專利名稱：一種產l-精氨酸的菌株和利用該菌株生產l-精氨酸的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種利用黃色短桿菌生產L-精氨酸的方法，涉及以黃色短桿菌 (Brevibacterium flavum) ATCC14067為出發(fā)菌株，采用亞硝基胍逐級誘變，篩選切斷競爭性代謝途徑具有組氨酸、丁二酸營養(yǎng)缺陷型菌株的突變株，并篩選具有精氨酸結構類似物、 半胱氨酸結構類似物抗性的突變株HX1009 (His", Sue—，D-Argr, SMCr),以提高L-精氨酸的產量。屬于生物工程技術領域。
背景技術：
L-精氨酸是人體和動物體內的半必需堿性氨基酸，是合成蛋白質和肌酸的原料， 也是生物體尿素循環(huán)的重要中間代謝物，具有增加人類生長激素、恢復疲勞、增強肌肉力量及提高免疫力、防治心血管疾病以及增強男性精子活性等作用，在醫(yī)藥、食品領域上具有廣泛的用途。L-精氨酸的生產方法有水解法和發(fā)酵法，水解法是以含有豐富L-精氨酸的豬毛、 蹄甲、血粉、明膠、魚精蛋白、小雜魚(如馬面魚皮、魚骨)等為原料，經水解、分離、制備得到 L-精氨酸，如中國專利CN1161959A, 96100529. 7，200910019665. 6等公布的方法。但是，該提取法存在操作費時、收率低，環(huán)境污染大、不能滿足大規(guī)模生產等問題。發(fā)酵法是采用大腸桿菌、枯草桿菌、酵母菌、黏質沙雷菌、棒桿菌或短桿菌等微生物，通過傳統誘變或基因工程的方法，篩選解除精氨酸的生物合成的反饋抑制和反饋阻遏突變株，或切斷競爭性代謝途徑營養(yǎng)缺陷型菌株和切斷進一步的代謝途徑突變株，以提高 L-精氨酸的產量。如日本專利JP60083593公布了培養(yǎng)2-噻唑基丙氨酸抗性株生產L-精氨酸的方法；美國專利US5034319公布了培養(yǎng)半胱氨酸或其類似物抗性菌生產L-精氨酸的方法；龔建華等選育組氨酸缺陷型和具有磺胺胍的抗性的鈍齒棒狀桿菌產L-精氨酸最高達34g/L (微生物學報，1991，31 (6) 460-465.);黃繼紅等選育磺胺胍抗性的谷氨酸高產菌種LH，搖瓶產酸38 g/L (氨基酸和生物資源2005，27(3) 46-48)等，這些通過誘變及結構類似物抗性的方法往往比較單一，篩選得得的突變株往往產酸不高，水平3%左右，甚至遺傳穩(wěn)定性較差。對于L-精氨酸基因工程菌的研究有很多報道，例如日本味之素株式會社 CN1258736A公開通過提高編碼精氨琥珀酸合成酶的基因拷貝數增強細胞內的精氨琥珀酸合成酶的活性提高棒狀細菌L-精氨酸生產能力，以及CN1347982A通過破裂編碼細菌中參與L-精氨酸生物合成的精氨酸阻遏物的基因，使該阻遏物的基因缺失，從而來提高該細菌具有L-精氨酸生產能力；CJ第一制糖株式會社CN101517066A公開了通過乙酰鳥氨酸基轉移酶的推定基因argD2基因的高表達的棒桿菌屬的突變菌株CJR0500，提高用谷氨酸棒桿菌生產L-精氨酸的方法。但是這些工程菌往往對單一基因進行改造，表達的水平都很低， 產酸水平還不高，還不足以應用于實際生產。國內外關于利用黃色短桿菌(β. flavum)發(fā)酵制備L-精氨酸的微生物菌種的研究也已有一些相關的報道，如早年日本Kubota等對黃色短桿菌進行紫外、亞硝基胍、硫酸二乙酯逐級誘變處理，選育了鳥嘌呤缺陷型(GiT)、2-噻唑丙氨酸抗性Q-TA1O變異株，在含 13%葡萄糖、6%硫酸銨和0. 015%鳥嘌呤的培養(yǎng)基上發(fā)酵72h，產酸為34. 8g/L (J Gen Appl Microbiol, 1973，19: 339-352)。1982 年，味之素公司用黃色短桿菌 ATCC 14067 (SDr, MFA1O、黃色短桿菌 ATCC 21493 (2-TAr, SGr, L-His_，MFAlr)發(fā)酵 72 h 產 L-精氨酸分別為 1. 9%、3. 6% (明石邦彥，公開特許公報，昭57-18989)。1983年，滕亦等將L-精氨酸生物合成有關的基因進行克隆。然后將含L-精氨酸生物合成酶系基因群及卡那霉素抗性基因的重組質粒pEArgl導入到宿主黃色短桿菌ATCC 14067中，構建精氨酸工程菌，經72h培養(yǎng) L-精氨酸產1.017g/L。2002年，蘇令鳴等以黃色短桿菌ATHMAHf，TA r)為誘變出發(fā)株 .經亞硝基胍(NTG)誘變處理，獲得一株能夠積累大量L-精氨酸的菌株AG77 (AHVr, TAr, SGr)0在20L發(fā)酵罐中，以葡萄糖為碳源，以硫酸銨等為氨源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4天，產酸率可達31. 3g/L (工業(yè)微生物，2002，32(1) :1-5)；他們以AG77 (AHVr，TAr, SGr)為誘變出發(fā)菌株，篩選His—，ftx)-，Met-變異菌株，獲得新菌株AN78 (AHVr, TAr, SGr，His—)，產L-精氨酸產率達61. lg/L。(工業(yè)微生物，2003，33(2) :1-3)0李文廉報道了黃色短桿菌TA188 (AHVr， 2-TAr' SGr, L-HisO菌株已用于工業(yè)化生產，在30L到50m3通氣攪拌罐上的發(fā)酵，產L-Arg 4.0% 5.7%。(李文廉.L-谷氨酰胺和L-精氨酸發(fā)酵生產.化學工業(yè)出版社，2009)。本發(fā)明以黃色短桿菌ATCC 14067為出發(fā)菌株，采用亞硝基胍逐級誘變，篩選切斷競爭性代謝途徑具有組氨酸、丁二酸營養(yǎng)缺陷型菌株的突變株，并篩選具有精氨酸結構類似物、半胱氨酸結構類似物抗性的突變株HX1009 (His", Sue—，D-Argr, SMC1)，有效地提高了 L-精氨酸的產酸水平，并且容易工藝放大。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于提供一種生產L-精氨酸的菌株及利用該菌株生產L-精氨酸的方法，包括篩選多重抗性與營養(yǎng)缺陷型，以及在合適的條件下生產L-精氨酸。本發(fā)明的技術方案一種生產L-精氨酸的菌株，該菌株命名黃色短桿菌HX1009， 已保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No. 4464，該菌株的遺傳特性組氨酸缺陷型His_，丁二酸缺陷型Suc_，D-精氨酸抗性D-Arg1^S-甲基半胱氨酸抗性SMCr0所述的菌種，以黃色短桿菌ATCC14067為出發(fā)菌株，采用亞硝基胍逐級誘變，篩選切斷競爭性代謝途徑具有組氨酸、丁二酸營養(yǎng)缺陷型菌株的突變株，并具有精氨酸結構類似物抗性、半胱氨酸結構類似物抗性，其D-精氨酸抗性、S-甲基半胱氨酸抗性濃度分別15 mg/mL 25 mg/mL。所述的菌種，篩選所用誘變培養(yǎng)基的組成為葡萄糖1(T30 g/L，(NH4)2SO4 3^20 g/L, KH2PO4 2 5g/L，MgSO4 · 7H20 0. 5 lg/L，FeSO4 · 7H20 0. 02 0. 05 g/L, MnSO4 · H2O 0. 02 0. 05g/L,瓊脂 15 20 g/L,生物素 1 X 10_5 3 X 10_5 g/L,硫胺素 1 X 10_4 2 X 10_4 g/L, L-組氨酸 0. 5X 10_2 5X 10_2 g/L, 丁二酸 0. 5 X IO"2 5X 10_2 g/L, D-精氨酸 15X10^25 X IO"3 g/L, S-甲基半胱氨酸15 X 10_3 25 X 10_3 g/L，用雙蒸水定容至1L，pH 7. 0 7. 2，121°C滅菌20分鐘。一種利用所述菌株生產L-精氨酸的方法，發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10(T120 g/L，尿素1 g/L，玉米菜 5 25 g/L, (NH4) 2S04 30 50 g/L, KH2PO4 0· 5 2· 0 g/L，K2HPO4 · 3Η20 0· 2 1· 0 g/L，MgSO4 · 7Η20 0.2 0.8 g/L，L-His 0. 5 lmg/L，生物素 0. 05 2mg/L，鹽酸硫胺素 0. 05 1 mg/L，用雙蒸水定容至1L，pH 7. 0 7. 2 ；將菌株CGMCC No. 4464以W/W 5% 15% 接種量轉接到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在通氣條件下，以搖瓶培養(yǎng)或攪拌式發(fā)酵罐通風培養(yǎng)，控制 !16 8;培養(yǎng)溫度沘 351，發(fā)酵罐通風氣比￥八1:0.2 1 3，培養(yǎng)時間65 100小時。本發(fā)明的出發(fā)菌株為黃色短桿菌ATCC 14067，用于篩選的營養(yǎng)缺陷物質為組氨酸、丁二酸，抗性物質為D-精氨酸，S-甲基半胱氨酸。本發(fā)明所述突變株黃色短桿菌HX1009具有以下的遺傳特性組氨酸缺陷型(His_)， 丁二酸缺陷型(Suc_)、D-精氨酸抗性(D-Arglr)、S-甲基半胱氨酸抗性(SMCD，且抗性物質濃度分別為15 25 mg/L。本發(fā)明采用亞硝基胍逐級誘變處理，將處理的菌液涂布在含一定量的組氨酸，丁二酸、D-精氨酸、S-甲基半胱氨酸的篩選平板上，挑選生長菌落進行搖瓶篩選。突變菌株誘變譜系如附圖1所示。(1)該菌的誘變方法
出發(fā)菌株黃色短桿菌(Brevibacterium flavum) ATCC14067。逐級誘變第一次NTG處理，得到誘變菌株HX0901 (組氨酸缺陷型，丁二酸缺陷型)；第二次NTG處理，得到誘變菌株HX0918 (組氨酸缺陷型，丁二酸缺陷型，D-精氨酸抗性)；第三次NTG處理，得到誘變菌株HX1009 (組氨酸缺陷型，丁二酸缺陷型，D-精氨酸抗性，S-甲基半胱氨酸抗性)。NTG誘變方法選用亞硝基胍為誘變劑，采用含適當濃度的精氨酸、半胱氨酸結構類似物平板作為篩選用平板。具體方法如下種子培養(yǎng)到對數生長中后期(2(Γ30小時)后， 取10 mL培養(yǎng)液無菌離心，收集菌體，用0.1 mol/L, pH 6. 0的磷酸鹽緩沖液洗滌2 3次， 轉入帶玻璃珠的三角燒瓶中振蕩打散制備菌懸液(細胞濃度控制在IO8個/mL左右)。稱取少量亞硝基胍溶解在少量丙酮中，再加入磷酸鹽緩沖液，制成濃度為1. 0 mg/mL的亞硝基胍溶液。取0. SmL菌懸液加入到0. 2mL上述亞硝基胍溶液中，30°C振蕩反應一定時間，誘變結束后快速離心終止反應，用0.1 mol/L, pH 6. 0的磷酸鹽緩沖液洗滌菌體沉淀2 3次后用 0.5mL無菌生理鹽水懸浮。最后取菌懸液涂布篩選平板，31 ！恒溫培養(yǎng)3-5天后隨機挑選菌落進行搖瓶篩選。(2)培養(yǎng)和篩選(參考諸葛健，王正祥工業(yè)微生物實驗技術手冊，中國輕工業(yè)出版社，1994)
種子培養(yǎng)
種子培養(yǎng)基葡萄糖30 60 g/L，玉米漿10 30 g/L, (NH4)2SO4 10 30 g/L, KH2PO4廣5 g/L，MgSO4 · 7H20 0. 5 1 g/L，尿素 1. 5 5 g/L。pH 7. 0 7. 2，121°C滅菌 20 分鐘，裝液量 30 mL/250 mL。種子培養(yǎng)溫度28 35°C，搖床轉速70 120轉/分，時間20 30小時。營養(yǎng)缺陷型篩選培養(yǎng)
篩選培養(yǎng)基葡萄糖 10 30 g/L, (NH4)2SO4 3 20 g/L，KH2PO4 2 5g/L，MgSO4 · 7H20 0. 5 lg/L，FeSO4 · 7H20 0. 02 0· 05 g/L, MnSO4 · H2O 0. 02 0. 05g/L，瓊月旨 15 20 g/L，生物素 1X10—5 3X10—5 g/L，硫胺素 1X10—4 2X10—4 g/L，L-組氨酸 0. 5 X 10_2 5 X 10_2 g/L，丁二酸0.5X10—2 2X10—2 g/L，D-精氨酸15X10—3 25X10—3 g/L,或再補加S-甲基半胱氨
5W. 15X 10^25X IO"3 g/L，瓊脂 15 20 g/L，pH 7. 0 7. 2，121°C滅菌 20 分鐘。篩選培養(yǎng)條件溫度28 ;35°C，時間Γ5天。D-精氨酸(D-Arginine，簡寫D-Arg)抗性突變株的篩選
配制基本培養(yǎng)基，滅菌后加入適量的D-精氨酸使平板中的D-精氨酸濃度分別為5 mg/mLUO mg/mL、15 mg/mL、20 mg/mL。再在各個不同濃度D-精氨酸平板上涂布適量的出發(fā)菌株菌懸液，觀察生長情況，根據出發(fā)菌株耐受D-精氨酸的濃度確定誘變菌株篩選用藥物濃度。將誘變后的菌液涂布到此濃度的藥物平板上，置30 °C溫箱中培養(yǎng)3-5天，隨機挑選菌落進行搖瓶篩選。S-甲基半胱氨酸抗性突變株的篩選
采用與確定D-精氨酸藥物濃度相同的方法確定精氨酸氧肟鹽的篩選用濃度。將誘變菌液涂布到此濃度的藥物平板上，置31 °C溫箱中培養(yǎng)3-5天，隨機挑選菌落進行搖瓶初篩。(3)發(fā)酵產酸
發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖100 120 g/L，尿素1 g/L，玉米漿5 25 g/L, (NH4)2SO4 30^50 g/L, KH2PO4 0. 5 2· O g/L, K2HPO4 · 3H20 0. 2 1· O g/L, MgSO4 · 7H20 0. 2 0. 8 g/L, L-His 0. 5 lmg/L，生物素0.05 2mg/L，鹽酸硫胺素0· 05 1 mg/L，用雙蒸水定容至1L，pH 7. O 7. 2。將菌株以59T15%(W/W)接種量轉接到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在通氣條件下，以搖瓶培養(yǎng)或攪拌式發(fā)酵罐通風培養(yǎng)，控制PH6、，培養(yǎng)溫度觀 351，發(fā)酵罐通風氣比1:0.2 1:3 (ν/ ν)，培養(yǎng)時間65 100小時。用5% 10%的接種量接種于5L、15L發(fā)酵罐或5Μ3發(fā)酵罐，30 31 °C、300r/ min 850 r/min、pH 6. 5 7. 6、1:0. 5 1:3 (ν/ν)的通風量培養(yǎng)70小時左右。(4)發(fā)酵液中L-精氨酸的測定采用坂口改良法(H Rosenberg, et al. Biochemical Journal, 1956,63:153)。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明采用NTG逐級誘變篩選得到一株高產L-精氨酸的黃色短桿菌、B. flavum)突變株 HX1009 (His—，Sue—，D-Argr, SMClr),在 5 L 5M3 發(fā)酵罐上發(fā)酵生產L-精氨酸，產酸水平達到50-70 g/L。生物材料樣品保藏該突變株黃色短桿菌HX1009 (His—，Sue—，D-Argr, SMCr)已保藏在北京中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，保藏日期2010年 12月13日，保藏編號CGMCC No. 4464。


圖1生產L-精氨酸菌株CGMCC No. 4464的誘變譜系圖。
具體實施例方式實施例1
制備組氨酸缺陷型，丁二酸缺陷型的黃色短桿菌突變株HX1009 (His", Sue") 用出發(fā)菌株ATCC14067的斜面菌種，按常規(guī)方法，挑一環(huán)接種于種子培養(yǎng)基(葡萄糖 30 60 g/L，玉米菜 10 30 g/L, (NH4)2SO4 10 30 g/L，KH2PO4 1 5 g/L，MgSO4 · 7Η20 0. 5 1g/L，尿素1.5 5 g/L，pH 7.0 7.2，121°C滅菌20分鐘，裝液量30 mL/250 mL)，在往復式搖床上，溫度30°C，轉速100轉/分，培養(yǎng)20小時后，取10 mL培養(yǎng)液無菌離心，收集菌體， 用0.1 mol/L,pH 6. 0的磷酸鹽緩沖液洗滌2 3次，轉入帶玻璃珠的三角燒瓶中振蕩打散制備菌懸液(細胞濃度3. 2X IO8個/mL)。取0. 8mL菌懸液，加入0. 2mL預先配制好的濃度為1. 0 mg/mL的亞硝基胍丙酮溶液，30°C振蕩反應一定時間(分2分，4分，6分鐘三個系列)，誘變結束后快速離心終止反應， 用0. 1 mol/L,pH 6. 0的磷酸鹽緩沖液洗滌菌體沉淀2 3次后用0. 5mL無菌生理鹽水懸浮。 最后取菌懸液涂布篩選平板，30 ！恒溫培養(yǎng)3-5天，期間視菌落生長情況隨機挑選菌落進行搖瓶篩選。經NTG誘變，得到突變株HX0901 (His—，Sue — )，搖瓶產酸22. 3 g/L。搖瓶種子培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖30，玉米漿20，(NH4)2SO4 20，KH2PO4 1， MgSO4 · 7H20 0. 5，尿素 1. 5。pH 7. 0 7. 2，121°C滅菌 20 分鐘，裝液量 30 mL/250 mL。搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖120，玉米漿 25，(NH4)2SO4 50，KH2PO4 1. 5， MgSO4 · 7H20 0. 5，FeSO4 · 7H20 0. 02，MnSO4 · H2O 0. 02，生物素 8X 1(Γ5，L-組氨酸 5Χ 1(Γ4， CaCO3 30。pH 7. 0 7. 2，121°C滅菌 10 分鐘，裝液量 20 mL/250 mL。實施例2
制備D-精氨酸抗性，S-甲基半胱氨酸抗性的黃色短桿菌突變株HX1009 (His", Suc_， D-Argr, SMCr)
將HX0901 (His", Sue")按實施例1的方法，培養(yǎng)到對數生長中后期，然后以5%的接種量轉接到新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)5小時。然后取10 mL培養(yǎng)液無菌離心，收集菌體，按實施例1 的方法，用亞硝基胍誘變，誘變結束后用0. 5mL無菌生理鹽水懸浮。最后取菌懸液涂布抗性篩選培養(yǎng)基平板，30 ！恒溫培養(yǎng)3-5天，期間視菌落生長情況挑選大菌落進行搖瓶篩選?？剐院Y選基礎培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖10，(NH4) 2S04 3，KH2PO4 1，MgSO4 · 7H20 0. 5 ，FeSO4 · 7H20 0. 02，MnSO4 · H2O 0. 02，瓊脂 20，生物素 3 X IO"5,硫胺素 2 X IO"4, L-組氨酸 5Χ1(Γ3，丁二酸 1Χ1(Γ2。pH 7. 0 7. 2，121°C滅菌 20 分鐘?？剐院Y選培養(yǎng)基在抗性篩選基礎培養(yǎng)基中分別添加20 mg/mL的D-精氨酸或25 mg/mL的D-精氨酸和20 mg/mL S-甲基半胱氨酸。HX0901經NTG誘變，得到D-精氨酸抗性篩選結果見表1。表1菌株HX0901經過NTG誘變后部分突變株產酸結果
菌株號L-精氨酸的產量(g/L)HX090122. 3HX090525. 5HX090725. 3HX091830. 6HX092123. 6
其中HX0918 (His —，Suc，D-Argr)繼續(xù)用NTG誘變，得到S-甲基半胱氨酸抗性篩選結果見表2
表2菌株HX0918經過NTG誘變后部分突變株產酸結果
權利要求
1.一種生產L-精氨酸的菌株，該菌株命名黃色短桿菌HX1009，已保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No. 4464，該菌株的遺傳特性組氨酸缺陷型His_，丁二酸缺陷型Suc_，D-精氨酸抗性D-Arglr, S-甲基半胱氨酸抗性SMCr0
2.根據權利要求1所述的菌種，其特征在于以黃色短桿菌ATCC14067為出發(fā)菌株，采用亞硝基胍逐級誘變，篩選切斷競爭性代謝途徑具有組氨酸、丁二酸營養(yǎng)缺陷型菌株的突變株，并具有精氨酸結構類似物抗性、半胱氨酸結構類似物抗性，其D-精氨酸抗性、S-甲基半胱氨酸抗性濃度分別15 mg/mL^25 mg/mL。
3.根據權利要求2所述的菌種，其特征在于篩選所用誘變培養(yǎng)基的組成為葡萄糖 10 30 g/L, (NH4)2SO4 3 20 g/L, KH2PO4 2 5g/L，MgSO4 · 7H20 0. 5 lg/L，FeSO4 · 7H20 0. 02 0· 05 g/L, MnSO4 · H2O 0. 02 0. 05g/L,瓊脂 15 20 g/L,生物素 1 X 1(Γ5 3X 1(Γ5 g/L, 硫胺素 1X10—4 2 ΧΙΟ—4 g/L，L-組氨酸 0.5 ΧΙΟ—2 5 ΧΙΟ—2 g/L，丁二酸 0. 5 X 10_2 5 ΧΙΟ—2 g/L, D-精氨酸15 ΧΙΟ—3 25 ΧΙΟ—3 g/L, S-甲基半胱氨酸15X10^25X10^ g/L，用雙蒸水定容至1L, pH 7. O 7. 2，121°C滅菌20分鐘。
4.一種利用權利要求1所述菌株生產L-精氨酸的方法，其特征在于發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖 100 120 g/L，尿素 1 g/L，玉米漿 5 25 g/L, (NH4)2SO4 30^50 g/L，KH2PO4 0. 5 2. O g/L, K2HPO4 · 3H20 0. 2 1· O g/L, MgSO4 · 7H20 0. 2 0. 8 g/L, L-His 0. 5 lmg/L，生物素 0. 05 2mg/L，鹽酸硫胺素0. 05 1 mg/L，用雙蒸水定容至1L，pH 7. O 7. 2 ；將菌株CGMCC No. 4464以W/W 59Γ15%接種量轉接到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在通氣條件下，以搖瓶培養(yǎng)或攪拌式發(fā)酵罐通風培養(yǎng)，控制ΡΗ6、；培養(yǎng)溫度觀 351，發(fā)酵罐通風氣比ν/ν 1:0.2 1:3，培養(yǎng)時間65 100小時。
全文摘要
一種產L-精氨酸的菌株和利用該菌株生產L-精氨酸的方法，屬于生物工程技術領域。該菌株以黃色短桿菌(Brevibacterium flavum)ATCC14067為出發(fā)菌株，采用亞硝基胍逐級誘變，篩選切斷競爭性代謝途徑具有組氨酸、丁二酸營養(yǎng)缺陷型菌株的突變株，并篩選具有精氨酸結構類似物、半胱氨酸結構類似物抗性的突變株(His-，Suc-，D-Argr，SMCr)，命名為黃色短桿菌HX1009，已保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.4464，該菌株的遺傳特性組氨酸缺陷型His-，丁二酸缺陷型Suc-，D-精氨酸抗性D-Argr，S-甲基半胱氨酸抗性SMCr，以提高L-精氨酸的產量。在優(yōu)化的條件下，在5L～5M3發(fā)酵罐上發(fā)酵生產L-精氨酸，產酸水平達到50-70g/L。
文檔編號C12R1/13GK102154160SQ20101061091
公開日2011年8月17日 申請日期2010年12月29日 優(yōu)先權日2010年12月29日
發(fā)明者孫志浩, 方佳茂, 李少平, 許正宏, 鄭璞, 陳偉濱 申請人:廣東環(huán)西生物科技股份有限公司