專利名稱：一種陰道炎快速檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種陰道炎的檢測(cè)試劑試劑盒。特別用于輔助診斷女性細(xì)菌性陰道炎。
背景技術(shù)：
細(xì)菌性陰道病(Bacterial Vaginosis，簡(jiǎn)稱BV)是已婚婦女最常見的下生殖道感染之一，是指一類在細(xì)菌學(xué)上表現(xiàn)為生殖道正常菌群(產(chǎn)H202的乳酸桿菌)減少，代之以一組厭氧菌群(類桿菌屬族、加德納菌、莫比倫氏菌屬、人型支原體菌屬和消化鏈球菌屬等)數(shù)量增加所致的臨床癥候群。BV是婦科常見疾病之一，感染率在15 — 50%，且容易復(fù)發(fā)?；糂V的婦女有50%的人易早產(chǎn)或者分娩低體重兒，她們所生的孩子也很可能帶有各種后遺癥。越來越多的證據(jù)表明，BV是導(dǎo)致組織性絨毛膜炎、羊水感染、剖腹產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎及其它妊娠不良和妊娠并發(fā)癥的危險(xiǎn)因素。另外在婦科，BV主要與輸卵管炎、盆腔炎、宮外孕、不孕癥、泌尿系感染、術(shù)后感染及婦科腫瘤有關(guān)。陰道炎是婦女最常見的疾病，宮頸炎也存在較高的發(fā)病率。當(dāng)炎性患者自我癥狀比較輕微時(shí)，容易造成誤診，常常延誤了治療，并有可能并發(fā)輸卵管炎、子宮內(nèi)膜炎而導(dǎo)致不孕及流產(chǎn)。鑒于BV對(duì)婦女及其妊娠的危害性，在婦科、產(chǎn)科以及施行外科流產(chǎn)術(shù)前進(jìn)行BV檢查具有十分重要的意義。同時(shí)在臨床上對(duì)BV也有了更嚴(yán)格的定義，即符合以下4項(xiàng)指標(biāo)中的3項(xiàng)可診斷為BV ； (1)陰道pH > 4. 5，(2)陰道分泌物增多，變稀如奶狀，有異味；(3)胺試驗(yàn)(Whiff)陽(yáng)性，即在陰道分泌物中加入10% KOH產(chǎn)生魚腥味；(4)陰道涂片中可見線索細(xì)胞。以上即為傳統(tǒng)的Amsel診斷方法，稱為“金標(biāo)準(zhǔn)”。80年代后期，人們發(fā)現(xiàn)了 BV與陰道中特有的微生物的代謝產(chǎn)物有關(guān)，并依此研究出一系列新的BV診斷技術(shù)和方法。在BV 的診斷方面，臨床上最為普遍采用的方法有傳統(tǒng)的Amsel方法(如上所述)，然而要在實(shí)際中準(zhǔn)確實(shí)施并非易事。首先，一些與感染無關(guān)的因素如近期性交、陰道灌洗、行經(jīng)或是存在大量子宮頸粘液等同樣可以導(dǎo)致陰道PH值升高，或使分泌物產(chǎn)生異味；胺試驗(yàn)中對(duì)氣味的鑒別因人而異；而對(duì)于作為BV診斷最佳標(biāo)志的線索細(xì)胞的識(shí)別則受到顯微設(shè)備的質(zhì)量、樣本的采集以及操作者的經(jīng)驗(yàn)等諸多因素的共同影響，主觀性強(qiáng)，因而很難對(duì)判定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和比較?，F(xiàn)有檢測(cè)BV的用具包括中國(guó)某些公司的細(xì)菌性陰道病四聯(lián)診斷試劑盒、五聯(lián)診斷試劑盒和六聯(lián)診斷試劑盒，使用方法為用拭子取陰道分泌物，滴加數(shù)滴稀釋液，制成懸液，將懸液滴入各個(gè)反應(yīng)微孔中，并滴加顯色液，于30 — 37°C溫育15min后，觀察各孔顏色變化，與比色試劑盒對(duì)照，推斷病情。其缺點(diǎn)是操作麻煩，不同孔滴加的顯色液不同，滴加時(shí)間也不同，極其容易混淆，造成誤操作；反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，影響診斷效率；多孔判讀過程繁瑣，各孔所顯顏色不同，極其容易混淆，需借助比色試劑盒，影響工作效率；對(duì)各孔結(jié)果進(jìn)行對(duì)比判讀也極其繁瑣易亂，判讀過程復(fù)雜易錯(cuò)，主觀因素強(qiáng)，且易出現(xiàn)各孔結(jié)果不一致的狀況，難以最終斷定診斷結(jié)果；靈敏度不高；產(chǎn)品價(jià)格昂貴。研究表明，陰道分泌物中唾液酸酶活性與BV之間存在一定的量的關(guān)系，患BV的婦女，其陰道分泌物中含有產(chǎn)生唾液酸酶的細(xì)菌，無BV的婦女陰道分泌物中不顯示異常的唾液酸酶活性。細(xì)菌性唾液酸酶可以作用于各種天然和合成的唾液酸糖結(jié)合底物，通過底物的分解顯色或顏色的改變來指示唾液酸酶的活性高低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種陰道炎快速檢測(cè)試劑盒，簡(jiǎn)化BV診斷的實(shí)驗(yàn)方法、結(jié)果判讀，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間，提高靈敏度，判讀簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確。本發(fā)明的技術(shù)方案為提供一種陰道炎快速檢測(cè)試劑盒，包括檢測(cè)卡，稀釋液，顯色齊IJ，所述檢測(cè)卡上設(shè)置有一個(gè)干化學(xué)反應(yīng)檢測(cè)盲孔，，所述檢測(cè)盲孔設(shè)置有唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊，所述的唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊為將墊載體在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑中浸泡之后進(jìn)行干燥處理的試劑墊，所述唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑包括以下組分蔗糖質(zhì)量濃度為30_60g/L ；酶底物5_溴-4氯-3吲哚基乙酰神經(jīng)氨酸鈉鹽，所述酶底物在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑質(zhì)量濃度為0. 05-5g/ml ；所述稀釋液為0. 9%生理鹽水混合緩沖液配制而成；所述顯色劑為固紫B鹽溶液或氫氧化鈉溶液。優(yōu)選的，所述唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑包括以下組分蔗糖質(zhì)量濃度為50_60g/L ；酶底物5_溴-4氯-3吲哚基乙酰神經(jīng)氨酸鈉鹽，所述酶底物在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑質(zhì)量濃度為3-5g/ml ；優(yōu)選的，所述稀釋液中氯化鈉的質(zhì)量濃度為0.9%，所述稀釋液中緩沖液濃度為 0. 5-5mol/L，所述稀釋液pH值為5-8。優(yōu)選的，所述緩沖液為醋酸-醋酸鈉緩沖液、醋酸_醋酸鉀緩沖液、檸檬酸_檸檬酸鈉緩沖液或檸檬酸_檸檬酸鉀緩沖液其中的一種。優(yōu)選的，所述顯色劑的溶質(zhì)摩爾濃度為0. 5-5mol/L。優(yōu)選的，所述唾液酸苷酶墊的墊載體為濾紙、玻璃纖維膜或?qū)游黾?。本發(fā)明的有益效果為簡(jiǎn)化BV診斷的實(shí)驗(yàn)方法、結(jié)果判讀，使用唾液酸苷酶法進(jìn)行單孔判別可以有以下進(jìn)步1、大大節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間，所有實(shí)驗(yàn)操作在十分鐘內(nèi)完成2、單孔判另IJ，無需市面上大部分產(chǎn)品復(fù)雜的操作、判讀步驟，快速、直觀，極大降低了誤操作率、誤診率3、靈敏度高。4、解決了各孔結(jié)果矛盾的問題，使實(shí)驗(yàn)人員能夠迅速、準(zhǔn)確地得出實(shí)驗(yàn)結(jié)^ ο
具體實(shí)施例方式唾液酸苷酶又稱神經(jīng)氨酸苷酶，在陰道環(huán)境中，唾液酸苷酶活性與BV密切相關(guān)， 是BV致病菌所產(chǎn)生的特異性酶之一，其在陰道分泌物中的活性與BV發(fā)病的嚴(yán)重程度成正比。唾液酸苷酶墊上底物經(jīng)陰道內(nèi)唾液酸苷酶水解后，其產(chǎn)物之一與顯色指示劑起反應(yīng)后顯示紅色或紫色，呈色深度與唾液酸苷酶活性相關(guān)。實(shí)例1
一種陰道炎快速檢測(cè)試劑盒，包括檢測(cè)卡，稀釋液，顯色劑，所述檢測(cè)卡上設(shè)置有一個(gè)干化學(xué)反應(yīng)檢測(cè)盲孔，所述檢測(cè)盲孔設(shè)置有唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊，唾液酸苷酶墊的墊載體為濾紙玻璃纖維膜，其直徑與檢測(cè)盲孔直徑相同。唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊的制作將墊載體在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑中浸泡之后進(jìn)行干燥處理，唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑包括以下組分蔗糖30g/L ；酶底物5_溴-4氯-3吲哚基乙酰神經(jīng)氨酸鈉鹽，所述酶底物在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑質(zhì)量濃度為0. 05g/ml。稀釋液配制0. 9%生理鹽水混合醋酸_醋酸鈉緩沖液濃度配制而成，混合后醋酸_醋酸鈉緩沖液摩爾濃度為0. 5mol/L,氯化鈉摩爾濃度為0. 154mol/L, pH值為7。顯色劑固紫B鹽溶液，其濃度為0. 5mol/L, pH值為3。實(shí)例2本發(fā)明另一實(shí)施列唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊的制作將墊載體在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑中浸泡之后進(jìn)行干燥處理，唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑包括以下組分蔗糖50g/L;酶底物5_溴-4氯-3吲哚基乙酰神經(jīng)氨酸鈉鹽，所述酶底物在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑質(zhì)量濃度為3g/ml。稀釋液配制0. 9%生理鹽水混合檸檬酸_檸檬酸鈉緩沖液配制而成，混合后檸檬酸_檸檬酸鈉緩沖液濃度為5mol/L，氯化鈉摩爾濃度為0. 154mol/L,pH 值為 8。顯色劑ΝΑ0Η與醋酸-醋酸鈉緩沖液的混合溶液，其濃度為4mol/L，pH值為8。實(shí)例3本發(fā)明又一實(shí)施列唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊的制作將墊載體在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑中浸泡之后進(jìn)行干燥處理，唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑包括以下組分蔗糖60g/L；酶底物5_溴-4氯-3吲哚基乙酰神經(jīng)氨酸鈉鹽，所述酶底物在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑質(zhì)量濃度為5g/ml。稀釋液配制0. 9%生理鹽水混合檸檬酸_檸檬酸鈉緩沖液配制而成，混合后檸檬酸_檸檬酸鈉緩沖液濃度為5mol/L，pH值為8。顯色劑ΝΑ0Η與醋酸-醋酸鈉緩沖液的混合溶液，其濃度為5mol/L，pH值為8。實(shí)施4 a、樣本提取1.非經(jīng)期取樣，且取樣前24小時(shí)應(yīng)禁止性交、盆浴、陰道灌洗及局部上藥等。2.用無菌棉拭子在陰道后穹窿或陰道深處旋轉(zhuǎn)2-10周，停留10-20秒，盡可能多的采集患者陰道分泌物，以清晰見到棉拭子上有分泌物附著為準(zhǔn)。3.取樣后的標(biāo)本常溫下應(yīng)在4小時(shí)之內(nèi)測(cè)定，否則應(yīng)保存在2_8°C，24小時(shí)內(nèi)完成測(cè)定。b、本發(fā)明檢測(cè)試劑盒使用步驟如下1、取出檢測(cè)試劑盒平衡至室溫25°C。
2、取一加樣試管，滴加檢測(cè)試劑盒中的稀釋液250 μ L，將一已經(jīng)取樣的試子置于該試管中，反復(fù)擠壓試子，使目的物充分釋出，得到樣本液。3、用吸管吸取樣本液，在檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)孔孔中加1滴樣本液(約30 μ L)，然后滴加一滴顯色劑。4、將檢測(cè)試劑盒置37°C溫育15分鐘，2分鐘內(nèi)對(duì)照比色試劑盒判讀結(jié)果。不變色或桔黃色為陰性；顯紅色或紫色為陽(yáng)性。產(chǎn)品性能指標(biāo)最低檢出量唾液酸苷酶≥7U/mL。以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書及內(nèi)所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種陰道炎快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括檢測(cè)卡，稀釋液，顯色劑，所述檢測(cè)卡上設(shè)置有一個(gè)干化學(xué)反應(yīng)檢測(cè)盲孔，所述檢測(cè)盲孔設(shè)置有唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊，所述的唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊為將墊載體在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑中浸泡之后進(jìn)行干燥處理的試劑墊，所述唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑包括以下組分蔗糖質(zhì)量濃度為30-60g/L ；酶底物5_溴-4氯-3吲哚基乙酰神經(jīng)氨酸鈉鹽，所述酶底物在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑質(zhì)量濃度為0. 05-5g/ml,所述稀釋液為0. 9%生理鹽水混合緩沖液配制而成，所述顯色劑為固紫B鹽溶液或氫氧化鈉溶液。
2.按權(quán)利要求1所述的陰道炎快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑包括以下組分蔗糖質(zhì)量濃度為50-60g/L ；酶底物5_溴-4氯-3吲哚基乙酰神經(jīng)氨酸鈉鹽，所述酶底物在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑質(zhì)量濃度為3-5g/ml。
3.按權(quán)利要求1所述的陰道炎快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述稀釋液中氯化鈉的質(zhì)量濃度為0. 9%，所述稀釋液中緩沖液濃度為0. 5-5mol/L，所述稀釋液pH值為5_8。
4.按權(quán)利要求1所述的陰道炎快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述緩沖液為醋酸-醋酸鈉緩沖液、醋酸_醋酸鉀緩沖液、檸檬酸_檸檬酸鈉緩沖液或檸檬酸_檸檬酸鉀緩沖液其中的一種。
5.按權(quán)利要求1所述的陰道炎快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述顯色劑的溶質(zhì)摩爾濃度為 0. 5-5mol/L。
6.按權(quán)利要求1所述的陰道炎快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述唾液酸苷酶墊的墊載體為濾紙、玻璃纖維膜或?qū)游黾垺?br> 全文摘要
本發(fā)明的目的是發(fā)明一種陰道炎快速檢測(cè)試劑盒，簡(jiǎn)化BV診斷的實(shí)驗(yàn)方法、結(jié)果判讀，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間，提高靈敏度。本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種陰道炎快速檢測(cè)試劑盒，包括檢測(cè)卡，稀釋液，顯色劑，所述檢測(cè)卡上設(shè)置有一個(gè)干化學(xué)反應(yīng)檢測(cè)盲孔，所述檢測(cè)盲孔設(shè)置有唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊，所述的唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊為將墊載體在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑中浸泡之后進(jìn)行干燥處理的試劑墊，本發(fā)明的有益效果是簡(jiǎn)化了BV診斷的實(shí)驗(yàn)方法，使用唾液酸苷酶法進(jìn)行單孔判別可以有以下進(jìn)步，大大節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間，所有實(shí)驗(yàn)操作在十分鐘內(nèi)完成，本檢測(cè)試劑盒靈敏、準(zhǔn)確、便捷。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK102251022SQ20111017456
公開日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2011年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月23日
發(fā)明者周曉強(qiáng), 姚銘鋒, 江敏, 胡守旺, 謝佐福, 陽(yáng)衛(wèi)超 申請(qǐng)人:泰普生物科學(xué)(中國(guó))有限公司