專利名稱：胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒及其檢查方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于胃幽門(mén)螺桿菌 檢查技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒，以及使用該試劑盒檢查胃幽門(mén)螺桿菌的方法。
背景技術(shù)：
胃幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori,簡(jiǎn)稱Hp)是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的革蘭陰性菌，臨床感染很普遍。Hp是慢性活動(dòng)性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關(guān)淋巴組織(MALT)淋巴瘤和胃癌的主要致病因素，1994年世界衛(wèi)生組織/國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)將Hp定為I類致癌原。根據(jù)檢測(cè)目的可將臨床Hp檢測(cè)分兩類診斷性檢測(cè)和治療性檢測(cè)?！霸\斷性檢測(cè)”目的是弄清是否Hp感染；“治療性檢測(cè)”實(shí)質(zhì)是藥敏試驗(yàn)，目的是弄清用什么藥物治療有效。一、診斷性檢測(cè)分離培養(yǎng)鑒別檢測(cè)以“分離出Hp”為診斷提供直接依據(jù)，是評(píng)價(jià)Hp其他診斷性檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，是治療性檢測(cè)(藥敏試驗(yàn))的唯一前提和基礎(chǔ)。但樣本采送、人員、設(shè)備、環(huán)境、試劑要求高，需時(shí)長(zhǎng)。Hp基因檢測(cè)(聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù))本法以“查到Hp基因”為診斷提供直接依據(jù)，快速準(zhǔn)確，但人員、設(shè)備、環(huán)境要求高。涂片染色檢查染色方法多樣，如革蘭染色法、銀染法、美蘭染色法、H-E染色法等，以“看到Hp”為診斷提供直接依據(jù)。但操作復(fù)雜，對(duì)人員、設(shè)備要求較高。尿素酶檢測(cè)具體有胃活檢組織尿素酶試驗(yàn)、尿素13C/14C呼氣試驗(yàn)、胃液尿素氮測(cè)定等，可實(shí)現(xiàn)非侵襲性檢測(cè)，簡(jiǎn)易快速。由于Hp不是尿素酶唯一產(chǎn)生菌，其它細(xì)菌(如變形桿菌、克雷伯氏菌、耶爾森氏菌)也可產(chǎn)生，所以“查到尿素酶古有Hp感染”。血清Hp抗體檢測(cè)Hp抗體為人體受Hp感染刺激的產(chǎn)物，感染后數(shù)周才能檢出，可維持存在數(shù)月至數(shù)年，因此，Hp抗體只能視為Hp曾經(jīng)感染的依據(jù)，而不表示體內(nèi)是否有Hp。二、治療性檢測(cè)-藥敏試驗(yàn)紙片法根據(jù)瓊脂平板上藥敏紙片周圍的抑菌圈大小來(lái)計(jì)算Hp對(duì)藥物的敏感性，方法簡(jiǎn)單，但結(jié)果易受培養(yǎng)基組分、瓊脂層厚度、菌液涂布均勻度、紙片質(zhì)量、抑菌圈大小測(cè)量方法等多種因素影響；E-Test法根據(jù)瓊脂平板上E-Test試條周圍抑菌圈大小直接讀取最低抑菌濃度(MIC)，方法簡(jiǎn)便，較準(zhǔn)確，但目前試條主要依賴進(jìn)口，成本高；瓊脂稀釋法根據(jù)同一濃度菌液在不同濃度藥物的培養(yǎng)平板上的生長(zhǎng)情況判定Hp的MIC,是評(píng)價(jià)其它Hp藥敏試驗(yàn)方法的金標(biāo)準(zhǔn),但本法操作復(fù)雜,工作量極大,不適合臨床使用；肉湯稀釋法根據(jù)同一濃度菌液在不同濃度藥物的培養(yǎng)液中的生長(zhǎng)情況判定Hp的MIC，是評(píng)價(jià)其它Hp藥敏試驗(yàn)方法的金標(biāo)準(zhǔn)，但本法操作復(fù)雜，工作量較大，不適合臨床使用。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒、以及使用該試劑盒檢查胃幽門(mén)螺桿菌的方法，使用該試劑盒和方法可快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出胃幽門(mén)螺桿菌。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明所采用技術(shù)方案如下一種胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒，該試劑盒包括
第一培養(yǎng)管，在所述第一培養(yǎng)管中盛裝有提供Hp生長(zhǎng)基本營(yíng)養(yǎng)的基礎(chǔ)液、提高Hp生長(zhǎng)速度的促生長(zhǎng)劑、指示Hp生長(zhǎng)進(jìn)度的生長(zhǎng)指示劑、抑制其他雜菌生長(zhǎng)的雜菌抑制齊U、吸附不利Hp生長(zhǎng)物質(zhì)的解毒劑、保證液體中含有足量的二氧化碳并降低氧氣比例的氣體發(fā)生劑；鑒別試劑裝置，所述鑒別試劑裝置包括鑒別試驗(yàn)微孔板和四個(gè)分裝有不同鑒別液的滴瓶；所述鑒別微孔板中設(shè)置有4個(gè)鑒別微孔，每個(gè)鑒別微孔內(nèi)分別吸附上用于觸酶、氧化酶、尿素酶、以及堿性磷酸酶檢測(cè)底物；所述鑒別液包括作為觸酶鑒別液的過(guò)氧化氫溶液、作為尿素酶鑒別液的酚紅液、作為氧化酶鑒別液的α -萘酚溶液、以及作為堿性磷酸酶鑒別液的氯化硝基四氮唑藍(lán)溶液；藥敏試驗(yàn)套組，所述藥敏實(shí)驗(yàn)套組包括第二培養(yǎng)管、藥敏微孔板、標(biāo)準(zhǔn)比濁管、稀釋液組成；所述第二培養(yǎng)管與所述第一培養(yǎng)管相同；所述藥敏微孔板包括有32個(gè)藥敏微孔，將該32個(gè)藥敏微孔以每4孔為一組分為8組，第I組為對(duì)照組，另外7組為藥物鑒別組，在各個(gè)藥物鑒別組中分別盛裝濃度由小到大呈梯度關(guān)系的同一種鑒別藥物，所述鑒別藥物包括甲硝唑、阿莫西林、呋喃唑酮、克拉霉素、左氧氟沙星、慶大霉素、以及多西環(huán)素；所述標(biāo)準(zhǔn)比濁管由氯化鋇溶液和硫酸銨溶液混合制成，該混合溶液的濁度為O. 5個(gè)麥?zhǔn)蠞岫?；所述稀釋液為O. 85%濃度的氯化鈉和O. I %濃度的牛血清白蛋白的混合溶液。所述胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒中，所述基礎(chǔ)液包括培養(yǎng)基和7% 10%濃度的去纖維蛋白馬血，所述培養(yǎng)基為腦心浸液瓊脂、哥倫比亞瓊脂、胰蛋白胨大豆瓊脂、WiIkins-Chalgren瓊脂中的任一種。所述胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒中，所述促生長(zhǎng)劑包括主成分和添加成分，所述主成分為脫纖維羊血、脫纖維馬血、馬血清、以及小牛血清中任一種，所述添加成分為丙酮酸鈉、半胱氨酸、亞硫酸鈉、異抗壞血酸、以及氯化血紅素中的一種或幾種；所述胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒中，所述解毒劑為可溶性淀粉、活性炭、以及環(huán)糊精中任一種。所述胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒中，所述生長(zhǎng)指示劑為氯化三苯基四氮唑鹽(TTC)、碘硝基四唑紫(INT)、氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)、四硝基四氮唑藍(lán)(TNBT)、噻唑藍(lán)(MTT)中的任一種。所述胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒中，所述雜菌抑制劑包括萬(wàn)古霉素、啶酸、二性霉素B、多粘菌素B、以及甲氧芐氨嘧啶(TMP)。
所述胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒中，所述氣體發(fā)生劑由碳酸鹽和酸組成，所述碳酸鹽為碳酸鈉和碳酸氫鈉的一種，所述酸為檸檬酸、乳酸、乙酸、以及鹽酸中的一種?！N 使用所述試劑盒檢測(cè)胃幽門(mén)螺桿菌的方法，包括以下步驟Hp分離培養(yǎng)將樣本直接投入到第一培養(yǎng)管內(nèi)蓋緊,輕搖以確保樣本完全浸入培養(yǎng)液中，放置37°C恒溫培養(yǎng)，逐日觀察培養(yǎng)液顏色變化，變紅表明有細(xì)菌生長(zhǎng)，不變表明無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)；快速鑒別從第一培養(yǎng)管中取有細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)物分別滴入各個(gè)鑒別微孔中，再加入對(duì)應(yīng)的鑒別液，觸酶孔產(chǎn)生氣泡、尿素酶孔變紅、氧化酶孔變藍(lán)則表明為Hp，否則為其它細(xì)菌；藥敏試驗(yàn)用稀釋液將有細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)物進(jìn)行稀釋至標(biāo)準(zhǔn)比濁管的濁度水平，再按I : 1000的比例稀釋到第二培養(yǎng)管的培養(yǎng)液中，然后按100微升每孔的量加至每個(gè)藥敏微孔內(nèi)，并按照I滴每孔的量滴加礦物油后在37°c條件下恒溫培養(yǎng)24小時(shí)，若微孔變紅表明該濃度藥物不能抑制Hp生長(zhǎng)，不變色則能抑制Hp生長(zhǎng)。本發(fā)明的有益效果如下I、本發(fā)明通過(guò)Hp培養(yǎng)管實(shí)現(xiàn)標(biāo)本床邊接種，省去傳統(tǒng)的樣本運(yùn)輸、保存等操作環(huán)節(jié)；還可實(shí)現(xiàn)普通恒溫箱培養(yǎng)，解除對(duì)二氧化碳培養(yǎng)箱的依賴；并且，以顏色變化為Hp生長(zhǎng)結(jié)果指標(biāo)，使非專業(yè)人員也能準(zhǔn)確判讀結(jié)果；通過(guò)促生長(zhǎng)劑和生長(zhǎng)指示劑結(jié)合，縮短培養(yǎng)時(shí)間，實(shí)現(xiàn)Hp快速培養(yǎng)；2、本發(fā)明通過(guò)Hp鑒別試劑，實(shí)現(xiàn)Hp快速組合鑒別。3、本發(fā)明通過(guò)Hp藥敏試驗(yàn)套組，實(shí)現(xiàn)Hp藥敏性的快速準(zhǔn)確測(cè)定。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合具體實(shí)施方法來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，在本發(fā)明的示意性實(shí)施及說(shuō)明用來(lái)解釋本發(fā)明，但并不作為對(duì)本發(fā)明的限定。本發(fā)明公開(kāi)了公開(kāi)了一種胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒，該試劑盒由培養(yǎng)管、鑒別試劑、藥敏試驗(yàn)套組組成，具體如下I、第一培養(yǎng)管，在所述第一培養(yǎng)管中盛裝有提供Hp生長(zhǎng)基本營(yíng)養(yǎng)的基礎(chǔ)液、提高Hp生長(zhǎng)速度的促生長(zhǎng)劑、指示Hp生長(zhǎng)進(jìn)度的生長(zhǎng)指示劑、抑制其他雜菌生長(zhǎng)的雜菌抑制齊U、吸附不利Hp生長(zhǎng)物質(zhì)的解毒劑、保證液體中含有足量的二氧化碳并降低氧氣比例的氣體發(fā)生劑；(I)基礎(chǔ)液目的是為Hp生長(zhǎng)提供基本營(yíng)養(yǎng)?？蛇x腦心浸液瓊脂、哥倫比亞瓊脂、胰蛋白胨大豆瓊脂、Wilkins-Chalgren瓊脂，比例按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；培養(yǎng)基中需加7% 10%的去纖維蛋白馬血。(2)促生長(zhǎng)劑目的是提高Hp生長(zhǎng)速度，縮短培養(yǎng)時(shí)間。主成分可選脫纖維羊血、脫纖維馬血、馬血清、小牛血清中任一種；添加成分可選用丙酮酸鈉、半胱氨酸、亞硫酸鈉、異抗壞血酸、氯化血紅素等成分，可單一或組合添加；(3)解毒劑目的是吸附不利Hp生長(zhǎng)物質(zhì)，可選可溶性淀粉、活性炭、環(huán)糊精等，用量為O. I O. 5%。
(4)生長(zhǎng)指示劑目的是使Hp濃度很低的情況下，非專業(yè)人員也可觀察判斷，縮短檢測(cè)時(shí)間?？蓮穆然交牡螓}(TTC)、碘硝基四唑紫(INT)、氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)、四硝基四氮唑藍(lán)(TNBT)、噻唑藍(lán)(MTT)等脫氫酶顯色底物中選擇；(5)雜菌抑制劑目的是抑制污染的雜菌生長(zhǎng)但不影響Hp生長(zhǎng)。由萬(wàn)古霉素、啶酸、二性霉素B、多粘菌素B、甲氧芐氨嘧啶(TMP)等配伍而成；(6)氣體發(fā)生劑目的是保證液體中含足量的C02，降低02比例，從而實(shí)現(xiàn)床邊接種，擺脫對(duì)二氧化碳培養(yǎng)箱的依賴。由碳酸鹽和酸組成，碳酸鹽可選碳酸鈉、碳酸氫鈉，酸可選檸檬酸、乳酸、乙酸、鹽酸；2、鑒別試劑裝置，所述鑒別試劑裝置包括鑒別試驗(yàn)微孔板和四個(gè)分裝有不同鑒別液的滴瓶；所述鑒別微孔板中設(shè)置有4個(gè)鑒別微孔，每個(gè)鑒別微孔內(nèi)分別吸附上用于觸酶、氧化酶、尿素酶、以及堿性磷酸酶檢測(cè)底物；所述鑒別液包括作為觸酶鑒別液的過(guò)氧化氫溶液、作為尿素酶鑒別液的酚紅液、作為氧化酶鑒別液的α -萘酚溶液、以及作為堿性磷酸酶 鑒別液的氯化硝基四氮唑藍(lán)溶液；3、藥敏試驗(yàn)套組，所述藥敏實(shí)驗(yàn)套組包括第二培養(yǎng)管、藥敏微孔板、標(biāo)準(zhǔn)比濁管、稀釋液組成；所述第二培養(yǎng)管與所述第一培養(yǎng)管相同；所述藥敏微孔板包括有32個(gè)藥敏微孔，將該32個(gè)藥敏微孔以每4孔為一組分為8組，第I組為對(duì)照組，另外7組為藥物鑒別組，在各個(gè)藥物鑒別組中分別盛裝濃度由小到大呈梯度關(guān)系的同一種鑒別藥物，所述鑒別藥物包括甲硝唑、阿莫西林、呋喃唑酮、克拉霉素、左氧氟沙星、慶大霉素、以及多西環(huán)素；所述標(biāo)準(zhǔn)比濁管由氯化鋇溶液和硫酸銨溶液混合制成，該混合溶液的濁度為O. 5個(gè)麥?zhǔn)蠞岫龋凰鱿♂屢簽镺. 85%濃度的氯化鈉和O. I %濃度的牛血清白蛋白的混合溶液。一種使用所述試劑盒檢測(cè)胃幽門(mén)螺桿菌的方法，包括以下步驟stepl、Hp分離培養(yǎng)將樣本直接投入到第一培養(yǎng)管內(nèi)蓋緊，輕搖以確保樣本完全浸入培養(yǎng)液中，放置37°C恒溫培養(yǎng)，逐日觀察培養(yǎng)液顏色變化，變紅表明有細(xì)菌生長(zhǎng)，不變表明無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)；step 2、快速鑒別從第一培養(yǎng)管中取有細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)物分別滴入各個(gè)鑒別微孔中，再加入對(duì)應(yīng)的鑒別液，觸酶孔產(chǎn)生氣泡、尿素酶孔變紅、氧化酶孔變藍(lán)則表明為Hp，否則為其它細(xì)菌；step 3、藥敏試驗(yàn)用稀釋液將有細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)物進(jìn)行稀釋至標(biāo)準(zhǔn)比濁管的濁度水平，再按I : 1000的比例稀釋到第二培養(yǎng)管的培養(yǎng)液中，然后按100微升每孔的量加至每個(gè)藥敏微孔內(nèi)，并按照I滴每孔的量滴加礦物油后在37°c條件下恒溫培養(yǎng)24小時(shí)，若微孔變紅表明該濃度藥物不能抑制Hp生長(zhǎng)，不變色則能抑制Hp生長(zhǎng)。以下舉例介紹詳細(xì)的制備方法—、第一培養(yǎng)管的制備先分別配制各組分，后將各組分混合，3ml/瓶分裝到西林瓶?jī)?nèi)即得。各組分配制方法為腦心浸液肉湯稱腦心浸液干粉38g，加蒸餾水850ml，溶解，調(diào)節(jié)pH7. 4±0. 2，O. 22um孔徑的微孔濾膜過(guò)濾；促生長(zhǎng)劑半胱氨酸溶于IOml蒸餾水中，O. 22um孔徑的微孔濾膜過(guò)濾，與IOOml
小牛血清混合；生長(zhǎng)指示劑TTC 200mg溶解于IOml蒸餾水中，O. 22um孔徑的微孔濾膜過(guò)濾；雜菌抑制劑取萬(wàn)古霉素10mg、二性霉素B5mg、多粘菌素B 25000U、甲氧芐氨嘧啶5mg溶解于IOml蒸懼水中，O. 22um孔徑的微孔濾膜過(guò)濾；解毒劑稱β環(huán)糊精5g溶解于IOml蒸餾水中，O. 22um孔徑的微孔濾膜過(guò)濾；氣體發(fā)生劑lmol/L鹽酸5ml, O. 22um孔徑的微孔濾膜過(guò)濾；碳酸氫鈉O. 42g, 5ml雙蒸水溶解，孔徑為O. 22um的微孔濾膜過(guò)濾；二、鑒別試劑的制備1、制備鑒別微孔板分別溶解鹽酸二甲基對(duì)苯二胺、尿素、5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽，5mg/ml ；加至第2、3、4微孔中，IOul/孔，抽干，裝到鋁箔袋內(nèi)封口。2、配制鑒別液配制3%的過(guò)氧化氫溶液作為觸酶鑒別液，分裝到塑料滴瓶中；配制O. 04%的酚紅液作為尿素酶鑒別液，分裝到塑料滴瓶中；配制α -萘酚溶液作為氧化酶鑒別液，分裝到塑料滴瓶中；配制O. 03%的NBT液作為堿性磷酸酶鑒別液，分裝到塑料滴瓶中；三、藥敏試驗(yàn)套組的制備1、第二培養(yǎng)管制備同第一培養(yǎng)管；2、藥敏微孔板的制備確定藥物濃度以國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)公布的判定藥物耐受MIC值(R)、敏感MIC值(S)為標(biāo)準(zhǔn)，每種藥物有4個(gè)濃度值(IOOul/孔時(shí)的終濃度)，分別為 2R、R、S、0. 5S ；藥物稀釋每種藥物分別按4個(gè)濃度要求稀釋；加入微孔中，快速抽干；裝入鋁箔袋封口。3、標(biāo)準(zhǔn)比濁管的配制O. 048mol/L 氯化鋇 O. 5ml，加到 99. 5ml 的 O. 18mol/L 硫酸(1% V/V)溶液中制成。4、稀釋液的配制稱氯化鈉8. 5g,牛血清白蛋白1g,蒸懼水IOOOml溶解,0. 22um孔徑的微孔濾膜過(guò)濾。綜上，本發(fā)明通過(guò)對(duì)試劑盒的設(shè)計(jì)和使用，解決Hp分離培養(yǎng)、鑒別、藥敏試驗(yàn)檢測(cè)中的以下問(wèn)題樣本不易運(yùn)送、保存問(wèn)題；對(duì)昂貴設(shè)備的依賴問(wèn)題；對(duì)操作人員的高專業(yè)技術(shù)要求問(wèn)題；檢測(cè)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)問(wèn)題；快速組合鑒別問(wèn)題；
操作簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的藥敏試驗(yàn)問(wèn)題。以上對(duì)本發(fā)明實(shí)施例所提供的技術(shù)方案進(jìn)行了詳細(xì)介紹，本文中應(yīng)用了具體個(gè)例對(duì)本發(fā)明實(shí)施例的原理以及實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說(shuō)明只適用于幫助理解本 發(fā)明實(shí)施例的原理；同時(shí)，對(duì)于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，在具體實(shí)施方式
以及應(yīng)用范圍上均會(huì)有改變之處，綜上所述，本說(shuō)明書(shū)內(nèi)容不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
權(quán)利要求
1.一種胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒，其特征在于該試劑盒包括 第一培養(yǎng)管，在所述第一培養(yǎng)管中盛裝有提供Hp生長(zhǎng)基本營(yíng)養(yǎng)的基礎(chǔ)液、提高Hp生長(zhǎng)速度的促生長(zhǎng)劑、指示Hp生長(zhǎng)進(jìn)度的生長(zhǎng)指示劑、抑制其他雜菌生長(zhǎng)的雜菌抑制劑、吸附不利Hp生長(zhǎng)物質(zhì)的解毒劑、保證液體中含有足量的二氧化碳并降低氧氣比例的氣體發(fā)生劑； 鑒別試劑裝置，所述鑒別試劑裝置包括鑒別試驗(yàn)微孔板和四個(gè)分裝有不同鑒別液的滴瓶；所述鑒別微孔板中設(shè)置有4個(gè)鑒別微孔，每個(gè)鑒別微孔內(nèi)分別吸附上用于觸酶、氧化酶、尿素酶、以及堿性磷酸酶檢測(cè)底物；所述鑒別液包括作為觸酶鑒別液的過(guò)氧化氫溶液、作為尿素酶鑒別液的酚紅液、作為氧化酶鑒別液的α-萘酚溶液、以及作為堿性磷酸酶鑒別液的氯化硝基四氮唑藍(lán)溶液； 藥敏試驗(yàn)套組，所述藥敏實(shí)驗(yàn)套組包括第二培養(yǎng)管、藥敏微孔板、標(biāo)準(zhǔn)比濁管、稀釋液組成；所述第二培養(yǎng)管與所述第一培養(yǎng)管相同；所述藥敏微孔板包括有32個(gè)藥敏微孔，將該32個(gè)藥敏微孔以每4孔為一組分為8組，第I組為對(duì)照組，另外7組為藥物鑒別組，在各個(gè)藥物鑒別組中分別盛裝濃度由小到大呈梯度關(guān)系的同一種鑒別藥物，所述鑒別藥物包括甲硝唑、阿莫西林、呋喃唑酮、克拉霉素、左氧氟沙星、慶大霉素、以及多西環(huán)素；所述標(biāo)準(zhǔn)比濁管由氯化鋇溶液和硫酸銨溶液混合制成，該混合溶液的濁度為O. 5個(gè)麥?zhǔn)蠞岫?；所述稀釋液為O. 85%濃度的氯化鈉和O. I %濃度的牛血清白蛋白的混合溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒，其特征在于 所述基礎(chǔ)液包括培養(yǎng)基和7% 10%濃度的去纖維蛋白馬血，所述培養(yǎng)基為腦心浸液瓊脂、哥倫比亞瓊脂、胰蛋白胨大豆瓊脂、Wilkins-Chalgren瓊脂中的任一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒，其特征在于 所述促生長(zhǎng)劑包括主成分和添加成分，所述主成分為脫纖維羊血、脫纖維馬血、馬血清、以及小牛血清中任一種，所述添加成分為丙酮酸鈉、半胱氨酸、亞硫酸鈉、異抗壞血酸、以及氯化血紅素中的一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒，其特征在于 所述解毒劑為可溶性淀粉、活性炭、以及環(huán)糊精中任一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒，其特征在于 所述生長(zhǎng)指示劑為氯化三苯基四氮唑鹽(TTC)、碘硝基四唑紫(INT)、氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)、四硝基四氮唑藍(lán)(TNBT)、噻唑藍(lán)(MTT)中的任一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒，其特征在于 所述雜菌抑制劑包括萬(wàn)古霉素、啶酸、二性霉素B、多粘菌素B、以及甲氧芐氨嘧啶(TMP) ο
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒，其特征在于 所述氣體發(fā)生劑由碳酸鹽和酸組成，所述碳酸鹽為碳酸鈉和碳酸氫鈉的一種，所述酸為檸檬酸、乳酸、乙酸、以及鹽酸中的一種。
8.一種使用權(quán)利要求I所述的試劑盒檢測(cè)胃幽門(mén)螺桿菌的方法，其特征在于包括以下步驟 Hp分離培養(yǎng)將樣本直接投入到第一培養(yǎng)管內(nèi)蓋緊，輕搖以確保樣本完全浸入培養(yǎng)液中，放置37°C恒溫培養(yǎng)，逐日觀察培養(yǎng)液顏色變化，變紅表明有細(xì)菌生長(zhǎng)，不變表明無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)； 快速鑒別從第一培養(yǎng)管中取有細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)物分別滴入各個(gè)鑒別微孔中，再加入對(duì)應(yīng)的鑒別液，觸酶孔產(chǎn)生氣泡、尿素酶孔變紅、氧化酶孔變藍(lán)則表明為Hp，否則為其它細(xì)菌； 藥敏試驗(yàn)用稀釋液將有細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)物進(jìn)行稀釋至標(biāo)準(zhǔn)比濁管的濁度水平，再按I 1000的比例稀釋到第二培養(yǎng)管的培 養(yǎng)液中，然后按100微升每孔的量加至每個(gè)藥敏微孔內(nèi)，并按照I滴每孔的量滴加礦物油后在37°C條件下恒溫培養(yǎng)24小時(shí)，若微孔變紅表明該濃度藥物不能抑制Hp生長(zhǎng)，不變色則能抑制Hp生長(zhǎng)。
全文摘要
本發(fā)明屬于胃幽門(mén)螺桿菌檢查技術(shù)領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種胃幽門(mén)螺桿菌快速培養(yǎng)、鑒別與藥敏的試劑盒及其檢測(cè)方法。該試劑盒包括第一培養(yǎng)管、鑒別試劑裝置、以及藥敏實(shí)驗(yàn)套組。本發(fā)明通過(guò)Hp培養(yǎng)管實(shí)現(xiàn)標(biāo)本床邊接種，省去傳統(tǒng)的樣本運(yùn)輸、保存等操作環(huán)節(jié)；還可實(shí)現(xiàn)普通恒溫箱培養(yǎng)，解除對(duì)二氧化碳培養(yǎng)箱的依賴；并且，以顏色變化為Hp生長(zhǎng)結(jié)果指標(biāo)，使非專業(yè)人員也能準(zhǔn)確判讀結(jié)果；通過(guò)促生長(zhǎng)劑和生長(zhǎng)指示劑結(jié)合，縮短培養(yǎng)時(shí)間，實(shí)現(xiàn)Hp快速培養(yǎng)；本發(fā)明通過(guò)Hp鑒別試劑，實(shí)現(xiàn)Hp快速組合鑒別。本發(fā)明通過(guò)Hp藥敏試驗(yàn)套組，實(shí)現(xiàn)Hp藥敏性的快速準(zhǔn)確測(cè)定。綜上，通過(guò)本發(fā)明可快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出胃幽門(mén)螺桿菌。
文檔編號(hào)C12Q1/58GK102888442SQ20111020320
公開(kāi)日2013年1月23日 申請(qǐng)日期2011年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月20日
發(fā)明者農(nóng)高惠 申請(qǐng)人:農(nóng)高惠