專利名稱：用于cho細(xì)胞dna殘留檢測的試劑盒及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種定量檢測CHO細(xì)胞DNA(即中國倉鼠卵巢細(xì)胞基因組DNA)殘留的試劑盒及其使用。
背景技術(shù)：
通過哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)表達(dá)制備治療性重組蛋白質(zhì)藥物已經(jīng)成為當(dāng)今生物制藥領(lǐng)域的主流技術(shù)，目前已經(jīng)上市和正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)的蛋白質(zhì)藥物中，70%來自于哺乳動物細(xì)胞，而這其中CHO細(xì)胞是最常用的細(xì)胞系。CHO細(xì)胞來源于中國倉鼠的卵巢細(xì)胞，目前，它是重組蛋白質(zhì)生產(chǎn)的首選體系；因?yàn)榕c其他表達(dá)系統(tǒng)相比，它具有許多優(yōu)點(diǎn)1)具有準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)錄后修飾功能，表達(dá)的藥物蛋白能通過CHO細(xì)胞進(jìn)行糖基化修飾，其產(chǎn)物在分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和生物學(xué)功能方面最接近于天然蛋白分子；2)表達(dá)產(chǎn)物分泌于培養(yǎng)液中， 并且很少分泌自身的內(nèi)源蛋白，便于下游產(chǎn)物分離純化；3)具有重組基因的高效擴(kuò)增和表達(dá)能力，外源蛋白的表達(dá)穩(wěn)定；4)具有貼壁和懸浮生長特性，且有較高的耐受剪切力和滲透壓能力，能在無血清培養(yǎng)基中高密度培養(yǎng)，且培養(yǎng)體積能達(dá)到1000L以上，可以大規(guī)模生產(chǎn)。目前已有數(shù)十種CHO細(xì)胞表達(dá)和生產(chǎn)的產(chǎn)品投放市場，例如促紅細(xì)胞生成素(EPO)、白細(xì)胞介素(IL)、凝血因子(VII，IX)、治療性單克隆抗體(如=Avastin,Erbitux,Herceptin, Rituxan)等。為了確保治療性重組蛋白質(zhì)藥物的產(chǎn)品質(zhì)量，歐美食品和藥品管理局以及我國國家食品藥品監(jiān)督管理局都對藥品中宿主細(xì)胞殘留DNA量提出了明確的要求。分子雜交分析以及Threshold immunoassay分析具有靈敏度低、耗費(fèi)時間長、不易定量檢測等缺陷。定量PCR是在PCR定性技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的核酸定量技術(shù)。實(shí)時熒光定量PCR 技術(shù)是一種在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料，利用熒光信好積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。該技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確、 自動化程度高和實(shí)時性等特點(diǎn)。STOR Green是一種最為常用的燃料，但因其與DNA親和力強(qiáng)，故通常對PCR反應(yīng)有抑制作用；Taqman探針靈敏度較高，特異性強(qiáng)，但其價(jià)格昂貴，國外相關(guān)試劑盒每個96孔板的檢測價(jià)格大于3000美元，極大地限制了其使用。本發(fā)明的熒光PCR方法克服上述已有定量PCR檢測方法靈敏度低、實(shí)施費(fèi)用高等缺點(diǎn)，提供一種簡單、廉價(jià)、準(zhǔn)確率高的定量熒光PCR檢測方法以及用于該方法的試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種使用實(shí)時熒光PCR技術(shù)來定性與定量檢測CHO細(xì)胞DNA 的試劑盒，特別是本試劑盒可用于檢測治療蛋白質(zhì)藥物、重組疫苗及單克隆抗體等產(chǎn)品CHO 細(xì)胞殘留DNA，從而對重組蛋白質(zhì)藥物生產(chǎn)過程進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)測。本發(fā)明的試劑盒以EvaGreen為熒光染料，基于實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR)技術(shù)快速、準(zhǔn)確、定量檢測重組的治療蛋白質(zhì)藥物、重組疫苗及單克隆抗體中CHO細(xì)胞殘留DNA含量的試劑盒。
本發(fā)明試劑盒的基本原理是利用一對靶多核苷酸的特異性引物，在本試劑盒PCR 擴(kuò)增反應(yīng)液中，通過熒光定量PCR擴(kuò)增儀實(shí)現(xiàn)靶核苷酸的循環(huán)擴(kuò)增，從而達(dá)到快速、定量檢測多核苷酸的目的。本發(fā)明所提供的檢測重組蛋白樣品中CHO細(xì)胞殘留DNA的試劑盒包括分別裝有 PCR擴(kuò)增反應(yīng)液、CHO細(xì)胞基因組DNA定量參考品、陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品以及DNA稀釋液的多個試劑瓶或管，所述試劑瓶或管加蓋密封。所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)液含有Taq酶、EvaGreen熒光染料、dNTPs、Rox染料、Mg2+、PCR 緩沖液、正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物為Genebank登錄號為EFM0878. 1 序列的特異性引物。所述正向引物與反向引物之間相距30-250個堿基。所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)液能和該對引物的靶序列結(jié)合，產(chǎn)生高度靈敏、特異性高的檢測信號。所述DNA稀釋液可為常規(guī)。優(yōu)選由EDTA、NaOH和TriS-HCl溶液配制而成，其中 Tris-HCl 濃度為 5. 0-10. OmM/L, EDTA 的濃度為 0. 5-1. OmM/L,用 NaOH 溶液調(diào)節(jié) pH 為 6. 0-8. 5。該DNA稀釋液能高效稀釋低濃度的DNA樣品，而且適合于PCR擴(kuò)增。進(jìn)一步的，所述特異性引物是根據(jù)Genebank登錄序列(登錄號EF540878. 1)，通過引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)的，特異性引物包括正向引物CHO-F和反向引物CHO-R CHO-F :5，-CTGGCAGACATCTAAATATC-3，(SEQ ID NO 1),CHO-R :5，-TAGCAGACACTGTTGTAGAG-3，(SEQ ID NO :2)。PCR擴(kuò)增反應(yīng)液中，引物、Taq酶、dNTPs、Rox染料、Mg2+及PCR緩沖液均為常見組分，其含量亦為常規(guī)。一般而言，Taq酶用量為50000-200000U/L，dNTP含量為0. 1-0. 5mM/ L, Mg2+濃度為3. 0-6. OmM/L，引物總濃度為0. 4-2. O μ mol/L, PCR緩沖液則稀釋為IX。Rox染料及EvaGreen染料均可經(jīng)市售途徑購買獲得，市售染料會有不同的濃縮倍數(shù)(如20X，50X)，在配置PCR擴(kuò)增反應(yīng)液時，一般使染料在PCR擴(kuò)增反應(yīng)液中的終濃度為 IX左右即可。優(yōu)選的，所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)液中，正向引物濃度為0.2-1. 0 μ mol/L，反向引物濃度為 0. 2-1. 0 μ mol/L。PCR擴(kuò)增反應(yīng)液可自行配置，也可直接以市售的不含引物的通用PCR擴(kuò)增反應(yīng)液加入引物及染料配置獲得。本發(fā)明的試劑盒可與常規(guī)市購DNA提取試劑盒組合使用，也可進(jìn)一步包括DNA提取液，所述DNA提取液可采用常規(guī)市購的DNA提取試劑盒中所含試劑。CHO細(xì)胞基因組DNA定量參考品含有已知濃度的CHO細(xì)胞基因組DNA，較佳的，CHO 細(xì)胞基因組DNA的濃度為1.0X 107-5. 0X 107fg/y L·所述陽性質(zhì)控品為CHO細(xì)胞基因組DNA，較佳的，CHO細(xì)胞基因組DNA濃度大于 3. 0X102fg/y 1。所述陰性對照品為不含CHO細(xì)胞基因組DNA的溶液，如純水。本發(fā)明進(jìn)一步公開了上述試劑盒的使用方法，包括下列步驟1)對待檢樣本提取DNA，并將提取的DNA溶解于DNA稀釋液或純水中獲得待檢樣本DNA溶液；提取樣品DNA時，同時提取陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品DNA，陰性質(zhì)控品用于判斷提取過程中有無污染，陽性質(zhì)控品用于測定提取收率；2)將CHO細(xì)胞基因組DNA定量參考品采用DNA稀釋液梯度稀釋；
3)將待檢樣本DNA溶液、CHO細(xì)胞基因組DNA定量參考品梯度稀釋液分別加入PCR 擴(kuò)增反應(yīng)液在熒光定量PCR儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)；4)根據(jù)定量參考品的熒光信號獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到待檢樣本中CHO細(xì)胞DNA的量。所述待檢樣本包括但不限于CHO細(xì)胞表達(dá)或生產(chǎn)的治療蛋白質(zhì)藥物、重組疫苗及單克隆抗體等產(chǎn)品。所述步驟3) PCR反應(yīng)體系可為總體積25μ 1，其中PCR擴(kuò)增反應(yīng)液15. 5μ 1，待檢樣品DNA溶液9. 5 μ 1。所述步驟3)PCR反應(yīng)條件可為95°C預(yù)變性IOmin ；95°C 15s，60°C 40s，40個循環(huán)。本發(fā)明提供的實(shí)施熒光定量PCR試劑盒可以監(jiān)測出CHO細(xì)胞DNA最低濃度為 3. Ofg/ul，說明本試劑盒具有非常好的靈敏度。本發(fā)明針對CHO細(xì)胞基因組DNA保守區(qū)設(shè)計(jì)的特異引物，可以檢測出CHO細(xì)胞基因組DNA，但不能檢測出非CHO細(xì)胞基因組DNA，表明本試劑盒具有較高的特異性。本發(fā)明提供的實(shí)時熒光定量PCR檢測試劑盒可以檢測重組蛋白藥物產(chǎn)程中間樣品、半成品、成品等樣品中的CHO細(xì)胞殘留DNA ；可以為重組蛋白藥物的生產(chǎn)提供可靠的質(zhì)控證據(jù)，為重組蛋白藥物研發(fā)和安全生產(chǎn)提供重要支持。


圖1參考品擴(kuò)增曲線。擴(kuò)增曲線有明顯的指數(shù)增長期，呈S型，每個濃度的擴(kuò)增曲線均勻疊和在一起，表明試劑盒重復(fù)性好。圖2參考品溶解曲線。溶解曲線為單一峰，無引物二聚體。圖3顯示線性與靈敏度參考品擴(kuò)增結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)曲線。由圖可知，當(dāng)樣品濃度為 3. 0X105fg/y 1,3. 0X104fg/y 1,3. OX 103fg/y 1, 3. 0 X 102fg/μ 1，3. OX 101 /μ 1， 3. Ofg/μ 1時，樣品的Ct值為15-32之間，檢測下線低于3. Ofg/ul。繪制得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率為-3. 38，相關(guān)系數(shù)(R2) = 0.997，在Y軸截距為34. 452，擴(kuò)增效率為97.457%。圖4顯示檢測方法特異性的擴(kuò)增曲線。圖5顯示樣品定量分析標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明結(jié)合附圖和實(shí)施例作進(jìn)一步說明，所列實(shí)例旨在舉例說明而不是限制本發(fā)明。實(shí)施例1 熒光定量PCR法檢測CHO細(xì)胞DNA殘留的引物設(shè)計(jì)及參考品制備1、材料DNTPs,Taq DNA聚合酶、熒光染料及PCR緩沖液購自美國BioRad公司，7500Fast熒光定量PCR儀為美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司產(chǎn)品，DNA稀釋液采用分析純試劑配制，基因組DNA 提取試劑盒為美國Bio-Tek公司產(chǎn)品。2、引物及探針的設(shè)計(jì)與合成以 Genebank 登錄序列(Genebank 登錄號 EF540878. 1)為模板，使用 PrimerPrimer 5. 0軟件(美國I^remierBiosoft公司)設(shè)計(jì)PCR引物，通過預(yù)實(shí)驗(yàn)，從中選擇最佳
組合CHO-F :5，-CTGGCAGACATCTAAATATC-3，(SEQ ID NO 1),CHO-R :5，-TAGCAGACACTGTTGTAGAG-3，(SEQ ID NO :2)。引物由上海生工生物工程有限公司合成。3、檢測參考品制備及檢測培養(yǎng)CHO細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，用PBS無菌洗滌2次，按基因組DNA提取試劑盒說明書提取CHO細(xì)胞基因組DNA，分光光度法測定其在260nm(A-260)測定其濃度并稀釋成 30ng/ μ 1(3. OX 10 / μ 1)，_20°C分裝儲存，作為參考品使用。取7支新的1. 5ml低吸附離心管，分別標(biāo)記為SDO、SDl、SD2、SD3、SD4、SD5、SD6， 向每管中各加入45 μ 1 DNA稀釋緩沖液(Tris-HCl 10mM/L, EDTA ImM/L, pH為8)。SDO管中加入5μ 1 CHO DNA Control，渦旋混勻器充分混勻，之后每一管依次加入5μ 1上一濃度梯度稀釋液，各管加入DNA后均用渦旋混勻器充分混勻，再進(jìn)行下一個梯度稀釋。參考品制備后，在ABI 7500Fast型熒光定量PCR儀上進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR 體系PCR 緩沖液(IOX) 2. 5 μ 1 ； dNTP (2mM/L) 2. 0 μ 1 ；MgCl2 (50mM/L) 2 μ 1 ；EvaGreen 染料(20Χ) 1. 25 μ 1 ；Rox 染料(50Χ)0. 5μ 1 ；正向引物(10 μ mol/L) 1 μ 1 ；反向引物(lOymol/ μ 1 ； Tap 酶(50υ/μ 1)0. 1μ 1 ；模板 9. 5 μ 1 ；純水 5. 15μ 1。PCR 條件95°C預(yù)變性 IOmin ；95°C 15s, 60°C 40s, 40 個循環(huán)；95°C 15s, 60°C 60s, 95°C15s。分析標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1，圖2所示。實(shí)施例2 熒光定量PCR法檢測CHO細(xì)胞殘留DNA的應(yīng)用及其特異性分析1、制備包括以下組成成分的試劑盒DNA稀釋液(lml/管)1管、PCR擴(kuò)增反應(yīng)液(lml/管)1管、陰性質(zhì)控品(150 μ 1/ 管)2管、陽性質(zhì)控品(150 μ 1/管)2管、定量參考品(50 μ 1/管)1管。陽性質(zhì)控品為CHO細(xì)胞基因組DNA，濃度為3. 0 X 105fg/ul。所述陰性對照品為純水。定量參考品為CHO細(xì)胞基因組DNA，濃度為3. 0 X 107fg/ul。DNA稀釋液(選自以下任一)配方一以去離子水為溶劑，Tris-HCl濃度為5. 0mM/L, EDTA的濃度為1. 0mM/L, 用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為8. 5。配方二 以去離子水為溶劑，Tris-HCl濃度為8mM/L，EDTA的濃度為0. 7mM/L,用 NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為8。配方三以去離子水為溶劑，Tris-HCl濃度為10. 0mM/L, EDTA的濃度為0. 5mM/L, 用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為6.0。PCR 擴(kuò)增反應(yīng)液Taq 酶 100000U/L，dNTP 含量為 0. 5mM/L, Mg2+ 濃度為 5mM/L，Rox 染料(50X)20ml/L, EvaGreen 染料(50X)20ml/L, PCR 緩沖液(10X) 100ml/L，正向引物濃度為0. 5ymol/L，反向引物濃度為0. 5 μ mol/L，混合配置。2、樣品采集、運(yùn)送和保存樣品采集包括各種用CHO細(xì)胞做為宿主細(xì)胞生產(chǎn)的重組蛋白藥物半成品、成品等，按照國家生物制品檢定所取樣要求進(jìn)行操作，密封送檢。用作分析本方法特異性所用細(xì)胞株購自美國標(biāo)準(zhǔn)生物品收藏中心(ATCC)、質(zhì)粒為本實(shí)驗(yàn)室自制。樣品保存和運(yùn)送樣品可立即用于檢測，也可保存于-20°C待檢，保存期為6個月。 樣品運(yùn)送時應(yīng)保存于0°c -8°c。3、檢測步驟 a)樣品處理與DNA提取本例測定樣品包括293細(xì)胞基因組DNA (30pg/μ 1)，Wil2_S細(xì)胞基因組DNA(30pg/ μ 1)，正常人血清基因組DNA(批號CP18)，pHLXlOl質(zhì)粒(107拷貝/ μ 1)，利妥昔單克隆抗體成品(Roche公司，批號B6(^9)，HLX-Ol單克隆抗體半成品(本公司生產(chǎn)，批號 RS20110102)，CHO細(xì)胞基因組DNA樣品(lOOpg/μΙ)。采用磁珠富集法提取DNA。提取樣品時，同時提取陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品，陰性質(zhì)控品用于判斷提取過程中有無污染，陽性質(zhì)控品用于測定提取收率。所有待檢樣品均需通過提取后溶解于試劑盒所帶DNA稀釋液或純水中。b) PCR擴(kuò)增與結(jié)果分析每次檢測均應(yīng)設(shè)立參考品，陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品。參考品使用時用DNA稀釋液(配方二)稀釋成7個濃度梯度，分別為3. 0 X 105f g/ μ 1, 3. 0 X 104f g/ μ 1, 3. 0 X 103f g/ μ 1,3. 0X102fg/y 1，3. OX 101 /μ 1,3. Ofg/μ 1 及 0. 3fg/y 1。參考品制備后，將參考品和PCR擴(kuò)增反應(yīng)液加入到96孔PCR反應(yīng)板中，總體積 25 μ 1，其中PCR擴(kuò)增反應(yīng)液15. 5 μ 1，待檢樣品DNA溶液9. 5 μ 1。在ABI 750(Fast型熒光定量PCR儀上進(jìn)行PCR擴(kuò)增，條件為95°C預(yù)變性IOmin ；95°C 15s，60°C 40s，40個循環(huán)。同時加參考品檢測作標(biāo)準(zhǔn)曲線。反應(yīng)結(jié)束后保存檢測數(shù)據(jù)文件。根據(jù)PCR擴(kuò)增結(jié)果所得到的曲線圖調(diào)節(jié)分析參數(shù)，使標(biāo)準(zhǔn)曲線窗口下的標(biāo)準(zhǔn)曲線達(dá)到最佳(即相關(guān)系數(shù)大于0.97，擴(kuò)增效率介于 95% -105%之間)。測定結(jié)果經(jīng)儀器處理根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出檢測樣品中CHO細(xì)胞DNA殘留量，樣品檢測結(jié)果如附圖4、圖5所示，其中293細(xì)胞基因組DNA，Wil2-S細(xì)胞基因組DNA， 正常人血清基因組DNA，pHLX101質(zhì)粒，利妥昔單克隆抗體成品，HLX-Ol單克隆抗體原液，檢測結(jié)果Ct值均低于檢測下限，可以判定為陰性；CHO細(xì)胞基因組DNA樣品的Ct值為16. 95， 參照同一次實(shí)驗(yàn)中線性定量參考品的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，可以判定樣品中CHO細(xì)胞殘留DNA的濃度為 104. 4pg/l·! 1。本發(fā)明是結(jié)合實(shí)施例進(jìn)行描述的，根據(jù)本發(fā)明的內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價(jià)形式同樣屬于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.一種檢測CHO細(xì)胞殘留DNA含量的試劑盒，包括PCR擴(kuò)增反應(yīng)液、CHO細(xì)胞基因組 DNA定量參考品、陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品和DNA稀釋液；所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)液含有Taq酶、 EvaGreen熒光染料、dNTPs、Rox染料、Mg2+、PCR緩沖液、正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物為Genebank登錄號為EF540878. 1序列的特異性引物。
2.如權(quán)利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述正向引物與反向引物間相距30-250個堿基。
3.如權(quán)利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述DNA稀釋液由EDTA、NaOH和1Tris-HCl 溶液配制而成，其中 EDTA 為 0. 5-1. OmM/L, Tris-HCl 為 5. 0-10. OmM/L, pH 為 6. 0-8. 5。
4.如權(quán)利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述特異性引物包括正向引物CHO-F和反向引物CHO-R CHO-F 的核苷酸序列為5，-CTGGCAGACATCTAAATATC-3，，CHO-R 的核苷酸序列為5，-TAGCAGACACTGTTGTAGAG-3，。
5.如權(quán)利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)液中，正向引物濃度為 0. 2-1 μ mol/L，反向引物濃度為 0. 2-1 μ mol/L。
6.如權(quán)利要求1-5任一所述試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括DNA提取液。
7.如權(quán)利要求1-5任一權(quán)利要求所述試劑盒的使用方法，包括下列步驟1)對待檢樣本提取DNA，并將提取的DNA溶解于DNA稀釋液或純水中獲得待檢樣本DNA 溶液；提取樣品DNA時，同時提取陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品DNA，陰性質(zhì)控品用于判斷提取過程中有無污染，陽性質(zhì)控品用于測定提取收率；2)將CHO細(xì)胞基因組DNA定量參考品采用DNA稀釋液梯度稀釋；3)將待檢樣本DNA溶液、CHO細(xì)胞基因組DNA定量參考品梯度稀釋液分別加入PCR擴(kuò)增反應(yīng)液在熒光定量PCR儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)；4)根據(jù)定量參考品的熒光信號獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到待檢樣本中CHO細(xì)胞DNA的量。
8.如權(quán)利要求6所述試劑盒的使用方法，其特征在于，所述待檢樣本為CHO細(xì)胞表達(dá)或生產(chǎn)的治療蛋白質(zhì)藥物、重組疫苗或單克隆抗體等產(chǎn)品。
9.如權(quán)利要求6所述試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟3)中，PCR反應(yīng)體系為總體積25 μ 1，其中PCR擴(kuò)增反應(yīng)液15. 5 μ 1，待檢樣品DNA溶液9. 5 μ 1。
10.如權(quán)利要求6所述試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟3)中，PCR反應(yīng)條件為95°C預(yù)變性 IOmin ；95°C 15s，60°C 40s，40 個循環(huán)。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于CHO細(xì)胞DNA殘留檢測的試劑盒及其使用方法。本發(fā)明的試劑盒包括DNA提取液、PCR擴(kuò)增反應(yīng)液、CHO細(xì)胞基因組DNA定量參考品、陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品和DNA稀釋液。本發(fā)明的試劑盒以EvaGreen為熒光染料，通過實(shí)時定量PCR技術(shù)檢測CHO細(xì)胞基因組DNA?？梢跃_定量檢測來源于CHO細(xì)胞的治療蛋白質(zhì)藥物、重組疫苗及單克隆抗體等產(chǎn)品。
文檔編號C12Q1/68GK102181530SQ20111006674
公開日2011年9月14日 申請日期2011年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月18日
發(fā)明者劉世高, 姜偉東, 張二輝, 郎國竣, 郭新軍, 馬辰 申請人:上海復(fù)宏漢霖生物技術(shù)有限公司