專利名稱：一種亞硝基亞鐵血色原的提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品領(lǐng)域，具體涉及一種亞硝基亞鐵血色原的提取工藝。
背景技術(shù)：
利用動物血液中血紅蛋白和亞硝酸鈉中NO-人工合成亞硝基血紅蛋白(HbNO)，將 合成的HbNO作為肉品發(fā)色劑，或作為無硝腌制系統(tǒng)中著色劑成分添加到火腿、香腸中，經(jīng) 試驗分析和檢測，適用于配方中肌紅蛋白含量較低的肉制品，如雞肉、豬肉；加工過程中使 用真空處理，以防止色素和脂肪的氧化，產(chǎn)品發(fā)色效果良好，穩(wěn)定持久，風(fēng)味獨特，并具有一 定防腐效果，可實現(xiàn)肉制品的低硝化。由于它的安全性、水溶解性，還可以在其它食品中應(yīng) 用，如面包、果脯、糕點、糖果、飲料中使用。國外有關(guān)腌肉色素的早期報道為亞硝基血紅蛋白的開發(fā)應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)，但 所報道的工藝路線仍存在一定的缺陷，以動物血液為原料首先制備血紅素，這需耗費大量 的有機溶劑，工藝復(fù)雜，一氧化氮參與反應(yīng)，成本高且具有一定危險性。亞硝基血紅蛋白在 我國的研究起步較晚，從1988年起張坤生、馬美湖等人先后研究了腌肉色素的制取工藝， 取得了一定的效果，但缺乏適于工業(yè)化生產(chǎn)的可行性工藝；至于亞硝基亞鐵血色原色素的 提取純化，國內(nèi)外至今沒有報道。為了更好的將亞硝基血紅蛋白應(yīng)用于食品及其它行業(yè)中， 有必要對其合成、純化、性質(zhì)及應(yīng)用進行系統(tǒng)的研究。以動物血液為原料，經(jīng)離心、分離、洗滌得紅細(xì)胞，紅細(xì)胞加入一定體積蒸餾水后 經(jīng)高速均質(zhì)或冷凍、解凍破胞處理得血紅蛋白液，在還原劑作用下血紅蛋白液與亞硝酸鈉 經(jīng)加熱即可制得亞硝基血紅蛋白。亞硝基血紅蛋白是蛋白質(zhì)與亞硝基亞鐵血色原色素的復(fù) 合體。亞硝基血紅蛋白的化學(xué)結(jié)構(gòu)長期以來一直是人們爭論的焦點。1901年Haldane， 首次提出腌肉的粉紅色為一氧化氮和血紅蛋白的聯(lián)合體，這種假設(shè)的根據(jù)是腌肉提取物的 可見光吸收波段與一氧化氮和血紅蛋白合成產(chǎn)物類似，根據(jù)眾多的光譜分析發(fā)現(xiàn)，用亞硝 酸鈉腌制肉，肌紅蛋白被亞硝基化，加熱后，其中的珠蛋白受熱變性，隨后與血紅素部分分 離。然而，也存在其它觀點，認(rèn)為合成色素可能是單亞硝基血紅蛋白，再獲得另一個一氧化 氮即成為二亞硝基結(jié)構(gòu)，見

圖1所示。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種亞硝基亞鐵血色原的提取工 藝。本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)一種亞硝基亞鐵血色原的提取工藝，取半干固體亞硝基血紅蛋白，加入80%的丙 酮水溶液采用浸提，浸提料液比為1 18 32、浸提時間為5 15min，浸提溫度為20 500C ；離心取上清，加入蒸餾水使亞硝基亞鐵血色原結(jié)晶沉淀，離心后水洗沉淀即得所述的 亞硝基亞鐵血色原結(jié)晶純品，工藝流程圖見圖2。
其中所述的浸提優(yōu)選采用二級浸提。所述的浸提料液比優(yōu)選1 18。所述的浸提時間優(yōu)選5min。所述的浸提溫度優(yōu)選20°C。所述的半干固體亞硝基血紅蛋白通過如下方法制備在血紅蛋白液中加入 0. 2MNa0H溶液，同時加入亞硝酸鈉、抗壞血酸，攪拌后在83 88°C保溫反應(yīng)10 18min，反 應(yīng)完畢冷卻至23 ^°C，以2500 32000r/min離心1 5min，棄去上清液，用抗壞血酸 溶液洗滌沉淀物，再次離心，反復(fù)洗滌，沉淀物即為半干固體亞硝基血紅蛋白。所述的亞硝酸鈉、抗壞血酸用量為豬血中血紅素亞硝酸鈉抗壞血酸的摩爾比 為 1 2 3 10 13，優(yōu)選 1 3 13。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明采用80%丙酮水溶液浸提亞硝基血紅蛋白，確定亞硝基亞鐵血色原的最佳 提取工藝為浸提料液比作為1 18、浸提時間5min、浸提溫度20°C、浸提級數(shù)為二級。元 素分析結(jié)果可初步推斷亞硝基亞鐵血色原分子中含一個亞硝基，工藝簡單，成本低廉，更加 適合工業(yè)化大量提取制備。本發(fā)明方法目前國內(nèi)外尚無報道。說明書附1單亞硝基亞鐵血色原和二亞硝基亞鐵血色原的化學(xué)結(jié)構(gòu)。A為單亞硝基亞鐵血色原，B為二亞硝基亞鐵血色原。圖2本發(fā)明亞硝基亞鐵血色原提取工藝流程圖。圖3亞硝基血紅蛋白丙酮提取液吸收光譜。
具體實施例方式實施例1半干固體亞硝基血紅蛋白的制備1.1血紅蛋白液的制取向新鮮豬血中加入0.35%檸檬酸鈉抗凝，檸檬酸鈉事先用水溶解，與豬血充分混 勻。低溫下迅速運回實驗室，過濾除去雜物，將全血置于離心管中，用低溫冷凍離心機在 0°C 4°C下以4200r/min的速度離心8min，棄去上層清液，用0. 9%生理鹽水洗滌紅血球， 然后在同樣的轉(zhuǎn)速下離心5min，重復(fù)洗滌兩次，立即裝入塑料瓶中于低溫冰柜中冷凍貯藏 (_20°C)。紅血球使用前于4°C冰箱中存放過夜，以起到冷凍破胞的作用。為使紅血球破胞 充分，紅血球中加入等量的蒸餾水稀釋后，用高速分散均質(zhì)機以llOOOr/min速度破碎紅細(xì) 胞，破碎時間:3min，血樣顏色由暗紅色轉(zhuǎn)為鮮紅色，用紗布過濾，得濾液即為血紅蛋白液。1. 2亞硝基血紅蛋白的制備在血紅蛋白液中加入0. 2M的NaOH溶液，使NaOH的中濃度為0. 04M,同時按血紅 素亞硝酸鈉抗壞血酸的摩爾比為1 3 13加入亞硝酸鈉、抗壞血酸，攪拌后置于 電熱恒溫水浴鍋中85°C加熱反應(yīng)，其間間歇攪拌。反應(yīng)完畢迅速于冰浴中冷卻至室溫，以 3000r/min離心aiiin。棄去上清液，用抗壞血酸溶液洗滌離心所得沉淀物，再次離心，重復(fù) 洗滌兩次，沉淀物即為半干固體亞硝基血紅蛋白，于真空冷凍干燥機中凍干即得亞硝基血 紅蛋白色素粉末。1.3亞硝基血紅蛋白吸收光譜的測定
將1.2合成的亞硝基血紅蛋白溶于80%丙酮水溶液中，離心取上清液，用紫外可 見分光光度計在450 700nm下掃描其吸收光譜，結(jié)果見圖3。由圖3可知亞硝基血紅蛋白 丙酮水溶液在538. 8nm、563nm處有最大吸收峰，以下所測吸光度均為波長538. 8nm處的吸
光度值。實施例2提取亞硝基亞鐵血色原色素的單因素實驗2. 1浸取溫度對提取率的影響取半干固體亞硝基血紅蛋白lg，加入IOmL 80 %丙酮水溶液，分別在不同溫度 條件下，攪拌浸提15min后離心，取上清液lmL，用5mL丙酮液稀釋，于分光光度計測波長 538. 8nm處吸光度，實驗結(jié)果如表1所示。表1提取溫度對吸光度的影響
權(quán)利要求
1.一種亞硝基亞鐵血色原的提取工藝，其特征在于取半干固體亞硝基血紅蛋白，加 入80%的丙酮水溶液浸提，浸提料液比為1 18 32、浸提時間為5 15min，浸提溫度為 20 50°C ；離心取上清，加入蒸餾水使亞硝基亞鐵血色原結(jié)晶沉淀，離心后水洗沉淀即得所 述的亞硝基亞鐵血色原結(jié)晶純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞硝基亞鐵血色原的提取工藝，其特征在于所述的浸提采用 二級浸提。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的亞硝基亞鐵血色原的提取工藝，其特征在于所述的浸提料液 比為1 18。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的亞硝基亞鐵血色原的提取工藝，其特征在于所述的浸提時間 為 5min。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的亞硝基亞鐵血色原的提取工藝，其特征在于所述的浸提溫度 為 20 0C ο
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞硝基亞鐵血色原的提取工藝，其特征在于所述的半干固體 亞硝基血紅蛋白通過如下方法制備在血紅蛋白液中加入0. 2M NaOH溶液，同時加入亞硝酸 鈉、抗壞血酸，攪拌后在83 88°C保溫反應(yīng)10 18min，反應(yīng)完畢冷卻至23 ^°C，以 2500 32000r/min離心1 5min，棄去上清液，用抗壞血酸溶液洗滌沉淀物，再次離心，反 復(fù)洗滌，沉淀物即為半干固體亞硝基血紅蛋白。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的亞硝基亞鐵血色原的提取工藝，其特征在于所述的亞硝酸 鈉、抗壞血酸用量為豬血中血紅素亞硝酸鈉抗壞血酸的摩爾比為1 2 3 10 13。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的亞硝基亞鐵血色原的提取工藝，其特征在于所述的亞硝酸 鈉、抗壞血酸用量為豬血中血紅素亞硝酸鈉抗壞血酸的摩爾比為1 3 13。
全文摘要
本發(fā)明屬于食品領(lǐng)域，公開了一種亞硝基亞鐵血色原的提取工藝。一種亞硝基亞鐵血色原的提取工藝，取半干固體亞硝基血紅蛋白，加入80％的丙酮水溶液采用浸提，浸提物料比為1∶18～32、浸提時間為5～15min，浸提溫度為20～50℃；離心取上清，加入蒸餾水使亞硝基亞鐵血色原結(jié)晶沉淀，離心后水洗沉淀即得所述的亞硝基亞鐵血色原結(jié)晶純品。本發(fā)明確定亞硝基亞鐵血色原的最佳提取工藝，工藝簡單，成本低廉，更加適合工業(yè)化大量提取制備。
文檔編號A23L1/272GK102138674SQ201110071358
公開日2011年8月3日 申請日期2011年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月23日
發(fā)明者任發(fā)政, 俞明, 葉環(huán), 孫友珍, 徐寶才, 鄭立紅, 閆文杰 申請人:連云港福潤食品有限公司