專利名稱：茶類提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由茶葉高收率地制備甜味、釅味和美味強而澀味少的茶類提取物的方法。
背景技術(shù)：
近年來，已提供有將茶類飲料填充到罐或PET瓶等而成的商品，由于消費者對甜味的習慣，而得到了高度支持，產(chǎn)量不斷增加。作為最近的趨勢，正偏好美味和釅味強、澀味得到抑制的茶類飲料。在制備茶類提取物時，作為通過酶進行處理的方法，提出例如了如下方法合用原果膠酶和纖維素酶提取茶葉的方法(參照專利文獻1)；用鞣酸酶處理紅茶葉的方法(參照專利文獻幻；用果膠酶、淀粉酶和多酚氧化酶進行處理的方法(參照專利文獻；3)；浸漬于淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶或其混合酶的水溶液后干燥，然后于10(Γ170 加熱焙煎的谷茶 (穀茶)制備法(參照專利文獻4)；通過粘結(jié)性淀粉和選自α-或β-淀粉酶、纖維素酶及蛋白酶的至少1種酶的混合物進行提取的速溶茶的制法(參照專利文獻幻；用鞣酸酶和至少一種細胞壁消化酶潤濕紅茶的葉的方法(參照專利文獻6)；用纖維素酶和蛋白酶處理茶葉提取殘渣的方法(參照專利文獻7)；預先用鞣酸酶處理茶類的熱水提取液后冷凍濃縮的方法(參照專利文獻8)；使綠原酸酯酶作用于茶提取液從而制備渾濁少的茶類飲料的方法 (參照專利文獻9)；茶類提取物的制備方法，其特征在于，在蛋白酶和鞣酸酶存在下提取茶類原料(參照專利文獻10)；茶葉提取液的制備方法，其特征在于，使用至少含有纖維素酶、 半纖維素酶、果膠酶和原果膠酶的酶類，對茶葉進行酶分解提取處理(參照專利文獻11)； 茶類提取物的提取方法，其特征在于，在蛋白酶存在下用水提取茶葉，并進一步用蛋白酶處理制得的提取液(參照專利文獻12)；茶類提取物的制備方法，其特征在于，在茶類原料的提取時和/或提取后用葡糖淀粉酶、半纖維素酶、果膠酶、甘露聚糖酶、蔗糖酶或α-半乳糖苷酶等糖類分解酶進行酶分解處理(參照專利文獻13)；茶類提取物的制備方法，其特征在于，使用緋紅密孔菌iPycnoporus coccineus)產(chǎn)生酶和纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶或原果膠酶對茶類原料進行酶分解提取處理(參照專利文獻14)等。但是，這新方法雖然在謀求改善甜味、釅味、美味等味覺，收率提高的目的下取得了相應(yīng)的成果，但茶的提取殘渣中仍殘存有細胞壁和蛋白質(zhì)等有用成分，稱不上是將其全部有效利用。在先技術(shù)文獻專利文獻
專利文獻1 日本特公昭46-17958號公報專利文獻2 日本特公昭52-似877 專利文獻3 日本特公昭62-15175號公報專利文獻4 日本特開昭57-47465號公報專利文獻5 日本特公平1-47979號公報專利文獻6 日本特公平4-63662號公報專利文獻7 日本專利第3157539號公報專利文獻8 日本特開平5-328901號公報專利文獻9 日本特開平11-308965號公報專利文獻10 日本特開2003-144049號公報專利文獻11 日本特開2003-210110號公報專利文獻12 日本特開2008-67631號公報專利文獻13 日本特開2008-86280號公報專利文獻14 日本特開2008-125477號公報c

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的課題
本發(fā)明的目的在于提供能夠提取通過現(xiàn)有的由茶葉進行的酶處理提取未完全分解、 提取的來自茶葉的細胞壁成分，并且隨著細胞壁成分的分解能夠?qū)⒖商崛〉牡鞍踪|(zhì)進一步分解為氨基酸，結(jié)果可高收率地制備富含氨基酸成分，富于甜味、釅味和美味且澀味少的茶類提取物的方法。解決課題的手段
茶葉中約含25%的蛋白質(zhì)(第5版食品成分表)，推測若用蛋白酶分解該蛋白質(zhì)，則可獲得美味強的茶類提取物。但是，即使僅使蛋白酶作用于茶葉，仍未見到那樣多的氨基酸的游離。本申請人在以前的研究中推測茶葉中的蛋白質(zhì)或許與鞣質(zhì)結(jié)合，并進行深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過在蛋白酶和鞣酸酶存在下提取茶類原料可獲得美味和釅味強且澀味少的茶類提取物，并在此前提出(參照上述專利文獻10)。但是，發(fā)現(xiàn)即使實施專利文獻10中記載的方法，仍殘存大量未被提取的細胞壁成分和蛋白質(zhì)。因此，本發(fā)明人為有效利用上述無法提取而殘存的細胞壁成分和蛋白質(zhì)而進行研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn)在果膠酶中尤其是多聚半乳糖醛酸酶能夠有效地分解茶葉的細胞組織。為了分解茶葉中的果膠質(zhì)從而增加可溶性固體成分，通常認為增加所添加的多聚半乳糖醛酸酶的活性單位即可。但是，市售的絕大多數(shù)果膠酶的多聚半乳糖醛酸酶的活性單位都不高于該水平，在通常的添加量(相當于茶葉0. 質(zhì)量左右)下效果小，而且若大量添加，則由于源自酶制劑的賦形劑和酶蛋白，可產(chǎn)生制得的茶類提取物的味道變淡、賦予與茶不同的不自然的甜味或產(chǎn)生雜味等對味道造成不良影響的問題。因此，本發(fā)明人為解決該問題而進一步反復研究，結(jié)果此次令人驚奇地發(fā)現(xiàn)若除向茶葉中添加蛋白酶和鞣酸酶外，進一步以相對于Ig的茶葉使多聚半乳糖醛酸酶活性為 800U以上的量向茶葉中添加具有20000U/g以上的多聚半乳糖醛酸酶活性的酶制劑，進行提取，則來自茶葉的可溶性固體成分收率飛躍性地提高，生成大量的半乳糖醛酸，而且氨基酸收率也提高，制得的提取物富于甜味、釅味和美味，從而完成本發(fā)明。因此，本申請發(fā)明提供茶類提取物的制備方法，其特征在于，添加㈧蛋白酶、⑶ 鞣酸酶和(C)具有20000U/g以上的多聚半乳糖醛酸酶活性的酶制劑對茶類原料進行提取處理。發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明的方法，作為原料所使用的茶類原料的約40%質(zhì)量 約80%質(zhì)量轉(zhuǎn)換為可溶性固體成分，可使茶類原料的提取物收率大幅提高，制得的茶類提取物含有大量半乳糖醛酸。另外，還可使茶類原料的氨基酸收率提高。此外，根據(jù)本發(fā)明的方法制得的茶類提取物富含甜味、釅味和美味，通過添加到茶類飲料等中可賦予茶類飲料等甜味、釅味和美味或增強茶類飲料等的甜味、釅味和美味。另外，在本發(fā)明的方法中，隨著對茶類原料進行酶處理，酶處理中的粘度降低，變得松散，所以變得可容易地進行從酶處理漿中分離茶葉殘渣的工序。具體而言，分離、過濾等操作所需要的時間大幅縮短，可實現(xiàn)制備中的操作性的提高， 由于操作時間的縮短也可獲得降低制備費用的效果。實施發(fā)明的最佳方式
作為在本發(fā)明的方法中用作原料的茶類，可列舉出由屬于茶科常綠樹的茶(學名 Camellia sinensis (L) 0. Kuntze)的芽、葉、莖等制得的生葉，經(jīng)制茶而成的不發(fā)酵茶、半發(fā)酵茶和發(fā)酵茶。作為不發(fā)酵茶，例如可列舉出煎茶、粗茶、焙茶、玉露、蓋茶、天茶等蒸制的不發(fā)酵茶、或嬉野茶、青柳茶、各種中國茶等釜炒茶等不發(fā)酵茶；作為半發(fā)酵茶，例如可列舉出包種茶、鐵觀音茶、烏龍茶等；作為發(fā)酵茶，例如可列舉出紅茶、普洱茶、阿波粗茶、巖茶等。另外，也可使用通過花使不發(fā)酵茶或半發(fā)酵茶加香而成的茶等。其中，從可制得具有新鮮、自然的香氣和甜味、美味等的茶類提取物的觀點出發(fā)，特別優(yōu)選綠茶、烏龍茶、茉莉花茶寸。本發(fā)明的方法的特征在于將蛋白酶(A)、鞣酸酶(B)和具有20000U/g以上的多聚半乳糖醛酸酶活性的酶制劑(C)以相對于Ig的茶類原料使多聚半乳糖醛酸酶活性為 800U以上的量，對上述茶類原料進行提取處理。根據(jù)本發(fā)明，用于酶處理的蛋白酶(A)為水解蛋白質(zhì)或肽的肽鍵的酶。作為這樣的蛋白酶，無特殊限制，可使用源自動植物或源自微生的蛋白酶，例如可列舉出蛋白酶 A “ Amano、” J、，，、蛋白酶 M “Amano，，、蛋白酶 P “Amano，，3G、蛋白酶 N “Amano，，、胰酶 F、 番木瓜蛋白酶W-40、菠蘿蛋白酶F (以上均為Amano Enzyme Inc.(天野A社) 制)，Sumizyme ( 7 S f — Λ )(注冊商標)AP、LP、MP、FP、LPL (以上均為新日本化學工業(yè)社制)，口 f > (注冊商標)FN (大和化成社制)，Denapsin ( r f ν > )(注冊商標)2Ρ、Denatyme ( 7 f f — Λ )(注冊商標)AP、ΧΡ-415、食品用純化番木瓜酶、 Bioplase (匕·才 7°，一七)(注冊商標)XL-416F、SP-4FG、SP-15FG (以上均為 Nagase Chemtex Corporation (于辦七夂么于’7夕義社)制)，Orientase (才'J工 > 夕一七) (注冊商標)22BF、90N、0NS、20A (以上均為 HBI Enzymes Inc.(工 4 f ' 4 7 4 社) 制)，Molsin ( ^ ν > )(注冊商標)F、PD酶、IP酶、AO-蛋白酶(以上均為Kikkoman Corporation (今,^ >社)制)，寸力于一七(Kaken Pharma Co.，Ltd.(科研 7 r > 社)制的源自曲菌的蛋白酶)"ry千夕—七(注冊商標)NP-2、P、“ m > 乂 ^ >、蛋白酶 YP-SS (以上均為 Yakult Pharmaceutical Industry Co. , Ltd.(弋夕卟卜薬品工業(yè)社)制)，F(xiàn)lavourzyme ( 7 l· — K 廿 4 Λ )(注冊商標)、ftx)tamex ( a ^ J ^ 夕(注冊商標)、Neutrase (二-一卜，一七)(注冊商標)、Alcalase ( 7 >力，一七)(注冊商標)(Novozymes Japan Ltd. ( 7 # 廿 4 Λ 乂 ” ~ ” >社)制)，Kokulase (二 ” 7 —-tf )(注冊商標)SS、P (以上均為 Mitsubishi-Kagaku Foods Corporation (三菱化學 7 —文社)制)，VERON PS、C0R0LASE PN_L、C0R0LASE N、C0R0LASE 7089,VERONW,VERON P (以上均為 AB Enzymes Co.，Ltd. (AB 工 > 廿 4 么社)制)，口子 > P、尹 7 今 >、尹if l· 4 7、口 f > A、Thermoase ( T--t￡ )(注冊商標)(以上均為大和化成社制)，Orientase (注冊商標)90N、10NL、22BF、Nucleicin ( 3 夕 > 4 * > )(注冊商標)(以上均為HBI Enzymes Inc. ( 4 t f 4 7 <社)制)，7 口 7 一七(注冊商標)AP-IO (Yakult Pharmaceutical Industry Co. , Ltd. ( ^ ^ ^ 卜薬品工業(yè)社)制)， Enzylon (工 > f 口 > ) NBS (洛東化成工業(yè)社制)，Actinase (T 9 tf)(注冊商標)AS、AF (以上均為Kaken Pharma Co. , Ltd.(科研7 r > “社)制)；堿性蛋白酶 GL440、Purafect (匕° -，7 工夕卜)(注冊商標)4000L、蛋白酶 899、Protex ( π r 夕 ^ ) 6L,Tasinase (夕 ν t —-tf )(注冊商標)(Genencor Kyowa Co.，Ltd. ( ^ 二才、 7協(xié)和社)制)，以及源自動物的胃蛋白酶、胰蛋白酶等。這些蛋白酶可分別單獨或?qū)?2種以上組合使用。這些蛋白酶(A)的使用量由于效價等而不同，無法一概而論，但可例示出相對于每Ig茶類原料通常在約0. 01Γ約100U、優(yōu)選約1Γ約80U的范圍內(nèi)。另外，作為根據(jù)本發(fā)明用于酶處理的鞣酸酶(B)，只要是具有分解鞣質(zhì)活性的物質(zhì)，則無特殊限制，可使用任意物質(zhì)。具體而言，例如可列舉出將屬于曲霉屬、青霉屬、根霉屬、毛霉屬等的鞣酸酶產(chǎn)生菌使用通常用于這些絲狀菌的培養(yǎng)的培養(yǎng)基根據(jù)常規(guī)方法進行固體培養(yǎng)或液體培養(yǎng)，按照常規(guī)方法將獲得的培養(yǎng)物或其處理物純化處理而得的物質(zhì)。 需要說明的是，也可使用市售的鞣酸酶(例如鞣酸酶“Kilikoman (5，000U/g)，，(Kikkoman Corporation (今,^ — ^ > 社)制)、鞋酸酶“Kikkoman (500U/g) ” (Kikkoman Corporation ( 3T ” 3 —> ± ) M ) >I^SIBI (Mitsubishi-Kagaku Foods Corporation 制)、Sumizyme TAN (新日本化學社制)等)。這些鞣酸酶可分別單獨或?qū)?種以上組合使用。鞣酸酶(B)的使用量由于效價等而不同，無法一概而論，但可例示出相對于每Ig茶類原料通常在約0. 1曠約50U、優(yōu)選約0. 5曠約45U的范圍內(nèi)。本發(fā)明的方法的本質(zhì)特征在于以下方面除上述蛋白酶和鞣酸酶外，以相對于每 Ig茶類原料使多聚半乳糖醛酸酶活性為800U以上的量，添加具有20000U/g以上的多聚半乳糖醛酸酶活性的酶制劑進行提取；因此，來自茶葉原料的可溶性固體成分收率顯著提高， 而且可獲得所制得的茶類提取物富含半乳糖醛酸和氨基酸，且富于甜味、釅味和美味的顯著效果。如上所述，在本專利申請前已知道將茶類原料用果膠酶處理進行提取的技術(shù)。另外，在向茶類原料中添加蛋白酶、鞣酸酶以及果膠酶進行提取時，與僅添加蛋白酶和鞣酸酶進行提取時相比，可獲得相同的效果。但是，如果向茶類原料中添加蛋白酶、鞣酸酶以及相對于每Ig茶類原料為通常800U以上、優(yōu)選1000U以上、進一步優(yōu)選ιοοοΓιοοοου、更優(yōu)選 1500擴5000U的多聚半乳糖醛酸酶進行提取處理，則會產(chǎn)生茶葉原料(干燥茶葉)中約40% 質(zhì)量 約80%質(zhì)量可溶化的令人驚訝的現(xiàn)象，而且發(fā)現(xiàn)隨著細胞壁成分的分解，生成大量半乳糖醛酸，并且氨基酸的提取量也增加，隨著上述物質(zhì)的增加，美味、甜味、釅味等增強，可高收率地獲得富于風味的茶類提取物，并且可有效分解茶葉組織，提高水溶性成分的提取效率。多聚半乳糖醛酸酶是果膠酶的一種。通常被分類為果膠酶的酶包含多聚半乳糖醛酸酶、果膠裂合酶和果膠甲酯酶。多聚半乳糖醛酸酶為水解果膠中的多聚半乳糖醛酸主鏈的α-1，4鍵的酶，果膠裂合酶為通過β-消除反應(yīng)分解果膠中的多聚半乳糖醛酸主鏈的α-1，4鍵的酶，果膠甲酯酶為水解果膠中的甲酯的酶。果膠酶是被定位在破壞植物組織的酶族的中心的酶，如上所述，在本專利申請前已知道將茶類原料用果膠酶處理進行提取的技術(shù)。但是，即使按照通常的添加量使用目前的例如上述專利文獻等記載的果膠酶對茶類原料進行酶處理，仍無法認為能夠充分進行茶類細胞組織的分解。因此，在研究果膠酶中的多聚半乳糖醛酸酶、果膠裂合酶、果膠甲酯酶中哪一種酶對茶類細胞組織特別有效時發(fā)現(xiàn)， 多聚半乳糖醛酸酶在單獨使用下仍有效，而且通過使用具有比目前所使用的多聚半乳糖醛酸酶更高的活性單位的多聚半乳糖醛酸酶，可使細胞組織充分分解。需要說明的是，在本說明書中多聚半乳糖醛酸酶活性是根據(jù)Somogyi-Nelson法 (乂 ￥ —才、A 乂 >法)(J. Biol. Chem. 153, 375-380, 1"4 年)，以多聚半乳糖醛酸水溶液為底物使多聚半乳糖醛酸酶發(fā)生作用，通過采用比色法定量作為酶反應(yīng)生成物的還原糖的方法測定得到的值，1單位酶(IU)意味著1分鐘內(nèi)生成1 μ mol半乳糖醛酸的酶量。作為上述果膠酶，可列舉出作為市售品的例如果膠酶PL "Amano”、果膠酶 G“Amano”(以上均為Amano Enzyme Inc.(天野工巧]Λ社)制)，果膠酶-GODO (合同酒精社制)，Sucrase ( ^ ^)(注冊商標)A、N、S (以上均為 Mitsubishi-Kagaku Foods Corporation ), Sumizyme (注冊商標)AP_2、SPC、SPG、MC、PX、液態(tài) Sumizyme AP-2 (以上均為新日本化學工業(yè)社制)，果膠酶XP_5;M (Nagase Chemtex Corporation (f辦七夂Λ于夕ζ社)制)，Pectinex (《夕子才、’，夕7 )(注冊商標)、Pectinex Ultra (《夕子才、夕7々卟卜，)SP-L,Ultrazyme (々卟卜，廿4 Λ )(注冊商標)、Vinozym (if 7 廿 4 Λ )(注冊商標)、CitoroZym ( * 卜口廿 4 Λ )(注冊商標)、peelzym (匕°一卟廿 4 Λ )(注冊商標)(以上均為 Novo Nordisk Bioindustry Ltd. ( ^ ^ ^ r ^ ^ 夕八4才4 >夕· 7卜'J —社)制)，Cellulosin (七卟口* > )(注冊商標)PC5、PE60、 PEL、可溶性果膠酶T (以上均為HBI Enzymes Inc.(工4 f '〗7 ^社)制)、果膠酶SS、 果膠酶 HL (以上均為 Yakult Pharmaceutical Industry Co. , Ltd.(弋”ν 卜薬品工業(yè)社)制)等。其中，作為多聚半乳糖醛酸酶活性特別高的果膠酶，例如可列舉出Sumizyme AP-2、SPC、SPG (以上均為新日本化學工業(yè)社制)。通常的市售果膠酶制劑的多聚半乳糖醛酸酶活性通常為500U/g 約20000U/g左右。因此，為相對于Ig的茶葉原料添加800U，必須相對于Ig的茶葉原料添加0. 04g 1. 6g 的大量果膠酶制劑。此時，若相對于Ig茶類原料添加0. 06g以上、特別是0. 08g以上的酶制劑量，則賦形劑或其它成分會對茶類提取液有強烈的影響，出現(xiàn)制得的茶類提取物的味道變淡、或賦予其不同于茶的不自然的甜味、產(chǎn)生雜味等對味道造成不良影響的問題。因此，可直接使用具有多聚半乳糖醛酸酶活性本身就在20000U/g以上的高活性的果膠酶，但在多聚半乳糖醛酸酶活性不足20000U/g的果膠酶制劑的情況下，例如有必要通過水互溶性有機溶劑(丙酮、乙醇等)沉淀、等電點沉淀、超濾、凝膠過濾等將該酶制劑純化，回收多聚半乳糖醛酸酶活性為20000U/g以上的組分進行使用。另外，可在提取處理時，除添加上述蛋白酶(A)、鞣酸酶⑶和多聚半乳糖醛酸酶(C)外，進一步添加源自長梗木霉(Trichoderma longibrachiatum)或里氏木霉 (Trichoderma reesei)的纖維素酶進行提取，從而更有效地分解茶葉組織，增加水溶性成分的提取效率。如上所述，在本專利申請前已知道將茶類用纖維素酶處理進行提取的技術(shù)。另外，當除向茶類原料中添加蛋白酶、鞣酸酶外，添加源自黑曲霉(Aspergillus niger)或綠色木霉(Trichoderma viride)等的纖維素酶進行提取時，與僅添加蛋白酶和鞣酸酶進行提取時相比，可獲得相同的效果。但是，明確了 當除向茶類原料中添加蛋白酶、鞣酸酶外，添加源自長梗木霉(Trichoderma longibrachiatum)或里氏木霉(Trichoderma reesei)的纖維素酶進行提取時，細胞組織可充分分解。作為上述源自長梗木霉(^Trichoderma longibrachiatum)或里氏木霉 CTrichoderma reesei)的纖維素酶，例如可列舉出Cellulosin (注冊商標)T3 (HBI Enzymes Inc.(工4 f ' 4 7 4社)制)，Sumizyme (注冊商標)CS、C (以上均為新日本化學工業(yè)社制)，纖維素酶SS (Nagase Chemtex Corporation ( f力‘七> A〒〃夕^社) 制)、Sucrase (注冊商標)C (Mitsubishi-Kagaku Foods Corporation 制)等。源自長梗 7^ (Trichoderma longibrachiatum)或 1!! * (Trichoderma reesei)白勺纖維素8!白勺使用量由于效價等而不同，無法一概而論，但可例示出相對于每Ig茶類原料在通常約ο. Γ 約200U、優(yōu)選約0. 5 約100U、更優(yōu)選約廣約50U的范圍內(nèi)。在本發(fā)明中，可在不妨礙本發(fā)明效果的范圍內(nèi)合用半纖維素酶、原果膠酶、葡糖淀粉酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、α -半乳糖苷酶等其它糖質(zhì)分解酶。若例示出制備本發(fā)明的茶類提取物的一個實施方式，則如下所示
相對于1重量份的茶類原料，準備4質(zhì)量份 40質(zhì)量份的水和根據(jù)需要溶解有茶類原料的0. 1%質(zhì)量 1%質(zhì)量的抗壞血酸或抗壞血酸鈉的溶液，將茶類原料加入其中，根據(jù)需要于約60°C 約121°C殺菌約2秒 約20分鐘，然后冷卻。接著，首先加入鞣酸酶，均勻混合， 然后進一步添加蛋白酶，并且以相對于每Ig茶類原料使多聚半乳糖醛酸酶活性為800U以上的量添加具有20000U/g以上的多聚半乳糖醛酸酶活性的酶制劑，于約20°C 約60°C進行約30分鐘 約M小時酶處理。在酶處理后，于約60°C 約121°C進行約2秒 約20分鐘的酶失活，冷卻，采用離心分離、濾紙過濾等適宜的分離手段進行分離，由此可獲得澄清的茶類提取物。制得的茶類提取物也可根據(jù)需要采用適宜的濃縮手段制成濃縮液的形態(tài)。通過以上的酶處理進行提取，與完全不進行酶處理的茶類提取物相比，生成約4 倍量 約5倍量的氨基酸，而且茶類原料的細胞組織分解生成大量的半乳糖醛酸，在作為原料使用的茶類中，可將約40%質(zhì)量 約80%質(zhì)量轉(zhuǎn)換為可溶性固體成分。通過上述方法，由茶類原料出發(fā)的固體成分收率、氨基酸收率和半乳糖醛酸收率均增加，結(jié)果可獲得(a)以茶類提取物的全部固體成分(換算成Bx)為基準，含有1. Γ5% 質(zhì)量的半乳糖醛酸，(b)半乳糖醛酸/鞣質(zhì)的質(zhì)量比為0. 04、. 8，且(c)半乳糖醛酸/氨基酸的質(zhì)量比為0.08、. 8的茶類提取物；優(yōu)選為(a)以茶類提取物的全部固體成分(換算成 Bx)為基準，含有1.2 4%質(zhì)量的半乳糖醛酸，(b)半乳糖醛酸/鞣質(zhì)的質(zhì)量比為0.06、. 4， 且(c)半乳糖醛酸/氨基酸的質(zhì)量比為0. ΙΟ. 6的茶類提取物；更優(yōu)選為(a)以茶類提取物的全部固體成分(換算成Bx)為基準，含有1.3 3%質(zhì)量的半乳糖醛酸，(b)半乳糖醛酸 /鞣質(zhì)的質(zhì)量比為0. 07、. 2，且(c)半乳糖醛酸/氨基酸的質(zhì)量比為0. 19^0. 4的茶類提取物。需要說明的是，半乳糖醛酸由于具有像抹茶等高級茶那樣的粘稠、清爽的酸味，所以推測其具有掩蔽苦澀味、掩蔽異臭、賦予粘稠感(一感)等作用，就本發(fā)明的茶類提取物的甜味、釅味、美味等而言，推測半乳糖醛酸的增加是一個重要的原因。
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本發(fā)明的茶類提取物也可根據(jù)需要通過在填充到容器中后或填充前進行加熱殺菌制成可長期保存的狀態(tài)。 另外，本發(fā)明的茶類提取物通?？芍苯右砸簯B(tài)使用，但也可根據(jù)需要向該提取物中添加糊精、化工淀粉、環(huán)糊精、阿拉伯膠等賦形劑制成粉末狀。以下通過實施例和比較例對本發(fā)明進行更具體地說明。
實施例參考例1多聚半乳糖醛酸酶活性的測定(Somogyi-Nelson法(y ￥ —才、> 乂 >法)參照 J. Biol. Chem. 153，375-380，1994 年)
向0. 9ml的含有1%多聚半乳糖醛酸的50mM醋酸緩沖液(pH4. 5)中添加0. Iml的酶溶液的適當(恰當)稀釋液。于45°C使上述混合溶液反應(yīng)適當(恰當)時間，然后于沸水浴中加熱10分鐘使酶失活，冰冷，制成反應(yīng)液。向0. 3ml的反應(yīng)液中加入0. 3ml的Somogyi銅試劑，于沸水浴中加熱10分鐘，冰冷，加入0. 3ml的Nelson試劑，用試管混合器充分攪拌， 進一步加入3ml的離子交換水，用試管混合器充分攪拌。在9000轉(zhuǎn)下用離心分離機將該溶液處理3分鐘，測定上清液在500nm下的吸光度(Abs.)。另一方面，使用預先將上述酶溶液的適當(恰當)稀釋液加熱失活得到的溶液，進行與上述完全相同的操作，作為空白吸光度。根據(jù)使用的酶濃度、酶反應(yīng)時間、吸光度計算出Ig酶在1分鐘內(nèi)生成的半乳聚糖酸的 μ mol數(shù)，作為每Ig酶的單位⑶。測定的酶和多聚半乳糖醛酸酶活性測定值 Sumizyme AP2 (新日本化學工業(yè)社制):12400U/g
Cellulosin PE60 (HBI Enzymes Inc.(工 4 子匕 4 7 4 社)制):20600U/g
Sumizyme MC (新日本化學工業(yè)社制):1690U/g
Sucrase N (Mitsubishi-Kagaku Foods Corporation 制)4550U/go參考例2
將IOOg的Sumizyme AP2 (新日本化學工業(yè)社制)(通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性lM00U/g)溶于IOOOg的離子交換水，用Vivaflow ( if K 7 口一)(注冊商標)50VF05P2 (分離分子量 30，000 :Sartorius Co. , Ltd.(廿 A 卜1J 々 ^ 社)制)進行超濾濃縮，回收30ml的未通過部分，進一步冷凍干燥，制得參考品2 (12. Og 通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性86500U/g)。實施例1
向?qū)?. 6g的抗壞血酸鈉溶于900g的軟水所得到的溶液中添加IOOg的綠茶葉(中國產(chǎn)蒸青制法)，于80°C殺菌5分鐘，冷卻至45°C。向其中加入Ig的鞣酸酶(Mitsubishi-Kagaku Foods Corporation 制500U/g)，攪拌 15 分鐘。然后，添加 Ig 的蛋白酶 M (Amano Enzyme Inc. ( 7 7工 > 廿4 Λ社)制:5500U/g)和4. Sg的參考品2 (相對于Ig的茶葉，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性為4152U/g)，待溶解后于40°C進行8小時酶處理。在酶處理后，于90°C殺菌10分鐘，然后冷卻至30°C，用干布除去茶葉殘渣固體物， 然后使用在No. 2濾紙(8cm)上預先涂布IOg纖維素粉末的奴采過濾器，在一定壓力下進行抽濾(減壓度13. 33KPa)，得到825g的澄清的提取液(過濾所需要時間為3分42秒)。將該提取液減壓濃縮，制得165. 3g的Bx48°的濃縮液。將該濃縮液于95°C加熱殺菌30秒，填充到密閉容器中，然后迅速冷卻至常溫，制得本發(fā)明品1的綠茶提取物。實施例2
除了在實施例1中將參考品2的添加量用2.4g代替4.8g (相對于Ig的茶葉，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性為2076U/g)以外，進行與實施例1完全相同的操作 (過濾所需要時間為4分25秒)，制得本發(fā)明品2 (149. Ig)。實施例3
除了在實施例1中將參考品2的添加量用1.2g代替4.8g (相對于Ig的茶葉，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性為1038U/g)以外，進行與實施例1完全相同的操作 (過濾所需要時間為5分52秒)，制得本發(fā)明品3 (138. 5g)。實施例4
除了在實施例1中添加Cellulosin PE60 (5. 0g、相對于Ig的茶葉，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性為1030U/g)代替參考品2 (4. Sg)以外，進行與實施例1完全相同的操作(過濾所需要時間為5分21秒)，制得本發(fā)明品4 (146. 3g)。實施例5
除了在實施例1中除參考品2 (4. 8g)外進一步添加0. 25g的Sumizyme C (新日本化學工業(yè)社制的源自長梗木霉的纖維素酶1500U/g)以外，進行與實施例1完全相同的操作 (過濾所需要時間為3分21秒)，制得本發(fā)明品5 (167. 3g)。實施例6
除了在實施例1中除參考品2 (4. 8g)外進一步添加0. 25g的Cellulosin T3 (HBI Enzymes Inc.(工4 f '〗7 ^社)制的源自里氏木霉的纖維素酶2600U/g)以外，進行與實施例1完全相同的操作(過濾所需要時間為3分32秒)，制得本發(fā)明品6 (165. 4g)。參考例3
將150g (通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性1690U/g)的Sumizyme MC (新日本化學社製)溶于1500g的離子交換水，洗凈，通過離心分離G，500Xg、5分鐘)回收沉淀部分，進一步冷凍干燥，制得參考品3 (9. 8g，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性:20770U/g)。實施例7
除了在實施例1中添加4. 9g的參考品3 (相對于Ig的茶葉，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性為1018U/g)代替參考品2 (4. Sg)以外，進行與實施例1完全相同的操作(過濾所需要時間為4分49秒)，制得本發(fā)明品7 (153. 2)。參考例4
將 IOOg 的 Sucrase N (Mitsubishi-Kagaku Foods Corporation 制)(通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性4550U/g)溶于IOOOg的離子交換水，用Vivaflow ( 〃 ” 口一)(注冊商標)50VF05P2 (分離分子量30，000:5&汁01^118(0·，Ltd.制)進行超濾濃縮，回收25ml的未通過部分，進一步冷凍干燥，制得參考品4 (10. 0g，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性32，000U/g)。實施例8
除了在實施例1中添加5. Og的參考品4 (相對于Ig的茶葉，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性為1600U/g)代替參考品2 (4. Sg)以外，進行與實施例1完全相同的操作(過濾所需要時間為4分16秒)，制得本發(fā)明品8 (155. 4g)。比較例1
除了在實施例1中不使用任何酶以外，進行與實施例1完全相同的操作(過濾所需要時間為10分25秒)，制得比較品1 (66. Sg)。比較例2
除了在實施例1中不使用參考品2 (4. Sg)以外，進行與實施例1完全相同的操作(過濾所需要時間為9分57秒)，制得比較品2 (72. 9g)。比較例3 5
除了在實施例1分別使用2. Og的Sumizyme AP2 (新日本化學工業(yè)社制)(相對于Ig 的茶葉，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性為248U/g)、2. Og的Sumizyme MC (新日本化學工業(yè)社制)(相對于Ig的茶葉，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性為 33. 8U/g)、2. Og 的 Sucrase N (Mitsubishi-Kagaku Foods Corporation 制)(相對于 Ig 的茶葉，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性為91U/g)代替參考品2 (4. Sg)以外， 進行與實施例1完全相同的操作，制得比較品3、(過濾所需要時間和收獲量與其它測定值一同表示在下列表1中)。比較例6、(通過大量使用市售果膠酶使相對于Ig茶葉的多聚半乳糖醛酸酶活性為800U以上的實例)
除了在實施例1中分別使用8. Og的Sumizyme AP2 (新日本化學工業(yè)社制)(相對于 Ig的茶葉，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性為992U/g)、50. Og的Sumizyme MC (新日本化學工業(yè)社制)(相對于Ig的茶葉，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性為 845U/g)、20g 白勺 Sucrase N (Mitsubishi-Kagaku Foods Corporation M ) ( ^UMΨ Ig 的茶葉，通過上述測定得到的多聚半乳糖醛酸酶活性為910U/g)以外，進行與實施例1完全相同的操作，制得比較品6、(過濾所需要時間和收獲量與其它測定值一同表示在下列表 1中)。成分分析
對本發(fā)明品1、和比較品1、進行鞣質(zhì)、氨基酸和半乳糖醛酸濃度(％為質(zhì)量標準)的測定。測定方法
氨基酸氨基酸自動分析儀鞣質(zhì)酒石酸鐵法
半乳糖醛酸高效液相色譜(HPLC)法
本發(fā)明品廣8和比較品廣8的來自綠茶原料的收獲量和各成分的測定值(濃度)及過濾所需要時間如下列表1所示。[表 1]
權(quán)利要求
1.茶類提取物的制備方法，其特征在于，添加㈧蛋白酶、⑶鞣酸酶和(C)具有 20000U/g以上的多聚半乳糖醛酸酶活性的酶制劑對茶類原料進行提取處理。
2.權(quán)利要求1的方法，其中，茶類原料為綠茶、烏龍茶或茉莉茶。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中，在相對于每Ig茶類原料為0.Ο Γ ΟΟυ的范圍內(nèi)添加蛋白酶(A)。
4.權(quán)利要求廣3中任一項的方法，其中，在相對于每Ig茶類原料為0.1U 50U的范圍內(nèi)添加鞣酸酶(B)。
5.權(quán)利要求廣4中任一項的方法，其中，以相對于每Ig茶類原料使多聚半乳糖醛酸酶活性為800U以上的量添加具有20000U/g以上的多聚半乳糖醛酸酶活性的酶制劑(C)。
6.權(quán)利要求廣5中任一項的方法，其中，進一步添加源自長梗木霉(Trichoderma longibrachiatum)或里氏木霉(Trichoderma reesei)的纖維素酶進行提取處理。
全文摘要
本發(fā)明提供茶類提取物的制備方法，所述方法包括添加蛋白酶、鞣酸酶和具有20000U/g以上的多聚半乳糖醛酸酶活性的酶制劑而提取處理茶類原料，根據(jù)本發(fā)明的方法，可提取通過現(xiàn)有的由茶葉進行的酶提取處理未完全分解、提取的來自茶葉的細胞壁成分，而且隨著細胞壁成分的分解可進一步將可提取的蛋白質(zhì)分解成氨基酸，其結(jié)果可高收率地獲得富含氨基酸成分且富于甜味、釅味和美味的茶類提取物。
文檔編號A23F3/16GK102548424SQ201080002428
公開日2012年7月4日 申請日期2010年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月8日
發(fā)明者加東冴美, 川口理衣, 木野遙, 村井弘二, 藤田憐, 長野和種, 陳風雷 申請人:長谷川香料株式會社