專(zhuān)利名稱(chēng)：基于脫細(xì)胞dna檢測(cè)致dna斷裂物的膠體金試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是檢測(cè)致DNA(脫氧核糖核酸)斷裂物的快速檢測(cè)方法，致 DNA(脫氧核糖核酸)斷裂物包括自由基、遺傳毒性物質(zhì)和輻射物。用于水質(zhì)、空氣質(zhì)量、 土壤質(zhì)量、食品質(zhì)量檢測(cè)與監(jiān)測(cè)，以及疾病機(jī)制探索和抗氧化物質(zhì)篩選等工作中。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有檢測(cè)致DNA斷裂物的方法包括牛胸腺DNA、脫細(xì)胞-核DNA、質(zhì)粒 DNA、微核試驗(yàn)、染色體畸變?cè)囼?yàn)、熒光原位雜交試驗(yàn)(FISH)等?，F(xiàn)有的檢測(cè)方法很難開(kāi)展現(xiàn)場(chǎng)的快速檢測(cè)。利用脫細(xì)胞DNA穩(wěn)定，對(duì)致DNA斷裂物敏感性高、特異性好、適用性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，在諸多研究領(lǐng)域均有應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是合成一定長(zhǎng)度任意序列DNA片段或單一堿基 (胞嘧啶C、胸嘧啶T、腺嘌呤A和鳥(niǎo)嘌呤G)的DNA片段，該片段在緩沖液中不形成雙螺旋， 保持單鏈；在該DNA片段的5’和3’端分別標(biāo)記不同的抗原(5’為A和3’端為B)，把標(biāo)記的DNA片段作為檢測(cè)受試物的平臺(tái)；抗A抗體1吸附于有色顆粒，如膠體金、納米金和乳膠顆粒等，在顆粒表面形成抗體包被；將另一種特異性抗B抗體和抗A抗體2以線條狀固定于膜上形成檢測(cè)線，該膜通常為硝酸纖維素膜或尼龍膜。本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)為完成DNA斷裂物的快速檢測(cè)。附圖及說(shuō)明

圖1為本發(fā)明基于脫細(xì)胞DNA檢測(cè)致DNA斷裂物的膠體金試紙條示意圖，包括 1.抗A抗體2檢測(cè)線；2.抗B抗體檢測(cè)線；3.抗原A;4.單鏈DNA;5.抗原B ;6.抗A抗體； 7.有色顆粒。圖2、圖3和圖4為本發(fā)明的實(shí)施實(shí)例示意圖圖2表示DNA片段無(wú)斷裂，抗B抗體檢測(cè)線顯色；圖3表示DNA片段部分?jǐn)嗔眩笲抗體檢測(cè)線和抗A抗體2檢測(cè)線均顯色； 圖4表示DNA片段完全斷裂，抗A抗體2檢測(cè)線顯色。
具體實(shí)施例方式受試物用緩沖液稀釋?zhuān)尤胍欢舛鹊臉?biāo)記DNA片段，室溫下反應(yīng) 30分鐘，插入檢測(cè)試紙條，根據(jù)檢測(cè)帶的顯色情況判斷受試物是否具有致DNA斷裂作用。結(jié)果判斷如果受試物未導(dǎo)致DNA斷裂，DNA片段完整，形成抗原A-抗A抗體1有色顆?？乖?B復(fù)合物，在溶液中通過(guò)毛細(xì)虹吸作用向上移動(dòng)至抗體B檢測(cè)線時(shí)與線條上的抗體B結(jié)合， 形成有色的B檢測(cè)帶；如果受試物導(dǎo)致全部DNA斷裂，則僅形成抗原A-抗A抗體有色顆粒復(fù)合物，該復(fù)合物無(wú)抗原B，在溶液中通過(guò)毛細(xì)現(xiàn)象向上移動(dòng)至抗體B檢測(cè)線時(shí)越過(guò)抗體B，在抗A抗體2檢測(cè)線未形成有色的A檢測(cè)帶；如果部分?jǐn)嗔眩瑒t形成兩種復(fù)合物(抗原A-抗 A抗體1有色顆?？乖瑽復(fù)合物和抗原A-抗A抗體1有色顆粒復(fù)合物)，在抗B抗體和抗 A抗體2檢測(cè)線形成兩條檢測(cè)帶。
權(quán)利要求
1.合成一定長(zhǎng)度的任意序列DNA片段或者是單一堿基(胞嘧啶C、胸嘧啶T、腺嘌呤A 和鳥(niǎo)嘌呤G)的DNA片段，在DNA片段5’和3’端分別標(biāo)記不同的抗原(為5’ A、3’端為B)。
2.把權(quán)利要求1所述抗原A的抗A抗體1吸附于有色顆粒，如膠體金、納米金和乳膠顆粒等，在顆粒表面形成抗體包被。
3.把權(quán)利要求2所述抗原A和抗原B的特異性抗A抗體2和抗B抗體以線條狀固定于膜上形成檢測(cè)線，該膜通常為硝酸纖維素膜或尼龍膜。
全文摘要
基于脫細(xì)胞DNA檢測(cè)致DNA斷裂物的膠體金試紙條是檢測(cè)自由基、遺傳毒性物質(zhì)和輻射的快速方法?，F(xiàn)有的方法很難開(kāi)展現(xiàn)場(chǎng)的快速檢測(cè)。本發(fā)明合成一定長(zhǎng)度任意序列DNA片段或單一堿基(胞嘧啶C、胸嘧啶T、腺嘌呤A和鳥(niǎo)嘌呤G)的DNA片段，該片段在緩沖液中不形成雙螺旋，保持單鏈；在該DNA片段的5’和3’端分別標(biāo)記不同的抗原(5’為A，3’端為B)，把標(biāo)記的DNA片段作為檢測(cè)受試物的平臺(tái)；抗A抗體1吸附于有色顆粒，如膠體金、納米金和乳膠顆粒等，在顆粒表面形成抗體包被；將另一種特異性抗B抗體和抗A抗體2以線條狀固定于膜上形成檢測(cè)線，該膜通常為硝酸纖維素膜或尼龍膜。從而實(shí)現(xiàn)致DNA斷裂物的定性和/或半定量檢測(cè)。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102199666SQ20111008634
公開(kāi)日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2011年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月7日
發(fā)明者張崇霄, 遲偉建 申請(qǐng)人:張崇霄, 張文眾, 遲偉建