專(zhuān)利名稱(chēng)：一種吲哚化合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種吲哚化合物及其制備方法與用途。
背景技術(shù)：
理想的鎮(zhèn)痛藥應(yīng)能夠完全緩解疼痛，并不導(dǎo)致嚴(yán)重副作用，不會(huì)引起藥物的耐 受、依賴(lài)及濫用。目前，最常用的鎮(zhèn)痛藥是非甾體抗炎藥(NSAID)和阿片類(lèi)，由于其副作 用和成癮性，在臨床上的應(yīng)用受到了很大的限制，因此尋找和開(kāi)發(fā)新型鎮(zhèn)痛藥已成為疼 痛治療中的重要內(nèi)容。天然產(chǎn)物一直以來(lái)都是藥物的重要來(lái)源，大麻作為草藥治療疼痛 在民間已有數(shù)千年歷史。各種研究結(jié)果表明，大麻素受體在體內(nèi)廣泛分布，內(nèi)源性大麻 素和各種合成大麻素參與多水平疼痛信號(hào)的調(diào)節(jié)，在鎮(zhèn)痛方面發(fā)揮著重要作用。因此， 利用內(nèi)源性大麻素降解酶中的脂肪酰胺水解酶(Fatty Acid Amide Hydrolase, FAAH) 和單酰基甘油酯酶(Monoacylglycerol Lipase，MGL)篩選化合物，有望發(fā)現(xiàn)新型鎮(zhèn)痛 藥先導(dǎo)化合物(1、AhnK, Johnson DS, Cravatt BF. Fatty acid amide hydrolase as a potential therapeutic target for thetreatment of pain and CNS disorders[J]. Expert Opin Drug Discov. 2009 ;4 (7) :763-784.)。目前陸地資源的不斷開(kāi)發(fā)，發(fā)現(xiàn)新的 代謝物的可能性日趨減少，帶來(lái)了對(duì)新的生物來(lái)源的強(qiáng)烈需求，向海洋要藥的研究已掀起 熱潮。特殊的生活環(huán)境，使得深海微生物代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)新穎、活性獨(dú)特，可以預(yù)測(cè)海洋微生 物將成為開(kāi)發(fā)新型醫(yī)藥品的重要資源(2、Kosta S，Jain R，andTiwari A. Marine Fungi Potential Source of Pharmacological Compounds[J]. Pharmacologyonline,2008,1 (1) 1-3)。然而，由于微生物群落及其棲息環(huán)境的特殊性和復(fù)雜性，在實(shí)驗(yàn)室條件下，難以模 擬和重現(xiàn)其生活的原始環(huán)境，致使環(huán)境中仍有高達(dá)99%的微生物未能得到純培養(yǎng)。宏基 因組學(xué)可避開(kāi)了環(huán)境微生物分離培養(yǎng)的障礙，在挖掘和利用未培養(yǎng)微生物資源、篩選新穎 生物活性物質(zhì)方面具有極其巨大的潛力(3、Amann, R. I.，Ludwig, W.，Schleifer，K. H.， Phylogenetic identification and in situ detection of individual microbial cells withoutcultivation[J]. Microbiol. Rev. 1995,59,143-169)。隨著疼痛機(jī)制的研究、宏基 因組學(xué)技術(shù)和色譜技術(shù)的發(fā)展和完善，在不久的將來(lái)第一個(gè)宏基因組新型天然鎮(zhèn)痛藥物必 將推向市場(chǎng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一目的在于提供一種吲哚化合物。本發(fā)明的第二目的在于提供一種吲哚化合物的制備方法。本發(fā)明的第三目的在于提供一種吲哚化合物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。所述一種吲哚化合物的化學(xué)名為N-{[1_(對(duì)乙酰氨基-苯基)-1-(1Η-吲哚-3 基)-3-羥基]丙烷-2基} -2，2氯乙酰胺，命名為PIHA，分子式為C21H21C12N3O3,相對(duì)分子質(zhì) 量為433，呈油狀，結(jié)構(gòu)式為
所述一種吲哚化合物的制備方法包括以下步驟1)大腸桿菌EPI3005C11接種至培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，收集發(fā)酵后的發(fā)酵液；所述大 腸桿菌 EPI3005C11 (Escherichia coli EPI3005C11)于 2010 年 9 月 21 日保藏于中國(guó)典型 培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏中心保藏編號(hào)為CCTCC NO =M 2010243 ；2)將發(fā)酵液加入大孔吸附樹(shù)脂，水洗除去雜質(zhì)，再用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫部 分，回收乙醇即得浸膏；3)將所得浸膏進(jìn)行硅膠柱層析，以氯仿-甲醇梯度洗脫，在氯仿中添加甲醇，收集 得到16個(gè)組分；反相薄層分析所得的16個(gè)組分，合并氯仿-甲醇洗脫物的第9組分，進(jìn)行 ODS柱層析，以甲醇和水作為流動(dòng)相，10%甲醇至100%甲醇梯度洗脫，收集50%甲醇洗脫 部分，濃縮，干燥，即得PIHA粗品；4)將PIHA粗品加至ODS制備柱，進(jìn)行液相色譜分析，收集20min PIHA主峰，濃縮， 干燥，即得PIHA。在步驟1)中，所述培養(yǎng)基可為L(zhǎng)B培養(yǎng)基，所述發(fā)酵的條件為溫度37°C，培養(yǎng)時(shí) 間10 36h。在步驟3)中，所述氯仿與甲醇的體積比可為5 1。在步驟4)中，所述液相色譜分析可采用Varian型液相色譜儀，二極管陣列檢測(cè)器 的檢測(cè)波長(zhǎng)可為210nm，以40%甲醇/水為流動(dòng)相，流速可為8ml/min。本發(fā)明利用從深海中提取的微生物進(jìn)行發(fā)酵，分離純化獲得了一種吲哚化合物 N-{[1-(對(duì)乙酰氨基-苯基)-1-(1H-吲哚-3基)-3-羥基]丙烷-2基}-2，2氯乙酰胺，命 名為PIHA。PIHA結(jié)構(gòu)獨(dú)特，具有很強(qiáng)的鎮(zhèn)痛活性，具有開(kāi)發(fā)為鎮(zhèn)痛藥物的潛能，在制備鎮(zhèn)痛 瘤藥物上有廣泛的應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。實(shí)施例1克隆子的篩選1)深海沉積物樣品的富集取出4°C保存的采集于西南印度洋278 !深海的沉積 物樣品I0g，于人工海水放線(xiàn)菌富集培養(yǎng)基進(jìn)行富集培養(yǎng)；2)深海沉積物富集樣品DNA提取加入DNA提取緩沖液，使細(xì)胞裂解，然后從樣品 中直接提取DNA并純化；3)深海沉積物富集樣品宏基因組文庫(kù)的構(gòu)建所用質(zhì)粒載體為R)smid，插入片段 30 401Λ，宿主是大腸桿菌(Escherichia coli)，獲得約4000個(gè)克隆子，其中編號(hào)為5C11 克隆子的LB發(fā)酵液的乙酸乙酯粗提物在lOOug/ml濃度下對(duì)FAAH和MGL具有良好的活性，
4其活性均大于70%。4)將包含克隆子 5C11 的大腸桿菌 EPI3005C11 (Escherichia coli EPI3005C11) 于2010年9月21日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏中心保藏編號(hào)為CCTCC NO :M 2010243。實(shí)施例2PIHA的制備1、包含克隆子5C11的大腸桿菌EPI3005C11的發(fā)酵大腸桿菌EPI3005C11接種至3ml培養(yǎng)基，37°C、200rpm培養(yǎng)10h。將初級(jí)培養(yǎng)物 取Iml接種至500ml培養(yǎng)基，37°C、200rpm培養(yǎng)20h后，接種至100升發(fā)酵罐，37°C、60L/min 通氣量，200rpm，pH7. 0發(fā)酵36h，利用連續(xù)流離心機(jī)分別收集菌體和菌液。2、發(fā)酵液提取80L發(fā)酵液上大孔吸附樹(shù)脂(AB-8，10L)吸附，30L水洗除去雜質(zhì)后，用33L乙醇洗 脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇得浸膏63. 48g。3、PIHA的分離與純化1)取步驟2)所得的浸膏進(jìn)行硅膠柱層析，以氯仿-甲醇梯度洗脫，逐步在氯仿中 添加甲醇直至氯仿與甲醇體積比為5 1，硅膠薄層層析檢測(cè)流分，收集得到16個(gè)組分；2)反向薄層分析16個(gè)組分，合并氯仿-甲醇25 1洗脫物第9組分(0. 82g)進(jìn) 行ODS柱層析，以甲醇和水作為流動(dòng)相，10%甲醇至100%甲醇梯度洗脫，收集50%甲醇洗 脫部分，濃縮，干燥，即得PIHA粗品；3)將PIHA粗品放至ODS制備柱(SHMADZU C1820X250mm)進(jìn)行HPLC制備，儀器 Varian, 二極管陣列檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，以40%甲醇/水為流動(dòng)相，流速Sml/min，收 集20min PIHA主峰，濃縮，干燥，即得PIHA 3mgo4、PIHA 的鑒定通過(guò)波譜和理化性質(zhì)鑒定化合物，確定所得為新的吲哚化合物，化學(xué)名為 Ν-{[1-(對(duì)乙酰氨基-苯基)-1-(1Η-吲哚-3基)-3-羥基]丙烷-2基}-2，2氯乙酰胺，命 名為PIHA。其結(jié)構(gòu)式如下
0034
權(quán)利要求
1. 一種吲哚化合物，其特征在于其化學(xué)名為N- {[1-(對(duì)乙酰氨基-苯基)-1- (1H-吲 哚-3基)-3-羥基]丙烷-2基} -2，2氯乙酰胺，命名為PIHA,分子式為C21H21Cl2N3O3,相對(duì) 分子質(zhì)量為433，呈油狀，結(jié)構(gòu)式為
2.如權(quán)利要求1所述的一種吲哚化合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)大腸桿菌EPI3005C11接種至培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，收集發(fā)酵后的發(fā)酵液；所述大腸桿 菌EPI3005C11于2010年9月21日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏中心保藏編號(hào)為 CCTCC NO :M 2010243 ；2)將發(fā)酵液加入大孔吸附樹(shù)脂，水洗除去雜質(zhì)，再用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫部分，回 收乙醇即得浸膏；3)將所得浸膏進(jìn)行硅膠柱層析，以氯仿-甲醇梯度洗脫，在氯仿中添加甲醇，收集得到 16個(gè)組分；反相薄層分析所得的16個(gè)組分，合并氯仿-甲醇洗脫物的第9組分，進(jìn)行ODS柱 層析，以甲醇和水作為流動(dòng)相，10%甲醇至100%甲醇梯度洗脫，收集50%甲醇洗脫部分， 濃縮，干燥，即得吲哚化合物粗品；4)將吲哚化合物粗品加至ODS制備柱，進(jìn)行液相色譜分析，收集20min吲哚化合物主 峰，濃縮，干燥，即得吲哚化合物。
3.如權(quán)利要求2所述的一種吲哚化合物的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述培 養(yǎng)基為L(zhǎng)B培養(yǎng)基。
4.如權(quán)利要求2所述的一種吲哚化合物的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述發(fā) 酵的條件為溫度37°C，培養(yǎng)時(shí)間10 36h。
5.如權(quán)利要求2所述的一種吲哚化合物的制備方法，其特征在于在步驟；3)中，所述氯 仿與甲醇的體積比為5 1。
6.如權(quán)利要求2所述的一種吲哚化合物的制備方法，其特征在于在步驟3)中，在步 驟4)中，所述液相色譜分析采用Varian型液相色譜儀，二極管陣列檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為 210nm,以40%甲醇/水為流動(dòng)相，流速為8ml/min。
7.如權(quán)利要求1所述的一種吲哚化合物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一種吲哚化合物及其制備方法和用途。屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，提供一種吲哚化合物及其制備方法和用途。所述吲哚化合物的化學(xué)名為N-{[1-(對(duì)乙酰氨基-苯基)-1-(1H-吲哚-3基)-3-羥基]丙烷-2基}-2，2氯乙酰胺，命名為PIHA，分子式為C21H21Cl2N3O3，相對(duì)分子質(zhì)量為433。制備方法包括大腸桿菌EPI3005C11接種至培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，收集發(fā)酵后的發(fā)酵液，分離純化發(fā)酵液即得PIHA。PIHA結(jié)構(gòu)獨(dú)特，具有很強(qiáng)的鎮(zhèn)痛活性，具有開(kāi)發(fā)為鎮(zhèn)痛藥物的潛能，在制備鎮(zhèn)痛瘤藥物上有廣泛的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12P17/10GK102070508SQ20101057339
公開(kāi)日2011年5月25日 申請(qǐng)日期2010年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月3日
發(fā)明者丘鷹昆, 吳振, 莊萍, 易志偉, 湯熙翔, 肖湘, 陳琳 申請(qǐng)人:廈門(mén)大學(xué), 國(guó)家海洋局第三海洋研究所