專(zhuān)利名稱(chēng)：糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的培養(yǎng)基及其檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物菌種培養(yǎng)基及其檢測(cè)方法，特別是一種糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的培養(yǎng)基及其檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
微生物球菌特別是糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌作為農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)使用的有益微生物菌種之一，已被廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)中，為減少和避免使用抗生素發(fā)揮了很大作用。但長(zhǎng)期以來(lái)，益生菌特別是糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌的檢測(cè)使用的是乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基即MRS培養(yǎng)基和普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂粉且瓊脂粉在培養(yǎng)基中的含量較高，這樣檢測(cè)時(shí)培養(yǎng)基很容易出現(xiàn)凝結(jié)成塊，菌落與培養(yǎng)基斑點(diǎn)混淆不清，難以準(zhǔn)確計(jì)數(shù)的缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是要提供一種糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的培養(yǎng)基及其檢測(cè)方法，其提供了一種更為有效的檢測(cè)培養(yǎng)基和檢測(cè)方法，能克服上述缺點(diǎn)，為糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌提供檢測(cè)的培養(yǎng)基不易凝結(jié)成塊，菌落與培養(yǎng)基斑點(diǎn)清楚，計(jì)數(shù)準(zhǔn)確。本發(fā)明糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測(cè)培養(yǎng)基技術(shù)方案是這樣來(lái)實(shí)現(xiàn)， 包括蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、瓊脂粉、氯化鈉或磷酸二氫鉀、葡萄糖，還包括有碳酸鈣。本發(fā)明所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測(cè)培養(yǎng)基，其包括如下質(zhì)量組份混合組成蛋白胨10-15、牛肉膏5-8、葡萄糖15-20、氯化鈉5_8、瓊脂粉10-12、碳酸鈣 10-20、和蒸餾水1000-1500，或蛋白胨10-15、牛肉膏5_8、葡萄糖15-20、酵母膏5_8、磷酸氫二鉀3-5、碳酸鈣10-20、瓊脂粉10-15、和蒸餾水1000-1500 ；亦或是由蛋白胨10-15、牛肉膏5-8、葡萄糖15-20、瓊脂粉10-12、碳酸鈣10-20、蒸餾水1000-1500、和氯化鈉5_8、酵母膏5-8、磷酸氫二鉀3-5的一種或任意幾種的組合構(gòu)成。本發(fā)明所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測(cè)培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基由如下質(zhì)量的組份混合組成蛋白胨10、牛肉膏5、葡萄糖20、氯化鈉5、瓊脂粉10、碳酸鈣10、蒸餾水1000 ；或蛋白胨10、牛肉膏5、葡萄糖20、酵母膏5、磷酸氫二鉀3、碳酸鈣10、瓊脂粉10 蒸餾水1000。本發(fā)明所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測(cè)培養(yǎng)基，所述的培養(yǎng)基中瓊脂粉的加入量為培養(yǎng)基總質(zhì)量的0. 8-1. 4Wt%。本發(fā)明所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測(cè)培養(yǎng)基，所述的培養(yǎng)基中碳酸鈣的加入量為培養(yǎng)基總質(zhì)量的l_2Wt%。一種糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測(cè)方法，其是采用上面所述的檢測(cè)培養(yǎng)基，按下述方法步驟進(jìn)行1)樣品稀釋a)將檢測(cè)樣品稱(chēng)量后置于盛有無(wú)菌生理鹽水的容器中，加入玻璃珠，置于搖床震蕩30-50分鐘，得樣品液；b)將樣品液移入盛有無(wú)菌水的三角瓶中，充分振搖使樣品均勻分散，制成10-2的樣品稀釋液，再以此無(wú)菌操作制成相應(yīng)適當(dāng)?shù)南♂尪龋?)平板制作a)、選用2-3個(gè)上述相應(yīng)適當(dāng)?shù)南♂尪?，分別置于不同的培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做2-3個(gè)重復(fù)；b)、將45-52°C保溫的培養(yǎng)基倒于培養(yǎng)皿中，使之均勻混合冷卻制成培養(yǎng)皿平板。3)培養(yǎng)和計(jì)數(shù)將2)步制 成的培養(yǎng)皿平板倒置于30-35°C恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)48_72h，觀察長(zhǎng)出的菌落，計(jì)算含有透明圈的菌落數(shù)目，選擇含有30-300個(gè)菌落的培養(yǎng)皿平板進(jìn)行結(jié)果計(jì)算。本發(fā)明采用上述方案在糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌的檢測(cè)培養(yǎng)基中加入碳酸鈣，同時(shí)控制瓊脂粉的加入量，其加入量占培養(yǎng)基總量的左右；與現(xiàn)有的乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基MRS以下簡(jiǎn)稱(chēng)MRS相比，由于本發(fā)明培養(yǎng)基在檢測(cè)過(guò)程中產(chǎn)生的乳酸溶解菌落周?chē)奶妓徕}形成透明圈，培養(yǎng)基不會(huì)凝結(jié)成塊，菌落與培養(yǎng)基之間斑點(diǎn)清晰，計(jì)數(shù)準(zhǔn)確。


圖1為本發(fā)明檢測(cè)培養(yǎng)基及檢測(cè)方法檢測(cè)糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌樣品時(shí)的結(jié)果照片圖。圖2為采用MRS培養(yǎng)基與采用本發(fā)明培養(yǎng)基檢測(cè)糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌樣品時(shí)的結(jié)果照片對(duì)照?qǐng)D。圖1中結(jié)果可以看出圖中培養(yǎng)基均一，菌落清晰，菌落透明圈非常明顯，容易計(jì)數(shù)。圖2中左邊為用MRS培養(yǎng)基所檢測(cè)的倒培養(yǎng)皿，倒培養(yǎng)皿中有很多半透明凝結(jié)物， 且顏色較深，影響準(zhǔn)確計(jì)數(shù)；右邊為用本發(fā)明檢測(cè)培養(yǎng)基所檢測(cè)的倒培養(yǎng)皿，倒培養(yǎng)皿中球菌的透明圈非常明顯，菌落清晰可見(jiàn)，且整個(gè)倒培養(yǎng)皿色澤較淺，計(jì)數(shù)很容易。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌樣品檢測(cè)取l.OOg含糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌的粉末樣品，采用培養(yǎng)基葡萄糖 20. Og蛋白胨10. 0g，牛肉膏5. Og,酵母膏5. Og,磷酸氫二鉀3. Og,碳酸鈣10. Og,瓊脂粉 10. Og蒸餾水1000克，pH自然，依次按照所述檢測(cè)過(guò)程稀釋至IO7倍倒平皿即倒培養(yǎng)皿，以下簡(jiǎn)稱(chēng)倒平皿，檢測(cè)結(jié)果如圖1。檢測(cè)儀器和器具10ml, Iml無(wú)菌移液管，250毫升無(wú)菌三角瓶，50毫升無(wú)菌三角瓶或試管，無(wú)菌生理鹽水，無(wú)菌培養(yǎng)皿，旋渦均勻器或震蕩培養(yǎng)器，恒溫培養(yǎng)箱。檢測(cè)過(guò)程和方法1)樣品稀釋準(zhǔn)確稱(chēng)量粉末狀樣品l.OOg，放于裝有99. Oml無(wú)菌生理鹽水三角瓶中，預(yù)先放 10 20粒無(wú)菌玻璃珠，置于搖床震蕩30分鐘，用無(wú)菌移液管吸取樣品Iml加入盛有99ml 無(wú)菌水的三角瓶中，在旋渦均勻器上充分振搖，務(wù)必使樣品均勻分散，即為10_2的樣品稀釋液，然后根據(jù)對(duì)樣品含菌量的估計(jì)，將用無(wú)菌操作方法樣品稀釋至適當(dāng)?shù)南♂尪取?)平板制作選用2-3個(gè)適合的稀釋度，培養(yǎng)皿貼上相應(yīng)的標(biāo)簽或用記號(hào)筆寫(xiě)上編號(hào)，分別吸取不同稀釋度的稀釋液Iml置于培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度作2-3個(gè)重復(fù)。然后用45°C -52°C 保溫的培養(yǎng)基倒于培養(yǎng)皿，迅速轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿使之混合均勻，冷卻成平板。培養(yǎng)基要求 45°C-52°C保溫，倒培養(yǎng)皿時(shí)注意均勻，特別是沉在培養(yǎng)基底部的碳酸鈣要求在培養(yǎng)皿中使之分布均勻。3)培養(yǎng)和計(jì)數(shù)將培養(yǎng)皿倒置于30_35°C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48_72h，觀察長(zhǎng)出的菌落，計(jì)含有透明圈的菌落數(shù)目，選擇含有30-300個(gè)菌落的培養(yǎng)皿進(jìn)行結(jié)果計(jì)算。實(shí)施例2本發(fā)明檢測(cè)培養(yǎng)基與常用檢測(cè)培養(yǎng)基MRS對(duì)照，檢測(cè)方法、檢測(cè)儀器和器具同實(shí)施例1或按現(xiàn)有技術(shù)方法進(jìn)行。
1、本發(fā)明檢測(cè)培養(yǎng)基取1. OOg含糞腸球菌、屎腸球菌、乳酸片球菌的粉末樣品， 采用本發(fā)明檢測(cè)培養(yǎng)基蛋白胨10. Og牛肉膏5. Og,葡萄糖20. Og,氯化鈉5. Og碳酸鈣 10. Og,瓊脂粉10. Og,蒸餾水1000克進(jìn)行檢測(cè)；2、采用常用的乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基MRS 蛋白胨10. Og牛肉膏10. Og酵母膏5. Og檸檬酸氫二銨2. Og葡萄糖20. Og吐溫801. OmL乙酸鈉5. Og磷酸氫二鉀2. Og硫酸鎂0. 58g硫酸錳0. 25g瓊脂18. Og蒸餾水1000克ρΗ6· 2-6. 6進(jìn)行檢測(cè)依次按照所述檢測(cè)過(guò)程稀釋至IO7倍倒培養(yǎng)皿，檢測(cè)結(jié)果如圖2 左邊用MRS培養(yǎng)基所檢測(cè)的倒培養(yǎng)皿，倒培養(yǎng)皿中有很多半透明凝結(jié)物，且顏色較深，影響準(zhǔn)確計(jì)數(shù)；右邊為用本發(fā)明檢測(cè)培養(yǎng)基所檢測(cè)的倒培養(yǎng)皿，倒培養(yǎng)皿中球菌的透明圈非常明顯，菌落清晰可見(jiàn)，且整個(gè)倒培養(yǎng)皿色澤較淺，計(jì)數(shù)很容易。
權(quán)利要求
1.一種糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測(cè)培養(yǎng)基，包括蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、 瓊脂粉、氯化鈉或磷酸二氫鉀、葡萄糖，其特征是還包括有碳酸鈣。
2.依據(jù)權(quán)利要求1所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測(cè)培養(yǎng)基，其特征是包括如下質(zhì)量組份混合組成蛋白胨10 -15、牛肉膏5 -8、葡萄糖15-20、氯化鈉5-8、瓊脂粉10-12、碳酸鈣10-20、和蒸餾水1000-1500，或蛋白胨10-15、牛肉膏5_8、葡萄糖15-20、 酵母膏5-8、磷酸氫二鉀3-5、碳酸鈣10-20、瓊脂粉10-15、和蒸餾水1000-1500 ；亦或是由蛋白胨10 -15、牛肉膏5 -8、葡萄糖15-20、瓊脂粉10-12、碳酸鈣10-20、蒸餾水1000-1500、 和氯化鈉5-8、酵母膏5-8、磷酸氫二鉀3-5的一種或任意幾種的組合構(gòu)成。
3.依據(jù)權(quán)利要求2所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測(cè)培養(yǎng)基，其特征是所述培養(yǎng)基由如下質(zhì)量組份混合組成蛋白胨10、牛肉膏5、葡萄糖20、氯化鈉5、瓊脂粉 10、碳酸鈣10、和蒸餾水1000 ；或蛋白胨10、牛肉膏5、葡萄糖20、酵母膏5、磷酸氫二鉀3、 碳酸鈣10、瓊脂粉10、和蒸餾水 1000。
4.依據(jù)權(quán)利要求1或2所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測(cè)培養(yǎng)基，其特征是培養(yǎng)基中瓊脂粉的加入量為培養(yǎng)基總質(zhì)量的0. 8-1. 4fft %。
5.依據(jù)權(quán)利要求1或2所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測(cè)培養(yǎng)基，其特征是培養(yǎng)基中碳酸鈣的加入量為培養(yǎng)基總質(zhì)量的l-2Wt %。
6.一種糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測(cè)方法，其特征是以權(quán)利要求1-3之一所述的檢測(cè)培養(yǎng)基為培養(yǎng)基，按下述方法步驟進(jìn)行樣品稀釋將檢測(cè)樣品稱(chēng)量后置于盛有無(wú)菌生理鹽水的容器中，加入玻璃珠，置于搖床震蕩30-50 分鐘，得樣品液；將樣品液移入盛有無(wú)菌水的三角瓶中，充分振搖使樣品均勻分散，制成10_2的樣品稀釋液，再制成相應(yīng)適當(dāng)?shù)南♂尪?；平板制作a)、選用2-3個(gè)上述相應(yīng)適當(dāng)?shù)南♂尪龋謩e置于不同的培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做2-3 個(gè)重復(fù)；b)、將45-52°C保溫的培養(yǎng)基倒于培養(yǎng)皿中，使之均勻混合冷卻制成培養(yǎng)皿平板；3)培養(yǎng)和計(jì)數(shù)將2)步制成的培養(yǎng)皿平板倒置于30-35°C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48-7池，觀察長(zhǎng)出的菌落，計(jì)算含有透明圈的菌落數(shù)目，選擇含有30-300個(gè)菌落的培養(yǎng)皿平板進(jìn)行結(jié)果計(jì)算。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的培養(yǎng)基及其檢測(cè)方法；包括蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、瓊脂粉、氯化鈉或磷酸二氫鉀、葡萄糖，還包括有碳酸鈣；所述的培養(yǎng)基中瓊脂粉的加入量為培養(yǎng)基總質(zhì)量的0.8-1.4Wt％；本發(fā)明為糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌提供檢測(cè)的培養(yǎng)基不易凝結(jié)成塊，菌落與培養(yǎng)基斑點(diǎn)清楚，計(jì)數(shù)準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)C12Q1/06GK102154439SQ20101061974
公開(kāi)日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2010年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月31日
發(fā)明者楊林海, 鐘啟平 申請(qǐng)人:宜春強(qiáng)微生物科技有限公司