專利名稱：一種與弓形蟲病毒具有特異性的弓形蟲抗體適配子及構成的生物芯片的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學領域，具體的說，涉及一種與弓形蟲病毒具有特異性的弓形蟲抗體適配子及構成能在孕婦早期檢測是否感染弓形蟲的生物芯片。
背景技術：
出生缺陷給家庭、國家和社會帶來極大的精神及經(jīng)濟負擔。目前，臨床對胎兒的先天性缺陷尚無有效的治療方法。出生缺陷疾病預防的方法中，孕前期的一級預防最為有效。 弓形蟲是一組孕期感染的病原微生物，能通過胎盤或產(chǎn)道引起宮內感染，導致流產(chǎn)、死胎或胎兒生長遲緩、先天畸形、新生兒期感染及嬰、幼兒生長發(fā)育障礙。我國每年約有沈，000個弓形蟲病毒感染患兒出生，平均每小時就有3個，因此，弓形蟲病毒篩查是孕前感染性疾病檢查的重要內容。但是，據(jù)統(tǒng)計資料顯示，我國目前診斷臨床普遍采用ELISA法、金標法等檢測孕齡婦女血清TOX-IgG和CMV-IgG的水平，假陽性率較高，不能為臨床提供準確的診斷依據(jù)。
SELEX技術，又指數(shù)富集配體的系統(tǒng)進化(systematic evolution ofligands by exponential enrichment, SELEX)是20世紀90年代發(fā)展起來的一項組合化學技術。DNA 配體與RNA配體的篩選過程雖然有一點不同，但一般都包括以下幾個步驟(1)通過人工合成，建立dsDNA隨機序列庫。( 與靶物質反應，篩選出相互結合的靶物質-核酸復合體。(3)將篩選到的蛋白-核酸復合物分離，得到的核酸進行PCR擴增，變性成單鏈以準備進行下一輪篩選，篩選的次數(shù)由文庫的類型和每次循環(huán)所得特異性序列的富集程度決定。(4)經(jīng)過若干輪篩選得到的、能高度結合靶物質的核酸配體可以進行測序并用于各種研究工作。具有庫容量大，靶分子范圍廣，親和力強等優(yōu)點，應用十分廣泛。與傳統(tǒng)檢測技術中的抗體相比，寡核苷酸適配子還具與靶分子結合力更強、穩(wěn)定性好、精確性高、重復性好、 可反復使用、可長期保存、可進行精確的位點修飾、篩選期更短等優(yōu)勢，是一種高效、快速的檢測手段。
近年來表面等離子體共振(surface ρlasmon resonance, SPR)技術因其具有實時監(jiān)測反應動態(tài)過程、靈敏度較高、無需標記、無背景干擾、成本低廉等特點，被認為是生物分子檢測的理想檢測器件，已經(jīng)成為臨床實驗診斷領域研究的熱點?；驹硎且环N物理光學現(xiàn)象。表面等離子體(SP)是沿著金屬和電介質間界面?zhèn)鞑サ碾姶挪ㄐ纬傻?。當平行表面的偏振光以稱之為表面等離子體共振角入射在界面上，發(fā)生衰減全反射時，入射光被耦合入表面等離子體內，光能大量被吸收，在這個角度上由于表面等離子體共振引起界面反射光顯著減少。由于SPR對金屬表面電介質的折射率非常敏感，不同電介質其表面等離子體共振角不同。同種電介質，其附在金屬表面的量不同，則sra的響應強度不同。基于這種原理的生物傳感器通常將一種具特異識別屬性的分子即配體固定于金屬膜表面，監(jiān)控溶液中的被分析物與該配體的結合過程。在復合物形成或解離過程中，金屬膜表面溶液的折射率發(fā)生變化，隨即被SPR生物傳感器檢測出來。與傳統(tǒng)的ELISA檢測法相比，Sra生物傳感器具有如下顯著特點(1)實時檢測，能動態(tài)地監(jiān)測生物分子相互作用的全過程；
(2)無需標記樣品，保持了分子活性；(3)樣品需要量極少；(4)檢測過程方便快捷，靈敏度高；( 應用范圍非常廣泛；(6)高通量、高質量的分析數(shù)據(jù)；(7)大多數(shù)情況下， 不需對樣品進行預處理；(8)能檢測混濁的甚至不透明的樣品。現(xiàn)在已廣泛用于物理量檢測，化學檢測與生物監(jiān)測。
如果能篩選出弓形蟲抗體的適配子，然后將其包被在生物芯片上，再結合sra生物傳感器進行檢測，將非常的快捷和精確。。

發(fā)明內容
為解決以上技術問題，本發(fā)明的目的之一在于提供一種與弓形蟲病毒結合力更強、穩(wěn)定性好、精確性高、重復性好的弓形蟲抗體適配子。
本發(fā)明目的之二在于提供一種與弓形蟲病毒具有特異性的弓形蟲抗體適配子所構成的生物芯片。
本發(fā)明目的是這樣實現(xiàn)的一種與弓形蟲病毒具有特異性的弓形蟲抗體適配子，其特征在于他具有SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 3的序列之一。
權利要求
1.一種與弓形蟲病毒具有特異性的弓形蟲抗體適配子，其特征在于他具有SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 3的序列之一。
2.根據(jù)權利要求1所述一種與弓形蟲病毒具有特異性的弓形蟲抗體適配子，其特征在于SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 3的二級構象依次分別為
3.根據(jù)權利要求3所述生物芯片，其特征在于所述金膜(2)在包被適配子前，先預處理，即在1. Omol / L NaOH中浸泡清洗20 min，取出后用去離子水清洗3次，然后放入 Piranha溶液中處理15 min，取出后立即投入無水乙醇中浸泡5 min，氮氣吹干。
4.根據(jù)權利要求3所述生物芯片，其特征在于所述適配子包被在金膜(2)上之前，先預處理，即先將適配子溶解到PBS緩沖液，95°C變性3 min，迅速冰浴2 min，隨后巰基法進行固定。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種與弓形蟲病毒具有特異性的弓形蟲抗體適配子，同時利用該弓形蟲抗體適配子構成的的生物芯片。本發(fā)明與傳統(tǒng)檢測技術中的抗體相比，寡核苷酸適配子還具與靶分子結合力更強、穩(wěn)定性好、精確性高、重復性好、可反復使用、可長期保存、可進行精確的位點修飾、篩選期更短等優(yōu)勢；所得到的生物芯片放入SPR生物傳感器檢測，能實現(xiàn)(1)實時檢測、(2)無需標記樣品、(3)樣品需要量極少、(4)檢測過程方便快捷,靈敏度高、(5)應用范圍非常廣泛、(6)高通量、(7)大多數(shù)情況下、(8)能檢測混濁的甚至不透明的樣品。
文檔編號C12Q1/68GK102234648SQ20111015337
公開日2011年11月9日 申請日期2011年6月9日 優(yōu)先權日2011年6月9日
發(fā)明者劉星, 姚春艷, 府偉靈 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學第一附屬醫(yī)院