專(zhuān)利名稱(chēng)：副干酪乳桿菌副干酪亞種l1及用其制備甘薯酸漿發(fā)酵劑的方法和在生產(chǎn)甘薯酸漿中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種副干酪乳桿菌副干酪亞種Ll及用其制備甘薯酸漿發(fā)酵劑的方法和在生產(chǎn)甘薯酸漿中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
酸漿法生產(chǎn)薯類(lèi)淀粉的技術(shù)廣泛應(yīng)用于我國(guó)的河北盧龍、四川三臺(tái)、山東招遠(yuǎn)及海陽(yáng)、河南社旗及禹州、安徽臨泉等地，具有四、五百年的悠久歷史。該方法生產(chǎn)出的淀粉加工成粉絲、粉條具有其特有的韌性和亮度，在世界上被譽(yù)為“粉絲之冠”的龍口粉絲所用的淀粉就是采用酸漿法生產(chǎn)的。但是，由于酸漿法生產(chǎn)淀粉受到原料季節(jié)性的限制，所以目前多應(yīng)用于中、小型工廠或農(nóng)村傳統(tǒng)手工生產(chǎn)。近年來(lái)，“三粉”(即淀粉、粉條、粉絲)加工已成為廣大農(nóng)民脫貧致富奔小康的一條切實(shí)可行的途徑，并且酸漿法生產(chǎn)的粉絲、粉條等產(chǎn)品不僅受到國(guó)內(nèi)消費(fèi)者的歡迎，而且出口到了日本、韓國(guó)以及歐美等國(guó)家，增加了我國(guó)的外匯收入。酸漿法生產(chǎn)淀粉是我國(guó)勞動(dòng)人民的一項(xiàng)獨(dú)特的創(chuàng)造，一直流傳到今天。把甘薯淀粉乳放置一些時(shí)候，經(jīng)過(guò)自然發(fā)酵，形成一種具有微酸味的乳白色或黃白色液體，就制成了沉淀淀粉用的“酸漿”?！八釢{”在淀粉生產(chǎn)過(guò)程中主要起到促進(jìn)淀粉與蛋白質(zhì)等其他雜質(zhì)的分離，并凈化淀粉的作用。淀粉、粉絲、粉條生產(chǎn)的關(guān)鍵就是酸漿的質(zhì)量問(wèn)題，它決定了最終粉絲、粉條的質(zhì)量。但是，由于酸漿是自然發(fā)酵的產(chǎn)物，受原料、氣候變化等環(huán)境因素及操作方法的影響很大，例如，車(chē)間的溫度、空氣中的菌群種類(lèi)和數(shù)量、酸漿的PH值、加工用水的硬度和含金屬的種類(lèi)、不同工人操作時(shí)的人為誤差等等。因此，在加工過(guò)程中常常出現(xiàn)產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定，有時(shí)由于溫度或其他因素造成發(fā)酵過(guò)度，酸漿質(zhì)量變劣，出現(xiàn)“倒缸”現(xiàn)象， 即整批的甘薯淀粉不能沉淀，生產(chǎn)不出來(lái)，或者生產(chǎn)出來(lái)的淀粉發(fā)暗發(fā)酸；有時(shí)酸漿活力不足，使得淀粉不能與蛋白質(zhì)等其他雜質(zhì)及時(shí)分離。而且，不同批次的甘薯淀粉的質(zhì)量也往往不同。造成這些問(wèn)題的主要原因是由于酸漿是自然發(fā)酵的產(chǎn)物，沒(méi)有可用于酸漿生產(chǎn)的發(fā)酵劑，不能進(jìn)行人工接種發(fā)酵。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種副干酪乳桿菌副干酪亞種Ll及用其制備甘薯酸漿發(fā)酵劑的方法和在生產(chǎn)甘薯酸漿中的應(yīng)用，以充分利用副干酪乳桿菌副干酪亞種Ll 的對(duì)淀粉具有絮凝活性，提高酸漿質(zhì)量的穩(wěn)定性，縮短生產(chǎn)周期，可在室內(nèi)或發(fā)酵罐內(nèi)完成甘薯酸漿的發(fā)酵，使酸漿的生產(chǎn)不再受季節(jié)、環(huán)境的限制，為利用酸漿法常年化、規(guī)模化、連續(xù)化生產(chǎn)甘薯淀粉提供可靠的技術(shù)支持。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是
一種副干酪乳桿菌副干酪亞種Li，其菌種學(xué)名Lactobacillus paracasei subsp. paracasei Li，保藏編號(hào)CGMCC No. 4163。
用副干酪乳桿菌副干酪亞種Ll制備甘薯酸漿發(fā)酵劑的方法，其步驟如下
1、制備料液比為1:3 l:5g/ml的甘薯淀粉乳，調(diào)pH值為4.5 5. 5，沉淀蛋白質(zhì)，取上清液，離心取上清液進(jìn)行煮沸，再離心，留取上清液，分別按上清液體積的0. 3% 0. 5%和 0. 8% 1%加入乳糖、酵母粉，調(diào)pH值至6. 3 6. 7，此液體即為甘薯汁培養(yǎng)基，將甘薯汁培養(yǎng)基滅菌，待用；
2、將斜面保藏的副干酪乳桿菌副干酪亞種Li，保藏編號(hào)CGMCCNo. 4163，接種于改良 TJA液體培養(yǎng)基中，25°C 30°C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2d 3d，然后將此液體培養(yǎng)物按照接種量體積比8% 10%接種于已滅菌的甘薯汁培養(yǎng)基中，25°C 30°C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)2d 3d， 發(fā)酵液即為甘薯酸漿發(fā)酵劑。上述的用副干酪乳桿菌副干酪亞種Ll制備甘薯酸漿發(fā)酵劑的方法在生產(chǎn)甘薯酸漿中的應(yīng)用。上述的甘薯酸漿發(fā)酵劑制得的甘薯酸漿發(fā)酵劑在生產(chǎn)甘薯酸漿中的應(yīng)用，其步驟如下選取鮮甘薯、清洗、粉碎、過(guò)濾，按濾液體積5%的量加入甘薯酸漿發(fā)酵劑，除去蛋白質(zhì)、再加入濾液體積洲 3%的甘薯酸漿發(fā)酵劑，攪拌、發(fā)酵，直到發(fā)酵液中的料液達(dá)到青白色，有少量水沫，pH在4 5之間，此發(fā)酵液即為可用于甘薯淀粉生產(chǎn)的甘薯酸漿。微生物發(fā)酵劑是用于生產(chǎn)發(fā)酵制品的特定微生物培養(yǎng)物，微生物發(fā)酵劑在發(fā)酵制品生產(chǎn)中的應(yīng)用，改變了傳統(tǒng)發(fā)酵制品的生產(chǎn)模式，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)甘薯淀粉。直接使用微生物發(fā)酵劑，具有如下優(yōu)點(diǎn)發(fā)酵活力強(qiáng)，發(fā)酵時(shí)間短；保持微生物菌種的活性、比例； 節(jié)省原材料，降低成本，避免發(fā)酵失敗造成整個(gè)生產(chǎn)的失??；保證發(fā)酵產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。所以， 酸漿的人工接種發(fā)酵對(duì)酸漿法生產(chǎn)甘薯淀粉的工業(yè)化、規(guī)?；a(chǎn)具有重要意義。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)
1、副干酪乳桿菌副干酪亞種Ll是酸漿中對(duì)淀粉具有絮凝活性的主要菌株。2、本發(fā)明提供了利用分離到的副干酪乳桿菌副干酪亞種進(jìn)行人工接種發(fā)酵生產(chǎn)甘薯酸漿的方法，提高了酸漿質(zhì)量的穩(wěn)定性，避免了傳統(tǒng)酸漿因發(fā)酵過(guò)度造成的倒缸或活力不足造成的淀粉不能與蛋白質(zhì)等雜質(zhì)及時(shí)分離現(xiàn)象。3、縮短了生產(chǎn)周期。每年廠家第一次用的自然發(fā)酵的甘薯一般需要15d到20d左右的時(shí)間，利用本方法生產(chǎn)甘薯酸漿僅需3d 5d的時(shí)間，極大地縮短了生產(chǎn)周期。4、采用人工接種發(fā)酵，可以在室內(nèi)或發(fā)酵罐內(nèi)完成甘薯酸漿的發(fā)酵，使酸漿的生產(chǎn)不再受季節(jié)、環(huán)境的限制，為利用酸漿法常年化、規(guī)?；?、連續(xù)化生產(chǎn)甘薯淀粉提供了可靠的技術(shù)支持。


圖1是利用TJA培養(yǎng)基對(duì)乳酸菌進(jìn)行分離純化的副干酪乳桿菌副干酪亞種Ll菌落形態(tài)圖片；
圖2是副干酪乳桿菌副干酪亞種Ll的個(gè)體形態(tài)(X1000)圖片。副干酷乳桿菌副干酷亞種Li，菌種學(xué)名Lactobacillus paracasei subsp. paracasei Li,
保藏日期2010年9月13日
保藏機(jī)構(gòu)中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏中心登記入冊(cè)編號(hào)CGMCC No. 4163。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
所述的副干酪乳桿菌副干酪亞種Ll (菌種學(xué)名Lactobacillus paracasei subsp. paracasei Ll，保藏編號(hào)CGMCC No. 4163_)的獲得途徑(見(jiàn)《安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)》2009，37 (1) :9-10) 1試驗(yàn)材料甘薯酸漿
分離培養(yǎng)基改良MRS培養(yǎng)基滅菌后，加入3%滅過(guò)菌的CaCO3,混合； 發(fā)酵培養(yǎng)基新鮮甘薯洗凈后，按不同比例加水，在組織搗碎機(jī)內(nèi)打漿，雙層紗布過(guò)濾除渣，濾液中加入0. 3%酵母粉，作為發(fā)酵培養(yǎng)基，115°C，滅菌20min。1.2試驗(yàn)方法
1.2. 1乳酸菌的分離純化
以無(wú)菌生理鹽水進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)瑢⑾♂屢和坎加诜蛛x培養(yǎng)基平板上，30°C下培養(yǎng)48h， 挑選有碳酸鈣溶解圈的單個(gè)菌落，接入由MRS培養(yǎng)基做成的試管斜面。用同樣的方法將斜面上的菌體再進(jìn)行第二次平板劃線分離、純化，斜面菌種冰箱保存、待用。1.2.2菌株的篩選
在經(jīng)過(guò)上述兩次分離純化的斜面中，各加入2ml無(wú)菌水，制成菌體懸浮液，然后無(wú)菌接入由新鮮薯汁(加入0. 3%酵母粉)制成的發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C培養(yǎng)48h，然后取該發(fā)酵液 15ml，倒入到50ml甘薯淀粉乳中，測(cè)定沉淀3ml淀粉所需要的時(shí)間。根據(jù)沉淀時(shí)間選出分離效果最好的菌株，進(jìn)行初步鑒定。1.2.3篩選出來(lái)的菌種的初步鑒定 (1)菌落特征的觀察肉眼直接觀察。(2)個(gè)體形態(tài)的觀察光學(xué)顯微鏡革蘭氏染色觀察。⑶生理生化特征鑒定明膠水解反應(yīng)，過(guò)氧化氫反應(yīng)，H2S試驗(yàn)。1.2.4甘薯淀粉乳的制備
甘薯清洗一切成1立方厘米左右的小塊一以料液比1 :3在組織搗碎機(jī)內(nèi)粉碎:3min — 漿液過(guò)140目篩子一取濾液，即為甘薯淀粉乳。1.2.5發(fā)酵液沉淀淀粉能力的測(cè)定
取發(fā)酵液15ml，加入到裝有50ml甘薯淀粉乳的量筒中，計(jì)數(shù)沉淀3ml淀粉所需的時(shí)間。1. 2. 6發(fā)酵液中乳酸菌總數(shù)的測(cè)定
取發(fā)酵液1ml，用無(wú)菌生理鹽水做10倍梯度稀釋?zhuān)x擇3個(gè)合適的稀釋度，每個(gè)稀釋度重復(fù)2次，取0. Iml涂布于改良MRS平板上，計(jì)數(shù)。2 結(jié)果
2.1乳酸菌的分離、篩選
經(jīng)過(guò)兩次分離純化，從自然發(fā)酵的甘薯酸漿中分離出13株乳酸菌，將這些菌株接入到由鮮薯漿配制成的發(fā)酵培養(yǎng)基中，經(jīng)30°C、4他發(fā)酵培養(yǎng)后，測(cè)定pH值及沉淀3ml淀粉所需的時(shí)間，見(jiàn)表2-1。
表2-1分離出的乳酸菌菌株對(duì)淀粉的沉淀能力
權(quán)利要求
1.一種副干酪乳桿菌副干酪亞種Li，其菌種學(xué)名Lactobacillus paracasei subsp. paracasei Li，保藏編號(hào)CGMCC No. 4163。
2.用副干酪乳桿菌副干酪亞種Ll制備甘薯酸漿發(fā)酵劑的方法，其特征是步驟如下(1)、制備料液比為1:3 l:5g/ml的甘薯淀粉乳，調(diào)pH值為4.5 5. 5，沉淀蛋白質(zhì)， 取上清液，離心取上清液進(jìn)行煮沸，再離心，留取上清液，分別按上清液體積的0. 3% 0. 5% 和0. 8% 1%加入乳糖、酵母粉，調(diào)pH值至6. 3 6. 7，此液體即為甘薯汁培養(yǎng)基，將甘薯汁培養(yǎng)基滅菌，待用；(2)、將斜面保藏的副干酪乳桿菌副干酪亞種Li，保藏編號(hào)CGMCCNo. 4163，接種于改良TJA液體培養(yǎng)基中，25°C 30°C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2d 3d，然后將此液體培養(yǎng)物按照接種量體積比8% 10%接種于已滅菌的甘薯汁培養(yǎng)基中，25°C 30°C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)2d 3d，發(fā)酵液即為甘薯酸漿發(fā)酵劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用副干酪乳桿菌副干酪亞種Ll制備甘薯酸漿發(fā)酵劑的方法在生產(chǎn)甘薯酸漿中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用副干酪乳桿菌副干酪亞種Ll制備甘薯酸漿發(fā)酵劑的方法在生產(chǎn)甘薯酸漿中的應(yīng)用，其特征是步驟如下選取鮮甘薯、清洗、粉碎、過(guò)濾，按濾液體積 5%的量加入甘薯酸漿發(fā)酵劑，除去蛋白質(zhì)、再加入濾液體積m 3%的甘薯酸漿發(fā)酵劑，攪拌、發(fā)酵，直到發(fā)酵液中的料液達(dá)到青白色，有少量水沫，PH在4 5之間，此發(fā)酵液即為可用于甘薯淀粉生產(chǎn)的甘薯酸漿。
全文摘要
一種副干酪乳桿菌副干酪亞種L1及用其制備甘薯酸漿發(fā)酵劑的方法和應(yīng)用，菌種學(xué)名Lactobacillusparacaseisubsp.paracaseiL1，保藏編號(hào)CGMCCNo.4163。制備方法是制備甘薯淀粉乳，調(diào)pH值為4.5～5.5，沉淀蛋白質(zhì)，取上清液，離心、煮沸，再離心，留取上清液，加入乳糖、酵母粉，調(diào)pH值至6.3～6.7，得甘薯汁培養(yǎng)基，將甘薯汁培養(yǎng)基滅菌，待用；將斜面保藏的副干酪乳桿菌副干酪亞種L1接種于改良TJA液體培養(yǎng)基中，然后將此液體培養(yǎng)物接種于已滅菌的甘薯汁培養(yǎng)基中，發(fā)酵液即為甘薯酸漿發(fā)酵劑。優(yōu)點(diǎn)是副干酪乳桿菌副干酪亞種L1是酸漿中對(duì)淀粉具有絮凝活性的主要菌株，提高了酸漿質(zhì)量的穩(wěn)定性，縮短了生產(chǎn)周期，可以在室內(nèi)或發(fā)酵罐內(nèi)完成甘薯酸漿的發(fā)酵，使酸漿的生產(chǎn)不再受季節(jié)、環(huán)境的限制。
文檔編號(hào)C12N1/20GK102277313SQ20111003440
公開(kāi)日2011年12月14日 申請(qǐng)日期2011年2月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月1日
發(fā)明者張莉力, 李新華, 許云賀 申請(qǐng)人:遼寧醫(yī)學(xué)院