專利名稱：與黃瓜單性花控制基因m緊密連鎖的分子標(biāo)記的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域的分子標(biāo)記，具體是與黃瓜單性花控制基因M緊密 連鎖的分子標(biāo)記。
背景技術(shù)：
黃瓜(Cucumis sativus L.)是葫蘆科(Cucurbitaceae)甜瓜屬(cucumis) —年 蔓生的草本植物，由于其多樣的性型分化，在大量的生理學(xué)和遺傳學(xué)的基礎(chǔ)上，黃瓜已逐 漸成為研究植物性型分化的模式材料。常見(jiàn)的黃瓜品種是雌雄花獨(dú)立著生的異花同株型 (monoecious)；不過(guò)某些品種也會(huì)出現(xiàn)兩性花(hermaphrodite)。黃瓜單性花性狀研究始 于1921年，一般認(rèn)為單性花(不完全花，雌花或雄花)是黃瓜的野生性狀，其對(duì)兩性花(完 全花)性狀具有顯性作用。單性/兩性花性狀由M/m(monoecious)基因控制，其與黃瓜全 雌性控制基因F(female)共同作用，控制黃瓜的主要性型分化。由單性花(雌花)發(fā)育成的果實(shí)一般為長(zhǎng)條狀，瓜條長(zhǎng)寬比較大，符合大眾的食用 傳統(tǒng)；由兩性花發(fā)育成的果實(shí)為球形，因其不具有消費(fèi)習(xí)慣優(yōu)勢(shì)，故在長(zhǎng)期育種實(shí)踐中培育 的品種較少。但有文獻(xiàn)表明，兩性花黃瓜品種具有明顯高于單性花株的結(jié)實(shí)率；兩性花株的 始座果節(jié)位也明顯低于單性花株。這兩方面的因素決定了兩性花株的單株總產(chǎn)量要高于單 性花株。另外，也有報(bào)道稱兩性花株的生長(zhǎng)速度快于單性花株。更為重要的是，單基因位點(diǎn) 決定性型分化是葫蘆科甜瓜屬(還包括甜瓜)所特有的表型。該基因位點(diǎn)的克隆和作用方 式的闡明將豐富植物性型決定機(jī)制。不難預(yù)見(jiàn)，如果以該基因作為工具，改造其它植物，特 別是在植物界絕大部分比例的自花授粉植物，將可能產(chǎn)生極大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)價(jià)值。對(duì)黃瓜單性花性型決定M基因分子水平的研究主要開(kāi)始于2000年以后。有多 篇文獻(xiàn)報(bào)告試圖從基因的表達(dá)差異入手克隆該基因，但均沒(méi)有獲得滿意的結(jié)果。2008年， Liu等和Li等利用不同的植物分離群體分別對(duì)M基因進(jìn)行了分子標(biāo)記定位，前者用一個(gè) 來(lái)源近等基因系親本構(gòu)建的96株F2群體將M基因定位在一個(gè)2. 5cM的遺傳區(qū)間內(nèi)；后 者使用兩個(gè)栽培品種配置的約900株的F2群體將M基因定位在6. IcM的區(qū)間內(nèi)，并發(fā) 現(xiàn)一個(gè)在該群體內(nèi)與M基因共分離的標(biāo)記S_ME8SA7。詳細(xì)結(jié)果可以參看Liu，S. Q等在 ((Theoretical and AppliedGenetics))(理論應(yīng)用遺傳學(xué))2008 年第 117 期 927-933 頁(yè)發(fā) 表的題為《Genetic association ofETHYLENE-INSENSITIVE3-like sequence with the sex-determining M locus in cucumber (Cucumis sativus L.)〉〉(黃瓜性別決定 M 位點(diǎn) 與類乙烯響應(yīng)基因ETHYLENE-INSENSITIVE3序列的遺傳相關(guān)性)一文，以及Li，Z等在 ((Theoretical and Applied Genetics》(理論應(yīng)用遺傳學(xué))2008 年第 117 期 1253-1260 頁(yè) 發(fā)表的題為〈〈Development and fine mapping of threeco-dominant SCAR markers linked to the M/m gene in the cucumber plant (Cucumis sativusL.)》(三個(gè)與黃瓜 M/m 基因 連鎖的共顯性SCAR標(biāo)記的開(kāi)發(fā)及精細(xì)定位)一文。但上述標(biāo)記還存在分析群體相對(duì)較小， 連鎖距離相對(duì)較遠(yuǎn)等問(wèn)題，還不足以克隆M基因位點(diǎn)的候選基因。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供與黃瓜單性花控制基因M緊密連鎖 的分子標(biāo)記。本發(fā)明的3個(gè)分子標(biāo)記與M基因位點(diǎn)連鎖更加緊密，對(duì)關(guān)于單性花/兩性花 的黃瓜分子標(biāo)記輔助育種體系的建立更有幫助；本發(fā)明的分子標(biāo)記可以簡(jiǎn)便、快速、高通量 地應(yīng)用于黃瓜育種實(shí)踐。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明涉及的第一種與黃瓜單性花基因M緊密連鎖的分子標(biāo)記，由序列表中SEQ IDN0. 1所示的223個(gè)核苷酸和SEQ ID NO. 2所示的221個(gè)核苷酸組成；其中223個(gè)核苷酸 的片段與單性花基因M連鎖，221個(gè)核苷酸的片段與兩性花基因m連鎖。所述與黃瓜單性花基因M緊密連鎖的分子標(biāo)記，由SEQ ID NO. 7所示上游引物和 SEQ IDN0. 8所示的下游引物擴(kuò)增得到。本發(fā)明涉及的第二種與黃瓜單性花基因M緊密連鎖的分子標(biāo)記，由序列表中SEQ IDN0. 3所示的155個(gè)核苷酸和SEQ ID NO. 4所示的157個(gè)核苷酸組成；其中155個(gè)核苷酸 的片段與單性花基因M連鎖，157個(gè)核苷酸的片段與兩性花基因m連鎖。所述與黃瓜單性花基因M緊密連鎖的分子標(biāo)記，由SEQ ID NO. 9所示的上游引物 和SEQID NO. 10所示的下游引物擴(kuò)增得到。本發(fā)明涉及的第三種與黃瓜單性花基因M緊密連鎖的分子標(biāo)記，由序列表中SEQ ID N0. 5所示的110個(gè)核苷酸和SEQ ID N0. 6所示的108個(gè)核苷酸組成；其中110個(gè)核苷 酸的片段與單性花基因M連鎖，108個(gè)核苷酸的片段與兩性花基因m連鎖。所述與黃瓜單性花基因M緊密連鎖的分子標(biāo)記，由SEQ ID NO. 11所示的上游引物 和SEQID N0. 12所示的下游引物擴(kuò)增得到。本發(fā)明利用單性花自交系親本S52和兩性花自交系親本H34雜交獲得F1代，F(xiàn)1植 株再自交獲得較大的F2分離群體。隨后利用標(biāo)記S_ME8SA7篩選該擴(kuò)大的群體，在該標(biāo)記 和M/m基因位點(diǎn)間獲得兩個(gè)交換單株。同時(shí)利用該標(biāo)記篩選黃瓜基因組細(xì)菌人工染色體 (BAC)文庫(kù)，獲得含有該標(biāo)記片段的BAC克隆B78。該BAC克隆經(jīng)末端測(cè)序獲得兩末端序 列，并利用B78克隆T7末端序列信息篩選BAC文庫(kù)，獲得了第二個(gè)BAC克隆B07。對(duì)克隆 B07進(jìn)行鳥(niǎo)槍法測(cè)序并拼接后獲得該克隆全長(zhǎng)約80. 6kb序列，并利用該序列開(kāi)發(fā)出SSR標(biāo) 記R70。經(jīng)連鎖分析發(fā)現(xiàn)，R70也同S_ME8SA7 —樣位于M基因位點(diǎn)同側(cè)，但與M位點(diǎn)僅存 在1個(gè)交換單株。在此基礎(chǔ)上，利用BAC克隆B07的一側(cè)不與BAC克隆B78重疊的序列信 息篩選BAC文庫(kù)，獲得第三個(gè)獨(dú)立的BAC克隆B58。仿照B07相同的方法獲得了約100. 81Λ 的序列信息，并利用該序列開(kāi)發(fā)出SSR標(biāo)記R81和R84。經(jīng)連鎖分析，這兩個(gè)標(biāo)記相對(duì)于S_ ME8SA7均M基因位點(diǎn)的異側(cè)，R81與M基因位點(diǎn)存在3個(gè)交換單株，而R84與M基因位點(diǎn)存 在兩個(gè)交換單株?；谝陨辖Y(jié)果，在約2700單株分離群體中，本發(fā)明將M基因位點(diǎn)定位在 一個(gè)包含3個(gè)交換單株，約501Λ的黃瓜基因組區(qū)間內(nèi)；上述黃瓜染色體步移的詳細(xì)情況可 參看本發(fā)明說(shuō)明書(shū)圖5。本發(fā)明具有如下的有益效果本發(fā)明的3個(gè)分子標(biāo)記與M基因的連鎖程度在所有 已知的標(biāo)記中最為緊密，由它們構(gòu)建的局部遺傳圖譜密度極高，已將M基因限定在了一個(gè) < Icm的遺傳區(qū)間內(nèi)；由于所有3個(gè)標(biāo)記的開(kāi)發(fā)均與BAC克隆相關(guān)，由此而獲得的黃瓜M基 因局部物理圖譜將有利于M基因的最終克隆。
本發(fā)明中涉及的分子標(biāo)記S_ME8SA7已公開(kāi)，可參看Li，Z等在《Theoretical and AppliedGenetics))(理論應(yīng)用遺傳學(xué))2008年第117期1253 1260頁(yè)發(fā)表的題為 ((Development and finemapping of three co-dominant SCAR markers linked to the M/ m gene in the cucumber plant (Cucumis sativus L.)》(三個(gè)與黃瓜 M/m 基因連鎖的共 顯性SCAR標(biāo)記的開(kāi)發(fā)及精細(xì)定位)一文；本發(fā)明中涉及的黃瓜基因組BAC文庫(kù)的篩選操作已公開(kāi)，可參看Guan，Y等 在《Progressof Natural Science》(自然科學(xué)進(jìn)展)2OO8年第I8期143 14了頁(yè)發(fā) 表白勺題為〈〈Construction ofa BAC library from cucumber (Cucumis sativus L.) and identification of linkage group specificclones》(黃瓜 BAC 文庫(kù)的構(gòu)建及連鎖群特 異克隆的鑒定)一文；本發(fā)明中PCR產(chǎn)物克隆測(cè)序中所使用的E. coli DH5 α菌株已在文獻(xiàn)《李欣，等。電 轉(zhuǎn)化法制備高轉(zhuǎn)化效率的Ε. coli感受態(tài)細(xì)胞研究。食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2007，26 (6) 48 51》中公開(kāi)；本發(fā)明中涉及的Ε. coli DH5a菌株可通過(guò)公開(kāi)市售的商業(yè)渠道取得，購(gòu)于寶 生物工程(大連)有限公司，公司地址大連經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)東北二街19號(hào)。


圖1是SSR標(biāo)記R70對(duì)黃瓜親本材料S52，H34，F(xiàn)1世代單株及在F2群體隨機(jī)單株 的檢測(cè)結(jié)果；圖2是SSR標(biāo)記R81對(duì)黃瓜親本材料S52，H34，F(xiàn)1世代單株及在F2群體隨機(jī)單株 的檢測(cè)結(jié)果；圖3是SSR標(biāo)記R84對(duì)黃瓜親本材料S52，H34，F(xiàn)1世代單株及在F2群體隨機(jī)單株 的檢測(cè)結(jié)果；圖4是本發(fā)明中3個(gè)SSR標(biāo)記與M基因位點(diǎn)的連鎖情況；圖5是本發(fā)明中黃瓜染色體步移的詳細(xì)情況說(shuō)明。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用 于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如 Sambrook 等分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New York Co Id Spring Harbor Laboratory Press， 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。本發(fā)明中涉及的鑒定SSR標(biāo)記位點(diǎn)的ItepeatMasker軟件可通過(guò)網(wǎng)址http //www. repeatmasker. org/ 免費(fèi)下載；本發(fā)明中涉及的BAC克隆末端和鳥(niǎo)槍全測(cè)序由北京華大基因研究中心提供技術(shù) 服務(wù)，地址北京順義空港科技創(chuàng)業(yè)園B-6 ；本發(fā)明涉及的其它常規(guī)測(cè)序(包括PCR產(chǎn)物直接測(cè)序和克隆測(cè)序)均由上海生工 生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司提供技術(shù)支持，地址上海市松江區(qū)車(chē)墩工業(yè)區(qū)香閔路698號(hào)。實(shí)施例1步驟一，遺傳分離群體的構(gòu)建與交換單株的鑒定1. F2分離群體的構(gòu)建
歐洲溫室類型自交系H34 (父本)，兩性花品種，正常生長(zhǎng)條件下全株著生兩性花， 植株生長(zhǎng)速度較快，成熟果實(shí)成球型，深綠色；華南類型自交系S52 (母本)，單性花品種，植 株生長(zhǎng)早期(較低節(jié)位)著生雄花，隨后雄花雌花交替分布，生長(zhǎng)后期(較高節(jié)位)完全 著生雌花，植株生長(zhǎng)速度較慢，成熟果實(shí)長(zhǎng)條狀，白色；前述父本及母本材料均可通過(guò)公開(kāi) 渠道獲取。二者雜交獲得F1子代，單性花株(強(qiáng)雌株)，果實(shí)長(zhǎng)條狀，墨綠色。自交系S52、 HS^F1子代和單性花株/兩性花株判斷標(biāo)準(zhǔn)，可參看Li，Z等在《Theoretical and Applied Genetics))(理論應(yīng)用遺傳學(xué))2008年第117期1253 1260頁(yè)發(fā)表的題為((Development and fine mapping ofthree co-dominant SCAR markers linked to the M/m gene in the cucumber plant (Cucumissativus L.)))(三個(gè)與黃瓜M/m基因連鎖的共顯性SCAR標(biāo)記的 開(kāi)發(fā)及精細(xì)定位)一文。本實(shí)施例利用F1代自交產(chǎn)生F2代群體。共種植約2700株&單 株，鑒定單性花株/兩性花株，卡方分析法進(jìn)行驗(yàn)證。2.交換單株的篩選①黃瓜基因組DNA的提取用CTAB法提取親本及F2分離群體的葉片總DNA。方法為取上部幼嫩葉片在液 氮中快速研磨成粉末狀，放于1. 5ml的離心管中；加入預(yù)熱的500 μ 1 CTAB提取緩沖液， 60°C水浴0. Ih;加入等體積氯仿異戊醇，其中氯仿與異戊醇的體積比為M 1，混勻 后12000r/min 4°C離心IOmin ；將上清液轉(zhuǎn)入新的離心管，加等體積異丙醇，輕輕混勻，冰 浴0. 5h以上；12000r/min4°C離心IOmin ；倒去上清液，用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇沖洗沉淀 兩次，干燥后，加入TE緩沖液150 μ 1溶解后，加入10 μ g/ml的RNA酶去除RNA，37°C水浴 30min ；在0. 8%瓊脂糖凝膠電泳，以50ng/ μ 1的λ DNA為標(biāo)準(zhǔn)，估計(jì)所得DNA的濃度；后用 TE稀釋終濃度為30ng/ μ 1，存于_20°C備用。②標(biāo)記掃描F2分離群體利用與已有的與M基因連鎖的分子標(biāo)記(S_ME8SA7)和本發(fā)明中開(kāi)發(fā)的3個(gè)分子 標(biāo)記(R70，R81，R84)掃描上述獲得的F2分離群體，尋找標(biāo)記基因型(通過(guò)分析顯隱親本 獲得)與性狀表現(xiàn)型(單性花/兩性花)的差別單株，獲得標(biāo)記與M基因的交換單株。PCR 體系基因組 DNA 30ng，引物 0. 2ymol/L，200ymol/L dNTPs, 2mmol/L MgCl2, IXiTaq 緩沖 液，0. 5UTaqDNA聚合酶，總反應(yīng)體系為10 μ L，其中TaqDNA聚合酶購(gòu)于!Iomega公司。PCR 擴(kuò)增程序?yàn)?4°C 5min ；35cycles, 94°C 30s ；55°C 30s ；72°C 30s ；72°C 5min。上述 PCR 產(chǎn) 物檢測(cè)方法為標(biāo)記S_ME8SA7使用3%瓊脂糖凝膠電泳顯示結(jié)果；其余(R70，R81，R84)PCR 產(chǎn)物使用6%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離。聚丙烯酰胺凝膠電泳緩沖液為1XTBE，50W恒功率，電泳lh。電泳后進(jìn)行銀染。 銀染方法為將帶膠的玻璃板放入固定液中，在搖床上輕輕搖動(dòng)至指示劑顏色褪去，其中固 定液的組成為冰醋酸、無(wú)水乙醇、蒸餾水的體積比為1 10 100;用超純水洗Imin 3min ；將沖洗后的膠板放入染色液中搖動(dòng)半小時(shí)，其中染色液的組分為2g/L硝酸銀；將染 色后的膠板放入超純水中漂洗^后放入裝有顯影液的塑料盒中，輕輕搖動(dòng)至條帶清晰， 放入自來(lái)水中沖洗aiiin;室溫下干燥，干燥后拍照，其中顯影液是在IL蒸餾水中加入15g NaOH和:3ml甲醛混勻得到的。③多態(tài)性片段的回收、克隆和測(cè)序?qū)⒍鄳B(tài)性片段從聚丙烯酰胺凝膠上切下，置于離心管中，用槍頭搗碎，加入超純水沖洗三遍，然后加入IOul超純水95°C水浴15min，快速離心取上清液，用相對(duì)應(yīng)的SRAP引 物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系為目標(biāo)條帶DNA 5ul，引物0. 5umol/L, 200umol/L dNTPs, 1 XTaqBuffer, 1. 5mmol/L MgCl2, 2U Taq DNA聚合酶，總反應(yīng)體系為 50ul，其中 iTaqDNA聚合 酶購(gòu)于 Promega 公司。目標(biāo)條帶 PCR擴(kuò)增程序?yàn)?MV 5min ；35cycles, 94°C 30s ；50°C 30s ； 72°C Imin ；72°C 5min。將PCR產(chǎn)物中加入goldview熒光染料!3ul，4°C下放置IOmin讓染 料同DNA結(jié)合，然后加入上樣緩沖液2ul，混勻后通過(guò)1 %瓊脂糖凝膠電泳分離，在紫外燈下 切下目標(biāo)片段放入1. 5ml的離心管中，用DNA回收試劑盒回收，其中DNA回收試劑盒為上海 生工UNIQ-10柱式DNA膠回收試劑盒，產(chǎn)品號(hào)為Cat. No. SK1132。將回收產(chǎn)物與載體連接采 用上海申能博彩公司的PUCm-T vector系統(tǒng)。用電擊法將連有目標(biāo)片段的T-vector轉(zhuǎn)化 進(jìn)E. coliDH5 α感受態(tài)細(xì)胞，將菌液均勻涂布于LB固體培養(yǎng)基的平板上，涂好的平板倒置 于37°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜，挑菌、搖菌及PCR菌液檢測(cè)，進(jìn)行相關(guān)序列的測(cè)定。步驟二，染色體步移與標(biāo)記開(kāi)發(fā)1.黃瓜基因組BAC文庫(kù)的掃描本發(fā)明中前后共使用3個(gè)PCR標(biāo)記對(duì)黃瓜基因組BAC文庫(kù)進(jìn)行掃描篩選，分別為 利用先前報(bào)道的標(biāo)記S_ME8SA7掃描BAC文庫(kù)獲得含有該片段的克隆B78 ；利用B78克隆T7 端序列信息設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增片段掃描文庫(kù)獲得另一個(gè)含有該片段信息的克隆B07 ；利用B07 克隆T7端序列信息設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增片段掃描文庫(kù)獲得另一個(gè)含有該片段信息的克隆B58。 所有PCR反應(yīng)體系均為BAC文庫(kù)質(zhì)粒20ng，雙向引物各0. 2ymol/L，200ymol/L dNTPs, 2mmol/LMgCl2，lXTaq緩沖液，0. 5U TaqDNA聚合酶，總反應(yīng)體系為10μ 1，其中TaqDNA聚 合酶購(gòu)于 Promega 公司。擴(kuò)增程序?yàn)?4°C 3min ；40cycles, 94°C 20s, 65°C 30s, 72°C 30s ； 72°C 5min, 1. 5%瓊脂糖凝膠電泳顯示結(jié)果。2.遺傳分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)本發(fā)明對(duì)獲得的第二個(gè)BAC克隆B07進(jìn)行了全長(zhǎng)測(cè)序，根據(jù)序列信息，本發(fā)明尋找 到3個(gè)潛在的SSR位點(diǎn)，并設(shè)計(jì)引物在兩親本間進(jìn)行PCR擴(kuò)增并使用6%變性聚丙烯酰胺凝 膠電泳檢測(cè)。發(fā)現(xiàn)其中1個(gè)SSR位點(diǎn)在兩親本間可以產(chǎn)生差異(圖1)，隨后對(duì)其進(jìn)行測(cè)序 并獲得SEQ ID NO. 1和SEQ ID N0. 2中的序列信息，該標(biāo)記命名為R70。本發(fā)明對(duì)獲得的第三個(gè)BAC克隆B58進(jìn)行了全長(zhǎng)測(cè)序，根據(jù)序列信息，本發(fā)明尋找 到5個(gè)潛在的SSR位點(diǎn)，并設(shè)計(jì)引物在兩親本間進(jìn)行PCR擴(kuò)增并使用6 %變性聚丙烯酰胺凝 膠電泳檢測(cè)。發(fā)現(xiàn)其中2個(gè)SSR位點(diǎn)在兩親本間可以產(chǎn)生差異(圖2，圖幻，隨后對(duì)其進(jìn)行 測(cè)序并獲得SEQ ID N0. 3和SEQ ID N0. 4及SEQ ID N0. 5和SEQ ID N0. 6中的序列信息， 這兩個(gè)標(biāo)記分別被命名為R81和R84。以上3個(gè)新開(kāi)發(fā)的分子標(biāo)記經(jīng)過(guò)分離群體驗(yàn)證，均與M基因位點(diǎn)緊密連鎖(圖4， 圖中X表示交換事件)。由于都是特異性PCR擴(kuò)增，故這些標(biāo)記具有高穩(wěn)定。利用這些標(biāo)記 構(gòu)建的高密度遺傳和物理圖譜，將有助于黃瓜單性花基因的最終克隆。
權(quán)利要求
1.一種與黃瓜單性花基因M緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于，由序列表中SEQ ID NO. 3所示的155個(gè)核苷酸和SEQ ID NO. 4所示的157個(gè)核苷酸組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的與黃瓜單性花基因M緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征是，SEQ IDN0. 3所示的155個(gè)核苷酸的片段與單性花基因M連鎖。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的與黃瓜單性花基因M緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征是，SEQ IDN0. 4所示的157個(gè)核苷酸的片段與兩性花基因m連鎖。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的與黃瓜單性花基因M緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征是，由 SEQID NO. 9所示的上游引物和SEQ ID NO. 10所示的下游引物擴(kuò)增得到。
全文摘要
本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域的與黃瓜單性花控制基因M緊密連鎖的分子標(biāo)記，第一種分子標(biāo)記由序列表中SEQ ID NO.1所示的223個(gè)核苷酸和SEQ ID NO.2所示的221個(gè)核苷酸組成；第二種分子標(biāo)記由序列表中SEQ ID NO.3所示的155個(gè)核苷酸和SEQ ID NO.4所示的157個(gè)核苷酸組成；第三種分子標(biāo)記由序列表中SEQ ID NO.5所示的110個(gè)核苷酸和SEQ ID NO.6所示的108個(gè)核苷酸組成。本發(fā)明的3個(gè)分子標(biāo)記與M基因位點(diǎn)連鎖更加緊密，對(duì)關(guān)于單性花/兩性花的黃瓜分子標(biāo)記輔助育種體系的建立更有幫助；本發(fā)明的分子標(biāo)記可以簡(jiǎn)便、快速、高通量地應(yīng)用于黃瓜育種實(shí)踐。
文檔編號(hào)C12N15/11GK102140457SQ20111004426
公開(kāi)日2011年8月3日 申請(qǐng)日期2009年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月14日
發(fā)明者何歡樂(lè), 李征, 潘俊松, 蔡潤(rùn), 陶倩怡 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)