專利名稱：一種海洋鏈霉菌以及利用該菌制備替達(dá)霉素a和b的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種海洋鏈霉菌，具體涉及一種海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666，另外本發(fā)明還涉及一種利用該菌株制備替達(dá)霉素A和B的方法。
背景技術(shù)：
替達(dá)霉素A (Tirandamycin A)和替達(dá)霉素B (Tirandamycin B)是利迪鏈菌素類似化合物，其結(jié)構(gòu)式如式(I)所示，這類Tetramic acid(2，4_吡咯啉啶二酮)抗生素具有廣泛的生物活性，如抗革蘭陽性細(xì)菌、抑制白血病淋巴細(xì)胞的末端轉(zhuǎn)脫氧核苷酸酰酶、抑制細(xì)菌RNA聚合酶、抑制小鼠肝線粒體氧化磷酸化和HIV蛋白酶等生物活性(Reusser F. Infect Immun,1970, 2(1) 77 ；Reusser F. Infect Immun,1970,2(1) 82 ；Reusser F.Antimicrob Agents Chemother, 1976,10 (4) :618.)。Tuske等用X射線衍射法闡明了利迪鏈菌素與 RNA聚合酶復(fù)合物的晶體三維結(jié)構(gòu)和作用位點，發(fā)現(xiàn)了其發(fā)揮抑制作用的方式和機制，這種作用方式有別于臨床治療肺結(jié)核疾病藥物利福平作用于細(xì)菌RNA聚合酶(Tuske S，et al. Cell, 2005,122(26) :541)。提示此類抗生素具有潛在的藥物開發(fā)價值。近年來這些方
面的研究受到越來越多的重視。
14Z15
X=^V2 0
J^^NH
HO \4' 5/式(I)Tirandamycin A :R = HTirandamycin B :R = OH

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個目的是提供了一種新的海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666，該菌于2010年11月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心 (CGMCC)，地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，其保藏編號為CGMCC No. 4359。本發(fā)明的海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666是從我國南海北部水深35 米的海底沉積物中分離獲得，該海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666菌的分類學(xué)特征如下該菌菌落質(zhì)地致密，菌落與固體培養(yǎng)基結(jié)合較緊，不容易被挑起。在AM2固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)氣生菌絲少，基質(zhì)菌絲呈黃褐色；在高氏一號固體培養(yǎng)基培養(yǎng)產(chǎn)生大量氣生菌絲；在AM2固體培養(yǎng)基和高氏一號培養(yǎng)基上培養(yǎng)均產(chǎn)生紫紅色可溶性色素；在M-ISP4固體培養(yǎng)基上生長良好，不產(chǎn)生紫紅色可溶性色素，基質(zhì)菌絲呈黃褐色和氣生菌絲白色，產(chǎn)生灰色分生孢子。利用常規(guī)方法提取該菌的16S rDNA，其16S rDNA序列如SEQ ID N0:1所示，Blast分析表明，該海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666的16S rDNA與鏈霉菌 S. variabilis NBRC 12825τ 和 S. aureofaciens IMET 43577τ 菌株的 16S rDNA 序列相似性較高，分別為97. 9%和97.7%，表明該菌屬于鏈霉菌屬中的一個種。將該菌命名為海洋鏈霉菌(Streptomyces sp.) SCSIO 1666，該菌于2010年11月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，其保藏編號為CGMCCNo. 4359。本發(fā)明的第二個目的是提供從本發(fā)明的海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666的發(fā)酵培養(yǎng)物中制備替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B的方法。所述的替達(dá)霉素A優(yōu)選通過以下方法制備a)制備海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666的發(fā)酵培養(yǎng)物，離心得到發(fā)酵液和菌絲體；b)發(fā)酵液用乙酸乙酯萃取，減壓蒸餾濃縮得浸膏A ；菌絲體用丙酮萃取，減壓蒸餾濃縮得浸膏B，浸膏A和浸膏B合并，經(jīng)正相硅膠柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑從體積比 10 O 5 5梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積分?jǐn)?shù)為96%-94%洗脫的餾分，該餾分再用反相硅膠柱層析，以甲醇-水為洗脫劑從體積分?jǐn)?shù)20% 100%梯度洗脫，收集甲醇-水體積分?jǐn)?shù)為80%洗脫的餾分，該餾分再經(jīng)正相硅膠柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑從體積比 10 O 8 2梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積分?jǐn)?shù)為94%洗脫的餾分，純化即得到純品替達(dá)霉素A。所述的替達(dá)霉素B優(yōu)選通過以下方法制備a)制備海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666的發(fā)酵培養(yǎng)物，離心得發(fā)酵液和菌絲體；b)菌絲體用丙酮萃取，減壓蒸餾濃縮得浸膏C ；發(fā)酵液用乙酸乙酯或者丁酮萃取， 減壓濃縮得浸膏D，浸膏C和浸膏D合并，經(jīng)正相硅膠柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑從體積比10 O 5 5梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比8 2洗脫的餾分，再經(jīng)正相硅膠柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑從體積比10 O 5 5梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比8 2洗脫的餾分，該餾分再用反相硅膠柱層析，以甲醇-水為洗脫劑從體積分?jǐn)?shù)20% 100%梯度洗脫，收集甲醇-水體積分?jǐn)?shù)為20% 30%洗脫的餾分，純化即得到純品替達(dá)霉素B。所述的海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666的發(fā)酵培養(yǎng)物優(yōu)選通過以下方法制備的將海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666接入種子培養(yǎng)基中，， 200rpm，培養(yǎng)40 60小時制得種子液，將種子液按照體積比1 9的比例接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，28°C，200rpm，培養(yǎng) 120 168 小時，獲得海洋鏈霉菌(Streptomyces sp.) SCSIO 1666 的發(fā)酵培養(yǎng)物，所述發(fā)酵培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基都為AM2發(fā)酵培養(yǎng)基，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計大豆粉 1 %，蛋白胨 0. 2 %，葡萄糖 2 %，淀粉 0.5%，酵母膏 0.2%，K2HPO4O. 05 %，MgSO4 · 7H20 0. 05%,碳酸鈣0.2%，粗海鹽3%，余量為水。
所述的減壓蒸餾濃縮優(yōu)選都是在-0. 05 -0. 15MPa，40°C減壓蒸餾濃縮。所述的替達(dá)霉素A優(yōu)選通過以下方法制備將海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666接入種子培養(yǎng)基中，28°C，200rpm，培養(yǎng)40 60小時制得種子液，將種子液按照體積比1 9的比例接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，28°C，200rpm，培養(yǎng)120 168小時，獲得海洋鏈霉菌(Str印tomycessp.) SCSIO 1666的發(fā)酵培養(yǎng)物，所述種子培養(yǎng)基為AM2發(fā)酵培養(yǎng)基， 按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計大豆粉1%，蛋白胨0.2%，葡萄糖2%，淀粉0.5%，酵母膏0.2%， K2HPO4O. 05%, MgSO4 · 7Η200· 05%，碳酸鈣0. 2%，粗海鹽3%，余量為水，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 %計大豆粉1 %，蛋白胨0. 2 %，葡萄糖2 %，淀粉0. 5 %，酵母膏0.2%， K2HPO4O. 05%，MgSO4 · 7Η20 0. 05%,碳酸鈣0. 2%,粗海鹽3%，大孔樹脂2%，余量為水，將發(fā)酵培養(yǎng)物離心棄去發(fā)酵液得到菌絲體和大孔樹脂，菌絲體和大孔樹脂通過水漂洗分離， 大孔樹脂用無水乙醇萃取，減壓蒸餾濃縮得浸膏Ε，菌絲體用丙酮萃取，減壓蒸餾濃縮得到浸膏F，浸膏E和F合并，經(jīng)正相硅膠柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑從體積比10 0 5 5梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積分?jǐn)?shù)為96%-94%洗脫的餾分，該餾分再用反相硅膠柱層析，以甲醇_水為洗脫劑從體積分?jǐn)?shù)20% 100%梯度洗脫，收集甲醇-水體積分?jǐn)?shù)為 80%洗脫的餾分，該餾分再經(jīng)正相硅膠柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑從體積比10 0 8 2梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積分?jǐn)?shù)為94%洗脫的餾分，純化即得到純品替達(dá)霉素 A0本發(fā)明的海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp. ) SCSIO 1666能夠產(chǎn)生細(xì)菌RNA聚合酶抑制劑替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B，這是首次從海洋放線菌中發(fā)酵提取分離得到替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B，為先導(dǎo)化合物提供了更多的源泉。本發(fā)明提供的最佳成份和配比的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，利用該培養(yǎng)基，按照本發(fā)明的培養(yǎng)條件和分離純化工藝，可以得到最高產(chǎn)量的替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B，從而可以大規(guī)模的制備替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B。本發(fā)明的鏈霉菌Str印tomyces sp. 1666于2010年11月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號， 中國科學(xué)院微生物研究所，其保藏編號為=CGMCC No. 4359。

圖1是替達(dá)霉素A的ESI-MS ；圖2是替達(dá)霉素B的ESI-MS ；圖3是替達(dá)霉素B隨發(fā)酵時間的變化曲線；圖4是海洋鏈霉菌Str印tomyces sp. SCSIO 1666在AM2發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)替達(dá)霉素的HPLC圖譜；圖5是海洋鏈霉菌Str印tomyces sp. SCSIO 1666在AM2發(fā)酵培養(yǎng)基+2%大孔樹脂發(fā)酵生產(chǎn)替達(dá)霉素的HPLC圖譜。
具體實施例方式以下實施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步的說明，而不是對本發(fā)明的限制。實施例一 海洋鏈霉菌(Sti^ptomycessp. ) SCSIO 1666 的分離海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp. ) SCSIO 1666是從我國南海北部水深35米的海底沉積物中分離獲得，該海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666菌的分類學(xué)特征如下 該菌菌落質(zhì)地致密，菌落與固體培養(yǎng)基結(jié)合較緊，不容易被挑起。在AM2固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)氣生菌絲少，基質(zhì)菌絲呈黃褐色；在高氏一號固體培養(yǎng)基培養(yǎng)產(chǎn)生大量氣生菌絲；在AM2 固體培養(yǎng)基和高氏一號培養(yǎng)基上培養(yǎng)均產(chǎn)生紫紅色可溶性色素；在M-ISP4固體培養(yǎng)基上生長良好，不產(chǎn)生紫紅色可溶性色素，基質(zhì)菌絲呈黃褐色和氣生菌絲白色，產(chǎn)生灰色分生孢子。其16S rDNA序列，如SEQ ID NO 1所示，Blast分析表明，該海洋鏈霉菌(Streptomyces sp.) SCSIO 1666 的 16SrDNA 與鏈霉菌 S. variabilis NBRC 12825τ* S. aureofaciens IMET 43577τ菌株的16S rDNA序列相似性較高，分別為97. 9%和97. 7%，因此屬于鏈霉菌屬中的一個種。將該菌命名為海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666，該菌于2010年11月 22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，其保藏編號為=CGMCC No. 4359。所使用的培養(yǎng)基配方如下高氏一號培養(yǎng)基淀粉20. Og，硝酸鉀1. Og，磷酸氫二鉀0. 5g，硫酸鎂0. 5g，氯化鈉
0.5g，硫酸亞鐵 0. Olg，粗海鹽 30. 0g,7jC IOOOmL, pH 7. 2-7. 4，瓊脂粉 18. OgM-ISP4培養(yǎng)基淀粉10. Og，硫酸銨2. Og，硫酸鎂1. Og，磷酸氫二鉀1. Og，氯化鈉
1.Og,蛋白胨1. Og,酵母粉0. 5g，碳酸鈣2. Og,粗海鹽30. Og,微量元素溶液[每升含七水硫酸亞鐵、四水氯化錳和七水硫酸鋅各0. 1克(pH 7. 2)] 1. 0ml，水IOOOmL, pH 7. 2-7. 4，瓊脂粉 18. OgAM2培養(yǎng)基大豆粉10. 0g，蛋白胨2. Og,葡萄糖20. Og,淀粉5. Og,酵母膏2. Og, K2HPO4O. 5g，MgSO4 · 7H20 0. 5g，碳酸鈣 2. 0g，粗海鹽 30. 0g，水 IOOOmL, pH 7. 2-7. 4，瓊脂粉 18. Og 瓊脂粉 18. Og實施例二替達(dá)霉素A的制備1、種子培養(yǎng)(1)AM2種子培養(yǎng)基配制大豆粉16g，蛋白胨3. 2g，葡萄糖32g，淀粉8g，酵母膏 3. 2g，K2HPO4O. 8g，MgSO4 · 7H20 0. 8g，碳酸鈣 3. 2g，粗海鹽 48g，加自來水 1600mL,調(diào)節(jié) pH7. 0 7. 4，分裝32個250mL三角瓶，每瓶裝50mL，115°C保溫30分鐘滅菌；(2)種子培養(yǎng)將海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666接入種子培養(yǎng)基中，28°C，200rpm，培養(yǎng)50小時制得種子液1600mL。2、發(fā)酵培養(yǎng)(1)發(fā)酵培養(yǎng)基的配置AM2培養(yǎng)基+2%大孔樹脂配制大豆粉72g，蛋白胨14. 4g，葡萄糖144g，淀粉36g， 酵母膏 14. 4g，K2HP043. 6g，MgSO4 · 7H20 3. 6g，碳酸鈣 14. 4g，粗海鹽 216g，大孔樹脂 144g， 加自來水7200mL，調(diào)節(jié)pH 7. 0 7. 4，分裝16個2000mL三角瓶，每瓶裝450mL，115°C保溫30分鐘滅菌；(2)發(fā)酵培養(yǎng)每瓶50mL種子液接入裝有450mL無菌AM2培養(yǎng)基+2%大孔樹脂的2000mL三角瓶中，28°C，200rpm，培養(yǎng)168小時，獲得海洋鏈霉菌(Streptomyces sp.) SCSIO 1666的發(fā)酵
培養(yǎng)物。3、代謝產(chǎn)物的分析取AM2培養(yǎng)基+2%大孔樹脂發(fā)酵的海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp. ) SCSIO 1666 的發(fā)酵培養(yǎng)物50mL，3500rpm離心10分鐘，發(fā)酵液棄去，大孔樹脂和菌絲體用無水乙醇萃取三次，萃取液于-0. 05 -0. 15MPa，40°C減壓蒸餾，濃縮后，用ImL甲醇溶解，12000rpm離心 10分鐘，離心兩次，取上清液10 μ L于HPLC上分析。4、替達(dá)霉素A的分離純化將ΑΜ2培養(yǎng)基+2%大孔樹脂發(fā)酵的海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp. ) SCSIO 1666 的發(fā)酵培養(yǎng)物，3500rpm離心十分鐘，發(fā)酵液棄去，菌絲體和大孔樹脂通過水漂洗分離開，菌絲體用丙酮萃取，大孔樹脂用無水乙醇萃取，分別于-0. 05 -0. 15MPa，40°C減壓蒸餾，濃縮后，合并浸膏獲得總浸膏3. 25g，用100 200目正相硅膠柱層析，以氯仿-甲醇從體積比10 0 5 5梯度洗脫，枯草芽孢桿菌抑菌實驗結(jié)果結(jié)合HPLC-UV追蹤分析，發(fā)現(xiàn)替達(dá)霉素A在氯仿-甲醇體積分?jǐn)?shù)為96% 94%洗脫的餾分中，收集該餾分；該餾分再用反相硅膠柱層析，以甲醇-水從體積分?jǐn)?shù)20% 100%梯度洗脫，枯草芽孢桿菌抑菌實驗結(jié)果結(jié)合HPLC追蹤分析，顯示替達(dá)霉素A在甲醇-水體積分?jǐn)?shù)為80%洗脫的餾分中；濃縮該餾分，再用正相硅膠柱層析，以氯仿-甲醇從體積比10 0 8 2梯度洗脫，枯草芽孢桿菌抑菌實驗結(jié)果結(jié)合HPLC-UV追蹤分析，顯示替達(dá)霉素A在氯仿-甲醇體積分?jǐn)?shù)為94%洗脫的餾分中，收集該餾分，減壓蒸干，即得到純品(5. 6mg)，經(jīng)鑒定為替達(dá)霉素A，其ESI-MS見于圖1，碳譜和氫譜數(shù)據(jù)見于表1。表1替達(dá)霉素A和B的碳譜和氫譜數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1.海洋鏈霉菌(Str印tomycessp.) SCSIO 1666，其保藏編號為CGMCC No. 4359。
2.一種制備替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B的方法，其特征在于，所述的替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B是從權(quán)利要求1所述的海洋鏈霉菌(Str印tomyces sp.) SCSIO 1666的發(fā)酵培養(yǎng)物中制備得到的。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B的方法，其特征在于，所述的替達(dá)霉素A是通過以下方法制備的a)制備海洋鏈霉菌(Str印tomycessp.) SCSIO 1666的發(fā)酵培養(yǎng)物，離心得到發(fā)酵液和菌絲體；b)發(fā)酵液用乙酸乙酯萃取，減壓蒸餾濃縮得浸膏A；菌絲體用丙酮萃取，減壓蒸餾濃縮得浸膏B，浸膏A和浸膏B合并，經(jīng)正相硅膠柱層析，以氯仿_甲醇為洗脫劑從體積比 10 0 5 5梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積分?jǐn)?shù)為96%-94%洗脫的餾分，該餾分再用反相硅膠柱層析，以甲醇_水為洗脫劑從體積分?jǐn)?shù)20% 100%梯度洗脫，收集甲醇-水體積分?jǐn)?shù)為80%洗脫的餾分，該餾分再經(jīng)正相硅膠柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑從體積比 10 0 8 2梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積分?jǐn)?shù)為94%洗脫的餾分，純化即得到純品替達(dá)霉素A。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B的方法，其特征在于，所述的替達(dá)霉素B是通過以下方法制備的a)制備海洋鏈霉菌(Str印tomycessp.) SCSIO 1666的發(fā)酵培養(yǎng)物，離心得發(fā)酵液和菌絲體；b)菌絲體用丙酮萃取，減壓蒸餾濃縮得浸膏C；發(fā)酵液用乙酸乙酯或者丁酮萃取，減壓濃縮得浸膏D，浸膏C和浸膏D合并，經(jīng)正相硅膠柱層析，以氯仿_甲醇為洗脫劑從體積比 10 0 5 5梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比8 2洗脫的餾分，再經(jīng)正相硅膠柱層析， 以氯仿-甲醇為洗脫劑從體積比10 0 5 5梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比8 2 洗脫的餾分，該餾分再用反相硅膠柱層析，以甲醇-水為洗脫劑從體積分?jǐn)?shù)20% 100%梯度洗脫，收集甲醇-水體積分?jǐn)?shù)為20% 30%洗脫的餾分，純化即得到純品替達(dá)霉素B。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的制備替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B的方法，其特征在于，所述的海洋鏈霉菌(Str印tomyces sp.) SCSIO 1666的發(fā)酵培養(yǎng)物是通過以下方法制備的將海洋鏈霉菌(Str印tomyces sp.) SCSIO 1666接入種子培養(yǎng)基中，28°C，200rpm，培養(yǎng)40 60小時制得種子液，將種子液按照體積比1 9的比例接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，28°C，200rpm， 培養(yǎng)120 168小時，獲得海洋鏈霉菌(Str印tomyces sp.) SCSIO 1666的發(fā)酵培養(yǎng)物，所述發(fā)酵培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基都為AM2發(fā)酵培養(yǎng)基，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計大豆粉1 %，蛋白胨 0. 2%，葡萄糖 2%，淀粉 0. 5%，酵母膏 0. 2%, K2HPO4O. 05%, MgSO4 · 7H20 0. 05%，碳酸鈣 0. 2%，粗海鹽3%，余量為水。
6.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的制備替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B的方法，其特征在于，所述的減壓蒸餾濃縮都是在-0. 05 -0. 15MPa，40°C減壓蒸餾濃縮。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B的方法，其特征在于，所述的替達(dá)霉素A是通過以下方法制備的將海洋鏈霉菌(Str印tomyces sp.) SCSIO 1666接入種子培養(yǎng)基中，28°C，200rpm，培養(yǎng)40 60小時制得種子液，將種子液按照體積比1 9的比例接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，28°C，200rpm，培養(yǎng)120 168小時，獲得海洋鏈霉菌(Sti^ptomyces sp.) SCSIO 1666的發(fā)酵培養(yǎng)物，所述種子培養(yǎng)基為AM2發(fā)酵培養(yǎng)基，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計大豆粉1%，蛋白胨0. 2%, 葡萄糖 2%，淀粉 0.5%，酵母膏 0.2%，K2HPO4O. 05%，MgSO4 ·7H20 0. 05%,碳酸鈣 0. 2%，粗海鹽3%，余量為水，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計大豆粉1%，蛋白胨0.2%，葡萄糖 2%，淀粉 0. 5%,酵母膏 0. 2%, K2HPO4O. 05%，MgSO4 · 7Η200· 05%，碳酸鈣 0. 2%,粗海鹽3 %，大孔樹脂2%，余量為水，將發(fā)酵培養(yǎng)物離心棄去發(fā)酵液得到菌絲體和大孔樹脂，菌絲體和大孔樹脂通過水漂洗分離，大孔樹脂用無水乙醇萃取，減壓蒸餾濃縮得浸膏Ε，菌絲體用丙酮萃取，減壓蒸餾濃縮得到浸膏F，浸膏E和F合并，經(jīng)正相硅膠柱層析，以氯仿_甲醇為洗脫劑從體積比10 0 5 5梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積分?jǐn)?shù)為96%-94%洗脫的餾分，該餾分再用反相硅膠柱層析，以甲醇-水為洗脫劑從體積分?jǐn)?shù)20% 100%梯度洗脫，收集甲醇_水體積分?jǐn)?shù)為80%洗脫的餾分，該餾分再經(jīng)正相硅膠柱層析，以氯仿_甲醇為洗脫劑從體積比10 0 8 2梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積分?jǐn)?shù)為94%洗脫的餾分，純化即得到純品替達(dá)霉素Α。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種海洋鏈霉菌以及利用該菌制備替達(dá)霉素A和B的方法。該菌為海洋鏈霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO 1666，于2010年11月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，其保藏編號為CGMCC No.4359。本發(fā)明的海洋鏈霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO 1666能夠產(chǎn)生細(xì)菌RNA聚合酶抑制劑替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B，這是首次從海洋放線菌中發(fā)酵提取分離得到替達(dá)霉素A和替達(dá)霉素B，為先導(dǎo)化合物提供了更多的源泉。
文檔編號C12N1/20GK102168034SQ201010565028
公開日2011年8月31日 申請日期2010年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月29日
發(fā)明者姚月良, 張偲, 張長生, 田新朋, 鞠建華 申請人:中國科學(xué)院南海海洋研究所