專利名稱：一種用添加營養(yǎng)物質提高球孢白僵菌孢子萌發(fā)率的方法
技術領域：
一種用添加營養(yǎng)物質提高球孢白僵菌孢子萌發(fā)率的方法，涉及營養(yǎng)物質添加在生 物農藥中的應用技術領域。
背景技術：
白僵菌(Bemveria bassiana)是一種廣譜性的昆蟲病原真菌，在防治農林害蟲 上具有顯著的應用潛力。白僵菌孢子的萌發(fā)率直接決定其殺蟲效果。白僵菌孢子的萌發(fā)率 越高，其毒力越強，殺蟲率越高。因此，提高白僵菌孢子的萌發(fā)率就成為提高白僵菌殺蟲效 果的關鍵所在。利用在白僵菌孢子懸浮液中添加麩皮浸出液(營養(yǎng)物質)的策略提高白僵菌 孢子的萌發(fā)率，尚未見文獻報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種用在球孢白僵菌孢子懸浮液中添加營養(yǎng)物質的策略提 高球孢白僵菌孢子萌發(fā)率的方法，利用本發(fā)明能大大提高球孢白僵菌孢子的萌發(fā)率。本發(fā)明的技術方案一種用添加營養(yǎng)物質提高球孢白僵菌孢子萌發(fā)率的方法，以 球孢白僵菌(^^/^ria bassianaXClCC No :M209238為發(fā)酵菌珠，將其產生的孢子配制成 一定濃度的孢子懸浮液，在該孢子懸浮液中添加麩皮浸出液，控制反應液中的球孢白僵菌 孢子最終濃度為2 X IO7孢子/mL，控制反應液中的麩皮浸出液最終質量濃度為0. 5%-10%， 置于25 °C、ISOrpm搖床上進行培養(yǎng)12h后，大大提高白僵菌孢子的萌發(fā)率。菌珠CCTCC No :M209238已在中國專利200910264664. 8中公開，公布日2010年6月9日，公布號 CN101724571A?？刂品磻褐械柠熎そ鲆鹤罱K質量濃度為2%，提高白僵菌孢子的萌發(fā)率。本發(fā)明的有益效果利用本發(fā)明能大大提高球孢白僵菌孢子的萌發(fā)率。孢子萌發(fā) 率由4. 63%提高到80%以上，最高達95. 31%。白僵菌孢子可用于抑制茶葉小綠葉蟬，其孢子 萌發(fā)率的大大提高，一定程度上增強了白僵菌孢子的毒力。本發(fā)明的在孢子懸浮液中添加 營養(yǎng)物質(麩皮浸出液)的策略對其它生物農藥的應用具有一定的指導意義。
具體實施例方式孢子懸浮液的制備
1、洗脫。本發(fā)明所用的菌種為球孢白僵菌^^/^ria bassiana (保藏編號為CCTCC No :M209238 )，取適量新鮮或在4°C冰箱中保存3個月以內(最好用保藏的)的培養(yǎng)物于250 mL的三角瓶中，加入適量0. 05%的吐溫-80溶液和玻璃珠，用玻璃棒將培養(yǎng)物搗碎，置于 25°C、180rpm搖床上振蕩30min (以上)。2、過濾。振蕩后，將三角瓶取出，用2-4層紗布過濾，取濾液。3、離心。將濾液離心，條件為8000rpm、5min、4°C，棄去上清。4、復溶。將離心后的沉淀物，加入一定量的0.05%的吐溫-80溶液復溶，攪勻，配制成孢子懸浮液。5、打散。將復溶后的孢子懸浮液添加適量的玻璃珠后，置于25°C、ISOrpm搖床上 振蕩Ih (以上)，將孢子充分打散，使其均勻的分散在吐溫溶液中。6、計數。將以上孢子懸浮液用血球計數板計數。7、稀釋。計數后，將孢子懸浮液的濃度稀釋為4X IO7孢子/mL，待用。麩皮浸出液的制備
濃度為3%的麩皮浸出液是指將a g麩皮添加到IOOmL蒸餾水中，沸水浴30min (以 上)，冷卻后用2-4層紗布過濾，再用蒸餾水將濾液補足至IOOmL,該溶液即為濃度為a%的麩 皮浸出液。制備濃度分別為1%、2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%、16%、18%、20% 的麩皮 浸出液各100mL。對照實施例不添加任何營養(yǎng)物質，將孢子懸浮液與吐溫-80溶液1 1混合。即 量取25mL濃度為4X IO7孢子/mL的孢子懸浮液和25mL濃度為0. 05%的吐溫-80溶液于 250mL的三角瓶中混合均勻，則反應液中孢子的最終濃度為2X IO7孢子/mL。再置于25°C、 ISOrpm搖床上培養(yǎng)12h后，取樣用血球計數板檢測其孢子萌發(fā)率。結果球孢白僵菌孢子 萌發(fā)率為4. 63%。實施例1 采用在孢子懸浮液中添加營養(yǎng)物質策略，添加方式為將孢子懸浮液與 濃度為1%的麩皮浸出液體積比1 1混合，其余條件同對照實施例。則反應液中孢子的最終 濃度為2X IO7孢子/mL，反應液中麩皮浸出液的最終濃度為0. 5%。結果球孢白僵菌孢子 萌發(fā)率為65. 59%ο實施例2 采用在孢子懸浮液中添加營養(yǎng)物質策略，添加方式為將孢子懸浮液與 濃度為10%的麩皮浸出液體積比1:1混合，其余條件同對照實施例。則反應液中孢子的最 終濃度為2X IO7孢子/mL，反應液中麩皮浸出液的最終濃度為5%。結果球孢白僵菌孢子 萌發(fā)率為83. 05%。實施例3 采用在孢子懸浮液中添加營養(yǎng)物質策略，添加方式為將孢子懸浮液與 濃度為20%的麩皮浸出液體積比1:1混合，其余條件同對照實施例。則反應液中孢子的最 終濃度為2X IO7孢子/mL，反應液中麩皮浸出液的最終濃度為10%。結果球孢白僵菌孢子 萌發(fā)率為=47. 92%。
權利要求
一種用添加營養(yǎng)物質提高球孢白僵菌孢子萌發(fā)率的方法，其特征在于以球孢白僵菌(Beauveria bassiana)CCTCC NoM209238為發(fā)酵菌珠，將其產生的孢子配制成一定濃度的孢子懸浮液，在該孢子懸浮液中添加麩皮浸出液，控制反應液中的球孢白僵菌孢子最終濃度為2×107孢子/mL，控制反應液中的麩皮浸出液最終質量濃度為0.5% 10%，置于25℃、180rpm搖床上進行培養(yǎng)12h后，大大提高白僵菌孢子的萌發(fā)率。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于控制反應液中的麩皮浸出液最終質量濃度 為2%，提高白僵菌孢子的萌發(fā)率。
全文摘要
一種用添加營養(yǎng)物質提高球孢白僵菌孢子萌發(fā)率的方法，屬于營養(yǎng)物質添加在生物農藥中的應用技術領域。本發(fā)明以球孢白僵菌(Beauveriabassiana)(保藏編號為CCTCC NoM209238)為發(fā)酵菌株，將其產生的孢子配制成一定濃度的孢子懸浮液，在該孢子懸浮液中添加最終濃度為0.5%-10%的麩皮浸出液，在適當的條件下(250mL的三角瓶，裝液量50mL；25℃、180rpm搖床12h)進行培養(yǎng)。在此培養(yǎng)條件下，球孢白僵菌孢子的萌發(fā)率由對照例(不添加任何營養(yǎng)物質)的4.63%提高到80%以上，最高達95.31%。利用此策略可以大大提高白僵菌孢子的萌發(fā)率，為其田間使用提供了基礎和保證。
文檔編號C12N3/00GK101967463SQ201010536189
公開日2011年2月9日 申請日期2010年11月9日 優(yōu)先權日2010年11月9日
發(fā)明者吳建良, 堵國成, 朱陽, 李華祥, 李江華, 楊海泉, 王一華, 陳堅 申請人:無錫益鵬集團有限公司;江南大學