專利名稱：一種蘇云金桿菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物培養(yǎng)基的制備方法，具體涉及一種蘇云金桿菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法。
背景技術(shù)：
蘇云金桿菌UaciBm ttmringiensis，^^1^、Bt)是一種對害蟲毒力強且對天敵無毒性的昆蟲病原微生物，對高等動物和人無毒性。它是目前研究最為深入、使用最為廣泛的微生物殺蟲劑，對16個目3000多種害蟲有活性。目前工業(yè)化生產(chǎn)Bt主要以各種工農(nóng)業(yè)產(chǎn)品或農(nóng)副產(chǎn)品為主要原料，如葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、黃豆粉、玉米淀粉和花生餅粉等， 因此有以下3個缺點①目前的生產(chǎn)原料價格占總生產(chǎn)成本的35% 59%，造成Bt殺蟲劑價格偏高而難以普及。②工業(yè)化生產(chǎn)的原料大部分來源于糧食，因而造成原料成本高、原料取材不便、占用糧食資源等問題。③生產(chǎn)原料經(jīng)過生產(chǎn)后形成的廢料，難以循環(huán)再利用，造成對環(huán)境的污染破壞。因此，為降低成本、提高經(jīng)濟效益，有關(guān)使用工農(nóng)業(yè)副產(chǎn)品、廢棄物、 污水、污泥等廉價原料替代傳統(tǒng)原料進行Bt生產(chǎn)的研究逐漸受到重視，國內(nèi)外已有相關(guān)研究成果表明利用這些廉價原料進行生產(chǎn)是一個可行的方向。中國有悠久的食用菌栽培傳統(tǒng)，年產(chǎn)量占世界的60%以上。但是，在食用菌大批量生產(chǎn)獲得高經(jīng)濟效益回報的同時也造成食用菌栽培廢料(又稱菌糠、菌渣)對環(huán)境污染、資源浪費等問題。菌糠作為一種廉價的農(nóng)業(yè)副產(chǎn)品，含有豐富的蛋白質(zhì)和其他營養(yǎng)成分，隨意丟棄或燃燒是對資源的浪費，同時菌糠中尚含有大量的菌絲體、食用菌生長代謝產(chǎn)物以及其他未利用的營養(yǎng)物質(zhì)，各種有害生物如霉菌、蚊類、螨類等極易在其中繁衍增殖，造成環(huán)境污染，危害食用菌生產(chǎn)，也影響人類生活。因此，合理的開發(fā)利用菌糠，不僅可以廣辟資源，化廢為寶，降低生產(chǎn)成本，而且可以減少對環(huán)境的污染，具有顯著的生態(tài)效益和經(jīng)濟效益。國內(nèi)外尚未見利用菌糠作為主要原料制備蘇云金桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種蘇云金桿菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，所采用的原料主要為食用菌栽培過程中產(chǎn)生的廢料，以降低蘇云金桿菌生物農(nóng)藥的生產(chǎn)成本。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的
本發(fā)明的一種利用金針菇菌糠制備蘇云金桿菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，其特征在于操作步驟如下
1、菌糠原料粉制備將脫袋后的金針菇菌糠于5(T90°C條件下烘至含水率不高于15%， 粉碎并過Γ10目篩，獲得菌糠原料粉；
2、固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基制備取10kg的菌糠原料粉，加入麩皮2、kg、或加入干奶牛糞 6 10 kg、或者加入黃豆餅粉、玉米粉和酵母粉各廣4 kg、0.5 1.5 kg和0.廣0.3 kg ；另加入碳酸鈣0. Γ0. 4kg、金屬離子貯存液0. 04、. IL和水1(T25L，攪拌均勻滅菌后即得到蘇云金芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基。
所述金屬離子貯存液的配方為=K2HPO4500g、KH2PO4 500g、MgCl2 20. 3 g 和 MnCl2 Ig溶于IL水中。所述K2HPO4或K2HP04、MgCl2、CaCO3和MnCl2,為化學(xué)純，固體；所有添加料均可在市
場購得。麩皮的主要作用是補充菌糠中的氮源和部分碳源；玉米粉的主要作用是替代麩皮補充蘇云金桿菌生長過程中所需的碳源；黃豆餅粉和酵母粉的主要作用是替代麩皮補充蘇云金桿菌生長過程中所需的主要氮源；KH2PO4和K2HPO4的主要作用是作為核酸、核蛋白、磷脂、輔酶及ATP等高分子的成分，并作為緩沖系統(tǒng)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基PH ；MgCl2的作用是激活和增強敏感昆蟲中腸蛋白酶活性，進而提高蘇云金桿菌對昆蟲的毒力；CaCO3的作用是穩(wěn)定培養(yǎng)基中的PH并且鈣離子是芽孢形成所需的重要因子；MnCl2的作用是作為過氧化物歧化酶、 磷酸烯醇式脫羧酶和檸檬酸合成酶的重要成分，促進菌體的快速分裂和增殖。將上述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后接入蘇云金桿菌菌種，按常規(guī)固體培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物的方法發(fā)酵、干燥、粉碎得到蘇云金桿菌生物農(nóng)藥原粉。本發(fā)明的優(yōu)點在于
1、以菌糠作為主要原料，具有工藝簡單、取材方便、生產(chǎn)成本低還能變廢為寶的特點。 本發(fā)明的培養(yǎng)基以菌糠為主要原料，統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，食用菌工廠化生產(chǎn)過程中每產(chǎn)出1千克的食用菌，就會產(chǎn)生1千克的菌糠，而菌糠的價格僅為5(Γιοο元/噸，較之使用價格為 3000^4800元/噸的傳統(tǒng)豆餅、麩皮為主要原料的培養(yǎng)基相比，在價格上有明顯的優(yōu)勢。所以采用本發(fā)明的培養(yǎng)基生產(chǎn)的蘇云金桿菌生物農(nóng)藥原粉的生產(chǎn)成本能夠降低一半。原料粉中含有豐富的粗纖維、碳水化合物、粗蛋白、磷、以及蘇云金桿菌生長所需的金屬離子等營養(yǎng)元素，是理想的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基。我國的食用菌產(chǎn)量居世界第一，且在逐年攀升，以菌糠為原料，原料充足、營養(yǎng)豐富、成分穩(wěn)定、取材方便、價格低廉，用于生產(chǎn)蘇云金桿菌生物農(nóng)藥，大大降低發(fā)酵成本，在價格上將具有很強的市場競爭力。原粉加入添加劑后能夠調(diào)配成可濕性粉劑、水分散劑、泡騰片劑等不同劑型的生物農(nóng)藥，用于糧食、棉花、蔬菜、瓜果、綠地、林木以及公共衛(wèi)生方面16個目3000多種害蟲的防治。2、使用本發(fā)明的固態(tài)培養(yǎng)基與使用其他固態(tài)培養(yǎng)基生產(chǎn)蘇云金桿菌生物農(nóng)藥的方法相比，由于食用菌栽培過程中已經(jīng)將409Γ70%的粗纖維降解，易于后期加工和粉碎，因此可以免去前期加入纖維素酶酶解纖維素的過程。而且菌糠中的菌絲體含有大量的營養(yǎng)物質(zhì)，作為培養(yǎng)基只需添加少量的營養(yǎng)物質(zhì)就能夠滿足蘇云金桿菌的生長，節(jié)約了許多原料成本。
具體實施例方式為了充分公開本發(fā)明的一種蘇云金桿菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，以下結(jié)合實施例加以說明。
實施例一利用金針菇菌糠制備蘇云金桿菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的方法 1、菌糠原料粉制備
按表1條件加工金針菇菌糠，使其含水率不高于15%，直徑不大于5 mm備用。表1金針菇菌糠原料粉加工方法
權(quán)利要求
1.一種蘇云金桿菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于操作步驟如下(1)菌糠原料粉制備將脫袋后的金針菇菌糠于5(T90°C條件下烘至含水率不高于 15%，粉碎并過4 10目篩，獲得菌糠原料粉；(2)固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基制備取10kg的菌糠原料粉，加入麩皮2、kg、或加入干奶牛糞 6 10 kg、或者加入黃豆餅粉、玉米粉和酵母粉各廣4 kg、0.5 1.5 kg和0.廣0.3 kg ；另加入碳酸鈣0. Γ0. 4kg、金屬離子貯存液0. 04、. IL和水1(T25L，攪拌均勻后滅菌；所述金屬離子貯存液的配方為=K2HPO4 500g、KH2PO4 500g、MgCl2 20. 3 g 和 MnCl2 Ig 溶于 IL 水中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蘇云金桿菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于操作步驟如下(1)菌糠原料粉制備將脫袋后的金針菇菌糠于80°C條件下烘至含水率為8%，粉碎并過4目篩；(2)固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基制備取10kg的菌糠原料粉，加入麩皮4 kg、碳酸鈣OJkg、金屬離子貯存液0.06 L和水12 L，攪拌均勻后經(jīng)15磅壓力、121°C滅菌2(T30min，即可。
全文摘要
一種蘇云金桿菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，包括菌糠干燥、菌糠粉碎和固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基調(diào)配。本發(fā)明以生產(chǎn)食用菌后的廢培養(yǎng)料菌糠為主要原料，廢物利用，變廢為寶，除添加了培養(yǎng)蘇云金桿菌所必須的C和N等營養(yǎng)成份外，還針對提高蘇云金桿菌的殺蟲毒力而添加了K、Mg、Ca和Mn等成份，既保證了產(chǎn)品質(zhì)量，而且大大降低了生產(chǎn)成本。經(jīng)統(tǒng)計，采用本發(fā)明的培養(yǎng)基生產(chǎn)蘇云金桿菌生物農(nóng)藥原粉的生產(chǎn)成本，僅相當(dāng)于使用常規(guī)方法生產(chǎn)成本的一半。還解決了生產(chǎn)食用菌廢菌棒污染環(huán)境的問題，經(jīng)濟效益、生態(tài)效益顯著。
文檔編號C12N1/20GK102250818SQ20111020705
公開日2011年11月23日 申請日期2011年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月23日
發(fā)明者關(guān)雄, 吳松青, 姚祖杰, 張小娟, 張靈玲, 彭艷, 陳忍, 黃冬梅 申請人:福建農(nóng)林大學(xué)