專利名稱：松香誘導(dǎo)生物轉(zhuǎn)化制備活性酚類化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及-
-株從云南松林腐殖質(zhì)中篩選獲得的毛霉科iM^/oAsis屬A5+菌株
及其培養(yǎng)發(fā)酵優(yōu)化條件，并用于松香誘導(dǎo)生物轉(zhuǎn)化制備活性酚類化合物0，0-1，1' -二 (2-羥基-3，4，5-三甲基)苯基氧橋和4，5，6-三甲基-1，2-鄰苯二酚的方法，通過下列技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。 本發(fā)明的目的在于提供一種松香誘導(dǎo)來生產(chǎn)活性酚類化合物的方法，其特征在于經(jīng)過下列各步驟
A.將微生物菌株A5+在PDA培養(yǎng)基中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，獲得活化菌株，再接入PDB培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵48 72h;
B.配制轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的誘導(dǎo)物；
C.將步驟B中所配制的誘導(dǎo)物加入步驟A中發(fā)酵后的菌株，進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化；
D.將C的轉(zhuǎn)化液進(jìn)行過濾濃縮，得到轉(zhuǎn)化產(chǎn)物粗提物浸膏；
E.轉(zhuǎn)化產(chǎn)物粗提物浸膏用50 90%的無水乙醇進(jìn)行梯度醇沉，乙醇相濃縮；其次再用石油醚萃取，水相濃縮；接著用乙酸乙酯多級(jí)萃取3次，乙酸乙酯相濃縮；最后經(jīng)過薄層層析、硅膠柱層析LH-20凝膠層析和高效液相色譜法分離純化得到粉狀化合物SX-I為0，0
-1, 1'-
(2-羥基-3，4，5-三甲基)苯基氧橋和結(jié)晶化合物SX-2為4，5，6-三甲
基-1，2-鄰苯二酚。
權(quán)利要求
1.一種松香誘導(dǎo)來生產(chǎn)活性酚類化合物的方法，其特征在于經(jīng)過下列各步驟A.將微生物菌株A5+在PDA培養(yǎng)基中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，獲得活化菌株，再接入PDB培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵48 72h ；B.配制轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的誘導(dǎo)物；C.將步驟B中所配制的誘導(dǎo)物加入步驟A中發(fā)酵后的菌株，進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化；D.將C的轉(zhuǎn)化液進(jìn)行過濾濃縮，得到轉(zhuǎn)化產(chǎn)物粗提物浸膏；E.轉(zhuǎn)化產(chǎn)物粗提物浸膏用50 90%的無水乙醇進(jìn)行梯度醇沉，乙醇相濃縮；其次再用石油醚萃取，水相濃縮；接著用乙酸乙酯多級(jí)萃取3次，乙酸乙酯相濃縮；最后經(jīng)過薄層層析、硅膠柱層析LH-20凝膠層析和高效液相色譜法分離純化得到粉狀化合物SX-I為0，0 -1，1' -二(2-羥基-3，4，5-三甲基)苯基氧橋和結(jié)晶化合物SX-2為4，5，6-三甲基-1，2-鄰苯二酚。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述PDA培養(yǎng)基為200g/L的馬鈴薯+20g/ L的葡萄糖+1. 5% 覬的瓊脂，pH值為6，于110 125°C下高壓滅菌15 30min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述PDB培養(yǎng)基為200g/L的馬鈴薯+20g/ L的葡萄糖，pH值為6，于110 125°C下高壓滅菌15 30min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述誘導(dǎo)物為按每200mL的PDA培養(yǎng)基中加松香0. 1 0. 3g，助溶劑95%的乙醇5 SmL取樣，將松香充分溶解在乙醇中所得的溶液為誘導(dǎo)物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述生物轉(zhuǎn)化的條件為在溫度沈 30°C、攪拌速率為120 128rpm下，反應(yīng)72 96h。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述微生物菌株A5+為毛霉菌亞門 (Mucoromycotina)、毛霉目(Mucorales)、毛霉禾斗(Mucorales incertae sedis)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種松香誘導(dǎo)來生產(chǎn)活性酚類化合物的方法，通過將微生物菌株A5+在PDA培養(yǎng)基中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，獲得活化菌株，再接入PDB培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵48～72h；將誘導(dǎo)物加入發(fā)酵后的菌株，進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化；轉(zhuǎn)化液進(jìn)行過濾濃縮，得到轉(zhuǎn)化產(chǎn)物粗提物浸膏；轉(zhuǎn)化產(chǎn)物粗提物浸膏用梯度醇沉，用石油醚、乙酸乙酯萃取，最后經(jīng)過薄層層析、硅膠柱層析LH-20凝膠層析和高效液相色譜法分離純化得到O,O-1,1′-二(2-羥基-3,4,5-三甲基)苯基氧橋和4,5,6-三甲基-1,2-鄰苯二酚。本發(fā)明的生物轉(zhuǎn)化法具有高效性、高選擇性，反應(yīng)條件溫和，幾乎不會(huì)對(duì)環(huán)境帶來污染；比提取法費(fèi)用低，節(jié)省成本；所得酚類化合物的活性有抗氧化性、抑菌、抗病毒、抗癌、抗輻射和抗過敏等作用。
文檔編號(hào)C12R1/645GK102181488SQ20111005972
公開日2011年9月14日 申請(qǐng)日期2011年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月14日
發(fā)明者余旭亞, 孟慶雄, 曹建新, 李巧峰, 王亞明 申請(qǐng)人:昆明理工大學(xué)