(yàn)陰性、葡萄糖產(chǎn)氣試驗(yàn)陰性、果糖-6-磷酸鹽磷酸酮酶 (F6PPK)試驗(yàn)陽性的菌落，接種于已滅菌的PTY液體培養(yǎng)基中，將接種后的三角瓶放置于厭 氧培養(yǎng)箱中，用氮?dú)庀?次，采用透氣膜封口，然后在37°C厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。將擴(kuò)增 后菌液在有氧環(huán)境繼續(xù)培養(yǎng)6 8h，有氧條件培養(yǎng)時(shí)逐步增加培養(yǎng)箱中的氧氣含量，以指 示劑的顏色變化來判斷含氧量的多少，經(jīng)多次傳代馴化后，選擇在脫脂乳培養(yǎng)基中凝乳時(shí) 間較短、活菌數(shù)較高且貯藏中仍能保持較高活菌數(shù)的菌株。本實(shí)施方式步驟三中所用陶瓷膜可以再生，再生工藝為50°C的熱水清洗5min，質(zhì)量濃度為0. 5%的氫氧化鈉溶液清洗10min，50°C的熱水清洗5min，質(zhì)量濃度為0. 5%的 硝酸清洗10min，5(TC的熱水清洗5min，即完成陶瓷膜再生。本實(shí)施方式采用流加法補(bǔ)充增菌培養(yǎng)基。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中采用中和劑調(diào) 節(jié)增菌培養(yǎng)基的PH值，中和劑為質(zhì)量濃度為10 15%的氫氧化鈉、質(zhì)量濃度為10 15% 的氨水或質(zhì)量濃度為20%的Na2CO3 ；步驟一中培養(yǎng)15 17h的過程中需補(bǔ)加乳糖，乳糖補(bǔ) 加量為所消耗的中和劑中堿性物質(zhì)摩爾量的3 5倍，同時(shí)采用D301型樹脂吸附培養(yǎng)過程 中產(chǎn)生的鈉鹽。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟一中在溫度為 35°C、pH值為6. 5的條件下培養(yǎng)17h，得發(fā)酵液。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一或二相 同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟一中在溫度為 37°C、pH值為6. 8的條件下培養(yǎng)15h，得發(fā)酵液。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一或二相 同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟一中在溫度為 36°C、pH值為6. 6的條件下培養(yǎng)16h，得發(fā)酵液。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一或二相 同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟一中增菌 培養(yǎng)基由80g的脫脂乳粉，40g的胰蛋白酶水解乳清粉，30g的番茄汁、30g的麥芽汁、IOg乳 糖、0. 50g的酵母膏或酵母粉、6. Smg的腺嘌呤和50mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并 定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟一中增菌 培養(yǎng)基由120g的脫脂乳粉，60g的胰蛋白酶水解乳清粉，60g的番茄汁、60g的麥芽汁、30g 乳糖、0. 70g的酵母膏或酵母粉、7. 2mg的腺嘌呤和54mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水 并定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟一中增菌 培養(yǎng)基由90 IlOg的脫脂乳粉，45 55g的胰蛋白酶水解乳清粉，40 50g的番茄汁、 40 50g的麥芽汁、15 25g乳糖、0. 55 0. 65g的酵母膏或酵母粉、6. 9 7. Img的腺嘌 呤和51 53mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù) 與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟一中增菌 培養(yǎng)基由IOOg的脫脂乳粉，50g的胰蛋白酶水解乳清粉，45g的番茄汁、45g的麥芽汁、20g 乳糖、0. 60g的酵母膏或酵母粉、7mg的腺嘌呤和52mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并 定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
十本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至九之一不同的是步驟二中加入 質(zhì)量濃度為0. 2%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至九之一 相同。
具體實(shí)施方式
十一本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至九之一不同的是步驟二中加 入質(zhì)量濃度為的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至九之一
6相同。
具體實(shí)施方式
十二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至九之一不同的是步驟二中加 入質(zhì)量濃度為0. 5 1. 5%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一 至九之一相同。
具體實(shí)施方式
十三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至九之一不同的是步驟二中加 入質(zhì)量濃度為2%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至九之一 相同。
具體實(shí)施方式
十四本實(shí)施方式功能性益生性乳桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法按以下 步驟進(jìn)行一、按重量比1 1 2將含有功能性益生性乳桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù) 劑混合，在溫度0 10°C的條件下進(jìn)行10 12h的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物；二、將混合 物置于_70°C冷凍機(jī)的冷凍盤中進(jìn)行預(yù)凍，直至混合物的溫度達(dá)到_45°C，保持30min，然后 以5°C /30min的速率升溫至-28 °C，并維持此溫度至真空度達(dá)到0. 05MPa完成主干燥階段， 再升溫至10°C并維持此溫度至真空度達(dá)到0. 03MPa完成解析干燥階段，取出后用顆粒機(jī)粉 碎，再用無菌鋁箔紙盒包裝并置于-20°C的環(huán)境中貯藏，即完成功能性益生性乳桿菌凍干產(chǎn) 品的制備；其中步驟一中冷凍保護(hù)劑10 20g的脫脂乳粉、1 3g的甘油、1 2g的維生素 C、0. 5 Ig的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖和3 15g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL 組成；步驟二中混合物置于_70°C冷凍機(jī)的冷凍盤中的大小為長40cmX寬50cmX高20mm。
具體實(shí)施方式
十五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四不同的是步驟一中按重量比 1 1將含有功能性益生性乳桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合，在溫度0°c的條件下進(jìn) 行12h的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四相同。
具體實(shí)施方式
十六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四不同的是步驟一中按重量比 1 2將含有功能性益生性乳桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合，在溫度10°C的條件下 進(jìn)行IOh的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四相同。
具體實(shí)施方式
十七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四不同的是步驟一中按重量比 1 1.5將含有功能性益生性乳桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合，在溫度5°C的條件下 進(jìn)行Ilh的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四相同。
具體實(shí)施方式
十八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四至十七之一不同的是步驟一 中冷凍保護(hù)劑IOg的脫脂乳粉、Ig的甘油、Ig的維生素C、0. 5g的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗 糖和3g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四 至十七之一相同。
具體實(shí)施方式
十九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四至十七之一不同的是步驟一 中冷凍保護(hù)劑20g的脫脂乳粉、3g的甘油、2g的維生素C、lg的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖 和15g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四 至十七之一相同。
具體實(shí)施方式
二十本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四至十七之一不同的是步驟一 中冷凍保護(hù)劑12 18g的脫脂乳粉、1. 5 2. 5g的甘油、1. 2 1. 8g的維生素C、0. 6 0. 9g的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖和5 IOg的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。 其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四至十七之一相同。
具體實(shí)施方式
二十一本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四至十七之一不同的是步驟一中冷凍保護(hù)劑15g的脫脂乳粉、2g的甘油、1. 5g的維生素C、0. 8g的谷氨酸或甘氨酸、5g 的蔗糖和8g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四至十七之一相同。
具體實(shí)施方式
二十二本實(shí)施方式功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)按以下步驟進(jìn) 行一、將經(jīng)過耐氧馴化的功能性益生性乳桿菌接種到發(fā)酵罐的增菌培養(yǎng)基中，在溫度為 36°C、pH值為6. 6的條件下培養(yǎng)16h，得發(fā)酵液；二、發(fā)酵液在10°C時(shí)，加入與發(fā)酵液等重 量的質(zhì)量濃度為10%的檸檬酸鈉溶液或質(zhì)量濃度為10%的磷酸鈉溶液對發(fā)酵液進(jìn)行蛋白 的洗脫，再加入質(zhì)量濃度為的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝；三、絮凝后的發(fā)酵液使用孔徑為 150nm、面積為0. 5m2的陶瓷膜，在跨膜壓力為IlOKPa進(jìn)行膜濃縮處理至絮凝后的發(fā)酵液 的濃縮倍數(shù)達(dá)到6，得到含有功能性益生性乳桿菌的膜濃縮產(chǎn)物，即完成功能性益生性乳桿 菌高密度培養(yǎng)；其中步驟一中接種量為2% ；步驟一中增菌培養(yǎng)基由IOOg的脫脂乳粉，50g 的胰蛋白酶水解乳清粉，45g的番茄汁、45g的麥芽汁、20g乳糖、0. 60g的酵母膏或酵母粉、 6. 8mg的腺嘌呤和52mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成；步驟三中 膜濃縮處理的方式為兩個(gè)陶瓷膜管串聯(lián)。功能性益生性乳桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法按以下步驟進(jìn)行一、按重量比1 1.5 將含有功能性益生性乳桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合，在溫度6°C的條件下進(jìn)行 12h的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物；二、將混合物置于_70°C冷凍機(jī)的冷凍盤中進(jìn)行預(yù)凍，直 至混合物的溫度達(dá)到_45°C，保持30min，然后以5°C /30min的速率升溫至_28°C，并維持 此溫度至真空度達(dá)到0. 05MPa完成主干燥階段，再升溫至10°C并維持此溫度至真空度達(dá)到 0. 03MPa完成解析干燥階段，取出后用顆粒機(jī)粉碎，再用無菌鋁箔紙盒包裝并置于_20°C的 環(huán)境中貯藏，即完成功能性益生性乳桿菌凍干產(chǎn)品的制備；其中步驟一中冷凍保護(hù)劑15g 的脫脂乳粉、2g的甘油、1. 5g的維生素C、0. 8g的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖和IOg的海藻 糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成；步驟二中混合物置于_70°C冷凍機(jī)的冷凍盤中的大小 為長 40cmX 寬 50cmX 高 20mm。本實(shí)施方式中所得凍干產(chǎn)品，經(jīng)測試其中活菌數(shù)為5. 4X1010CFU/g,與酸奶發(fā)酵劑 配合使用以0. 005% -0. 010%的量接種到滅菌脫脂乳和鮮牛奶中，在41 43°C的條件下發(fā) 酵3. 5h，乳凝固并產(chǎn)酸70° T，組織狀態(tài)、風(fēng)味良好，在21天酸奶的保質(zhì)期內(nèi)益生菌的活菌 數(shù)均大于1.0X106CFU/g，可以作為優(yōu)質(zhì)的益生菌直投式發(fā)酵劑；此外，還可以作為輔料添 加到奶粉中，在12個(gè)月的保質(zhì)期內(nèi)益生菌奶粉的益生乳桿菌的活菌數(shù)均大于1. OX IO6CFU/
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權(quán)利要求
功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)按以下步驟進(jìn)行一、將經(jīng)過耐氧馴化的功能性益生性乳桿菌接種到發(fā)酵罐的增菌培養(yǎng)基中，在溫度為35～37℃、pH值為6.5～6.8的條件下培養(yǎng)15～17h，得發(fā)酵液；二、發(fā)酵液在0～20℃時(shí)，加入與發(fā)酵液等重量的質(zhì)量濃度為10％的檸檬酸鈉溶液或質(zhì)量濃度為10％的磷酸鈉溶液對發(fā)酵液進(jìn)行蛋白的洗脫，再加入質(zhì)量濃度為0.2～2％的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝；三、絮凝后的發(fā)酵液使用孔徑為100～200nm、面積為0.5m2的陶瓷膜，在跨膜壓力為110KPa進(jìn)行膜濃縮處理至絮凝后的發(fā)酵液的濃縮倍數(shù)達(dá)到6，得到含有功能性益生性乳桿菌的膜濃縮產(chǎn)物，即完成功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)；其中步驟一中接種量為2％；步驟一中增菌培養(yǎng)基由80～120g的脫脂乳粉，40～60g的胰蛋白酶水解乳清粉，30～60g的番茄汁、30～60g的麥芽汁、10～30g乳糖、0.50～0.70g的酵母膏或酵母粉、6.8～7.2mg的腺嘌呤和50～54mg的L 半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至1000mL組成；步驟三中膜濃縮處理的方式為兩個(gè)陶瓷膜管串聯(lián)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于步驟一中采用 中和劑調(diào)節(jié)增菌培養(yǎng)基的PH值，中和劑為質(zhì)量濃度為10 15%的氫氧化鈉、質(zhì)量濃度為 10 15%的氨水或質(zhì)量濃度為20%的Na2CO3 ；步驟一中培養(yǎng)15 17h的過程中需補(bǔ)加乳 糖，乳糖補(bǔ)加量為所消耗的中和劑中堿性物質(zhì)摩爾量的3 5倍，同時(shí)采用D301型樹脂吸 附培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的鈉鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于步驟一中 在溫度為36°C、pH值為6. 6的條件下培養(yǎng)16h，得發(fā)酵液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于步驟一中增菌 培養(yǎng)基由90 IlOg的脫脂乳粉，45 55g的胰蛋白酶水解乳清粉，40 50g的番茄汁、 40 50g的麥芽汁、15 25g乳糖、0. 55 0. 65g的酵母膏或酵母粉、6. 9 7. Img的腺嘌 呤和51 53mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于步驟一中增菌 培養(yǎng)基由IOOg的脫脂乳粉，50g的胰蛋白酶水解乳清粉，45g的番茄汁、45g的麥芽汁、20g 乳糖、0. 60g的酵母膏或酵母粉、7mg的腺嘌呤和52mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并 定容至IOOOmL組成。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于步驟二中 加入質(zhì)量濃度為0. 5 1. 5%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝。
7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于步驟二中 加入質(zhì)量濃度為2%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝。
8.制備如權(quán)利要求1所述的功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)的所得功能性益生性乳 桿菌凍干產(chǎn)品的方法，其特征在于功能性益生性乳桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法按以下步驟 進(jìn)行一、按重量比1 1 2將含有功能性益生性乳桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混 合，在溫度0 10°C的條件下進(jìn)行10 12h的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物；二、將混合物 置于-70°C冷凍機(jī)的冷凍盤中進(jìn)行預(yù)凍，直至混合物的溫度達(dá)到_45°C，保持30min，然后以 5°C /30min的速率升溫至_28°C，并維持此溫度至真空度達(dá)到0. 05MPa完成主干燥階段，再 升溫至10°C并維持此溫度至真空度達(dá)到0. 03MPa完成解析干燥階段，取出后用顆粒機(jī)粉 碎，再用無菌鋁箔紙盒包裝并置于-20°C的環(huán)境中貯藏，即完成功能性益生性乳桿菌凍干產(chǎn)品的制備；其中步驟一中冷凍保護(hù)劑10 20g的脫脂乳粉、1 3g的甘油、1 2g的維生素 C、0. 5 Ig的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖和3 15g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL 組成；步驟二中混合物置于_70°C冷凍機(jī)的冷凍盤中的大小為長40cmX寬50cmX高20mm。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的功能性益生性乳桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法，其特征在于步驟 一中按重量比1 1.5將含有功能性益生性乳桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合，在溫 度5°C的條件下進(jìn)行Ilh的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的功能性益生性乳桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法，其特征在 于步驟一中冷凍保護(hù)劑15g的脫脂乳粉、2g的甘油、1. 5g的維生素C、0. 8g的谷氨酸或甘氨 酸、5g的蔗糖和8g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。
全文摘要
功能性益生性乳桿菌高密度培養(yǎng)及其凍干產(chǎn)品的制備方法，它涉及乳桿菌培養(yǎng)及其凍干產(chǎn)品的制備方法。它解決了現(xiàn)有乳桿菌生產(chǎn)存在產(chǎn)品中活菌含量小、用量大、發(fā)酵效果差，而且其凍干制劑的制造和使用成本均較高的問題。培養(yǎng)一、耐氧馴化的功能性益生性乳桿菌接種到增菌培養(yǎng)基中，得發(fā)酵液；二、洗脫和絮凝；三、膜濃縮處理后即完成。制備一、膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合預(yù)冷，得混合物；二、將混合物預(yù)凍后，經(jīng)主干燥和解析干燥，再進(jìn)行粉碎、包裝并貯藏即完成。本發(fā)明中乳桿菌的活菌數(shù)為5.4×1010CFU/g，用量減少，且發(fā)酵效果好，凍干產(chǎn)品的生產(chǎn)成本低、工藝簡單且活性高，可達(dá)到直接使用目的。
文檔編號C12R1/23GK101948774SQ20101026631
公開日2011年1月19日 申請日期2010年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月30日
發(fā)明者馮鎮(zhèn), 張?zhí)m威, 張莉麗, 易華西, 李春, 李艷華, 杜明, 范榮波, 韓雪 申請人:哈爾濱工業(yè)大學(xué);張?zhí)m威