專利名稱：軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰消化液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
這種發(fā)明涉及一種痰消化液，具體是一種適合對臨床痰標(biāo)本中軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)用的痰消化液。
背景技術(shù)：
軍團(tuán)菌是引起軍團(tuán)病的重要病原體，特別是嗜肺軍團(tuán)菌感染，是引起軍團(tuán)菌肺炎的主要病原菌，對于軍團(tuán)病的診斷，細(xì)菌分離培養(yǎng)是金標(biāo)準(zhǔn)。目前，國內(nèi)外對臨床痰標(biāo)本細(xì)菌分離培養(yǎng)所使用的痰消化液是由英國OXOID公司生產(chǎn)Sputasol (Liquid) SR0233。這種消化液只適用于臨床痰標(biāo)本常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)，不適用于軍團(tuán)菌培養(yǎng)。因為在該痰消化液中含有抑制軍團(tuán)菌生長的Na+離子，不能用于軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)的痰標(biāo)本的消化。因此，國內(nèi)外尚沒有一種適合軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)用的痰消化液。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)中，至今尚無一種用于軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)的痰消化液之不足，提供一種成本低、適用于提高軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)的痰消化液。本發(fā)明解決了軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)用的痰消化液，以提高對軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)的陽性率。為了實現(xiàn)以下目的，本發(fā)明是一種軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰消化液，其組分的質(zhì)量含量如下二硫蘇糖醇1.0 3. 0g，最佳為2. Og ；乙二胺四乙酸0. 890 0. 898g，最佳為 0. 894g ；氯化鉀0. 2 0. 6g，最佳為0. 4g ；磷酸氫二鉀3. 2 4. Og,最佳為3. 6g ；磷酸二氫鉀0. 2 0. 8g，最佳為0. 4g ；水IOOg0軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰消化液的配制方法的步驟如下首先，配制一份痰消化液作為貯存液，調(diào)正PH 7. 4，分裝小瓶，每瓶4 6mL ；然后液配制工作液，將取貯存液1份加無菌蒸餾水95ml混合，制成0. 濃度；最后，取痰液lmL，加工作液，經(jīng)37°C水浴，消化10 20min, 10000rpm/min,離心5min，取沉淀物供細(xì)菌培養(yǎng)或用作DNA提取，供PCR試驗。在新型軍團(tuán)菌痰消化液中，添加二硫蘇糖醇(DTT)和乙二胺四乙酸(EDTA)，對軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)的痰液進(jìn)行消化的同時，可以避免重金屬鹽類對軍團(tuán)菌的毒害；在緩沖系統(tǒng)中采用鉀鹽，避免Na+離子對軍團(tuán)菌的抑制作用，從而提高了對軍團(tuán)菌屬細(xì)菌分離培養(yǎng)的陽性率。在軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)前對痰標(biāo)本預(yù)先進(jìn)行消化，再行酸處理和熱處理，可減少雜菌污染，提高軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)陽性率的痰消化液。在本發(fā)明中包含二硫蘇糖醇(1，4 dithiothreitol，DTT)，是一種抗氧化劑，可作為酶或其他帶巰基蛋白質(zhì)的穩(wěn)定劑，無DNase和RNase活性，用作蛋白質(zhì)琉基保護(hù)劑， 用于蛋白質(zhì)二硫鍵的裂解和順序分析，以使痰液消化；乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid)，簡稱EDTA，是一種重要的絡(luò)合劑，能和堿金屬、稀土元素和過渡金屬等形成穩(wěn)定的水溶性絡(luò)合物，也可用來使有害放射性金屬從人體中迅速排泄，起到解毒作用； 緩沖系統(tǒng)由氯化鉀、磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀等鉀鹽組成，避免Na+離子對軍團(tuán)菌的抑制作用，從而提高對軍團(tuán)菌的分離培養(yǎng)陽性率。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰消化液有益效果是(1)添加二硫蘇糖醇(DTT)用于蛋白質(zhì)二硫鍵的裂解，促使痰液消化，便于消化后進(jìn)行酸處理和熱處理，減少雜菌污染，有利于分離軍團(tuán)菌目標(biāo)菌；(2)添加乙二胺四乙酸(EDTA)使有害重金屬等形成穩(wěn)定的水溶性絡(luò)合物，起到解毒作用，有利于軍團(tuán)菌生長，提高對軍團(tuán)菌屬分離培養(yǎng)陽性率；C3)緩沖系統(tǒng)采用鉀鹽代替鈉鹽，避免Na+對軍團(tuán)菌生長的抑制作用；(4)該痰消化液對其他非軍團(tuán)菌屬細(xì)菌沒有影響，可同時用于常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)痰液消化；(5)降低檢測成本、 經(jīng)濟(jì)實用，解決這類試劑長期依賴于進(jìn)口的困難局面，便于臨床推廣應(yīng)用。本發(fā)明之軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰消化液，既可用于軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰液消化，避免Na+ 對軍團(tuán)菌的抑制作用，大大提高軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)檢出陽性率。又可當(dāng)作英國OXOID公司進(jìn)口的Sputasol痰消化液，用于常規(guī)痰液消化細(xì)菌培養(yǎng)。
具體實施例方式實施例11.貯存液配制(DTT PBS 100ml)如表1，稱取二硫蘇糖醇(DTT) 2. Og,乙二胺四乙酸(EDTA) 0. 894g，氯化鉀(KCL) 0. 4g，磷酸氫二鉀(K2HPO4) 3. 6g，磷酸二氫鉀(KH2PO4) 0. 4g 加水(H2O) IOOmL,混合溶解，調(diào)正pH 7. 4，分裝小瓶，每瓶5mL，室溫可保持6個月。表1.軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰消化液(貯存液IOOml量)
權(quán)利要求
1.一種軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰消化液，其特征在于，其組分的質(zhì)量配比如下
2.根據(jù)權(quán)利要求書1所述的軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰消化液，其特征在于，其組分的質(zhì)量配
3.一種根據(jù)權(quán)利要求書1所述的軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰消化液的應(yīng)用，其特征在于，用作軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰液消化，或用作臨床痰常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)消化液。
4.一種根據(jù)權(quán)利要求書1所述的軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰消化液的配制方法，其特征在于步驟如下首先，配制一份痰消化液作為貯存液，調(diào)正pH7. 4，分裝小瓶，每瓶4 6mL ；然后液配制工作液，將取貯存液1份加無菌蒸餾水95ml混合，制成0. 濃度；最后，取痰液lmL， 加工作液，經(jīng)37°C水浴，消化10 20min，10000rpm/min,離心5min，取沉淀物供細(xì)菌培養(yǎng)或用作DNA提取，供PCR試驗。比如下
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新型的軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰消化液，既可以用作軍團(tuán)菌分離培養(yǎng)痰液消化，又可用作臨床痰常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)消化液，其組分的質(zhì)量配比如為二硫蘇糖醇2.0g，乙二胺四乙酸0.894g，氯化鉀0.4g，磷酸氫二鉀3.6g，磷酸二氫鉀0.4g，水100g。該痰消化液應(yīng)用DTT，使粘蛋白中的二硫鍵斷裂，從而降解粘蛋白，使痰液消化。在消化液中添加EDTA能和堿金屬、稀土元素和過渡金屬等形成穩(wěn)定的水溶性絡(luò)合物，避免重金屬鹽類對軍團(tuán)菌的毒害。緩沖系統(tǒng)由KCl、K2HPO4和KH2PO4等鉀鹽組成，避免Na+離子對軍團(tuán)菌的抑制作用，從而提高對軍團(tuán)菌的分離培養(yǎng)陽性率。
文檔編號C12R1/01GK102226160SQ20111012620
公開日2011年10月26日 申請日期2011年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月13日
發(fā)明者劉洋敏, 朱慶義, 胡朝暉, 趙利偉, 陳文聰 申請人:廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗中心有限公司