專利名稱：具有控制植物病害能力的釀酒酵母菌株的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用作保護(hù)植物抗多種病原體(特別是真菌)的拮抗微生物的釀酒酵母。本發(fā)明適合于治療多個(gè)植物品種。
背景技術(shù)：
在植物的病原體中，導(dǎo)致真菌病害或隱花植物病害的真菌是具有最大經(jīng)濟(jì)影響的病原體。每個(gè)植物種對(duì)一種或數(shù)種主要的病害敏感，這些病害可以強(qiáng)烈地降低其強(qiáng)壯性、其生長(zhǎng)并最終降低收獲物的數(shù)量或/和品質(zhì)。多種參數(shù)影響病害的發(fā)展，例如土壤條件和施肥、品種敏感性、栽培方法(輪作、 耕種、每公頃的植株或幼苗數(shù)量、修剪系統(tǒng)等)、或者特別是氣候條件。但是，一般來說作用于這些因數(shù)中的一些因數(shù)，不足以充分限制由病害所造成的損害。此外，作為針對(duì)此病害的防護(hù)措施，希望優(yōu)化并確保其產(chǎn)量的從業(yè)者將在正確的時(shí)間用控制植物病害的，常常是預(yù)防性的產(chǎn)品處理其栽培物。在最常見的情況下，所使用的產(chǎn)品是化學(xué)產(chǎn)品，其中的大部分是高效的，但是會(huì)給操作人員帶來健康危害，并且在被處理產(chǎn)品，土壤和水中產(chǎn)生殘留物。此外，作用于相同代謝部位的某些殺真菌活性物質(zhì)的重復(fù)使用選擇出對(duì)這些殺真菌劑耐藥的菌株。為了試圖發(fā)現(xiàn)此問題的補(bǔ)救方法，需要限制使用每年的同類化學(xué)品的用量、變換成具有不同作用模式的化學(xué)產(chǎn)品類別，并且采用對(duì)病原體不利的其它方法。因此，在此文的上下文中，存在著對(duì)針對(duì)植物病害的替代方案的真實(shí)和明顯的需求。理想地，這些方案應(yīng)以不同于現(xiàn)有化學(xué)殺真菌劑的方式起作用，不應(yīng)在收獲物和環(huán)境中產(chǎn)生任何化學(xué)殘留物，并且對(duì)操作人員來說更安全和更健康。這種處理應(yīng)單獨(dú)使用或者與本發(fā)明的化學(xué)處理或任何其它處理組合使用，用于預(yù)防這些病原體及其耐藥菌株在植物上的出現(xiàn)或者限制這些病原體及其耐藥菌株在植物上的生長(zhǎng)，并且限制對(duì)人和環(huán)境的危害。在本文的上下文中，已知如何將病原體的拮抗微生物施用于植物。例如，到目前為止被稱為拮抗微生物的微生物包括細(xì)菌枯草桿菌，真菌哈茨木霉、綠色木霉、小盾殼霉、 灰綠鏈霉菌，酵母菌出芽短梗霉、梅奇酵母(Metschnikowia fructicola)、嗜油假絲酵母 (Candida oleophila))。El (ihaouth等人的文章《對(duì)果實(shí)和蔬菜的收獲后病害的生物控制》(Applied Mycology and Biotechnology,第 2卷，Agriculture and food production, Elsevier Science B. V，第219-238頁)提出了一篇關(guān)于對(duì)果實(shí)上的病原體的生物控制的綜述，并且給出了對(duì)拮抗微生物作用模式的數(shù)種可能的解釋。本發(fā)明還涉及釀酒酵母作為拮抗微生物的用途。然而，一般來說已估計(jì)到這些酵母菌的效力低于其它微生物的效力，或者甚至在某些情況下效力為零。作為例子， 可參考A. B. Filonow寫的文章《酵母中的糖在蘋果灰霉病菌生物控制中的競(jìng)爭(zhēng)作用》 (Biocontrol Science and Technology，8 :243_256，1998)，其中教導(dǎo)了不同于羅倫隱球酵母(Cryptococcus laurentii)禾口聯(lián)抱酵母(Sporobolomyces roseus)，酉良酒酵母在降低灰霉病菌對(duì)蘋果的感染方面是沒有效力的?，F(xiàn)在，通常認(rèn)為是最有效的拮抗微生物常常是從自然環(huán)境中分離的，并不為人所熟知，因而在其開發(fā)和使用期間會(huì)顯示出不合需要的特性。然后，人們會(huì)面臨工業(yè)化的難題、或者甚至面臨針對(duì)人或環(huán)境的弊端。因此，需要開發(fā)出從工業(yè)的觀點(diǎn)來看更穩(wěn)定、從健康和環(huán)境的觀點(diǎn)來看更安全，并且有效控制由植物中病原體所引起病害的拮抗微生物的新菌株。

發(fā)明內(nèi)容
首先本發(fā)明涉及一種釀酒酵母菌株，其特征在于它是選自于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心("Collection Nationale de Cultures de Microorganismes", 巴斯德研究所，25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15，法國(guó))保藏的保藏號(hào) 1-3936菌株、于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心保藏的保藏號(hào)1-3927菌株、于 2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心保藏的保藏號(hào)1-3938菌株、和于2008年3月 4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心保藏的保藏號(hào)1-3939菌株。本發(fā)明還涉及一種控制植物病害的組合物，其包含選自于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心保藏的保藏號(hào)1-3936菌株、于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心保藏的保藏號(hào)1-3937菌株、于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心保藏的保藏號(hào)1-3938菌株、于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心保藏的保藏號(hào)1-3939 菌株的釀酒酵母、以及其混合物。根據(jù)一實(shí)施方式，控制植物病害的組合物還包含一種以上的制劑和/或至少一種附加的活性佐劑。根據(jù)一實(shí)施方式，控制植物病害的組合物是濃縮的控制植物病害組合物，為固體或液體的干制劑。根據(jù)一實(shí)施方式，控制植物病害的組合物是控制植物病害的即用型的組合物，為干的或液體制劑，優(yōu)選為液體制劑。根據(jù)一實(shí)施方式，控制植物病害的組合物包含在IO4至IO11Cfu/毫升之間、優(yōu)選在 IO5至IOltlCfu/毫升之間、更優(yōu)選在5X IO5至5X IO9Cfu/毫升之間量的釀酒酵母。本發(fā)明還涉及一種用于治療或保護(hù)植物不受由病原體所引起病害的方法，包括使植物與選自于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心保藏的保藏號(hào)1-3936菌株、于 2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心保藏的保藏號(hào)1-3937菌株、于2008年3月4 日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心保藏的保藏號(hào)1-3938菌株、和于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心保藏的保藏號(hào)1-3939菌株的釀酒酵母、及其混合物接觸。根據(jù)一實(shí)施方式，病原體選自真菌、病毒、細(xì)菌、支原體、螺原體、類病毒及其組合， 優(yōu)選真菌。根據(jù)一實(shí)施方式，病原體是選自下列微生物鏈格孢屬(Alternaria spp.)，特別是茄鏈格孢(Alternaria solani)和互隔交鏈格孢(Alternaria alternata))、殼二孢屬(Ascochyta spp.)，特另Ij是蠶豆殼二孢(Ascochyta fabae)或 Ascochyta pinodella、 曲霉屬，特別是黑曲霉和煙曲霉、葡萄孢屬，特別是灰葡萄孢、盤梗霉屬(Bremia spp.)， 特別是萵苣盤梗霉(Bremia lactucae)、尾孢菌屬(Cercospora spp)，特別是甜菜尾孢菌(Cercospora beticola)、枝孢屬(Cladosporium spp.),特另Ij是洋蔥枝孢菌 (Cladosporium allii-cepae)、炭疽菌屬(Colletotrichum spp.),特另Ij 是禾生炭疽菌 (Colletotrichum graminicola)、擬隱抱殼屬(Cryptosporiopsis spp.)，特別是腐皮擬隱孢殼(Cryptosporiopsis malicorticis)、白粉菌屬(Erysiphe spp.),特另Ij是小麥白粉菌(Erysiphe graminis)或葡萄白粉病菌(Erysiphe necator)、鐮刀菌屬(Fusarium spp.)，特另U 是尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)禾口粉紅鐮刀菌(Fusarium roseum)、 盤長(zhǎng)孢屬(Gloeosporium spp.),特另Ij 是果生盤長(zhǎng)孢(Gloeosporium fructigenum)、 球座菌屬(Guignardia spp.)，特別是葡萄球座菌(Guignardia bidwellii)、長(zhǎng)蠕孢屬(Helminthosporium spp.),特別是 Helminthosporium tritici-repentis、盤二抱屬 (Marssonina spp.),特另 Ij 是薔薇盤二孢(Marssonina rosae)、叢梗孢屬(Monilia spp·), 特別是果仁叢梗孢(Monilia fructigena)、球腔菌屬(Mycosphaerella spp.)，特別是蕓苔生球腔菌(Mycosphaerella brassicicola)、青霉菌屬(Penicillium spp·),特另Ij 是擴(kuò)展青霉(Penicillium expansum)或指狀青霉(Penicillium digitatum)、霜霉屬 (Peronospora spp. ), ^ !]^iJ^felf ^ (Peronospora parasitica) > Pezicula spp. , ^ 別是 Pezicula malicorticis、多胞銹菌屬(Phragmidium spp.)，特另Ij 是 Phragmidium rubi-idaei、疫霄菌屬(Phytophtora spp.),特另U是致病疫霄(Phytophtora infestans)) > 單軸霉屬(Plasmopara spp.)，特別是葡萄單軸霉(Plasmopara viticola)、叉絲單囊殼屬(Podosphaera spp.)，特別是白叉絲單囊殼(Podosphaera leucotricha)、假尾孢屬 (Pseudocercosporella spp.)，包括芥假小尾抱菌(Pseudocercosporella brassicae)、 /[叚霜霉菌屬(Pseudoperonospora spp.)，特另Ij 是古巴 /[叚霜霉(Pseudoperonospora cubensis)、假盤菌屬(Pseudopeziza spp.),特另U 是苜猜假盤菌(Pseudopeziza medicaginis)、柄銹菌屬(Puccinia spp.)，特另 Ij 是禾桿銹菌(Puccinia graminis)、腐霉菌屬(Pythium spp.)、柱隔孢屬(Ramularia spp.)，特別是甜菜柱隔孢(Ramularia betae)、絲核菌屬(Rhizoctonia spp.)，特別是立枯絲核菌(lihizoctonia solani)、根霉屬(Rhizopus spp.),特另Ij 是黑根霉(Rhizopus nigricans)禾口葡枝根霉(Rhizopus stolonifer)、_ 抱屬(Rynchosporium spp.),特別是 Rynchosporium secalis、核盤菌屬(Sclerotinia spp.),特另Ij 是油菜核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)、殼針孢屬(Septoria spp.),特另Ij是穎枯殼針孢(Septoria nodorum)或小麥殼針孢(Septoria tritici)、單囊絲殼屬(Sphaerotheca spp.)，特別是斑點(diǎn)單殼孢(Sphaerotheca macularis)、黑星孢屬(Spilocaea spp)，特別是環(huán)黑星孢(Spilocaea pomi)、外囊菌屬 (Taphrina spp.)，特另Ij是李夕卜囊菌(Taphrina pruni)、單端子包屬(Trichothecium spp.), 特別是粉紅單端胞(Trichothecium roseum)、鉤絲殼屬(Uncinula spp.)，特別是葡萄鉤絲殼(Uncinula necator)、黑粉菌屬(Ustilago spp.)，特別是小麥散黑粉菌(Ustilago tritici)、黑星菌屬(Venturia spp.)，特別是蘋果黑星菌(Venturia inaequalis)、及其組合；優(yōu)選地所述病原體選自指狀青霉、擴(kuò)展青霉、灰葡萄孢以及其組合。
根據(jù)一實(shí)施方式，植物選自禾本科植物、雙子葉植物、一年生植物、一年二次的植物和多年生植物、蔬菜的幼苗或收獲的蔬菜、帶果實(shí)的植物或樹或者收獲的果實(shí)、帶花的植物或樹或者收獲的花、谷類、含油植物、產(chǎn)蛋白(proteaginous)植物、木本植物、觀賞植物， 特別是選自來源于馬鈴薯、甜菜根、甘蔗、煙草、藤蔓植物、小麥、油菜籽、大麥、稻、玉米、高粱、粟(millet)、大豆、豆類、番茄、黃瓜、萵苣、草莓植物、蘋果樹、梨樹、柑橘、香蕉、菠蘿、桃樹、杏樹、櫻桃樹、胡桃樹和榛子樹的幼小植物或產(chǎn)物。根據(jù)一實(shí)施方式，上述方法包括將上述即用型的控制植物病害組合物施用于所述植物的全身或部分；或者將上述濃縮的控制植物病害組合物與制劑混合，從而形成最終的控制植物病害組合物，接著將該最終的控制植物病害組合物施用于所述植物的全身或部分。根據(jù)一實(shí)施方式，將控制植物病害組合物施用于所述植物的全身或部分，由優(yōu)選地通過噴灑將該組合物施用于葉、莖、花、果實(shí)、樹干和/或根或者其一部分，優(yōu)選地通過地面噴灑、機(jī)械摻和、與肥料、強(qiáng)化劑混合或者以預(yù)混劑形式施用于根部構(gòu)成。本發(fā)明能夠克服現(xiàn)有技術(shù)的弊端。尤其是，本發(fā)明提供從工業(yè)的觀點(diǎn)來看更穩(wěn)定、 從健康和環(huán)境的觀點(diǎn)來看更安全，并且有效控制由植物中病原體所引起病害的拮抗微生物的新菌株。本發(fā)明是基于本發(fā)明人對(duì)具有非常好的控制植物病害能力的釀酒酵母新菌株的開發(fā)。因?yàn)獒劸平湍甘且阎慕湍阜N并且人們已將其應(yīng)用于制造面包和酒類，包括以工業(yè)規(guī)模達(dá)數(shù)世紀(jì)，所以將其用作拮抗微生物是特別有利的。因此，能夠有效控制植物病原體以及由病原體所引起的病害，這是利用對(duì)人類和環(huán)境無害或者不是非常有害并且易于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)的產(chǎn)品所完成的。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，本發(fā)明還具有以下有利特征中的一個(gè)，或者優(yōu)選地?cái)?shù)個(gè)本發(fā)明提供長(zhǎng)期的植物保護(hù)(例如1周、2周或1個(gè)月以上)以及針對(duì)多種病原體的多價(jià)作用；本發(fā)明尤其適用于生物農(nóng)業(yè)領(lǐng)域；本發(fā)明能夠通過降低感染水平和/或降低接種物緩解來提高植物保護(hù)的總體效力；本發(fā)明能夠限制在對(duì)培養(yǎng)物或植物進(jìn)行處理期間農(nóng)用化學(xué)品在消費(fèi)產(chǎn)品上(或消費(fèi)產(chǎn)品中)以及土壤和水中的殘留量。
具體實(shí)施方式
的描述現(xiàn)在，在下面的描述中將以非限制性的方式更詳細(xì)地說明本發(fā)明。處理的類型(治療性的或預(yù)防性的)所前所述，本發(fā)明涉及預(yù)防性或治療性地控制植物中的病原體的方法和產(chǎn)品。相關(guān)的植物可以是任何類型的植物，特別是禾本科植物和雙子葉植物、一年生植物，一年二次的植物和多年生植物、蔬菜、谷類，包括小麥、大麥和稻、玉米、高粱、粟、含油植物、產(chǎn)蛋白(proteaginous)植物、馬鈴薯、甜菜根、甘蔗、煙草、木本植物、果樹或非果實(shí)樹、 藤蔓植物、觀賞植物等。根據(jù)一具體實(shí)施方式
，所述植物是果樹，例如種子類型的果樹，特別是選自蘋果樹、梨樹和柑橘樹。根據(jù)另一實(shí)施方式，所述植物選自藤蔓植物、谷類(特別是小麥)、油菜籽、甜菜根、馬鈴薯、豆類、番茄、黃瓜、萵苣或草莓植物。在本發(fā)明范圍內(nèi)所用的術(shù)語“植物”涵蓋植物(例如果樹等)及這些植物的分離部分，例如收獲的果實(shí)或花，而且也涵蓋谷?；蚍N子(植物繁殖材料)。根據(jù)一具體實(shí)施例，所述植物是果實(shí)，例如蘋果、或梨、或柑橘。在下文中，當(dāng)使植物與所述組合物接觸時(shí)，應(yīng)該理解的是可在植物的整個(gè)表面或者僅在部分表面上實(shí)施此接觸。例如，當(dāng)所述植物是完整植物時(shí)，接觸可在植物的全部或者在植物的一個(gè)以上部分(例如葉、莖、花、果實(shí)、樹干和/或根)或者僅在這些葉、莖、花、果實(shí)、樹干和/或根的表面的一部分上實(shí)施。本發(fā)明的產(chǎn)品能夠在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)段，可超過一個(gè)月、或者甚至數(shù)月內(nèi)有效保護(hù)在寒冷條件下的植物果實(shí)抗病原體。當(dāng)然，可涵蓋采用由使用者所確定間隔的重復(fù)施用。本發(fā)明可用于控制任何類型的病原體，特別是真菌、病毒、細(xì)菌、支原體、螺原體或類病毒。本發(fā)明對(duì)控制真菌特別有效。作為病原體的具體實(shí)例，特別地列舉出下列屬的真菌鏈格孢屬，例如茄鏈格孢和互隔交鏈格孢、殼二孢屬，例如蠶豆殼二孢菌或Ascochyta pinodella、曲霉屬，特別是黑曲霉和煙曲霉、葡萄孢屬，例如灰葡萄孢、盤梗霉屬，例如萵苣盤梗霉、尾孢菌屬，例如甜菜尾孢病菌、枝孢屬，例如洋蔥枝孢菌、炭疽菌屬，例如禾生炭疽菌、擬隱孢殼屬，特別是腐皮擬隱孢殼、白粉菌屬，例如小麥白粉菌或葡萄白粉病菌、鐮刀菌屬，例如尖孢鐮刀菌和粉紅鐮刀菌、盤長(zhǎng)孢屬，例如果生盤長(zhǎng)孢、球座菌屬，例如葡萄球座菌、長(zhǎng)蠕孢屬例如 Helminthosporium tritici-r印entis、盤二孢屬，例如薔薇盤二孢、叢梗孢屬，例如果仁叢梗孢、球腔菌屬，例如蕓苔生球腔菌、青霉菌屬，例如擴(kuò)展青霉或指狀青霉、霜霉屬，例如寄生霜毒、Pezicula spp.，特另U是 Pezicula malicorticis、多胞誘菌屬，例如 Phragmidium rubi-idaei、疫霉菌屬，包括致病疫霉、單軸霉屬，包括葡萄單軸霉、叉絲單囊殼屬，例如白叉絲單囊殼、假尾孢屬，包括芥假小尾孢菌、假霜霉菌屬，例如古巴假霜霉、假盤菌屬，例如苜蓿假盤菌、柄銹菌屬，包括禾桿銹菌、腐霉菌屬、柱隔孢屬，包括甜菜柱隔孢、絲核菌屬，例如立枯絲核菌、根霉屬，例如黑根霉和葡枝根霉、喙孢屬，如Rynchosporium secalis、核盤菌屬，如核盤菌、殼針孢屬，例如穎枯殼針孢或小麥殼針孢、單囊絲殼屬，如斑點(diǎn)單殼孢、黑星孢屬，特別是環(huán)黑星孢、外囊菌屬，例如李外囊菌、單端孢屬，特別是粉紅單端胞霉、鉤絲殼屬，例如葡萄鉤絲殼、黑粉菌屬，例如小麥散黑粉菌、黑星菌屬，例如蘋果黑星病菌。由本發(fā)明也可控制以上病原體的組合。指狀青霉、擴(kuò)展青霉、灰葡萄孢是本發(fā)明特別有效的種。影響栽培作物的細(xì)菌的實(shí)例特別地包括棒狀桿菌屬、棒形桿菌屬、短小桿菌屬、鏈霉菌屬、假單胞菌屬、黃單孢菌屬、歐文氏菌屬，特別是梨火疫歐文氏菌(Erwinia amylovora)、軟腐歐文氏菌(Erwinia carotovora)、菊歐文氏菌(Erwinia chrysanthemi)。影響栽培作物的病毒的實(shí)例是例如煙草花葉病毒或者馬鈴薯Y病毒。本發(fā)明提供一種用于治療和/或保護(hù)植物抗由上述病原體，例如灰霉所引起病害的方法。該方法涵蓋旨在延遲或預(yù)防這些病害的發(fā)生、根除病害、或者限制或降低這些病害的規(guī)模、程度或效果的任何治療性或預(yù)防性方法。作為拮抗微生物的釀酒酵母菌株“拮抗微生物”表示在本發(fā)明范圍內(nèi)是病原體的拮抗劑的微生物，特別是有可能導(dǎo)致植物病害的病原體(特別是以上所列病原體中的一種病原體)。本發(fā)明提供了四種可用作拮抗微生物的釀酒酵母的菌株，即于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心(CNCM)保藏的保藏號(hào)1-3936菌于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心(CNCM)保藏的保藏號(hào)1-3937菌于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心(CNCM)保藏的保藏號(hào)1-3938菌于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心(CNCM)保藏的保藏號(hào)1-3939菌
本發(fā)明提供了用于保護(hù)或治療植物抗由病原體所引起病害的前述釀酒酵母菌株
株；
株；
株；以及株。
的用途。特別是，為了達(dá)到此目的，本發(fā)明提供了一種包含前述釀酒酵母菌株(或者這些菌株中的數(shù)種菌株的混合物)中的一種菌株的控制植物病害組合物?！翱刂浦参锊『M合物”表示在本發(fā)明范圍內(nèi)能夠保護(hù)植物抗一種或者數(shù)種病原體和/或治療被一種以上病原體感染的植物的組合物。根據(jù)本發(fā)明的控制植物病害組合物可以采用濃縮的形式或者即用型的形式。所述控制植物病害組合物可采用干燥的形式，例如以粉末或顆粒的形式，或者采用液體形式，特別是含水的形式，例如懸浮液、分散液、凝膠、乳膏、糊劑，或者采用固體形式。在即用型的組合物的情況下，優(yōu)選含水的液體形式，因?yàn)榇诵问竭m于噴灑。在干燥的形式下，前述菌株的酵母菌優(yōu)選采用脫水、凍干和/或囊封的形式。在即用型的控制植物病害組合物中，已利用適當(dāng)方式配制了用于植物的活性物質(zhì) (前述釀酒酵母的菌株)。因此，將活性物質(zhì)例如與可接受的載體，例如填裝噴灑類型噴射器的液體、肥料、用于溫室的培養(yǎng)基質(zhì)混合。即用型的組合物可采用粉末的形式，但是優(yōu)選液體形式。不同于意圖應(yīng)用于植物上的即用型的控制植物病害組合物，所述濃縮的控制植物病害組合物意圖由使用者與制劑(載體)混合，從而形成最終的即用型組合物。優(yōu)選地，該制劑是水或水性溶液。因此，通常使用者將顆粒(濃縮的控制植物病害組合物)溶解于水中、或者將水性懸浮液或分散液(濃縮的控制植物病害組合物)稀釋于水中，從而獲得最終的即用型組合物。如果在濃縮的控制植物病害組合物中酵母菌為脫水形式并且如果最終組合物是為液體形式(通常是水性形式)，則應(yīng)注意采取防止使酵母再水合的常用預(yù)防措施；例如， 適于溶解/再水合的制劑溫度(通常為水或水性溶液)有利的是在20至25°C之間。無論控制植物病害組合物是濃縮的還是即用型的，在任一種情況下該組合物一般包含一種或數(shù)種固體或液體制劑。該制劑可由任何化合物組成、或者由能夠便于或者優(yōu)化運(yùn)輸、貯存、處理、應(yīng)用和/ 或使活性物質(zhì)在植物或其其部分上持續(xù)存在的任何惰性材料所組成。該制劑適合于所希望的目的活性物質(zhì)的保持、在貯存期間或者在制備處理混合物中使用期間將活性物質(zhì)維持于懸浮液中、抗起泡、防塵、對(duì)植物的粘附、滲透入組織、以及其它目的。這個(gè)或者這些制劑可以是固體、液體；可以單獨(dú)使用或者組合使用。
制劑可以特別是選自表面活性劑、分散劑、防腐劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑、粘附劑、pH緩
沖劑、營(yíng)養(yǎng)素；可以單獨(dú)使用或者混合使用。應(yīng)用于植物的釀酒酵母的量是由本領(lǐng)域技術(shù)人員所確定的，特別是取決于被處理的病原體或多種病原體、植物類型、菌株、以及所使用菌株的組合等。優(yōu)選地，應(yīng)用的量足以保護(hù)植物抗病原體或者限制或抑制所存在病原體的生長(zhǎng)和作用。該量例如可通過田間試驗(yàn)而獲得(或者，例如當(dāng)植物是果實(shí)時(shí)，通過實(shí)驗(yàn)室測(cè)試、或者在果實(shí)包裝站自己測(cè)試)。優(yōu)選地，即用型的控制植物病害組合物含有在IO4至IO11Cfu/毫升之間、優(yōu)選在 IO5至IOltlCfu/毫升之間、更優(yōu)選在5X IO5至5X IO9Cfu/毫升之間的量的前述酵母菌的菌株。上述控制植物病害組合物，在其最終(即用型的)形式中可通過不同的方式并按照處理的不同步驟或程序而施用于植物。在一優(yōu)選實(shí)施方式中，該組合物是液體，并且是通過噴灑特別是噴灑在葉面或地面上而應(yīng)用。在一具體實(shí)施方式
中，該組合物是液體，并且通過噴灑在收獲的花或果實(shí)上而應(yīng)用。可替代地，能夠以與肥料、培養(yǎng)支持劑、噴灑水或其他產(chǎn)品的混合物形式來應(yīng)用所述組合物。因此，可通過地面噴灑、機(jī)械摻和、與肥料、強(qiáng)化劑混合、或者以預(yù)混劑的形式、 或者其它方法將所述組合物施用于根部。其它可能的活件佐劑在針對(duì)植物的由病原體所引起病害的預(yù)防性或治療性處理的范圍內(nèi)，可使用其它活性佐劑。“活性佐劑”表示能夠有助于預(yù)防或治療由病原體所引起植物病害、或者能夠增強(qiáng)上述釀酒酵母的菌株在預(yù)防或治療由病原體所引起植物病害的效果的任何化合物(不同于前述釀酒酵母的菌株)。根據(jù)一實(shí)施方式，本發(fā)明的控制植物病害組合物可包含這些其它活性佐劑。根據(jù)另一實(shí)施方式，可將這些其它活性佐劑單獨(dú)地給植物施用，作為附加的治療 (相繼地或交替地)。這些其它相關(guān)的活性佐劑特別包括(1)不同于前述釀酒酵母的菌株的任何拮抗微生物。任何已知的微生物可用作例如一種以上植物病原體的拮抗劑。優(yōu)選地，所述拮抗微生物選自細(xì)菌、真菌和酵母，優(yōu)選酵母。拮抗微生物可以特別地選自農(nóng)桿菌屬、白粉寄生孢屬、短梗霉屬、芽孢桿菌屬、布勒擔(dān)孢酵母屬、念珠菌屬、毛殼菌屬、盾殼霉屬、隱球菌屬、德巴利氏酵母屬、德克酵母屬、歐文氏菌屬、Exophilia spp、粘帚霉屬、漢遜酵母屬、伊薩酵母屬、克魯維酵母菌屬、馬利亞霉屬、梅奇酵母屬、微結(jié)節(jié)菌屬、擬青霉屬、青霉菌屬、Wilebiopsis spp。；畢赤酵母屬、假單胞菌屬、假絲酵母屬、腐霉菌屬、紅酵母屬、酵母屬、復(fù)膜孢酵母屬、擲孢酵母屬、鏈霉菌屬、 籃狀菌屬、木霉菌屬、細(xì)基格孢屬、輪枝菌屬、接合酵母菌屬以及其混合物；更具體地放射形土壤桿菌、出芽短梗霉、枯草桿菌、地衣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、嗜油假絲酵母、Candida saitoana、清酒假絲酵母、纖細(xì)假絲酵母、產(chǎn)朊假絲酵、菌膜假絲酵母、小盾殼霉、淺白隱球酵母、羅倫隱球酵母、淺黃隱球酵母、軟腐歐文氏菌、鏈孢粘帚菌、綠粘帚霉、孢漢遜酵母、 耐熱克魯維酵母、Metschnikovia fructicola,美極梅奇酵母、魯考弗美奇、Microdochium dimerum、玫煙色擬青霉、草酸青霉菌、大伏革菌、異常畢赤酵母、季也蒙畢赤酵母、洋蔥假單胞菌、綠針假單胞菌、熒光假單胞菌、煙草野火病菌、Pseudozyma flocullosa、粘紅酵母、寡雄腐霉、粘質(zhì)紅酵母、釀酒酵母、復(fù)膜孢酵母、灰綠鏈霉菌、黃藍(lán)狀菌、深綠木霉、哈茨木霉、 多孢木霉、綠色木霉、棘孢木霉、蓋姆斯木霉、黑細(xì)基格孢、黑白輪枝孢、以及其混合物。(2)鈣、鉀或鈉鹽在W02006/032530中對(duì)作為活性佐劑的特別有效的鹽進(jìn)行了詳細(xì)描述，本文將其
作為參考。特別是鹽酸鹽、丙酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、醋酸鹽、乙酸鹽、甘油酸鹽、谷氨酸鹽、赤糖酸鹽、蘇糖酸鹽、核糖酸鹽、阿糖酸鹽、木糖酸鹽、來蘇糖酸鹽、阿洛糖酸、阿卓糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、馬來酸鹽、古洛糖酸鹽、艾杜糖酸鹽、半乳糖酸鹽、塔龍酸鹽、 反式庚酸鹽、altroh印tonate、葡庚糖酸鹽、甘露庚糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、艾杜糖庚酸鹽、乳糖庚酸鹽、塔羅庚酸鹽(taloh印tonate)、丙醇二酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、蔗糖酸鹽、粘液酸鹽、乳酸鹽、乳葡萄糖酸鹽(lactogluconate)、抗壞血酸鹽、異檸檬酸鹽和檸蘋酸鹽，優(yōu)選鈉或鈣或鉀(優(yōu)選鈣)，無論它們是采用無水的形式還是水合的形式。特別優(yōu)選乳酸鈣。也可以是上述鹽的混合物。(3)刺激劑，選自糖醛酸類、甘露聚糖、β-1，3-葡聚糖、混合物和衍生物(鹽、水合物等)。在糖醛酸類中，優(yōu)選半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸。(4)殺真菌、抗病毒和/或抗細(xì)菌的農(nóng)用化學(xué)物質(zhì)。殺真菌物質(zhì)可以例如選自有機(jī)農(nóng)用化學(xué)殺真菌劑或基于硫和/或銅的無機(jī)殺真菌劑。目前可利用的有機(jī)農(nóng)用化學(xué)殺真菌劑的實(shí)例，特別是苯甲腈類，包括百菌清、氨基甲酸酯類，包括二硫代氨基甲酸酯類，如代森錳鋅、鄰苯二甲酰亞胺類，包括克菌丹、磺酰胺類、胍類、醌類、喹啉類、噻二嗪類、酰替苯胺類、羥基酰替苯胺類、和苯基酰胺類、咪唑啉酮類、噁唑烷酮類、甲氧基丙烯酸酯類、氰基咪唑類、氟啶胺、敵螨普、硅嘧菌胺、對(duì)二甲酰亞胺類、咯菌腈、有機(jī)磷化合物、霜霉威鹽酸鹽、二苯胺、吡啶基胺類、留醇生物合成抑制劑 (IBS)，包括咪唑類、嘧啶類、羥基嘧啶類、苯胺基嘧啶類、三唑類、螺環(huán)菌胺、嗎啉類和哌啶類、環(huán)酰菌胺、惡霉靈、苯酰菌胺、乙霉威、苯并咪唑類、戊菌隆、喹氧靈、丙森鋅、霜脲氰、烯酰嗎啉、膦酸酯類、三嗪類。本發(fā)明也可與一種以上的可引起植物防御機(jī)制的化合物交替地、聯(lián)合地或者結(jié)合地使用，例如β-氨基丁酸、2，6_ 二氯異煙酸、阿拉酸式苯-S-甲基或者某些海藻提取物。 這種化合物的實(shí)例特別是昆布多糖和ulvans。在此方面，本發(fā)明還提供一種用于預(yù)防或減緩對(duì)一類殺真菌劑耐藥的真菌菌株的生長(zhǎng)的方法，其特征在于，用前述釀酒酵母的菌株對(duì)植物進(jìn)行處理，如上所述，以降低對(duì)所述類殺真菌劑耐藥的菌株的選擇壓力為目的，或者其特征在于將用所述類的殺真菌劑對(duì)植物的處理與如上所述用前述菌株的釀酒酵母對(duì)植物的處理交替使用或者聯(lián)合使用。本發(fā)明還提供一種用于預(yù)防或減緩對(duì)一類抗細(xì)菌劑耐藥的細(xì)菌菌株的生長(zhǎng)的方法，其特征在于如上所述以降低對(duì)所述類抗細(xì)菌劑耐藥的菌株的選擇壓力為目的而利用前述釀酒酵母的菌株處理所述植物，或者其特征在于用所述抗細(xì)菌對(duì)植物的處理與如上所述用前述菌株的釀酒酵母對(duì)植物的處理交替使用或者聯(lián)合使用。
然而，根據(jù)一具體實(shí)施例，本發(fā)明的控制植物病害組合物中不含任何對(duì)釀酒酵母有毒的殺真菌劑、抗病毒和/或抗菌物質(zhì)。根據(jù)一具體實(shí)施方式
，在利用前述菌株的釀酒酵母進(jìn)行處理之前，除了在充分的等待時(shí)間內(nèi)進(jìn)行觀察以外，不采用借助于在對(duì)釀酒酵母有毒劑量下的任何殺真菌、抗病毒和/或抗細(xì)菌農(nóng)用化學(xué)物質(zhì)的處理。
實(shí)施例以下實(shí)施例是用來說明本發(fā)明而不是限制本發(fā)明。實(shí)施例1按以下方法對(duì)本發(fā)明針對(duì)收獲后真菌病害的效力進(jìn)行測(cè)試。在每個(gè)葡萄柚上作出三處損傷。將控制植物病害組合物應(yīng)用于各損傷處，讓其變干，然后接種包含病原體的組合物。所使用的病原體為指狀青霉，濃度為5X IO4孢子/毫升。在20°C下進(jìn)行4或5天保溫培養(yǎng)后，測(cè)量病損的平均直徑。使用以下4種含有各種濃度微生物(將微生物培養(yǎng)物在無菌蒸餾水中進(jìn)行系列稀釋而獲得)的控制植物病害組合物A:包含于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心(CNCM)保藏的保藏號(hào) 1-3936菌株的組合物。B:包含于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心((CNCM))保藏的保藏號(hào) 1-3937菌株的組合物。C:包含于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心(CNCM)保藏的保藏號(hào) 1-3938菌株的組合物。D 包含于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心(CNCM)保藏的保藏號(hào) 1-3939菌株的組合物。酵母菌的菌株來自于法國(guó)Lesaffre hternational。病原體是從腐爛的葡萄柚中分離獲得；于4°C下在葡萄糖-馬鈴薯瓊脂糖斜面上儲(chǔ)存；于25°C在葡萄糖-馬鈴薯瓊脂糖斜面中培養(yǎng)；除去培養(yǎng)2-3周后形成孢子的邊緣的孢子；制成在無菌蒸餾水中的懸浮液，用血球計(jì)數(shù)器調(diào)整孢子濃度。每次測(cè)試平均使用10個(gè)以上的葡萄柚。測(cè)定不同的預(yù)防性處理相對(duì)于未處理對(duì)照的效力，并且將結(jié)果示于以下的表1。在第4天測(cè)量病損的直徑，除了在第5天獲得的標(biāo)出星號(hào)(*)的結(jié)果外。表1-預(yù)防指狀青霉對(duì)葡萄柚的感染
權(quán)利要求
1.一種釀酒酵母菌株，其特征在于，其選自于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心(CNCM)保藏的保藏號(hào)1-3936的菌株、于2008年3月4日在CNCM保藏的保藏號(hào)1-3937 的菌株、于2008年3月4日在CNCM保藏的保藏號(hào)1-3938的菌株、和于2008年3月4日在 CNCM保藏的保藏號(hào)1-3939的菌株。
2.一種控制植物病害的組合物，其包含選自于2008年3月4日在CNCM保藏的保藏號(hào) 1-3936的菌株、于2008年3月4日在CNCM保藏的保藏號(hào)1-3937的菌株、于2008年3月4 日在CNCM保藏的保藏號(hào)1-3938的菌株、和于2008年3月4日在CNCM保藏的保藏號(hào)1-3939 的菌株的釀酒酵母、及其混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的控制植物病害的組合物，還包括一種以上的制劑和/或至少一種附加的活性佐劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的控制植物病害的組合物，其是為固體或液體干制劑的濃縮控制植物病害的組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的控制植物病害的組合物，其是為干的或液體的，優(yōu)選液體的即用型控制植物病害的組合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的控制植物病害的組合物，其包含在IO4至IO11Cfu/毫升、優(yōu)選在IO5至IOltlCfu/毫升之間、更優(yōu)選在5X IO5至5X IO9Cfu/毫升之間量的釀酒酵母。
7.一種治療或預(yù)防植物抗由病原體所引起病害的方法，包括使所述植物與選自于 2008年3月4日在CNCM保藏的保藏號(hào)1-3936的菌株、于2008年3月4日在CNCM保藏的保藏號(hào)1-3937的菌株、于2008年3月4日在CNCM保藏的保藏號(hào)1-3938的菌株、和于2008 年3月4日在CNCM保藏的保藏號(hào)1-3939的菌株的釀酒酵母、及其混合物接觸。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述病原體選自真菌、病毒、細(xì)菌、支原體、螺原體、類病毒及其組合，優(yōu)選自真菌。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述病原體選自下列屬的微生物鏈格孢屬，特別是茄鏈格孢和互隔交鏈格孢、殼二孢屬，特別是蠶豆殼二孢菌或Ascochyta pinodella, 曲霉屬，特別是黑曲霉和煙曲霉、葡萄孢屬，特別是灰葡萄孢、盤梗霉屬，特別是萵苣盤梗霉、尾孢菌屬，特別是甜菜尾孢病菌、枝孢屬，特別是洋蔥枝孢菌、炭疽菌屬，特別是禾生炭疽菌、擬隱孢殼屬，特別是腐皮擬隱孢殼、白粉菌屬，特別是小麥白粉菌或葡萄白粉菌、鐮刀菌屬，特別是尖孢鐮刀菌和粉紅鐮刀菌、盤長(zhǎng)孢屬，特別是果生盤長(zhǎng)孢、球座菌屬，特別是葡萄球座菌、長(zhǎng)蠕孢屬，特別是小麥長(zhǎng)蠕孢、盤二孢屬，特別是薔薇盤二孢、叢梗孢屬，特別是果仁叢梗孢、球腔菌屬，特別是蕓苔生球腔菌、青霉菌屬，特別是擴(kuò)展青霉或指狀青霉、霜霉屬，特別是寄生霜霉、Pezicula spp.，特別是Pezicula malicorticis、多胞銹菌屬，特別是 Phragmidium rubi-idaei、疫霉菌屬，特別是致病疫霉、單軸霉屬，特別是葡萄葡萄單軸霉、 叉絲單囊殼屬，特別是白叉絲單囊殼、假尾孢屬，包括蕓苔小尾孢菌、假霜霉屬，特別是古巴假霜霉、假盤菌屬，特別是苜蓿假盤菌、柄銹菌屬，特別是禾桿銹菌、腐霉菌屬、柱隔孢屬，特別是甜菜柱隔孢、絲核菌屬，特別是立枯絲核菌、根霉屬，特別是黑根霉和葡枝根霉、喙孢屬，特別是Rynchosporium secalis、核盤菌屬，特別是油菜核盤菌、殼針孢屬，特別是穎枯殼針孢或小麥殼針孢、單囊絲殼屬，特別是斑點(diǎn)單殼孢、黑星孢屬，特別是環(huán)黑星孢、外囊菌屬，特別是李外囊菌、單端孢屬，特別是粉紅單端胞霉、鉤絲殼屬，特別是葡萄白粉菌、黑粉菌屬，特別是小麥散黑粉菌、黑星菌屬，特別是蘋果黑星病菌、及其組合，優(yōu)選地所述病原體選自指狀青霉、擴(kuò)展青霉、灰葡萄孢及其組合。
10.根據(jù)權(quán)利要求7至9中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述植物選自禾本科植物、雙子葉植物、一年生植物、一年二次的植物和多年生植物、蔬菜幼苗或收獲的蔬菜、果實(shí)植物或果樹或者收獲的果實(shí)、花卉植物或花卉樹或者收獲的花、谷類、含油植物、產(chǎn)蛋白植物、木本植物、觀賞植物，特別是選自馬鈴薯、甜菜根、甘蔗、煙草、藤蔓植物、小麥、油菜籽、大麥、稻、玉米、高粱、粟、大豆、豆類、番茄、黃瓜、萵苣、草莓植物、蘋果樹、梨樹、柑橘、香蕉、菠蘿、桃樹、 杏樹、櫻桃樹、胡桃樹和榛子樹的幼苗或產(chǎn)物。
11.根據(jù)權(quán)利要求7至10中任一項(xiàng)所述的方法，包括將根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的即用型控制植物病害的組合物施用于所述植物的全身或部分；或者將根據(jù)權(quán)利要求4所述的濃縮的控制植物病害的組合物與制劑混合，從而形成最終的控制植物病害的組合物，接著將此最終的控制植物病害的組合物施用于所述植物的全身或部分。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中將所述控制植物病害的組合物施用于所述植物的全身或部分，由優(yōu)選通過噴灑而施用于葉、莖、花、果實(shí)、樹干和/或根或者其一部分上組成，優(yōu)選地通過地面噴灑、機(jī)械摻和、通過與肥料、強(qiáng)化劑混合或者作為預(yù)混劑而施用于根。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種釀酒酵母菌株，其特征在于其選自于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心(CNCM)保藏的保藏號(hào)I-3936的菌株、于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心保藏的保藏號(hào)I-3938、和于2008年3月4日在法國(guó)國(guó)家微生物保藏中心保藏的保藏號(hào)I-3939的菌株。本發(fā)明還涉及一種控制植物病害的組合物、以及利用所述菌株治療或保護(hù)植物抗由病原體所引起病害的方法。
文檔編號(hào)C12N1/18GK102333857SQ201080005774
公開日2012年1月25日 申請(qǐng)日期2010年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月27日
發(fā)明者帕斯卡·范德克爾科夫, 菲利普·皮若, 迪迪爾·克拉維扎 申請(qǐng)人:樂斯福公司