專利名稱：植物乳桿菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株植物乳桿菌及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
乳酸菌細(xì)菌素(Bacteriocins of LAB)是指乳酸菌在代謝過(guò)程中通過(guò)核糖體合成 的一類具有抗菌活性的多肽或蛋白質(zhì)類物質(zhì)。它們通?？梢砸种埔恍┏Ｒ?jiàn)的腐敗菌和致病 菌，如金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌、枯草芽孢桿菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌等。而且大部 分乳酸菌細(xì)菌素穩(wěn)定性較好，可與食品一起加熱使用，而且易被人體中的蛋白酶降解，不會(huì) 在體內(nèi)蓄積引起不良反應(yīng)，被認(rèn)為是一種具有廣闊應(yīng)用前景的天然食品防腐劑和飼料添加 劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株的產(chǎn)細(xì)菌素的植物乳桿菌及其應(yīng)用，該菌株生產(chǎn)的細(xì)菌 素抑制常見(jiàn)的G+和G—腐敗菌和病原菌。本發(fā)明提供的植物乳桿菌為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)QZ-3，其在 中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏編號(hào)為CGMCC No . 4199。上述植物乳桿菌是以一些最常見(jiàn)的G+和G—腐敗菌和病原菌為指示菌，篩選出產(chǎn)廣 譜細(xì)菌素的植物乳桿菌菌株，已于2010年09月30日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員 會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院，中國(guó)科學(xué)院微生 物研究所)，保藏登記號(hào)為CGMCC No . 4199。本發(fā)明提供的應(yīng)用，即植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum) QZ-3CGMCC Na . 4199在抑制細(xì)菌中的應(yīng)用，以及植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)QZ-3CGMCC N2 .4199在生產(chǎn)細(xì)菌素中的應(yīng)用。所述細(xì)菌為上述所述G+和G—腐敗菌和病原菌，具體可為藤黃微球菌 (Micrococcusluteus)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)、沙門氏菌(Salmonella enterica)、銅綠假單孢桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、大腸桿菌(Escherichia coli),優(yōu)選為藤黃微球菌(Micrococcus luteus)28001、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 26003、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)63501、沙門氏菌(Salmonella enterica) 50094、銅綠假單孢桿菌(Pseudomonas aeruginosa) 10104、大腸桿菌(Escherichia coli) 30105。本發(fā)明的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)QZ-3可以產(chǎn)生對(duì)多種病原菌和 腐敗菌具有抑制作用的細(xì)菌素，該細(xì)菌素對(duì)蛋白酶的敏感，具有很好的熱穩(wěn)定性，在100°c 作用30min仍然保持活性，該細(xì)菌素在PH2. 0-10. 0范圍內(nèi)處理30min后，回調(diào)到pH6. 0后， 均保持很強(qiáng)的抑制指示菌藤黃微球菌(Micrococcus luteus) 28001的能力。并且該細(xì)菌素 具有抑菌譜廣的優(yōu)點(diǎn)?？梢詰?yīng)用為具有廣闊應(yīng)用前景的天然食品防腐劑和飼料添加劑。


圖1為細(xì)菌素對(duì)酶的敏感性檢測(cè)結(jié)果；圖2為細(xì)菌素提取條件對(duì)其活性的影響；圖3為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum) QZ_3產(chǎn)細(xì)菌素對(duì)藤黃微球菌生長(zhǎng) 曲線的影響
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)QZ-3 的獲得一、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)QZ-3 的獲得菌種來(lái)源分離自西藏的青貯飼料。本發(fā)明以一些最常見(jiàn)的G+和G—腐敗菌和病 原菌為指示菌，篩選出產(chǎn)廣譜細(xì)菌素的乳酸菌菌株，具體方法為在無(wú)菌條件下，取乳制品 材料5g，加入到45mL無(wú)菌蒸餾水中，充分震蕩5min，以10倍系列稀釋，從10—1 10_7梯度， 選合適的梯度，取100 μ L分別涂布于含有MRS培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，30°C靜置培養(yǎng)并計(jì)數(shù)。其 中，含MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)皿為厭氧培養(yǎng)48h，厭氧培養(yǎng)設(shè)備采用三菱株式化學(xué)社出品的厭氧包 與厭氧培養(yǎng)盒。從含MRS培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中挑取單菌落，劃線純化2次，并進(jìn)行革蘭氏染色 試驗(yàn)，鏡檢。利用牛津杯雙層平板法含1. 5%瓊脂的指示菌培養(yǎng)基冷卻至50°C左右，按每 平皿15mL傾倒在無(wú)菌培養(yǎng)皿中，超凈工作臺(tái)中冷卻；制備含0. 8%瓊脂的指示菌培養(yǎng)基，冷 卻至50°C左右，按1 %的接種量加入指示菌菌懸液作為上層培養(yǎng)基，傾倒5mL上層培養(yǎng)基于 含1. 5%瓊脂培養(yǎng)基的平板中冷卻，然后用無(wú)菌鑷子將牛津杯輕輕放置于平板上，將無(wú)細(xì)胞 發(fā)酵上清液加入牛津杯中于超凈工作臺(tái)上擴(kuò)散5h，置于適宜的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)24h后觀察 抑菌圈的出現(xiàn)，選取牛津杯周圍有明顯抑菌圈的菌株做復(fù)篩。結(jié)果獲得一株廣泛抑制指示 菌的菌株，命名為QZ-3。二、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)QZ-3 的鑒定QZ-3菌株生理生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，碳源發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果如表2所示；16SrRNA 基因序列如序列表中序列1所示。根據(jù)細(xì)胞顯微形態(tài)、生理生化數(shù)據(jù)和16S rRNA基因序列 數(shù)據(jù)，將QZ-3菌株鑒定為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)，并于2010年09月30 日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為北京市朝 陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，保藏登記號(hào)為CGMCC No . 4199。表1、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)QZ_3理化實(shí)驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)QZ 3，其在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏編號(hào)為CGMCC №.4199。
2.植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)QZ-3 CGMCC Ns . 4199 在抑制細(xì)菌中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述細(xì)菌為藤黃微球菌、金黃色葡萄球 菌、枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、銅綠假單孢桿菌、沙門氏菌或大腸桿菌。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述細(xì)菌為藤黃微球菌28001、金黃色葡 萄球菌26003、枯草芽孢桿菌63501、短小芽孢桿菌63202、銅綠假單孢桿菌10104、沙門氏菌 50094和大腸桿菌30105。
5.植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)QZ-3 CGMCC Ns . 4199 在生產(chǎn)細(xì)菌素中的 應(yīng)用。
6.植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)QZ-3 CGMCC Ns . 4199 在制備食品或飼料 防腐劑中的應(yīng)用。
7.培養(yǎng)植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum) QZ-3 CGMCC Ns . 4199 的培養(yǎng)基，由葡 萄糖3%，胰蛋白胨2%，蛋白胨2 %，酵母膏2%，硫酸鎂0. 058 %，吐溫800. 2 %和水組成， 其中百分含量為質(zhì)量百分含量。
8.植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)QZ-3 CGMCC Ns . 4199 在制備細(xì)菌抑制劑 中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株植物乳桿菌及其應(yīng)用。該植物乳桿菌為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)QZ-3，其在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏編號(hào)為CGMCC №.4199。植物乳桿菌QZ-3可以產(chǎn)生對(duì)多種病原菌和腐敗菌具有抑制作用的細(xì)菌素，并且該細(xì)菌素具有很好的熱穩(wěn)定性和酸穩(wěn)定性，并且對(duì)蛋白酶的敏感，抑菌譜廣等優(yōu)點(diǎn)?？梢詰?yīng)用為具有廣闊應(yīng)用前景的天然食品防腐劑和飼料添加劑。
文檔編號(hào)C12R1/25GK101974468SQ20101052717
公開日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2010年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月26日
發(fā)明者常勝合, 龐會(huì)利, 李宗偉, 楊飛飛, 焦湞, 王雁萍, 秦廣雍, 蔡義民, 談重芳 申請(qǐng)人:鄭州大學(xué)