專利名稱：一種哈茨木霉菌株及其用該菌株制備右旋糖酐酶的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物技術(shù)和發(fā)酵工程領(lǐng)域，具體地說是一種產(chǎn)右旋糖酐酶的哈茨木霉菌株的分離，以及利用該菌株發(fā)酵制備高酶活性的右旋糖酐酶的工藝。
背景技術(shù)：
在醫(yī)藥工業(yè)中，分子量70kDa、40kDa、20kDa的右旋糖酐是目前公認的優(yōu)良血漿代用品，有增加血容量、改善微循環(huán)的作用，臨床主要用于治療失血性休克等。目前我國90% 以上的右旋糖酐制造企業(yè)多采用鹽酸水解高分子右旋糖酐的工藝，先利用右旋糖酐蔗糖酶合成高分子右旋糖酐，再利用鹽酸進行水解得到中分子、小分子藥用級右旋糖酐。由于此工藝利用鹽酸進行水解生產(chǎn)藥用級右旋糖酐，所制備的右旋糖酐含有大量的氯化物及氮化物而嚴重影響了產(chǎn)品的質(zhì)量，產(chǎn)品在臨床使用過程中常出現(xiàn)過敏反應，可引起皮膚反應、嚴重的呼吸和循環(huán)衰竭，甚至導致死亡。同時由于利用鹽酸水解需要高溫高酸等惡劣條件，不利于環(huán)保、低碳。如果采用本發(fā)明的哈茨木霉產(chǎn)生的右旋糖酐酶催化水解高分子右旋糖酐，通過控制反應條件調(diào)控催化水解的右旋糖酐分子量，就能減少氯化物對產(chǎn)品質(zhì)量的影響，同時由于本發(fā)明制備的右旋糖酐酶在水解高分子右旋糖酐時，能夠優(yōu)先降解大分子量的右旋糖酐，然后再進一步降解中小分子量的右旋糖酐，如此便能夠得到分子量分布較集中的右旋糖酐，得到高品質(zhì)的右旋糖酐，目前國內(nèi)外的右旋糖酐酶主要是從薄青霉(Penicillium lilacinum)和細麗毛殼屬(Chaetomium sp.)等菌株培養(yǎng)得到，上述菌株產(chǎn)生的右旋糖酐酶在水解高分子右旋糖酐時不具備優(yōu)先降解大分子糖酐的能力，得到的產(chǎn)品分子量分布不集中，同時上述兩種菌株制備的右旋糖酐酶酶活力較低，且制備成本高，目前尚未有大量利用右旋糖酐酶水解高分子糖制備藥用級右旋糖酐的報道。而本發(fā)明的哈茨木霉制備的右旋糖酐酶活力高，且成本也較低。利用本發(fā)明制備的右旋糖酐酶生產(chǎn)右旋糖酐反應條件溫和、 能耗低、酶的使用量小、成本低，從而實現(xiàn)了中、小分子量多糖生產(chǎn)工藝的綠色、環(huán)保、低碳的目標，同時提升產(chǎn)品品質(zhì)、提升競爭力。在制糖工業(yè)中，葡聚糖的存在會增加制糖過程困難，主要體現(xiàn)在糖液粘度增加、過濾困難、能耗增加等，同時還會直接造成糖分的損失。因此這些問題是我國糖業(yè)界一個迫切需要的解決的問題。利用本發(fā)明制備的右旋糖酐酶能夠催化水解葡聚糖中的α-1，6糖苷鍵，并釋放出異麥芽糖和低聚異麥芽糖，最終的水解產(chǎn)物為異麥芽糖，由于本發(fā)明制備的右旋糖酐酶酶活力高，能夠高效的催化水解葡聚糖，成本較低，從而能快速的葡聚糖轉(zhuǎn)化為小分子的寡糖，降低粘度，提高糖的品質(zhì)，增加了蔗糖的回收率等。目前國內(nèi)外的右旋糖酐酶主要是從薄青霉(Penicillium lilacinum)和細麗毛殼屬(Chaetomium sp.)等菌株培養(yǎng)得到，由于制備得到的右旋糖酐酶酶活力較低、制備成本高，因此尚未有大量應用于制糖工業(yè)的報道。因此利用本發(fā)明的高酶活性的右旋糖酐酶對制糖行業(yè)的清潔生產(chǎn)、技術(shù)進步具有顯著的積極意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處，提供一種從土壤中篩選出的高產(chǎn)右旋糖酐酶的哈茨木霉菌株以用于制備高酶活性的右旋糖酐酶。本發(fā)明解決技術(shù)問題采用如下方案本發(fā)明提供一種從土壤中篩選出的高產(chǎn)右旋糖酐酶的哈茨木霉(Hypocrea lixii)菌株，該菌株保藏名稱為哈茨木霉(Hypocrea lixii) F1002，分類命名及拉丁文名為Trichoderma harzianum，保藏單位中國微生物菌種保藏中心，保藏日期2011年03月 31 日，保藏號為 CGMCC No. 4725。本發(fā)明的微生物F1002菌株具有下述性質(zhì)形態(tài)特征菌株F1002在菌株在PDA培養(yǎng)基(配方每IOOml水中含有馬鈴薯20g，蔗糖2g， 瓊脂1.6g)上28°C恒溫培養(yǎng)2d后肉眼可看到清晰的菌絲體，菌絲較粗而長。培養(yǎng)5d菌落較大，生長沒有局限性，菌落可以擴展到整個培養(yǎng)皿。分生孢子面為青色，反面略帶黃色，菌落呈現(xiàn)或緊或松的蛛網(wǎng)狀。在顯微鏡下觀察分生孢子梗從菌絲體側(cè)枝生長出來，垂直分枝生長，其直徑為2.5 μ m-3. 5 μ m。分生孢子為圓形，其直徑為3. 0 μ m_4. 5 μ m。菌株在發(fā)酵培養(yǎng)基(配方Dextran 70kDa 1. 5g，蛋白胨 1. 0g, K2HPO4 · 3H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 02g, KCl 0. 02g, FeSO4 · 7H20 0. OOlg，瓊月旨 1. 6g，水 100ml, pH5. 0 5. 5)上 28°C恒溫培養(yǎng) 5d 后，菌落分生孢子面為青綠色，反面略帶黃色。菌落呈現(xiàn)絨毛狀和棉絮，菌落與培養(yǎng)基的連接緊密。ITSrDNA 基因序列利用ITS rDNA特異引物對菌株進行PCR擴增得到560bp的目的DNA片段，利用 Blast軟件將測序結(jié)果與GenBank(http//www. ncbi. nlm. nih. gov/)網(wǎng)站中的相關(guān)序列進行同源性比較，結(jié)果顯示菌株F1002的560bp的目的DNA序列與哈茨木霉的基因序列相似性最高，同源性高達99%。同時將得到的菌株F1002的560bp的目的DNA片段的序列提交到GenBank上，獲得GenBank登陸號為HQ647326。本發(fā)明還提供了哈茨木霉(Hypocrea lixii)菌株F1002在制備高酶活性的右旋糖酐酶中的應用。本發(fā)明的微生物F1002菌株的分離方法是在99ml無菌水中加入Ig 土樣(土樣分別取自安徽合肥、安徽蛘埠、四川成都) 制備土壤稀釋液，在PDA培養(yǎng)基內(nèi)加入青霉素溶液(100ml加入50 μ 1)，倒入培養(yǎng)皿中， 靜止冷卻成平板。采用稀釋涂布法將稀釋后的土壤溶液分別涂布于平板上，然后倒置于 28°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待菌長出后，用接種針將菌株挑取到另一滅菌的篩選培養(yǎng)基(配方=Dextran T2000 lg, NaNO3 0. 3g, K2HPO4 · 3H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 02g, KCl 0. 02g, FeSO4 · 7H200. 001g，瓊脂1. 6g，水100ml, pH5. 0 5. 5)上進行劃線分離，然后將能夠在篩選培養(yǎng)基上生長的單菌落挑取下來，轉(zhuǎn)接到發(fā)酵培養(yǎng)基(配方=Dextran 70kDa 1.5g，蛋白胨 1. 0g，K2HPO4 ·3Η20 0. 4g，MgSO4 · 7H20 0.02g，KCl 0. 02g，F(xiàn)eSO4 · 7H20 0. 001g，水 100ml， pH5.0 5. 5)上，于28°C、220r/min恒溫繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)6天。將發(fā)酵液用于平半透明圈法。經(jīng)過平板透明圈法，將菌株發(fā)酵后的上清液經(jīng)過纖維素酯微孔濾膜(規(guī)格 (PSSmmdLga22ym)無菌過濾處理。在右旋糖酐瓊脂平板上打孔，將篩選菌株的培養(yǎng)液 150 μ L加入孔中，同時在每一塊檢測平板中，以無菌水(150 μ L)作為陰性對照，以商業(yè)右旋糖酐酶液(150yL)做陽性對照。在28°C條件下放置24h后，觀察孔周圍產(chǎn)生的透明圈大小，透明圈越大表明培養(yǎng)液所含的右旋糖酐酶酶活力越高。選擇能產(chǎn)生較大透明圈的菌株進行DNS比色法復篩。將初篩得到的活性菌株的發(fā)酵培養(yǎng)液用DNS比色法檢測酶活力大小。在酶反應體系中加入待測液，測定酶活，右旋糖酐酶的活力測定為將4mL 0. 02mol/L pH 5. 0的醋酸鹽緩沖液配制的5%右旋糖酐70kDa溶液置于25°C保溫lOmin，再加入適當稀釋的酶液ImL保溫30min后，利用3，5 二硝基水楊酸(DNS)法測定生成的還原糖。以在上述條件下每小時產(chǎn)生Img還原糖(葡萄糖當量)所需要的酶量為一個酶活力單位(U)。最后篩選出能產(chǎn)生較高右旋糖酐酶酶活性的菌株。通過初篩及復篩分離純化得到單菌落純培養(yǎng)哈茨木霉F1002。本發(fā)明的微生物F1002菌株的培養(yǎng)方法是先采用固體PDA培養(yǎng)基，所述固體PDA培養(yǎng)基組分為每IOOml水中含有馬鈴薯 20g，蔗糖2g，瓊脂1. 6g ；將上述菌株在試管斜面培養(yǎng)基上接種后，于28°C -30°C下活化培養(yǎng)，兩天后，再采用液體PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，液體PDA培養(yǎng)基組分為每IOOml水中含有馬鈴薯 20g，蔗糖2g ；將試管斜面活化的菌株接種在錐形瓶PDA液體培養(yǎng)基中30°C、220r/min恒溫培養(yǎng)5天。利用本發(fā)明的微生物液體發(fā)酵制備右旋糖酐酶的方法按以下步驟進行1)菌株活化采用滅菌固體PDA培養(yǎng)基，將F1002菌株接種在試管培養(yǎng)基上， 28-30°C下培養(yǎng)48-60h，然后用于菌株種子液制備；2)菌株種子發(fā)酵培養(yǎng)種子培養(yǎng)基組分為每IOOml水中含有Dextran 70kDa lg, 蛋白胨 0. 5g, K2HPO4 · 3H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 02g, KCl 0. 02g, FeSO4 · 7H20 0. OOlg, pH5. 0 5. 5，將步驟1)中的菌株接種到所述的種子培養(yǎng)基中，置于恒溫搖床上28-30°C，轉(zhuǎn)速220r/min下培養(yǎng)48-72小時作為種子液，然后將種子液用于發(fā)酵制備右旋糖酐酶；3)發(fā)酵制備右旋糖酐酶發(fā)酵培養(yǎng)基組分為每IOOml水中含有Dextran 70kDa 1. 5g，蛋白胨 1. 0g，K2HPO4 ·3Η20 0. 4g，MgSO4 · 7H20 0.02g，KCl 0· 02g，F(xiàn)eSO4 · 7Η20 0. OOlg, pH5. 0 5. 5，利用滅菌后發(fā)酵培養(yǎng)基，將步驟2)中的種子液按5%的比例接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于恒溫搖床上28-30°C，轉(zhuǎn)速220r/min下培養(yǎng)6天得到相應的右旋糖酐酶的發(fā)酵液，然后將發(fā)酵液用于分離純化；4)右旋糖酐酶的分離純化將步驟3)中得到的右旋糖酐酶的發(fā)酵液通過過濾、離心分離菌體，然后選擇適當?shù)某瑸V膜截留，先用8萬分子量截留，除去8萬分子量以上的雜質(zhì)，再利用5萬分子量截留，得到較純的右旋糖酐酶，濃縮發(fā)酵液，再進行低壓冷凍干燥，得到右旋糖酐酶酶粉。本發(fā)明哈茨木霉F1002能夠產(chǎn)生高酶活性的右旋糖酐酶，并且產(chǎn)生的右旋糖酐酶為胞外酶。利用哈茨木霉F1002發(fā)酵法制備的右旋糖酐酶的特征在于它的最適作用溫度為 25°C到30°C，最適pH為5. 0到5. 5，穩(wěn)定pH為4. 0到6. 5。哈茨木霉F1002發(fā)酵產(chǎn)右旋糖酐酶的水平為大于60U/ml。利用F1002菌發(fā)酵制備得到高酶活性的右旋糖酐酶。將高酶活性的右旋糖酐酶用于工業(yè)制備右旋糖酐，一方面能夠提高中、小分子右旋糖酐的質(zhì)量。另一方面由于用酶法制備右旋糖酐，反應條件溫和、能耗低，從而可實現(xiàn)了中、小分子量右旋糖酐生產(chǎn)工藝的綠色、環(huán)保、低碳的目標。
本發(fā)明能夠用于酶法制備藥用級右旋糖酐，實現(xiàn)節(jié)能降耗、提升產(chǎn)品質(zhì)量，提升右旋糖酐在市場上的競爭力。同時該酶還可以用于消除葡聚糖在制糖行業(yè)的問題，對制糖行業(yè)的清潔生產(chǎn)和促進產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有顯著的積極意義。保藏信息菌株名稱哈茨木霉(Hypocrealixii)F1002保藏日期2011年03月31日保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏編號CGMCCNo. 4725。
具體實施例方式下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明酶活定義為一個酶活力單位(U)表示為在pH5. 0，溫度25°C下，每小時分解右旋糖酐70kDa所產(chǎn)生Img還原糖(葡萄糖當量)所需要的酶量。實施例1一株產(chǎn)右旋糖酐酶高酶活性菌株F1002的分離方法，其包括如下步驟在99ml無菌水中加入Ig 土樣(土樣分別取自安徽合肥、安徽蛘埠、四川成都) 制備土壤稀釋液，在PDA培養(yǎng)基內(nèi)加入青霉素溶液(100ml加入50 μ 1)，倒入培養(yǎng)皿中， 靜止冷卻成平板。采用稀釋涂布法將稀釋后的土壤溶液分別涂布于平板上，然后倒置于 28°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待菌長出后，用接種針將菌株挑取到另一滅菌的篩選培養(yǎng)基(配方=Dextran T2000 lg, NaNO3 0. 3g, K2HPO4 · 3H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 02g, KCl 0. 02g, FeSO4 · 7H200. OOlg，瓊脂1. 6g，水100ml, pH5. 0 5. 5)上進行劃線分離，然后將能夠在篩選培養(yǎng)基上生長的單菌落挑取下來，轉(zhuǎn)接到發(fā)酵培養(yǎng)基(配方=Dextran 70kDa 1.5g，蛋白胨 1. 0g，K2HPO4 ·3Η20 0. 4g，MgSO4 · 7H20 0.02g，KCl 0. 02g，F(xiàn)eSO4 · 7H20 0. OOlg，水 100ml， pH5.0 5. 5)上，于28°C、220r/min恒溫繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)6天。將發(fā)酵液用于平半透明圈法。經(jīng)過平板透明圈法，將菌株發(fā)酵后的上清液經(jīng)過纖維素酯微孔濾膜(規(guī)格 cp25mm，孔徑0.22μπι)無菌過濾處理。在右旋糖酐瓊脂平板上打孔，將篩選菌株的培養(yǎng)液 150 μ L加入孔中，同時在每一塊檢測平板中，以無菌水(150 μ L)作為陰性對照，以商業(yè)右旋糖酐酶液(150yL)做陽性對照。在28°C條件下放置24h后，觀察孔周圍產(chǎn)生的透明圈大小，透明圈越大表明培養(yǎng)液所含的右旋糖酐酶酶活力越高。同時選擇能產(chǎn)生較大透明圈的菌株進行DNS比色法復篩。將初篩得到的活性菌株的發(fā)酵培養(yǎng)液用DNS比色法檢測酶活力大小。在酶反應體系中加入待測液，測定酶活，右旋糖酐酶的活力測定為將4mL 0. 02mol/L pH 5. 0的醋酸鹽緩沖液配制的5%右旋糖酐70kDa溶液置于25°C保溫lOmin，再加入適當稀釋的酶液ImL保溫30min后，利用3，5 二硝基水楊酸(DNS)法測定生成的還原糖。以在上述條件下每小時產(chǎn)生Img還原糖(葡萄糖當量)所需要的酶量為一個酶活力單位(U)。最后篩選出能產(chǎn)生較高右旋糖酐酶酶活性的菌株。通過初篩及復篩分離純化得到單菌落純培養(yǎng)哈茨木霉F1002。實施例2上述菌株F1002的培養(yǎng)方法，其包括以下步驟
先采用固體PDA培養(yǎng)基，所述固體PDA培養(yǎng)基組分為每IOOml水中含有馬鈴薯 20g，蔗糖2g，瓊脂1. 6g ；將上述菌株在試管斜面培養(yǎng)基上接種后，于28°C -30°C下活化培養(yǎng)，兩天后，再采用液體PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，液體PDA培養(yǎng)基組分為每IOOml水中含有馬鈴薯 20g，蔗糖2g ；將試管斜面活化的菌株接種在錐形瓶PDA液體培養(yǎng)基中30°C、220r/min恒溫培養(yǎng)5天。實施例3一種利用本發(fā)明的微生物液體發(fā)酵制備右旋糖酐酶的工藝，其包括以下步驟進行1)菌株活化采用滅菌固體PDA培養(yǎng)基，將F1002菌株接種在試管培養(yǎng)基上， 28-30°C下培養(yǎng)48-60h，然后用于菌株種子液制備；2)菌株種子發(fā)酵培養(yǎng)種子培養(yǎng)基組分為每IOOml水中含有Dextran 70kDa lg, 蛋白胨 0. 5g, K2HPO4 · 3H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 02g, KCl 0. 02g, FeSO4 · 7H20 0. OOlg, pH5. 0 5. 5，將步驟1)中的菌株接種到所述的種子培養(yǎng)基中，置于恒溫搖床上28-30°C，轉(zhuǎn)速220r/min下培養(yǎng)48-72小時作為種子液，然后將種子液用于發(fā)酵制備右旋糖酐酶；3)發(fā)酵制備右旋糖酐酶發(fā)酵培養(yǎng)基組分為每IOOml水中含有Dextran 70kDa 1. 5g，蛋白胨 1. 0g，K2HPO4 ·3Η20 0. 4g，MgSO4 · 7H20 0.02g，KCl 0· 02g，F(xiàn)eSO4 · 7Η20 0. OOlg, pH5. 0 5. 5，利用滅菌后發(fā)酵培養(yǎng)基，將步驟2)中的種子液按5%的比例接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于恒溫搖床上28-30°C，轉(zhuǎn)速220r/min下培養(yǎng)6天得到相應的右旋糖酐酶的發(fā)酵液，測得發(fā)酵液中右旋糖酐酶酶活力為65U/ml，然后將發(fā)酵液用于分離純化；4)右旋糖酐酶的分離純化將步驟3)中得到的右旋糖酐酶的發(fā)酵液通過過濾、離心分離菌體，然后選擇適當?shù)某瑸V膜截留(先用8萬分子量截留，除去8萬分子量以上的雜質(zhì)，再利用5萬分子量截留，得到較純的右旋糖酐酶)、濃縮發(fā)酵液，再進行低壓冷凍干燥， 得到右旋糖酐酶酶粉(測得右旋糖酐酶酶活為60000U/mg)。
權(quán)利要求
1.一種從土壤中篩選得到的哈茨木霉(Hypocrea lixii)菌株F1002，其保藏號為 CGMCC No. 4725。
2.權(quán)利要求1所述的一種哈茨木霉(Hypocrealixii)菌株F1002在制備高酶活性的右旋糖酐酶中的應用。
3.一種哈茨木霉(Hypocrea lixii)F1002菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于先采用固體 PDA培養(yǎng)基，將哈茨木霉菌株在試管斜面培養(yǎng)基上接種后，28°C到30°C下活化培養(yǎng)，兩天后再接種到液體PDA培養(yǎng)基中30°C、220r/min恒溫培養(yǎng)5天；所述PDA培養(yǎng)基組分為每 IOOml水中含有馬鈴薯20g，蔗糖2g，瓊脂1. 6g ；所述液體PDA培養(yǎng)基組分為每IOOml水中含有馬鈴薯20g，蔗糖2g。
4.利用權(quán)利要求1所述的哈茨木霉(Hypocrealixii)菌株F1002制備右旋糖酐酶的方法，其特征在于該方法按以下步驟進行1)菌株活化采用滅菌固體PDA培養(yǎng)基，將F1002菌株接種在試管培養(yǎng)基上，28-30°C 下培養(yǎng)48-60h，然后用于菌株種子液制備；2)菌株種子發(fā)酵培養(yǎng)種子培養(yǎng)基組分為每IOOml水中含有Dextran70kDa lg，蛋白胨 0. 5g, K2HPO4 · 3H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 02g, KCl 0. 02g, FeSO4 · 7H20 0. OOlg, pH5. 0 5. 5，將步驟1)中的菌株接種到所述的種子培養(yǎng)基中，置于恒溫搖床上28-30°C，轉(zhuǎn)速220r/ min下培養(yǎng)48-72小時作為種子液，然后將種子液用于發(fā)酵制備右旋糖酐酶；3)發(fā)酵制備右旋糖酐酶發(fā)酵培養(yǎng)基組分為每100ml水中含有Dextran70kDa 1. 5g， 蛋白胨 1. 0g, K2HPO4 · 3H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 02g, KCl 0. 02g, FeSO4 · 7H20 0. OOlg, pH5. 0 5. 5，利用滅菌后發(fā)酵培養(yǎng)基，將步驟2)中的種子液按5%的比例接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于恒溫搖床上28-30°C，轉(zhuǎn)速220r/min下培養(yǎng)6天得到相應的右旋糖酐酶的發(fā)酵液，然后將發(fā)酵液用于分離純化；4)右旋糖酐酶的分離純化將步驟3)中得到的右旋糖酐酶的發(fā)酵液通過過濾、離心分離菌體，然后超濾膜截留，得到較純的右旋糖酐酶，濃縮發(fā)酵液，再進行低壓冷凍干燥，得到右旋糖酐酶酶粉。
全文摘要
本發(fā)明是一株高酶活的右旋糖酐酶產(chǎn)生菌及用該菌株制備右旋糖酐酶的方法。其特征在于該菌株是從土壤中分離得到的哈茨木霉F1002(Hypocrea lixii)，該菌株由中國微生物菌種保藏中心保藏，保藏編號為CGMCC No.4725。本發(fā)明成功的利用哈茨木霉F1002發(fā)酵制備右旋糖酐酶，并且能夠產(chǎn)生高酶活性的右旋糖酐酶，同時產(chǎn)生的右旋糖酐酶為胞外酶。利用哈茨木霉F1002發(fā)酵法制備的右旋糖酐酶的特征在于它的最適作用溫度為25℃到30℃，最適pH為5.0到5.5，穩(wěn)定pH為4.0到6.5。哈茨木霉F1002發(fā)酵產(chǎn)右旋糖酐酶的水平為大于60U/ml。
文檔編號C12N1/14GK102220244SQ20111011707
公開日2011年10月19日 申請日期2011年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月6日
發(fā)明者吳定濤, 張洪斌, 胡雪芹, 黃麗君 申請人:合肥工業(yè)大學