專利名稱：一種同時(shí)分析人基因組dna 22個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的試劑盒及其使用方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種22個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)試劑盒，具體是涉及一種同時(shí)分析人基因組DNA 22個基因座的五色熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒，該試劑盒可以應(yīng)用于個體識別和親子鑒定。
背景技術(shù)：
短串聯(lián)重復(fù)序列基因座(STR)是目前普遍應(yīng)用的遺傳標(biāo)記。90年代初STR基因座多態(tài)性的發(fā)現(xiàn)，特別是STR基因座具有片段小容易擴(kuò)增，適宜于檢驗(yàn)微量和降解檢材，而且各基因座的擴(kuò)增條件相似而能夠復(fù)合擴(kuò)增，因而具有靈敏、準(zhǔn)確、快速、信息量大等優(yōu)點(diǎn)。尤其是在建立DNA數(shù)據(jù)庫方面，STR復(fù)合擴(kuò)增技術(shù)具有極大的優(yōu)越性。因此美國FBI選擇了
13 個 STR 基因座用于建立 DNA 數(shù)據(jù)庫-CODIS (Combined DNA Index System):CSFlP0、
D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA, THOU TPOX, vWA。這些STR基因座通常被稱為13個核心基因座。正因?yàn)镾TR所具備的優(yōu)點(diǎn)和應(yīng)用前景，法醫(yī)學(xué)界以及一些大的公司均投入大量的資金對其進(jìn)行了開發(fā)性的研究。90年代中后期以美國ABI公司為代表的研發(fā)商建立起熒光復(fù)合擴(kuò)增體系。目前最具代表性的是ABI(Applied Biosystems, USA)公司的Identifiler 和Promega (USA)公司的PowerPlex-16熒光檢測試劑盒。這兩個試劑盒均包括上述13個核心基因座。長期的DNA檢驗(yàn)實(shí)踐表明，短串聯(lián)重復(fù)序列基因座的遺傳多態(tài)性在種族間存在一定的差異，各個基因座間差別也很大。在美國FBI推薦的13個核心基因座中，有部分基因座遺傳多態(tài)性不高，或是不同人群間差異較大。由此給DNA檢驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用及其效率帶來一定的影響。專利ZL200510096613. 6公開了一種同時(shí)分析人基因組DNA的多個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于所述的15個基因座為=AmeIogeniru D2S1338、D3S1358、 D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、Penta E、CSF1P0、 vWA、FGA。該專利提供了對15個基因座的分型結(jié)果，為4色熒光檢測試劑盒。我們對中國人群的短串聯(lián)重復(fù)序列基因座的遺傳多態(tài)性進(jìn)行了深入的研究，并以此為依據(jù)開發(fā)新的短串聯(lián)重復(fù)序列基因座的復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)試劑盒，以求在5色熒光檢測試劑盒中，提供對包括Amelogenin在內(nèi)的22個基因座的分型結(jié)果，同時(shí)提高試劑盒的累計(jì)個體識別能力和累積非父排除率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種通過復(fù)合擴(kuò)增22個基因座來進(jìn)行個體識別和親子鑒定的熒光標(biāo)記STR復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)試劑盒。涉及檢測人基因組中具有多態(tài)性的遺傳標(biāo)記。本發(fā)明特別涉及用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)在一個體系中同時(shí)擴(kuò)增多個短串聯(lián)重復(fù)基因座。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，采用如下技術(shù)方案
一種同時(shí)分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的試劑盒，所述的22個基因座為D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta Ε、D2S441、TPOX, THOU D2S1338、 CSF1P0、Penta D、D10S1248、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、 D12S391、FGA、性別基因座Amelogenin ；其特征在于該試劑盒包括22個基因座對應(yīng)的引物如下
權(quán)利要求
1. 一種同時(shí)分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的試劑盒，所述的22 個基因座為D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta Ε、D2S441、ΤΡΟΧ、ΤΗ01、D2S1338、 CSF1P0、Penta D、D10S1248、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、 D12S391、FGA、性別基因座Amelogenin ；其特征在于該試劑盒包括22個基因座對應(yīng)的引物如下
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的試劑盒，其特征在于22個基因座對應(yīng)的引物的濃度為
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種同時(shí)分析人基因組DNA22個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的試劑盒，其特征在于所述的每個基因座對應(yīng)的引物中至少有一個引物的5’端進(jìn)行熒光染料標(biāo)記。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種同時(shí)分析人基因組DNA22個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的試劑盒，其特征在于所述的熒光染料標(biāo)記物為6-FAM、HEX、TAMRA或R0X。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種同時(shí)分析人基因組DNA22個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的試劑盒，其特征在于將所述22個基因座分組，具體為D3S1358、D13S317、D7S820、 D16S539、Penta E和D2S441為第一組，該組基因座對應(yīng)的引物的熒光標(biāo)記物為6-FAM、 HEX、TEMRA 和 ROX 的任意一種；TPOX、THOl、D2S1338、CSF1P0、Penta D 和 D10S1248 為第二組，該組基因座對應(yīng)的引物的熒光標(biāo)記物為與第一組不同的熒光染料標(biāo)記物；D19S433、 vffA, D21S11、D18S51、D6S1043為第三組，該組基因座對應(yīng)的引物的熒光標(biāo)記物為與第一組和第二組都不同的熒光染料標(biāo)記物；D8S1179、D5S818、D12S391、FGA,以及性別基因座 Amelogenin為第四組，該組基因座對應(yīng)的引物的熒光標(biāo)記物為與第一組、第二組和第三組都不同的熒光染料標(biāo)記物；該試劑盒還設(shè)有內(nèi)標(biāo)，其選用橙色熒光標(biāo)記，熒光標(biāo)記物為 SIZ。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任意一種所述的一種同時(shí)分析人基因組DNA22個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的試劑盒，其特征在于所述的試劑盒由如下組成
7. 一種同時(shí)分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的試劑盒的使用方法，其特征在于按如下步驟實(shí)現(xiàn) A、擴(kuò)增體系為
8.根據(jù)權(quán)利要求7—種同時(shí)分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的試劑盒的使用方法，其特征在于電泳采用多道或單道毛細(xì)管電泳。
9.根據(jù)權(quán)利要求7—種同時(shí)分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的試劑盒的使用方法，其特征在于其中基因組DNA樣品來源于精斑、唾液斑、組織、血痕或血液。
10.一種同時(shí)分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的試劑盒的應(yīng)用，其特征在于該試劑盒用于個體識別、親子鑒定。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種同時(shí)分析人基因組DNA22個基因座的五色熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒；本發(fā)明將22個基因座分為4組，共涉及5種顏色的熒光標(biāo)記；本發(fā)明的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒的靈敏度高，在DNA模板量為0.12ng的條件下，可檢出全部22個基因座；適用于血濾紙、FTA卡采集樣本的直接擴(kuò)增。
文檔編號C12Q1/68GK102321748SQ20111022932
公開日2012年1月18日 申請日期2011年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月11日
發(fā)明者周翔, 夏子芳, 張秀芳, 杜蔚安, 楊輝, 鄭衛(wèi)國 申請人:無錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司