專利名稱：減輕皺紋形成的口服組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有選自由D-谷氨酸和其衍生物和/或鹽所組成組中的I種或2種以上的化合物的用于減輕皺紋形成的ロ服組合物和用于預(yù)防皺紋形成的ロ服組合物，以及包括投與所述化合物的步驟的減輕皺紋形成的方法和預(yù)防皺紋形成的方法。
背景技術(shù)：
已知，皺紋的形成是通過伴隨著通常的老化及光老化引起的皮膚真皮的功能降低而發(fā)展，并通過皮膚粗糙這樣的皮膚表皮的功能損害、紫外線照射等氧化應(yīng)激(Oxidativestress)而加劇的。以往，認(rèn)為促進(jìn)膠原產(chǎn)生與抑制和/或改善皺紋形成相關(guān)。實(shí)際上，已知作為維生素A的衍生物的類維生素A類在應(yīng)用于引起了通常的老化及光老化的臉 部及上臂部的皮膚時，具有藥效(非專利文獻(xiàn)I和2)。然而，類維生素A類具有光敏化(photosensitizing)、作為類維生素A反應(yīng)而周知的炎癥性反應(yīng)這樣的副作用(非專利文獻(xiàn)3)。另外，類維生素A類通常光反應(yīng)性強(qiáng)，為了穩(wěn)定保存，需要避光，在通常的生活條件下，在皮膚投與后，易被透過到體內(nèi)的光分解?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)I:Kligman, A. M.等，J. Am. Acad. Dermatol. , 15:836 (1986)非專利文獻(xiàn)2:Kligman, A. Μ·等，J. Am. Acad. Dermatol.，29:25 (1993)非專利文獻(xiàn)3 :Mukher jee, S.等，Clin. Interv. Aging, 1:327 (2006)

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題因此，需要開發(fā)ー種具有抑制和/或改善皺紋形成作用的新穎組合物，其沒有類維生素A類那樣的副作用、且光穩(wěn)定性強(qiáng)。用于解決問題的方案本發(fā)明提供ー種用于減輕皺紋形成的ロ服組合物，其含有選自由D-谷氨酸和其衍生物和/或鹽所組成組中的I種或2種以上的化合物。本發(fā)明提供ー種用于預(yù)防皺紋形成的ロ服組合物，其含有選自由D-谷氨酸和其衍生物和/或鹽所組成組中的I種或2種以上的化合物。本發(fā)明提供ー種藥品組合物，其含有本發(fā)明的用于減輕皺紋形成的ロ服組合物或用于預(yù)防皺紋形成的ロ服組合物。本發(fā)明提供ー種食品組合物，其含有本發(fā)明的用于減輕皺紋形成的ロ服組合物或用于預(yù)防皺紋形成的ロ服組合物。本發(fā)明提供ー種減輕皺紋形成的方法，其包括投與用于減輕皺紋形成的ロ服組合物的步驟，所述用于減輕皺紋形成的ロ服組合物含有選自由D-谷氨酸和其衍生物和/或鹽所組成組中的I種或2種以上的化合物。
本發(fā)明提供ー種預(yù)防皺紋形成的方法，其包括投與用于預(yù)防皺紋形成的組合物的步驟，所述用于預(yù)防皺紋形成的組合物含有選自由D-谷氨酸和其衍生物和/或鹽所組成組中的I種或2種以上的化合物。本發(fā)明的減輕皺紋形成的方法和/或預(yù)防皺紋形成的方法中，所述用于減輕皺紋形成的ロ服組合物和/或用于預(yù)防皺紋形成的組合物可以為藥品組合物。本發(fā)明的減輕皺紋形成的方法和/或預(yù)防皺紋形成的方法中，所述用于減輕皺紋形成的ロ服組合物和/或用于預(yù)防皺紋形成的組合物可以為食品組合物。本說明書中，“皺紋”是皮膚問題的ー種，是指皮表的線狀陷落所產(chǎn)生的紋路集中于特定的區(qū)域，并且具有大小和排列的不規(guī)則性而存在的狀態(tài)。本說明書中，“皮膚屏障功能”是使皮膚保持正常狀態(tài)的功能，是指用于防止異物侵入體內(nèi)、或防止水分從體內(nèi)喪失的功能。本說明書中，D-谷氨酸的“鹽”是指在不損害D-谷氨酸的減輕皺紋形成的效果的條件下，包括金屬鹽、胺鹽等在內(nèi)的任意的鹽。所述金屬鹽可以包括堿金屬鹽、堿土金屬鹽等。所述胺鹽可以包括三こ胺鹽、芐胺鹽等。本說明書中，D-谷氨酸的“衍生物”是指在不損害D-谷氨酸的減輕皺紋形成的效果的條件下，D-谷氨酸分子在氨基、或羧基、或側(cè)鏈上與任意的原子團(tuán)共價結(jié)合而成的化合物。所述任意原子團(tuán)包括像N-苯基こ?；?，4’-ニ甲氧基三苯甲基(DMT)等這樣的保護(hù)基，像蛋白質(zhì)、肽、糖、脂質(zhì)、核酸等這樣的生物高分子，像聚苯こ烯、聚こ烯、聚こ烯基化合物、聚酯等這樣的合成高分子，像酯基等這樣的官能團(tuán)，但不限定于這些。所述酯基可以包括例如甲酷、こ酯等脂肪族酷，或芳香族酷。氨基酸中存在作為光學(xué)異構(gòu)體的L-體和D-體，天然的蛋白質(zhì)為L-氨基酸以肽鍵鍵合而成的蛋白質(zhì)，除了細(xì)菌的細(xì)胞壁等例外情況外僅L-氨基酸被利用，因此認(rèn)為以人類為首的哺乳類中僅存在L-氨基酸并且僅利用L-氨基酸。按照(木野內(nèi)忠稔等，蛋白質(zhì)核酸酶，50:453-460 (2005)，Lehninger 的新生物化學(xué)[上]第 2 版 ppl32_147 (1993)廣川書店，哈珀 生物化學(xué)原文書22版pp21-30(1991)丸善)。一直以來，學(xué)術(shù)上也好產(chǎn)業(yè)上也好，作為氨基酸主要僅使用L-氨基酸。作為例外地使用D-氨基酸的例子，有用作使細(xì)菌中產(chǎn)生抗生物質(zhì)的原料的情況；以及為了節(jié)省從化學(xué)合成氨基酸時等量獲得的L-氨基酸與D-氨基酸混合物中僅分離提取L-氨基酸的成本，而直接以DL-氨基酸混合物的形式使用D-氨基酸的食品添加物的例子。然而，從來沒有在產(chǎn)業(yè)中僅使用D-氨基酸作為具有生理活性的物質(zhì)的實(shí)例。D-絲氨酸、D-天冬氨酸由于D-體的比例高，因此研究進(jìn)展較快。D-絲氨酸局部存在于大腦、海馬中，已清楚其為腦內(nèi)的NMDA受體的調(diào)控因子。確認(rèn)到D-天冬氨酸局部存在于精巢、松果體中，顯示參與控制激素的分泌(日本特開2005-3558號公報(bào))。但是D-谷氨酸的減輕和/或抑制皺紋形成的效果尚不明確。以下實(shí)施例所示的D-谷氨酸的用于減輕皺紋形成的效果至今未曾被知曉。因此，含有本發(fā)明的D-谷氨酸的本發(fā)明的組合物為新穎發(fā)明。近年來，有報(bào)道顯示，使ddY小鼠兩周內(nèi)自由攝入IOmM的D-氨基酸水溶液，然后測定各器官中的D-氨基酸濃度，結(jié)果松果體中，D-氨基酸濃度相對于I個作為分泌器官的松果體為3-lOOOpmol ;腦組織中，D氨基酸濃度相對于I克濕重量為、2-500nmol (Morikawa, A.等，Amino Acids, 32:13-20 (2007))?；诖?，算出以下說明的本發(fā)明的組合物中所含有的D-谷氨酸的一日攝入量的下限。如以下的實(shí)施例所示的那樣，本發(fā)明的D-谷氨酸以IOmM的水溶液濃度的ロ服組合物對小鼠具有減輕皺紋形成的效果。因此，本發(fā)明的用于減輕皺紋形成的ロ服組合物和食品組合物中所含的D-谷氨酸的量只要滿足該濃度的D-谷氨酸可送達(dá)至生物體皮膚組織的成纖維細(xì)胞的條件，則可以為任意含量。本發(fā)明的組合物為ロ服劑時，D-谷氨酸的含量為O. 0000001重量％ 100重量％的范圍即可。本發(fā)明的組合物為ロ服劑時，D-谷氨酸的含量優(yōu)選為O. 000001重量％ 80重量％，最優(yōu)選為O. 00001重量％ 60重量％。另外，本發(fā)明的組合物中所含的D-谷氨酸的一日攝入量的下限只要每Ikg體重為O. Olng即可，優(yōu)選為O. Ing,更優(yōu)選為lng。本發(fā)明的組合物除了含有D-谷氨酸、D-谷氨酸的鹽和/或能夠在生物體內(nèi)通過藥物代謝酶等釋放D-谷氨酸的衍生物之外，在不損害D-谷氨酸的減輕皺紋形成的效果的條件下，還可含有I種或2種以上藥學(xué)上允許的添加物。所述添加物可以包括稀釋劑及膨脹 劑、粘合劑及粘接劑、潤滑劑、助流劑、增塑劑、崩解劑、載體溶劑、緩沖劑、著色材料、香料、甜味劑、防腐劑及穩(wěn)定化劑、吸附劑、本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的其他藥物添加剤，但不限于這些。本發(fā)明的食品組合物除了含有D-谷氨酸、D-谷氨酸的鹽和/或能夠在生物體內(nèi)通過藥物代謝酶等釋放D-谷氨酸的衍生物之外，在不損害D-谷氨酸的減輕皺紋形成的效果的條件下，還可以含有調(diào)料、著色材料、保存材料等作為食品所允許的成分。本發(fā)明的食品組合物只要為例如糖果、餅干、味噌、法式色拉調(diào)味汁、蛋黃醬、法式面包、醬油、酸奶、撒在飯上的粉狀食品、調(diào)料·納豆的佐料汁、納豆、醪黑醋等以往食品組合物中使用的物質(zhì)則可以為任意，但不限定于所述例示。


圖I為顯示D-谷氨酸對實(shí)施了膠帶剝離的小鼠的皮膚肥厚的效果的坐標(biāo)圖。圖2為顯示D-谷氨酸對實(shí)施了膠帶剝離的小鼠的皺紋形成的效果的坐標(biāo)圖。圖3為顯示D-谷氨酸對紫外線照射小鼠的屏障功能的效果的坐標(biāo)圖。圖4為顯示D-谷氨酸對紫外線照射小鼠的皺紋形成的效果的坐標(biāo)圖。
具體實(shí)施例方式以下說明的本發(fā)明的實(shí)施例僅以例示為目的，不限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的保護(hù)范圍僅受權(quán)利要求書的記載范圍所限定。本說明書中言及的全部文獻(xiàn)以引用其整體的方式引入本說明書中。以下的實(shí)施例中說明的實(shí)驗(yàn)依據(jù)美國國立衛(wèi)生研究所(National Institutes ofHealth(NIH))的準(zhǔn)則并得到資生堂研究中心的倫理委員會認(rèn)可后實(shí)施。實(shí)施例I實(shí)驗(yàn)動物使用5周齡的雄性HR-I無毛小鼠(星野試驗(yàn)動物飼育所股份有限公司)。D-谷氨酸的投與
通過給水瓶投與添加有IOmM的D-谷氨酸的飲用水4周。作為陰性對照，使用了未添加D-谷氨酸的飲用水。皮膚屏障的破壞為了形成皺紋，按照松永等的方法(Matsunaga, Y.等，Br. J. Dermatol.,156:884(2007))從開始投與D-谷氨酸的5天后每周進(jìn)行3次膠帶剝離。簡而言之，將按照無毛小鼠(HR-1系；星野動物，東京)背部長度剪切的24_寬的玻璃紙膠帶(透明膠帶(注冊商標(biāo))，米其邦(NICHIBAN)股份有限公司)均勻貼附于整個背部，然后剝離。邊使用水分喪失測定器(Meeco公司，美國賓夕法尼亞州，Warrington)測定屏障破壞的程度邊調(diào)節(jié)該膠帶的貼附/剝離循環(huán)的次數(shù)，以便角質(zhì)層水分蒸散量達(dá)到約4 8mg/cm2/h。例如，對未處理的無毛小鼠實(shí)施所述貼附/剝離循環(huán)操作時，在初次處理中重復(fù)4次，在第2、3次處理中重復(fù)5 6次，在第2周及以后的處理中重復(fù)6 8次，從而使角質(zhì)層水分蒸散量上
升至約4 8mg/cm2/h。若持續(xù)地每周3次進(jìn)行所述貼附/剝離循環(huán)操作，則大約在第3周左右，無毛小鼠背部開始出現(xiàn)與正中線垂直的皺紋。肥厚的皮膚的測定方法在開始投與D-谷氨酸4周后，使用厚度儀測定皮膚厚度。由于皮膚厚度的測定值通過用厚度儀夾持皮膚而測定，因此作為“皮膚厚度X 2”來表示。皺紋形成的評價方法開始投與D-谷氨酸4周后，拍攝小鼠背部的照片，用Bissett等的方法(Bissett, D. L.等，Photochemistry and Photobiology, 46:367 (1987))的改進(jìn)法按照下述表I所示的評價標(biāo)準(zhǔn)評價皺紋的程度。皺紋的評價工作由4名測定者分別進(jìn)行，之后商議，決定有關(guān)皺紋生成程度的評分(以下，簡稱為“評分”。)。[表 I]
評分判斷標(biāo)準(zhǔn)
0確認(rèn)不到皺紋
1較評分2淺、短、或者數(shù)量少 I 確認(rèn)到淺的皺紋
較評分2深、或長。較評分4淺、短、或數(shù)量少 ~ 整個表面確認(rèn)到淺的皺紋 ~ 較評分4深、或長。較評分6淺、或短 ~6 確認(rèn)到深且長的皺紋
~ 較評分6深且長的皺紋增多。較評分8淺、或短 I 整個表面確認(rèn)到深且長的皺紋
皮膚厚度的測定結(jié)果圖I示出了研究D-谷氨酸對由膠帶剝離所導(dǎo)致的皮膚肥厚的效果的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。各實(shí)驗(yàn)條件的誤差柱表示在同一條件下反復(fù)操作6次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。另夕卜，星號(***)表示在Student的獨(dú)立t檢驗(yàn)(unpaired t-test)中p不足O. 1%。皮膚厚度的平均值在陰性對照組中為1.2，在D-谷氨酸投與組中為1.05。由以上的結(jié)果顯示，D-谷氨酸能夠在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著地減輕由膠帶剝離所導(dǎo)致的皮膚肥厚。皺紋形成的評價結(jié)果圖2示出了研究D-谷氨酸對由膠帶剝離所導(dǎo)致的皺紋形成的效果的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。各實(shí)驗(yàn)條件的誤差柱表示在同一條件下重復(fù)操作6次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。另夕卜，星號(**)表示在Mann-Whitney U-檢驗(yàn)中p不足1%。皺紋評分在對照組中為3. 5,在D-谷氨酸投與組中為1.5。由以上的結(jié)果顯示，D-谷氨酸能夠在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著地減輕由膠帶剝離所導(dǎo)致的皺紋形成。
實(shí)施例2使用無毛小鼠的抑制由紫外線損傷所導(dǎo)致的皺紋形成的試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動物使用6周齡的Skh-I無毛小鼠(雄性)。D-谷氨酸的投與通過給水瓶投與添加有IOmM的D-谷氨酸的飲用水4周。作為陰性對照，使用了未添加D-谷氨酸的飲用水。紫外線照射紫外線照射基于將S chwartz等的方法(Haratake, A.等，J. Invest.Dermatol. 108:769(1997))進(jìn)行部分變更、反復(fù)照射UV-B的方法(Naganuma, M.等，J. Dermatol. Sci. 25:29 (2001)，Schwartz, E. J. , Invest. Dermatol. 91:158 (1988))來照射紫外線。即，每周3次對背部照射UV-B (光源東芝電器制東芝FL-20SE熒光燈)4周?？傉丈淞繛?1.4J/cm2。紫外線量使用通過 UVRADI0METER(UVR-305/36 ( II )，T0PC0N)而測定的值。表皮水分喪失度的測定開始投與D-谷氨酸4周后，依照常規(guī)方法測定表皮水分喪失度。表皮水分喪失度的測定結(jié)果圖3示出了研究D-谷氨酸對皮膚屏障功能的效果的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。各實(shí)驗(yàn)條件的誤差柱表示在同一條件下重復(fù)6次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。另外，符號(+)表示在Student的獨(dú)立t檢驗(yàn)(unpaired t-test)中p不足10%。表皮水分喪失度在對照組中為16，在D-谷氨酸投與組中為13。皺紋形成的評價方法皺紋形成以與實(shí)施例I同樣的方法進(jìn)行評價。皺紋形成的評價結(jié)果圖4示出了研究D-谷氨酸對由紫外線照射所導(dǎo)致的皺紋形成的效果的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。各實(shí)驗(yàn)條件的誤差柱表示在同一條件下重復(fù)操作6次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。另夕卜，星號(**)表示在Mann-Whitney U-檢驗(yàn)中p不足1%。皺紋評分在對照組中為4. 9,在D-谷氨酸投與組中為3. 3。由以上的結(jié)果顯示，D-谷氨酸能夠在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著地減輕由紫外線照射所導(dǎo)致的皺紋形成。以下示出基于本發(fā)明的含有D-谷氨酸的片劑、軟膠囊、顆粒、飲料、糖果、餅干、味噌、法式色拉調(diào)味汁、蛋黃醬、法式面包、醬油、酸奶、撒在飯上的粉狀食品、調(diào)料·納豆的佐料汁、納豆及醪黑醋的配合例。這些配合例以例示為目的而被列舉，并不意圖限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。配合例I (片劑) (組合物)配合量(mg/ 片中)
D-谷氨酸360.5 乳糖102.4
羧甲基纖維素鈣29.9羥丙基纖維素6 8
硬脂酸鎂5.2
結(jié)晶纖維素10 2
515.0配合例2 (片劑) (組合物)配合量(mg/1片中)
蔗糖酯70結(jié)晶纖維素74
甲基纖維素36
甘油25
D-谷氨酸鈉475N-乙酰氨基葡萄糖200
透明質(zhì)酸150
維生素E30
維生素B620
維生素B210α-疏辛酸20 輔酶QIO40 神經(jīng)酰胺(魔芋提取物)50 L-脯氨酸300
I·配合例3 (軟膠囊)
(組合物)配合量(mg/Ι膠嚢中)
食用大豆由530
杜仲提取物50
人參提取物50
D-谷氨酸鈉100
蜂王漿50
瑪咖30
GABA30
蜂蠟60
明肢375
甘油]20
甘油脂肪酸酯105
1500 配合例4 (軟膠囊)
權(quán)利要求
1.ー種用于減輕皺紋形成的ロ服組合物，其特征在于，其含有選自由D-谷氨酸和其衍生物和/或鹽所組成組中的I種或2種以上的化合物。
2.ー種用于預(yù)防皺紋形成的ロ服組合物，其特征在于，其含有選自由D-谷氨酸和其衍生物和/或鹽所組成組中的I種或2種以上的化合物。
3.ー種藥品組合物，其特征在于，其含有權(quán)利要求I或2的ロ服組合物。
4.ー種食品組合物，其特征在于，其含有權(quán)利要求I或2的ロ服組合物。
全文摘要
本發(fā)明開發(fā)一種沒有類維生素A類那樣的副作用、且光穩(wěn)定性強(qiáng)的組合物，其為具有抑制和/或改善皺紋形成作用的新穎組合物。本發(fā)明提供一種用于減輕皺紋形成的口服組合物，其含有選自由D-谷氨酸和其衍生物和/或鹽所組成組中的1種或2種以上的化合物。本發(fā)明提供一種含有所述化合物的用于預(yù)防皺紋形成的口服組合物。本發(fā)明提供含有本發(fā)明的用于減輕皺紋形成的口服組合物或用于預(yù)防皺紋形成的口服組合物的藥品組合物和食品組合物。
文檔編號A23L1/48GK102686223SQ20108004306
公開日2012年9月19日 申請日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月30日
發(fā)明者東條洋介, 橫尾美星, 牟田惠子, 蘆田豐 申請人:株式會社資生堂