專利名稱：采用動物細(xì)胞流加培養(yǎng)方式高效表達(dá)單克隆抗體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及動物細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及一種采用動物細(xì)胞流加 培養(yǎng)方式表達(dá)單克隆抗體的方法。
背景技術(shù)：
動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)各類生物活性物質(zhì)如單克隆抗體、 病毒疫苗、免疫調(diào)節(jié)因子、生長因子、特定腫瘤抗原以及各種基因重組蛋白質(zhì)藥物。動 物細(xì)胞同微生物相比具有轉(zhuǎn)錄后修飾的能力，能夠高效地表達(dá)和生產(chǎn)各類高質(zhì)量的蛋白 質(zhì)。動物細(xì)胞培養(yǎng)無論是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞，就操作方式而言，主要分為分批 式(Batch)，流加式(Fed-batch)和灌流式(Perfusion)三種操作方式。簡單的分批培養(yǎng) (Batch)中，隨著營養(yǎng)物的消耗和副產(chǎn)物積累，細(xì)胞停止生長并開始死亡，產(chǎn)物也停止 表達(dá)，生產(chǎn)效率很低。流加培養(yǎng)(Fed-batch)，即在培養(yǎng)過程中，根據(jù)細(xì)胞代謝需求， 連續(xù)或間歇地向反應(yīng)器內(nèi)加入特定的流加培養(yǎng)基，補(bǔ)充新的營養(yǎng)物質(zhì)，減少副產(chǎn)物， 克服了批培養(yǎng)的弊端。流加培養(yǎng)同批培養(yǎng)相比，培養(yǎng)周期延長，能夠最終獲得更高的 活細(xì)胞密度和產(chǎn)物濃度(J.B.Griffith，Animal Cell Culture and Production of Biologicals, pp.401-410, Klumer Academic Publishers, R.Sasaki and K.Ikura(eds.)，(1991), Robbinson DK, Seamans TC， et al.optimization of a fed-batch process for production of a recombinant antibody.Annals NY Academy Sciences, (1994)，745 185-296.)。連續(xù)灌流培養(yǎng) (Perfusion)是指把細(xì)胞和培養(yǎng)基一起加入反應(yīng)器后，在細(xì)胞增長和產(chǎn)物形成過程中，不 斷地將消耗過的培養(yǎng)基排出，同時(shí)又連續(xù)不斷地灌注新的培養(yǎng)基的方法。目前，流加式 (Fed-batch)培養(yǎng)是動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)分泌型重組蛋白藥物較為推崇的一種操作方 式。此外，動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的有關(guān)研究內(nèi)容還包括高密度和高表達(dá)細(xì)胞的培養(yǎng) 環(huán)境及條件，促進(jìn)單個細(xì)胞的基因合成和產(chǎn)物表達(dá)，改進(jìn)培養(yǎng)系統(tǒng)的氧傳遞方式，以及 減少剪切力和降低生產(chǎn)成本的培養(yǎng)條件等。其中，培養(yǎng)溫度是影響重組蛋白生產(chǎn)的重 要因素之一，優(yōu)化培養(yǎng)溫度，可提高重組蛋白的產(chǎn)量，與其他方法相比，此方法操作簡 便，有較好的實(shí)用價(jià)值。CN 200510011774.5(發(fā)明名稱為一種高效表達(dá)目的蛋白的 方法)公開了一種高效表達(dá)目的蛋白的方法，該方法通過優(yōu)化穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的工 程化CHO細(xì)胞株的培養(yǎng)溫度，并利用兩階段培養(yǎng)策略，使融合蛋白表達(dá)量得到顯著提 高。但一些研究表明，僅通過優(yōu)化培養(yǎng)溫度，并不能使重組蛋白的產(chǎn)量提高到理想水 平(Yoon SK, Song JY, Lee GM.EfFect of low culture temperature on specific productivity, transcription level, and heterogeneity of erythropoietin in Chinese hamster ovary cells.Biotechnol Bioeng.2003, 82(3) 289-98)，這是因?yàn)榻档团囵B(yǎng)溫度可提高目的蛋白的比 生成率，但同時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞增殖抑制，降低了細(xì)胞的相對數(shù)量，從而影響了目的蛋白產(chǎn)量 的提高。而且溫度不僅僅是影響重組蛋白表達(dá)的唯一因素。因此，結(jié)合優(yōu)化培養(yǎng)溫度綜 合考慮其它因素使重組蛋白高效表達(dá)一直是本領(lǐng)域技術(shù)人員一直期待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明的申請人公開了一種采用動物細(xì)胞流加培養(yǎng)方式高 效表達(dá)重組蛋白的方法。包括如下步驟(1)細(xì)胞培養(yǎng)溫度36°C-38°C，PH值6.5-6.9，培養(yǎng)24-48小時(shí)，當(dāng)動物細(xì)胞生 長至適當(dāng)密度時(shí)補(bǔ)加流加培養(yǎng)基，進(jìn)行流加培養(yǎng)；(2)細(xì)胞培養(yǎng)溫度降至32.5°C -35PH值7.0-7.3，進(jìn)行流加培養(yǎng)；(3)停止流加，細(xì)胞培養(yǎng)溫度升至36°C-38°C，PH值7.0-7.3，進(jìn)行培養(yǎng)。本發(fā)明選擇動物細(xì)胞流加培養(yǎng)方式進(jìn)行重組蛋白的表達(dá)，并在流加培養(yǎng)的不同 階段控制不同范圍的細(xì)胞培養(yǎng)溫度和PH值，通過增加單位體積的細(xì)胞數(shù)量和單個細(xì)胞的 蛋白表達(dá)量以期達(dá)到重組蛋白高效表達(dá)的目的。培養(yǎng)溫度是影響重組蛋白生產(chǎn)的重要因素之一。大多數(shù)動物細(xì)胞適宜的生長溫 度在37°C左右。在36°C-38°C的培養(yǎng)溫度下，動物細(xì)胞增殖速度很快。當(dāng)溫度逐漸下 降，細(xì)胞的增殖速度也逐漸減慢，但細(xì)胞表達(dá)重組蛋白的比生成率則顯著提高。因此， 細(xì)胞在36°C-38°C下處于生長期，以細(xì)胞增殖為主；而在32.5°C-35°C下，細(xì)胞增殖受到 抑制，細(xì)胞處于維持期，此時(shí)以重組蛋白表達(dá)為主。PH值的變化是培養(yǎng)環(huán)境及條件的另一個重要因素。一定范圍的PH環(huán)境將有利 于細(xì)胞的生長。大多數(shù)動物細(xì)胞的適宜pH為6.8-7.4，偏離這一范圍對細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生 有害的影響。但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些，在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長。對于同 一種細(xì)胞.生長期和維持期最適pH也不盡相同。對大多數(shù)細(xì)胞來說，偏酸環(huán)境更利于生 長.而偏堿環(huán)境更利于維持。本發(fā)明方法采用三段法。第一階段，即流加培養(yǎng)過程步驟(1)中，細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境溫度36°C-38°C，PH值 6.5-6.9。此時(shí)的細(xì)胞處于旺盛的生長期，選擇偏酸的培養(yǎng)環(huán)境還有利于減少副產(chǎn)物的產(chǎn) 生，如乳酸累積。培養(yǎng)24-48小時(shí)，當(dāng)細(xì)胞生長至適當(dāng)密度時(shí)通過補(bǔ)加流加培養(yǎng)基，讓 細(xì)胞繼續(xù)充分生長。第二階段，即流加培養(yǎng)過程步驟(2)中，細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境溫度32.5°C-35°C，PH值 7.0-7.3。此時(shí)的細(xì)胞進(jìn)入維持期，細(xì)胞以表達(dá)重組蛋白為主。此時(shí)選擇一定的流加稀釋 率和流加時(shí)間，盡量使單個細(xì)胞的重組蛋白得到充分表達(dá)。第三階段，即流加培養(yǎng)過程步驟(3)中，細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境溫度36°C-38°C，PH值 7.0-7.3。此時(shí)的細(xì)胞接近生長末期，停止添加流加培養(yǎng)基，再培養(yǎng)一段時(shí)間使細(xì)胞在適 宜的溫度下繼續(xù)生長，并完成蛋白表達(dá)的最后過程。經(jīng)過以上步驟，于合適的時(shí)間收集上清，經(jīng)檢測重組蛋白的產(chǎn)量得到顯著提
尚o本發(fā)明選擇流加培養(yǎng)方式培養(yǎng)動物細(xì)胞，通過生物反應(yīng)器電加熱系統(tǒng)控制培養(yǎng)溫度，并通過向生物反應(yīng)器中通入C02氣體使PH值下降或者加入NaHC03溶液使PH值 上升。除了溫度和PH值以外的其他培養(yǎng)條件采用本領(lǐng)域的常規(guī)做法。本發(fā)明與CN 200510011774.5 (發(fā)明名稱為一種高效表達(dá)目的蛋白的方法)公 開的細(xì)胞兩階段培養(yǎng)方法相比較，在細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)(50升及以上規(guī)模)生產(chǎn)重組蛋白方 面，本發(fā)明三段法的蛋白表達(dá)量高于對比文獻(xiàn)兩段法的蛋白表達(dá)量30%以上，對于重組 蛋白藥物產(chǎn)業(yè)化更具有實(shí)際意義。本發(fā)明利用動物細(xì)胞的生長特點(diǎn)，通過改變溫度和PH值達(dá)到提高重組蛋白產(chǎn) 量的目的。該方法的優(yōu)點(diǎn)在于操作簡便，容易實(shí)施，在提高蛋白產(chǎn)量的同時(shí)不提高 成本，適合于大規(guī)模的動物細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是應(yīng)用于生產(chǎn)各類生物活性物質(zhì)如單克隆抗 體、融合蛋白以及各種基因重組蛋白質(zhì)。


圖1為本發(fā)明“三段法”表達(dá)重組人II型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白與 對比文獻(xiàn)“兩段法”培養(yǎng)過程中的細(xì)胞生長比較圖。圖2為本發(fā)明“三段法”表達(dá)重組人II型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白與 對比文獻(xiàn)“兩段法”培養(yǎng)過程中的蛋白產(chǎn)量比較圖。圖3為本發(fā)明“三段法”表達(dá)人源化抗HER-2單克隆抗體與對比文獻(xiàn)“兩段 法”培養(yǎng)過程中的細(xì)胞生長比較圖。圖4為本發(fā)明“三段法”表達(dá)人源化抗HER-2單克隆抗體與對比文獻(xiàn)“兩段 法”培養(yǎng)過程中的蛋白產(chǎn)量比較圖。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例僅僅對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明，不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。實(shí)施例1 CHO細(xì)胞“三段法”表達(dá)融合蛋白1.材料穩(wěn)定表達(dá)重組人II型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白的CHO細(xì)胞株(按 照專利號01132074.5，發(fā)明名稱腫瘤壞死因子受體可溶部分的重組基因，及其 融合基因與產(chǎn)物制備)；ExCell325-PF培養(yǎng)基(美國JRH公司生產(chǎn))作為基礎(chǔ)培養(yǎng) 基；ExCell325-PF培養(yǎng)基中加入葡萄糖(濃度為60-90mmOl/L)和谷氨酰胺(濃度為 5.0-7.8mmol/L)作為流加培養(yǎng)基。2.生物反應(yīng)器Biostat D-50生物反應(yīng)器(德國貝朗公司)。
3.CH0細(xì)胞流加培養(yǎng)三段法(1)將穩(wěn)定表達(dá)重組人II型腫瘤壞死因子受體_抗體融合蛋白的CH0細(xì)胞株在第 1天接種后以5.0X105CellS/ml于生物反應(yīng)器中。控制溫度在37°C左右，上下浮動不超過 1°C, PH值控制在6.5-6.9之間。培養(yǎng)48小時(shí)，當(dāng)CH0細(xì)胞密度達(dá)到2.0-3.5 X 106cells/ ml時(shí)添加流加培養(yǎng)基，控制流加稀釋率為0.1-0.3/天，流加時(shí)間72小時(shí)。(2)降低培養(yǎng)溫度，將溫度控制在32.5°C-35°C，同時(shí)控制PH值7.0-7.3?？刂?流加稀釋率為0.1-0.2/天，流加時(shí)間120小時(shí)。
(3)升高細(xì)胞培養(yǎng)溫度至36°C-38°C，PH值7.0-7.3。停止添加流加培養(yǎng)基，再 培養(yǎng)24小時(shí)。整個培養(yǎng)過程中反應(yīng)器的攪拌轉(zhuǎn)速為50-60rpm，溶氧為40_50%空氣飽和度。4.本發(fā)明“三段法”與對比文獻(xiàn)“兩段法”進(jìn)行比較(1) “兩段法”的CHO細(xì)胞培養(yǎng)方法第一階段將穩(wěn)定表達(dá)重組人II型腫瘤壞死因子受體_抗體融合蛋白的CHO細(xì) 胞株在第1天接種后以5.0X105Cells/ml于生物反應(yīng)器中，控制溫度在36.5°C_37.8°C，PH 值控制在6.8-7.4，反應(yīng)器的攪拌轉(zhuǎn)速為50-60rpm，溶氧為40-50%空氣飽和度。培養(yǎng)48 小時(shí)后開始添加流加培養(yǎng)基，根據(jù)培養(yǎng)環(huán)境控制流加稀釋率，流加時(shí)間72小時(shí)。第二階段將培養(yǎng)溫度降至25°C-32°C，繼續(xù)流加培養(yǎng)120小時(shí)，其他培養(yǎng)條件 不變。停止添加流加培養(yǎng)基，再培養(yǎng)24小時(shí)。(2)本發(fā)明“三段法”與“兩段法”細(xì)胞密度的測定在用“三段法”與“兩段法”分別進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，在第2、3、4、5、 6、7、8、9、10、11和12天，常規(guī)采用血球計(jì)數(shù)法檢測細(xì)胞密度，結(jié)果見附圖1。(3)本發(fā)明“三段法”與“兩段法”蛋白表達(dá)量的測定在用“三段法”與“兩段法”分別進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，在第2、3、4、5、 6、7、8、9、10、11和12天，常規(guī)采用ELISA法，按照人可溶性腫瘤壞死因子_a受體 2(sTNF-aR2)酶免試劑盒(購自上海軒昊科技發(fā)展有限公司)說明書操作檢測融合蛋白的 表達(dá)量，結(jié)果見附圖2。(4)本發(fā)明“三段法”與“兩段法”的比較結(jié)果細(xì)胞密度的比較兩種細(xì)胞培養(yǎng)方法中，從第1天到第5天，細(xì)胞均處于旺盛的 生長期；在第5天，細(xì)胞生長達(dá)到最高峰；此后，細(xì)胞生長處于維持期，細(xì)胞生長速度 減慢，細(xì)胞密度曲線呈現(xiàn)一個平臺期，但“三段法”的細(xì)胞密度明顯高于“兩段法”的 細(xì)胞密度；在第12天，細(xì)胞密度達(dá)到最低點(diǎn)，見附圖1。蛋白表達(dá)量的比較兩種細(xì)胞培養(yǎng)方法中，從第1天到第5天，蛋白表達(dá)量處于 緩慢增長期；從第5天到第9天，蛋白表達(dá)量增長迅速；從第10天開始，“兩段法”的 蛋白表達(dá)量增長趨于平緩，而“三段法”的蛋白表達(dá)量增長依然顯著；在第12天，“三 段法”的蛋白表達(dá)量達(dá)到1.02g/L，而“兩段法”的蛋白表達(dá)量為0.71g/L，“三段法” 的蛋白表達(dá)量提高43.66%，見附圖2。實(shí)施例2 CHO細(xì)胞“三段法”表達(dá)單克隆抗體1.材料穩(wěn)定表達(dá)人源化抗HER-2單克隆抗體的CHO細(xì)胞株(按照專利號01132225. X，發(fā)明名稱人源化抗HER-2單克隆抗體及其制法和藥物組合物制備)；ExCell325-PF 培養(yǎng)基(由美國JRH公司生產(chǎn))作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；ExCell325-PF培養(yǎng)基中加入葡萄糖(濃 度為60-90mmol/L)和谷氨酰胺(濃度為5.0-7.8mmol/L)作為流加培養(yǎng)基。。2.生物反應(yīng)器 Biostat D-50生物反應(yīng)器(德國貝朗公司)。3.CH0細(xì)胞流加培養(yǎng)三段法(1)將穩(wěn)定表達(dá)人源化抗HER-2單克隆抗體的CH0細(xì)胞株在第1天接種后以5.0X105Cells/ml于生物反應(yīng)器中?？刂茰囟仍?7°C左右，上下浮動不超過1°C，PH值 控制在6.5-6.9之間。培養(yǎng)48小時(shí)，當(dāng)CHO細(xì)胞密度達(dá)到2.0-3.5X 106cells/ml時(shí)添加 流加培養(yǎng)基，控制流加稀釋率為0.1-0.3/天，流加時(shí)間96小時(shí)。(2)降低培養(yǎng)溫度，將溫度控制在32.5°C-35°C，同時(shí)控制PH值7.0-7.3?？刂?流加稀釋率為0.1-0.2/天，流加時(shí)間144小時(shí)。(3)升高細(xì)胞培養(yǎng)溫度至36°C-38°C，PH值7.0-7.3。停止添加流加培養(yǎng)基，再 培養(yǎng)24小時(shí)。整個培養(yǎng)過程中反應(yīng)器的攪拌轉(zhuǎn)速為50-60rpm，溶氧為40_50%空氣飽和度。4.本發(fā)明“三段法”與對比文獻(xiàn)“兩段法”進(jìn)行比較(1) “兩段法”的CHO細(xì)胞培養(yǎng)方法第一階段將穩(wěn)定表達(dá)人源化抗HER-2單克隆抗體的CHO細(xì)胞株在第1天 接種后以5.0X105cells/ml于生物反應(yīng)器中，控制溫度在36.5°C-37.8°C，PH值控制在 6.8-7.4，反應(yīng)器的攪拌轉(zhuǎn)速為50-60rpm，溶氧為40-50%空氣飽和度。培養(yǎng)48小時(shí)后開 始添加流加培養(yǎng)基，根據(jù)培養(yǎng)環(huán)境控制流加稀釋率，流加時(shí)間96小時(shí)。第二階段將培養(yǎng)溫度降至25°C-32°C，繼續(xù)流加培養(yǎng)144小時(shí)，其他培養(yǎng)條件 不變。停止添加流加培養(yǎng)基，再培養(yǎng)24小時(shí)。(2)本發(fā)明“三段法”與改進(jìn)前“兩段法”細(xì)胞密度的測定在用“三段法”與“兩段法”分別進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，在第2、3、4、5、 6、7、8、9、10、11、12、13和14天，常規(guī)采用血球計(jì)數(shù)法檢測細(xì)胞密度，結(jié)果見附圖 3。(3)本發(fā)明“三段法”與“兩段法”蛋白表達(dá)量的測定在用“三段法”與“兩段法”分別進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，在第2、3、4、 5、6、7、8、9、10、11、12、13和14天，常規(guī)采用雙抗體夾心法(具體方法將羊抗 人IgG輕鏈包被于酶標(biāo)板，BSA等無關(guān)蛋白封閉后，加入精確定量梯度稀釋的人源化抗 HER-2單克隆抗體，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線；同時(shí)加入待檢測的上清；反應(yīng)后經(jīng)過洗滌，再加入 HRP標(biāo)記的羊抗人重鏈的二抗；反應(yīng)后經(jīng)洗滌，加入HRP的顯色底物TMB，室溫避光 顯色，1M硫酸終止，酶標(biāo)儀讀取OD450nm，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待檢測上清中人源化抗 HER-2單克隆抗體的表達(dá)量。其中，羊抗人IgG輕鏈和HRP標(biāo)記的羊抗人重鏈的二抗均 由美國KPL公司生產(chǎn)。)檢測單克隆抗體的表達(dá)量，結(jié)果見附圖4。(4)本發(fā)明“三段法”與“兩段法”的結(jié)果比較兩種細(xì)胞培養(yǎng)方法中，培養(yǎng)結(jié)果無論是細(xì)胞密度還是蛋白表達(dá)量，“三段法” 均優(yōu)于“兩段法”。尤其在培養(yǎng)第10天以后，“三段法”的蛋白表達(dá)量增長依然顯著， 最高可達(dá)到1.04g/L，相對于“兩段法”最高蛋白表達(dá)量0.77g/L，“三段法”的蛋白表 達(dá)量提高35.06%。從兩種培養(yǎng)方法的細(xì)胞密度和蛋白表達(dá)量的不同可以得出結(jié)論，本發(fā)明“三段 法”由于在提高蛋白產(chǎn)量的同時(shí)不提高成本，并且操作簡便、容易實(shí)施，更適合于大規(guī) 模的動物細(xì)胞培養(yǎng)，，尤其是可以應(yīng)用于生產(chǎn)各類生物活性物質(zhì)如單克隆抗體、融合蛋 白以及各種基因重組蛋白質(zhì)。
權(quán)利要求
1.一種采用CHO細(xì)胞流加培養(yǎng)方式高效表達(dá)單克隆抗體的方法，其特征在于所述方 法包括如下步驟(1)細(xì)胞培養(yǎng)溫度36°c-38°c，PH值6.5-6.9，培養(yǎng)24-48小時(shí)，當(dāng)CHO細(xì)胞生長至 適當(dāng)密度時(shí)補(bǔ)加流加培養(yǎng)基，進(jìn)行流加培養(yǎng)；(2)細(xì)胞培養(yǎng)溫度降至32.5°C-35°C，PH值7.0-7.3，進(jìn)行流加培養(yǎng)；(3)停止流加，細(xì)胞培養(yǎng)溫度升至36°C-38°C，PH值7.0-7.3，進(jìn)行培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)中，所述的細(xì)胞適當(dāng)密度為 2.0-3.5X106cells/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)中，流加稀釋率為0.1-0.3/天， 流加培養(yǎng)時(shí)間72-96小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(2)中，流加稀釋率為0.1-0.2/天， 流加培養(yǎng)時(shí)間120-144小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)中，所述的培養(yǎng)時(shí)間為24-48小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的流加培養(yǎng)基為無血清培養(yǎng)基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的單克隆抗體為人源化抗HER-2單 克隆抗體。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種采用動物細(xì)胞流加培養(yǎng)方式高效表達(dá)單克隆抗體的方法。該方法選擇動物細(xì)胞流加培養(yǎng)方式進(jìn)行單克隆抗體的表達(dá)，并在流加培養(yǎng)的不同階段控制不同范圍的細(xì)胞培養(yǎng)溫度和pH值，以期達(dá)到單克隆抗體高效表達(dá)的目的。本發(fā)明操作簡便，容易實(shí)施，在提高蛋白產(chǎn)量的同時(shí)不提高成本，適合于大規(guī)模的動物細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是應(yīng)用于生產(chǎn)各類生物活性物質(zhì)如單克隆抗體、融合蛋白以及各種基因重組蛋白質(zhì)。
文檔編號C12N5/16GK102021217SQ20101053167
公開日2011年4月20日 申請日期2006年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月20日
發(fā)明者侯盛, 寇庚, 王皓, 胡輝, 郭亞軍 申請人:上海國健生物技術(shù)研究院