專利名稱：一種原料為塊菌和咖啡豆的食品的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥保健技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種原料為塊菌和咖啡豆的保健食品的制備方法。
背景技術(shù)：
保健食品是食品的一個(gè)種類，具有一般食品的共性，又能調(diào)節(jié)人體的機(jī)能，適于特定人群食用，近年來(lái)世界各國(guó)保健食品發(fā)展的增長(zhǎng)速度都很快，保健(功能)食品在歐美各國(guó)被稱為“健康食品”，在日本被稱為“功能食品”。我國(guó)保健(功能)食品的興起是在20世紀(jì)80年代末90年代初，經(jīng)過(guò)一、二代的發(fā)展，也將邁入第三代，即保健食品不僅需要人體及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明該產(chǎn)品具有某項(xiàng)生理調(diào)節(jié)功能，更需查明具有該項(xiàng)保健功能因子的結(jié)構(gòu)、含量、作用機(jī)理以及在食品中應(yīng)有的穩(wěn)定形態(tài)。塊菌是世界上最珍貴的食用菌之一，塊菌含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，由中國(guó)藥用真菌研究之父世界著名真菌學(xué)家劉波教授指導(dǎo)，以中國(guó)菌物學(xué)會(huì)理事長(zhǎng)、食用菌教育部工程研究中心主任李玉教授為首席科學(xué)家的研究小組對(duì)塊菌長(zhǎng)達(dá)八年的專項(xiàng)研究表明塊菌含有豐富的蛋白質(zhì)、18種氨基酸(包括人體不能合成的8種必需氨基酸)、不飽和脂肪酸、多種維生素、鋅、錳、鐵、鈣、磷、硒等必需微量元素，以及鞘脂類、腦苷脂、神經(jīng)酰胺、三萜、雄性酮、腺苷、松露酸、留醇、塊菌多糖、塊菌多肽等大量的代謝產(chǎn)物，具有極高的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值。 雄性酮有助陽(yáng)、調(diào)理內(nèi)分泌的顯著功效；鞘脂類化合物在防止老年癡呆、動(dòng)脈粥樣硬化以及抗腫瘤細(xì)胞毒性方面有明顯活性；多糖、多肽、三萜具有增強(qiáng)免疫力、抗衰老、抗疲勞作用等等。這些稀有天然化合物的存在構(gòu)成了塊菌神奇作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。塊菌的深入開發(fā)將成為保健食品的趨勢(shì)。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述原因，本申請(qǐng)人通過(guò)多年研究，得到塊菌與咖啡豆配伍為原料開發(fā)出新一代保健食品的制備方法，本發(fā)明方法得到的食品用于體虛多病、陽(yáng)虛等方面的患者，具有很好的保健作用；通過(guò)藥理試驗(yàn)表明，本發(fā)明方法得到的食品具有很好的提高免疫力、抗疲勞等方面的作用。本發(fā)明通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。一種塊菌和咖啡豆為原料食品的制備方法(1)菌種的制備選取新鮮未成熟的塊菌子囊果直接用刀劃開，挑取中央健壯且未接觸刀的組織塊，直接接種到培養(yǎng)基平板，在20-25°C恒溫黑暗中培養(yǎng)5-20天，然后將菌絲植入試管內(nèi)的斜面培養(yǎng)基上，在20-30°C條件下進(jìn)行菌絲培養(yǎng)，待菌絲布滿斜面培養(yǎng)基后，即得菌種；其中培養(yǎng)基為(g/100ml)馬鈴薯10-20%，枸杞提取物10-20%，黨參提取物5-10%，麥芽糖4-6%，蛋白胨0. 4-0.6%，硫酸鎂0. 4-0.6%,瓊脂1_3%，酵母膏 0. 4-0. 6%，磷酸二氫鉀0. 4-0.6% ；用馬鈴薯煮汁，沸騰8-20分鐘后，取濾液，將上述其他原料放入濾液中，邊煮邊攪，帶全部溶解后，趁熱滅菌，即得培養(yǎng)基；(2)液體菌種培養(yǎng)液體菌種分一級(jí)液體種子、二級(jí)液體種子，培養(yǎng)基均為(g/100ml):蛋白胨1-3%， 麥芽糖4-8 %，黨參提取物5-15 %，枸杞提取物10-25 %，磷酸氫二鉀0. 4-0. 6 %，硫酸鎂 0. 2-0. 6%，馬鈴薯10-25%;培養(yǎng)基制備方法為將馬鈴薯粉碎，加水提取得到提取液，與上述其余成份混合，定容，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)PH值到5. 5-6. 5，滅菌，既得；將斜面菌種轉(zhuǎn)接入裝有培養(yǎng)基的搖瓶中，進(jìn)行一級(jí)液體種子培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為 20-30°C，搖床轉(zhuǎn)速150-160轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時(shí)間4_6天，即得一級(jí)液體種子；將培養(yǎng)好的一級(jí)液體種子轉(zhuǎn)接到裝有培養(yǎng)基的搖瓶中進(jìn)行二級(jí)液體種子培養(yǎng)，二級(jí)液體種子的培養(yǎng)基配方與培養(yǎng)條件與一級(jí)液體種子相同，培養(yǎng)時(shí)間5-8天，即得二級(jí)液體種子；(3)塊菌深層發(fā)酵其中發(fā)酵罐培養(yǎng)基(g/100ml)麥芽糖6-10%，蛋白胨2-4%，黨參提取物4-10%， 枸杞提取物8-20 %，磷酸氫二鉀0. 5-0. 8 %，硫酸鎂0. 4-0. 6 %，馬鈴薯8_20 %，調(diào)PH值為 5. 5-6. 5 ；將二級(jí)液體種子接種到裝有上述培養(yǎng)基發(fā)酵罐中，接種量為5-15%，培養(yǎng)溫度 20-30°C，攪拌轉(zhuǎn)速170-190轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵M小時(shí)后，每隔16小時(shí)取發(fā)酵液樣鏡檢，當(dāng)每毫升培養(yǎng)液內(nèi)含有800-1000個(gè)塊菌菌株時(shí)，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，即得深層發(fā)酵塊菌菌液；(4)塊菌發(fā)酵液與咖啡流浸膏的混配發(fā)酵將咖啡豆用石灰乳堿化，然后粉碎至45-55目，加入濃度為30%-70%的乙醇或加入乙酸乙酯，提取，提取液過(guò)濾，濃縮，得到咖啡豆浸膏，用注射用水將咖啡豆浸膏調(diào)至含水量35-40%，以納豆芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌，以1 1的比例進(jìn)行混種發(fā)酵；將混種發(fā)酵咖啡流浸膏滅菌，將深層發(fā)酵得到的塊菌菌液加入流浸膏中，其中深層發(fā)酵塊菌菌液與混種發(fā)酵咖啡流浸膏按重量比1-300 1-200混合；培養(yǎng)溫度20-30°C，攪拌機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)150-160轉(zhuǎn) /分鐘，連續(xù)發(fā)酵6-9天，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液濃縮，干燥，制粒，封裝既得最終產(chǎn)品。其中塊菌為黑孢塊菌、中國(guó)塊菌、印度塊菌、白塊菌、夏塊菌、松露中一種。其中(4)中將混種發(fā)酵咖啡流浸膏滅菌，將深層發(fā)酵得到的塊菌菌液加入流浸膏中，培養(yǎng)溫度20-30°C，攪拌機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)150-160轉(zhuǎn)/分鐘，連續(xù)發(fā)酵6_9天，培養(yǎng)3_5天后加入菠蘿汁、橄欖汁、荔枝汁、香茅草汁、香蘭葉汁，藍(lán)莓汁的一種或幾種。其中食品包括飲料。制備實(shí)施例實(shí)施例1一種塊菌和咖啡豆為原料食品的制備方法(1)菌種的制備選取新鮮未成熟的塊菌子囊果直接用刀劃開，挑取中央健壯且未接觸刀的組織塊，直接接種到培養(yǎng)基平板，在20°C恒溫黑暗中培養(yǎng)20天，然后將菌絲植入試管內(nèi)的斜面培養(yǎng)基上，在20°C條件下進(jìn)行菌絲培養(yǎng)，待菌絲布滿斜面培養(yǎng)基后，即得菌種；其中培養(yǎng)基為(g/100ml)馬鈴薯10%，枸杞提取物10%，黨參提取物5%，麥芽糖 4 %，蛋白胨0. 4 %，硫酸鎂0. 4 %，瓊脂1 %，酵母膏0. 4 %，磷酸二氫鉀0.4%;用馬鈴薯煮汁，沸騰8分鐘后，取濾液，將上述其他原料放入濾液中，邊煮邊攪，帶全部溶解后，趁熱滅菌，即得培養(yǎng)基；(2)液體菌種培養(yǎng)液體菌種分一級(jí)液體種子、二級(jí)液體種子，培養(yǎng)基均為(g/100ml):蛋白胨1%，麥芽糖4 %，黨參提取物5 %，枸杞提取物10 %，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.2%，馬鈴薯10 % ； 培養(yǎng)基制備方法為將馬鈴薯粉碎，加水提取得到提取液，與上述其余成份混合，定容，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)PH值到5. 5，滅菌，既得；將斜面菌種轉(zhuǎn)接入裝有培養(yǎng)基的搖瓶中，進(jìn)行一級(jí)液體種子培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為 20°C，搖床轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時(shí)間4天，即得一級(jí)液體種子；將培養(yǎng)好的一級(jí)液體種子轉(zhuǎn)接到裝有培養(yǎng)基的搖瓶中進(jìn)行二級(jí)液體種子培養(yǎng)，二級(jí)液體種子的培養(yǎng)基配方與培養(yǎng)條件與一級(jí)液體種子相同，培養(yǎng)時(shí)間5天，即得二級(jí)液體種子；(3)塊菌深層發(fā)酵其中發(fā)酵罐培養(yǎng)基(g/100ml)麥芽糖6%，蛋白胨2%，黨參提取物4%，枸杞提取物8%，磷酸氫二鉀0.5%，硫酸鎂0.4%，馬鈴薯8%，調(diào)PH值為5.5 ；將二級(jí)液體種子接種到裝有上述培養(yǎng)基發(fā)酵罐中，接種量為5-15%，培養(yǎng)溫度 200C，攪拌轉(zhuǎn)速170轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵M小時(shí)后，每隔16小時(shí)取發(fā)酵液樣鏡檢，當(dāng)每毫升培養(yǎng)液內(nèi)含有800-1000個(gè)塊菌菌株時(shí)，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，即得深層發(fā)酵塊菌菌液；(4)塊菌發(fā)酵液與咖啡流浸膏的混配發(fā)酵將咖啡豆用石灰乳堿化，然后粉碎至45-55目，加入濃度為30%的乙醇，提取，提取液過(guò)濾，濃縮，得到咖啡豆浸膏，用注射用水將咖啡豆浸膏調(diào)至含水量35%，以納豆芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌，以1 1的比例進(jìn)行混種發(fā)酵；將混種發(fā)酵咖啡流浸膏滅菌，將深層發(fā)酵得到的塊菌菌液加入流浸膏中，其中深層發(fā)酵塊菌菌液與混種發(fā)酵咖啡流浸膏按重量比 1 1混合；培養(yǎng)溫度20°c，攪拌機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)150轉(zhuǎn)/分鐘，連續(xù)發(fā)酵6天，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液濃縮，干燥，制粒，封裝既得最終產(chǎn)品。其中塊菌為黑孢塊菌、中國(guó)塊菌、印度塊菌、白塊菌、夏塊菌、松露中一種。其中食品包括飲料。實(shí)施例2一種塊菌和咖啡豆為原料食品的制備方法(1)菌種的制備選取新鮮未成熟的塊菌子囊果直接用刀劃開，挑取中央健壯且未接觸刀的組織塊，直接接種到培養(yǎng)基平板，在25°C恒溫黑暗中培養(yǎng)5天，然后將菌絲植入試管內(nèi)的斜面培養(yǎng)基上，在30°C條件下進(jìn)行菌絲培養(yǎng)，待菌絲布滿斜面培養(yǎng)基后，即得菌種；其中培養(yǎng)基為(g/100ml)馬鈴薯20%，枸杞提取物20%，黨參提取物10%，麥芽糖6 %，蛋白胨0. 6 %，硫酸鎂0. 6 %，瓊脂3 %，酵母膏0.6%，磷酸二氫鉀0. 6 % ；用馬鈴薯煮汁，沸騰20分鐘后，取濾液，將上述其他原料放入濾液中，邊煮邊攪，帶全部溶解后，趁熱滅菌，即得培養(yǎng)基；(2)液體菌種培養(yǎng)液體菌種分一級(jí)液體種子、二級(jí)液體種子，培養(yǎng)基均為(g/100ml):蛋白胨3%，麥芽糖8 %，黨參提取物15 %，枸杞提取物25 %，磷酸氫二鉀0. 6 %，硫酸鎂0. 6 %，馬鈴薯 25% ；培養(yǎng)基制備方法為將馬鈴薯粉碎，加水提取得到提取液，與上述其余成份混合，定容，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)PH值到6. 5，滅菌，既得；將斜面菌種轉(zhuǎn)接入裝有培養(yǎng)基的搖瓶中，進(jìn)行一級(jí)液體種子培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為 30°C，搖床轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時(shí)間6天，即得一級(jí)液體種子；將培養(yǎng)好的一級(jí)液體種子轉(zhuǎn)接到裝有培養(yǎng)基的搖瓶中進(jìn)行二級(jí)液體種子培養(yǎng)，二級(jí)液體種子的培養(yǎng)基配方與培養(yǎng)條件與一級(jí)液體種子相同，培養(yǎng)時(shí)間5-8天，即得二級(jí)液體種子；(3)塊菌深層發(fā)酵其中發(fā)酵罐培養(yǎng)基(g/100ml)麥芽糖10%，蛋白胨4%，黨參提取物10%，枸杞提取物20 %，磷酸氫二鉀0.8%，硫酸鎂0.6%，馬鈴薯20 %，調(diào)PH值為6. 5 ；將二級(jí)液體種子接種到裝有上述培養(yǎng)基發(fā)酵罐中，接種量為15%，培養(yǎng)溫度 300C，攪拌轉(zhuǎn)190轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵M小時(shí)后，每隔16小時(shí)取發(fā)酵液樣鏡檢，當(dāng)每毫升培養(yǎng)液內(nèi)含有800-1000個(gè)塊菌菌株時(shí)，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，即得深層發(fā)酵塊菌菌液；(4)塊菌發(fā)酵液與咖啡流浸膏的混配發(fā)酵將咖啡豆用石灰乳堿化，然后粉碎至45-55目，加入濃度為70%的乙醇，提取，提取液過(guò)濾，濃縮，得到咖啡豆浸膏，用注射用水將咖啡豆浸膏調(diào)至含水量40%，以納豆芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌，以1 1的比例進(jìn)行混種發(fā)酵；將混種發(fā)酵咖啡流浸膏滅菌，將深層發(fā)酵得到的塊菌菌液加入流浸膏中，其中深層發(fā)酵塊菌菌液與混種發(fā)酵咖啡流浸膏按重量比 3 1-2混合；培養(yǎng)溫度30°C，攪拌機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)160轉(zhuǎn)/分鐘，連續(xù)發(fā)酵9天，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液濃縮，干燥，制粒，封裝既得最終產(chǎn)品。其中食品包括飲料。實(shí)施例3一種塊菌和咖啡豆為原料食品的制備方法(1)菌種的制備選取新鮮未成熟的塊菌子囊果直接用刀劃開，挑取中央健壯且未接觸刀的組織塊，直接接種到培養(yǎng)基平板，在23°C恒溫黑暗中培養(yǎng)10天，然后將菌絲植入試管內(nèi)的斜面培養(yǎng)基上，在25°C條件下進(jìn)行菌絲培養(yǎng)，待菌絲布滿斜面培養(yǎng)基后，即得菌種；其中培養(yǎng)基為(g/100ml)馬鈴薯15%，枸杞提取物15%，黨參提取物8%，麥芽糖 5%，蛋白胨0. 5 %，硫酸鎂0. 5 %，瓊脂2 %，酵母膏0.6%，磷酸二氫鉀0. 6 % ；用馬鈴薯煮汁，沸騰15分鐘后，取濾液，將上述其他原料放入濾液中，邊煮邊攪，帶全部溶解后，趁熱滅菌，即得培養(yǎng)基；(2)液體菌種培養(yǎng)液體菌種分一級(jí)液體種子、二級(jí)液體種子，培養(yǎng)基均為(g/100ml):蛋白胨2%， 麥芽糖6 %，黨參提取物10 %，枸杞提取物20 %，磷酸氫二鉀0.5%，硫酸鎂0.4%，馬鈴薯 15% ；培養(yǎng)基制備方法為將馬鈴薯粉碎，加水提取得到提取液，與上述其余成份混合，定容，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)PH值到6. 0，滅菌，既得；將斜面菌種轉(zhuǎn)接入裝有培養(yǎng)基的搖瓶中，進(jìn)行一級(jí)液體種子培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為 25°C，搖床轉(zhuǎn)速155轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時(shí)間5天，即得一級(jí)液體種子；
將培養(yǎng)好的一級(jí)液體種子轉(zhuǎn)接到裝有培養(yǎng)基的搖瓶中進(jìn)行二級(jí)液體種子培養(yǎng)，二級(jí)液體種子的培養(yǎng)基配方與培養(yǎng)條件與一級(jí)液體種子相同，培養(yǎng)時(shí)間6天，即得二級(jí)液體種子；(3)塊菌深層發(fā)酵其中發(fā)酵罐培養(yǎng)基(g/100ml)麥芽糖8%，蛋白胨3%，黨參提取物8%，枸杞提取物15 %，磷酸氫二鉀0.7%，硫酸鎂0.5%，馬鈴薯15 %，調(diào)PH值為6. 0 ；將二級(jí)液體種子接種到裝有上述培養(yǎng)基發(fā)酵罐中，接種量為10%，培養(yǎng)溫度 250C，攪拌轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵M小時(shí)后，每隔16小時(shí)取發(fā)酵液樣鏡檢，當(dāng)每毫升培養(yǎng)液內(nèi)含有800-1000個(gè)塊菌菌株時(shí)，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，即得深層發(fā)酵塊菌菌液；(4)塊菌發(fā)酵液與咖啡流浸膏的混配發(fā)酵將咖啡豆用石灰乳堿化，然后粉碎至45-55目，加入濃度為50%的乙醇，提取，提取液過(guò)濾，濃縮，得到咖啡豆浸膏，用注射用水將咖啡豆浸膏調(diào)至含水量38 %，以納豆芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌，以1 1的比例進(jìn)行混種發(fā)酵；將混種發(fā)酵咖啡流浸膏滅菌，將深層發(fā)酵得到的塊菌菌液加入流浸膏中，其中深層發(fā)酵塊菌菌液與混種發(fā)酵咖啡流浸膏按重量比 1.5 1混合；培養(yǎng)溫度25°C，攪拌機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)155轉(zhuǎn)/分鐘，連續(xù)發(fā)酵7天，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液濃縮，干燥，制粒，封裝既得最終產(chǎn)品。其中食品包括飲料。實(shí)施例4一種塊菌和咖啡豆為原料食品的制備方法(1)菌種的制備選取新鮮未成熟的塊菌子囊果直接用刀劃開，挑取中央健壯且未接觸刀的組織塊，直接接種到培養(yǎng)基平板，在恒溫黑暗中培養(yǎng)15天，然后將菌絲植入試管內(nèi)的斜面培養(yǎng)基上，在條件下進(jìn)行菌絲培養(yǎng)，待菌絲布滿斜面培養(yǎng)基后，即得菌種；其中培養(yǎng)基為(g/100ml)馬鈴薯15%，枸杞提取物18%，黨參提取物7%，麥芽糖 4%，蛋白胨0. 6 %，硫酸鎂0. 5 %，瓊脂3 %，酵母膏0.4%，磷酸二氫鉀0. 5 % ；用馬鈴薯煮汁，沸騰16分鐘后，取濾液，將上述其他原料放入濾液中，邊煮邊攪，帶全部溶解后，趁熱滅菌，即得培養(yǎng)基；(2)液體菌種培養(yǎng)液體菌種分一級(jí)液體種子、二級(jí)液體種子，培養(yǎng)基均為(g/100ml):蛋白胨3%， 麥芽糖4%，黨參提取物15 %，枸杞提取物16 %，磷酸氫二鉀0. 4 %，硫酸鎂0. 5 %，馬鈴薯 16% ；培養(yǎng)基制備方法為將馬鈴薯粉碎，加水提取得到提取液，與上訴其余成份混合，定容，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)PH值到6. 0，滅菌，既得；將斜面菌種轉(zhuǎn)接入裝有培養(yǎng)基的搖瓶中，進(jìn)行一級(jí)液體種子培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為 25°C，搖床轉(zhuǎn)速155轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時(shí)間5天，即得一級(jí)液體種子；將培養(yǎng)好的一級(jí)液體種子轉(zhuǎn)接到裝有培養(yǎng)基的搖瓶中進(jìn)行二級(jí)液體種子培養(yǎng)，二級(jí)液體種子的培養(yǎng)基配方與培養(yǎng)條件與一級(jí)液體種子相同，培養(yǎng)時(shí)間7天，即得二級(jí)液體種子；(3)塊菌深層發(fā)酵其中發(fā)酵罐培養(yǎng)基(g/100ml)麥芽糖9%，蛋白胨2%，黨參提取物9%，枸杞提取物12 %，磷酸氫二鉀0.6%，硫酸鎂0.4%，馬鈴薯18 %，調(diào)PH值為6 ；將二級(jí)液體種子接種到裝有上述培養(yǎng)基發(fā)酵罐中，接種量為13%，培養(yǎng)溫度 280C，攪拌轉(zhuǎn)速185轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵M小時(shí)后，每隔16小時(shí)取發(fā)酵液樣鏡檢，當(dāng)每毫升培養(yǎng)液內(nèi)含有800-1000個(gè)塊菌菌株時(shí)，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，即得深層發(fā)酵塊菌菌液；(4)塊菌發(fā)酵液與咖啡流浸膏的混配發(fā)酵將咖啡豆用石灰乳堿化，然后粉碎至45-55目，加入加入乙酸乙酯，提取，提取液過(guò)濾，濃縮，得到咖啡豆浸膏，用注射用水將咖啡豆浸膏調(diào)至含水量36%，以納豆芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌，以1 1的比例進(jìn)行混種發(fā)酵；將混種發(fā)酵咖啡流浸膏滅菌，將深層發(fā)酵得到的塊菌菌液加入流浸膏中，其中深層發(fā)酵塊菌菌液與混種發(fā)酵咖啡流浸膏按重量比 19 9混合；培養(yǎng)溫度^TC,攪拌機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)155轉(zhuǎn)/分鐘，連續(xù)發(fā)酵9天，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液濃縮，干燥，制粒，封裝既得最終產(chǎn)品。其中食品包括飲料。藥理試驗(yàn)例試驗(yàn)1提高免疫力試驗(yàn)試驗(yàn)動(dòng)物BALB/C雄性小鼠，體重18_20g。試驗(yàn)藥物藥物1組天然塊菌；藥物2組實(shí)施例1得到產(chǎn)品。
藥物3組實(shí)施例2得到產(chǎn)品。藥物4組實(shí)施例3得到產(chǎn)品。試驗(yàn)方法取小鼠，隨機(jī)分組，事先在小鼠造模為免疫力低下，正常組不造模，造模成功開始給藥，對(duì)照組給予生理鹽水0. 2ml/20go給藥1-4組組灌胃給藥，給藥量3g原料/ kg，連續(xù)給藥30天，停藥后M小時(shí)斷頭放血處死小鼠，在無(wú)菌條件下取出脾臟，用1640培養(yǎng)液(含10%小牛血清)制成脾細(xì)胞懸液，并將小鼠脾細(xì)胞調(diào)整到5X IO6細(xì)胞/ml，加到96 孔培養(yǎng)板中，每孔IOOul，每個(gè)脾加雙份(即一個(gè)加ConA，一個(gè)不加ConA)。ConA 20ul (濃度為100ug/ml)，1640培養(yǎng)液80ul，使每孔至200ul體積，于5% C0237°C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)72小時(shí)，終止培養(yǎng)前24小時(shí)，每孔加3H — TdR3. 7X109(iucr)。用細(xì)胞收集器(TlTERTEK CELL HARVESTER 550)收集細(xì)胞于49型玻璃纖維濾紙上，依次用蒸餾水、5%三氨醋酸、無(wú)水乙醇洗滌，將濾紙片置60 V溫箱烘干，加到含5ml閃爍液的杯內(nèi)，經(jīng)液閃儀(BECKMEN LS 9800) 測(cè)參入放射性活度(cpm)，然后計(jì)算刺激指數(shù)(Si)，S卩SI =加入ConA孔cpm/未加入ConA 孑L cpm。表1不同藥物對(duì)免疫力低下小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響
權(quán)利要求
1.一種塊菌和咖啡豆為原料食品的制備方法，其特征在于(1)菌種的制備選取新鮮未成熟的塊菌子囊果直接用刀劃開，挑取中央健壯且未接觸刀的組織塊，直接接種到培養(yǎng)基平板，在20-25°C恒溫黑暗中培養(yǎng)5-20天，然后將菌絲植入試管內(nèi)的斜面培養(yǎng)基上，在20-30°C條件下進(jìn)行菌絲培養(yǎng)，待菌絲布滿斜面培養(yǎng)基后，即得菌種；其中培養(yǎng)基為(g/100ml)馬鈴薯10-20%，枸杞提取物10-20%，黨參提取物5-10%， 麥芽糖4-6 %，蛋白胨0. 4-0. 6 %，硫酸鎂0. 4-0. 6 %，瓊脂1-3 %，酵母膏0. 4-0. 6 %，磷酸二氫鉀0. 4-0. 6% ；用馬鈴薯煮汁，沸騰8-20分鐘后，取濾液，將上述其他原料放入濾液中，邊煮邊攪，帶全部溶解后，趁熱滅菌，即得培養(yǎng)基；(2)液體菌種培養(yǎng)液體菌種分一級(jí)液體種子、二級(jí)液體種子，培養(yǎng)基均為(g/100ml):蛋白胨1_3%， 麥芽糖4-8 %，黨參提取物5-15 %，枸杞提取物10-25 %，磷酸氫二鉀0. 4-0. 6 %，硫酸鎂 0. 2-0. 6%，馬鈴薯10-25%;培養(yǎng)基制備方法為將馬鈴薯粉碎，加水提取得到提取液，與上述其余成份混合，定容，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)PH值到5. 5-6. 5，滅菌，既得；將斜面菌種轉(zhuǎn)接入裝有培養(yǎng)基的搖瓶中，進(jìn)行一級(jí)液體種子培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為 20-30°C，搖床轉(zhuǎn)速150-160轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時(shí)間4_6天，即得一級(jí)液體種子；將培養(yǎng)好的一級(jí)液體種子轉(zhuǎn)接到裝有培養(yǎng)基的搖瓶中進(jìn)行二級(jí)液體種子培養(yǎng)，二級(jí)液體種子的培養(yǎng)基配方與培養(yǎng)條件與一級(jí)液體種子相同，培養(yǎng)時(shí)間5-8天，即得二級(jí)液體種子；(3)塊菌深層發(fā)酵其中發(fā)酵罐培養(yǎng)基(g/100ml)麥芽糖6-10%，蛋白胨2-4%，黨參提取物4-10%，枸杞提取物8-20 %，磷酸氫二鉀0. 5-0. 8 %，硫酸鎂0. 4-0. 6 %，馬鈴薯8-20 %，調(diào)PH值為 5. 5-6. 5 ；將二級(jí)液體種子接種到裝有上述培養(yǎng)基發(fā)酵罐中，接種量為5-15%，培養(yǎng)溫度 20-30°C，攪拌轉(zhuǎn)速170-190轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵M小時(shí)后，每隔16小時(shí)取發(fā)酵液樣鏡檢，當(dāng)每毫升培養(yǎng)液內(nèi)含有800-1000個(gè)塊菌菌株時(shí)，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，即得深層發(fā)酵塊菌菌液；(4)塊菌發(fā)酵液與咖啡流浸膏的混配發(fā)酵將咖啡豆用石灰乳堿化，然后粉碎至45-55目，加入濃度為30% -70%的乙醇或加入乙酸乙酯，提取，提取液過(guò)濾，濃縮，得到咖啡豆浸膏，用注射用水將咖啡豆浸膏調(diào)至含水量 35-40%，以納豆芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌，以1 1的比例進(jìn)行混種發(fā)酵；將混種發(fā)酵咖啡流浸膏滅菌，將深層發(fā)酵得到的塊菌菌液加入流浸膏中，其中深層發(fā)酵塊菌菌液與混種發(fā)酵咖啡流浸膏按重量比1-300 1-200混合；培養(yǎng)溫度20-30°C，攪拌機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)150-160轉(zhuǎn)/分鐘，連續(xù)發(fā)酵6-9天，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液濃縮，干燥，制粒，封裝既得最終產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種塊菌和咖啡豆為原料食品的制備方法，其中塊菌為黑孢塊菌、中國(guó)塊菌、印度塊菌、白塊菌、夏塊菌、松露中一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種塊菌和咖啡豆為原料食品的制備方法，其中(4)中將混種發(fā)酵咖啡流浸膏滅菌，將深層發(fā)酵得到的塊菌菌液加入流浸膏中，培養(yǎng)溫度20-30°C，攪拌機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)150-160轉(zhuǎn)/分鐘，連續(xù)發(fā)酵6-9天，培養(yǎng)3-5天后加入菠蘿汁、橄欖汁、荔枝汁、 香茅草汁、香蘭葉汁，藍(lán)莓汁，鮮牛奶的一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種塊菌和咖啡豆為原料食品的制備方法，其中食品包括飲料。全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥保健技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明公開了一種原料為塊菌和咖啡豆的保健食品的制備方法。本申請(qǐng)人通過(guò)多年研究，得到一種塊菌與咖啡豆為原料的食品的制備方法，該方法得到的保健食品用于體虛多病、陽(yáng)虛等方面的患者，具有很好的保健作用；通過(guò)藥理試驗(yàn)表明，該食品具有很好的提高免疫力、抗疲勞等方面的作用。
文檔編號(hào)A23L1/29GK102224925SQ20111011614
公開日2011年10月26日 申請(qǐng)日期2011年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月6日
發(fā)明者郭景龍 申請(qǐng)人:郭景龍