專利名稱：一種高穩(wěn)定性液體α-半乳糖苷酶的制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及液體酶制劑領(lǐng)域，特別指高穩(wěn)定性液體α -半乳糖苷酶的制備工藝。
背景技術(shù)：
目前液體酶制劑尤其是液體α -半乳糖苷酶在飼料行業(yè)、食品行業(yè)已經(jīng)得到了廣泛的應(yīng)用，但是，現(xiàn)有的液體α -半乳糖苷酶穩(wěn)定性較差，具體來說就是當(dāng)氣溫較高尤其是當(dāng)氣溫在30°C以上時，其活性損失率較高，同時現(xiàn)有的液體α -半乳糖苷酶防腐效果差，容易受到細菌的污染，因而不便于保存和運輸。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問題是提供一種高穩(wěn)定性液體α -半乳糖苷酶的制備工藝，通過該制備工藝制作出來的液體α-半乳糖苷酶無混濁、無沉淀、無異味，具有很高的穩(wěn)定性，即在較高氣溫環(huán)境下，其活性不會明顯降低，同時其抑菌效果和防腐性能強。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的高穩(wěn)定性液體α-半乳糖苷酶的制備工藝，包括以下步驟第一步，將發(fā)酵放罐后的液體粗酶產(chǎn)品高速離心，其上清液經(jīng)微濾除菌、超濾濃縮后得到高濃度液體α -半乳糖苷酶半成品，放入攪拌罐；第二步，開動攪拌罐，緩慢加入磷酸或氫氧化鈉，調(diào)節(jié)液體α -半乳糖苷酶的ρΗ值至4. 6-5. 0 ；第三步，按照質(zhì)量百分比加入0. 15-0. 40%的苯甲酸鈉和0. 35-0. 55%山梨酸鉀；第四步，按照質(zhì)量百分比緩慢加入10%的穩(wěn)定劑到攪拌罐中，使之充分溶解至澄清透明，靜置24h后灌裝。為了進一步提高液體α-半乳糖苷酶的穩(wěn)定性，本發(fā)明的高穩(wěn)定性液體α-半乳糖苷酶的制備工藝，穩(wěn)定劑包括按照質(zhì)量百分比配比的以下組份氯化鈉30-50%;山梨醇 40-60%;海藻糖10-30%。本發(fā)明取得的有益效果是(1)苯甲酸鈉和山梨酸鉀作為防腐劑加入到液體 α -半乳糖苷酶中，具有抑制細菌生長的功能，防腐效果好；(2)放入磷酸或氫氧化鈉，調(diào)整液體α -半乳糖苷酶的PH值，使PH值穩(wěn)定在4. 6-5. 0之間，能進一步提高苯甲酸鈉和山梨酸鉀的防腐功效；C3)氯化鈉、山梨醇和海藻糖作為穩(wěn)定劑放入液體α-半乳糖苷酶中后， 能有效的提高液體α-半乳糖苷酶在較高氣溫下的活性存留率，使得液體α-半乳糖苷酶在40°C溫度下保存六個月后，依然能達到85%的活性。
具體實施例方式制備高穩(wěn)定性液體α -半乳糖苷酶時，采用如下步驟
第一步，將發(fā)酵放罐后的液體粗酶產(chǎn)品高速離心，其上清液經(jīng)微濾除菌、超濾濃縮后得到高濃度液體α -半乳糖苷酶半成品，放入攪拌罐；第二步，開動攪拌罐，緩慢加入磷酸或氫氧化鈉，調(diào)節(jié)液體α -半乳糖苷酶的ρΗ值至 4.8 ；第三步，按照質(zhì)量百分比加入0.25%的苯甲酸鈉和0.45%山梨酸鉀；第四步，按照質(zhì)量百分比緩慢加入10%的穩(wěn)定劑到攪拌罐中，使之充分溶解至澄清透明，靜置24h后灌裝。本發(fā)明的高穩(wěn)定性液體α -半乳糖苷酶的制備工藝，穩(wěn)定劑包括按照質(zhì)量百分比配比的以下組份氯化鈉40%;山梨醇 45%;海藻糖15%。試驗1為了驗證高穩(wěn)定性液體α -半乳糖苷酶的活性，做如下試驗分別取500ml樣品于4°C、室溫、40°C中保存1-12個月，表1為第1、3、6、12月檢測到的活性存留率。表1高穩(wěn)定性液體α -半乳糖苷酶活性存留率
保存
1個月
3個月 6個月
12個月
4 0C98.17%97. 22%93. 46%92. 56%
室溫98.32%96. 36%94. 22%90.10%40 "C95. 57%90. 21%85. 78%81. 30%備注外觀澄清透明、無混獨、無沉淀、無異味從表1可以看出，由本發(fā)明制備出的產(chǎn)品無論是在冷藏條件下)、室溫條件下、還是高溫條件下(40°C)其穩(wěn)定性都良好，即使在高溫條件下保存6個月活性存留率依然可以達到85%以上，且產(chǎn)品外觀品質(zhì)不發(fā)生變化，表明產(chǎn)品穩(wěn)定性能較高，適用于常溫保存及長途運輸。試驗2
為了驗證高穩(wěn)定性液體α -半乳糖苷酶的抑菌能力，做如下試驗分別取IOOml樣品于4°C、室溫、40°C中保存0-12個月，表2是第0、1、3、6、12月檢測到的雜菌含量，其中雜菌含量以CFU平板計數(shù)。
/mL) 表2液體α -半乳糖苷酶菌量(個
保存0個月1個月3個月6個月12個月4 0C88001200670340230室溫8800750068005900340040 0C88009400920085007600 從表2可以看出，本產(chǎn)品無論是在冷藏條件下)、室溫條件下、還是高溫條件下(40°C)其添加的防腐劑，主要是苯甲酸鈉和山梨酸鉀，其抑菌效果良好(食品級產(chǎn)品國標要求< 50000個/ml)，不會使產(chǎn)品在保存過程中產(chǎn)生脹氣、霉變、發(fā)酵和異味，在冷藏條件下)保存效果更好。
權(quán)利要求
1.一種高穩(wěn)定性液體α-半乳糖苷酶的制備工藝，其特征在于包括以下步驟1)將發(fā)酵放罐后的液體粗酶產(chǎn)品高速離心，其上清液經(jīng)微濾除菌、超濾濃縮后得到高濃度液體α -半乳糖苷酶半成品，放入攪拌罐；2)開動攪拌罐，緩慢加入磷酸或氫氧化鈉，調(diào)節(jié)液體α-半乳糖苷酶的ρΗ值至 4. 6-5. 0 ；3)按照質(zhì)量百分比加入0.15-0. 40%的苯甲酸鈉和0. 35-0. 55%山梨酸鉀；4)按照質(zhì)量百分比緩慢加入10%的穩(wěn)定劑到攪拌罐中，使之充分溶解至澄清透明，靜置24h后灌裝。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高穩(wěn)定性液體α-半乳糖苷酶的制備工藝，其特征在于所述穩(wěn)定劑包括按照質(zhì)量百分比配比的以下組份氯化鈉30-50% ； 山梨醇40-60% ； 海藻糖10-30%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高穩(wěn)定性液體α-半乳糖苷酶的制備工藝，包括以下步驟第一步，將發(fā)酵放罐后的液體粗酶產(chǎn)品高速離心，其上清液經(jīng)微濾除菌、超濾濃縮后得到高濃度液體α-半乳糖苷酶半成品，放入攪拌罐；第二步，開動攪拌罐，緩慢加入磷酸或氫氧化鈉，調(diào)節(jié)液體α-半乳糖苷酶的pH值至4.6-5.0；第三步，按照質(zhì)量百分比加入0.15-0.40％的苯甲酸鈉和0.35-0.55％山梨酸鉀；第四步，按照質(zhì)量百分比緩慢加入10％的穩(wěn)定劑到攪拌罐中，使之充分溶解至澄清透明，靜置24h后灌裝。本發(fā)明取得的有益效果是(1)具有抑制細菌生長的功能，防腐效果好；(2)進一步提高了苯甲酸鈉和山梨酸鉀的防腐功效；(3)能有效的提高液體α-半乳糖苷酶在較高氣溫下的活性存留率。
文檔編號C12N9/40GK102229922SQ20111015031
公開日2011年11月2日 申請日期2011年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月7日
發(fā)明者師昆景, 張召佐, 張濤, 趙靜 申請人:山東思諾拜特生物科技有限公司, 師昆景