專利名稱：三維細胞動態(tài)培養(yǎng)反應(yīng)器的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于細胞培養(yǎng)設(shè)備或裝置技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到在二氧化碳環(huán)境中使用流動的細胞培養(yǎng)液的培養(yǎng)設(shè)備。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)方法，即二維細胞培養(yǎng)會導(dǎo)致細胞失去其與組織相關(guān)的功能，無法準確地反映細胞在體內(nèi)的生長情況。動物模型和體內(nèi)試驗雖然可以反映細胞生長的真實內(nèi)環(huán)境，但是成本太高、過程復(fù)雜，而且受到倫理學(xué)方面的制約。在體內(nèi)環(huán)境下，所有的細胞都是在一種三維空間中。三維細胞培養(yǎng)可以重現(xiàn)細胞-細胞和細胞-基質(zhì)之間的相互作用， 與二維細胞培養(yǎng)相比，更能真實地反映細胞生長的內(nèi)環(huán)境。因此，三維細胞培養(yǎng)可以架起二維細胞培養(yǎng)和動物試驗之間的橋梁。三維細胞培養(yǎng)已在細胞生物學(xué)方面的研究中得到了應(yīng)用。在常規(guī)的三維細胞接種和培養(yǎng)的方法中，主要采用靜態(tài)接種和靜態(tài)培養(yǎng)的方法。 這一方法具有接種率低、接種不均勻，生長情況不均勻等缺點。動態(tài)接種和灌流培養(yǎng)在肝細胞的高密度培養(yǎng)中和靜態(tài)培養(yǎng)相比顯示出了其獨特的優(yōu)勢，如細胞在支架上的粘附性好、 分散更均勻、細胞存活率更高等。為了實現(xiàn)動態(tài)接種和灌流培養(yǎng)方法，目前國內(nèi)外已研制出一些細胞反應(yīng)器。目前，臨床使用的生物反應(yīng)器大致分為四種類型中空纖維型、單層平板型、灌注床型、包被懸浮型。這些生物反應(yīng)器的功能單一，有一些儀器用于細胞的分離或收集，一些儀器用于細胞懸液的配制，一些儀器用于細胞與材料的參雜，一些儀器用于細胞和組織的培養(yǎng)，這些生物反應(yīng)器的主要缺點是操作復(fù)雜性、易于污染。專利號為ZL 031106701. 2、發(fā)明名稱為《細胞反應(yīng)器》的發(fā)明專利，專利申請?zhí)枮?200910229109. 1、發(fā)明名稱為《藥物肝毒性評價用多糖復(fù)合支架灌流式肝細胞反應(yīng)器系統(tǒng)》 的發(fā)明專利，專利申請?zhí)枮?0091(^^907. 8、發(fā)明名稱為《一種細胞反應(yīng)器及包括該反應(yīng)器的人工肝支持系統(tǒng)》的發(fā)明專利，這三種細胞反應(yīng)器都不能提供細胞生長所需的溫度、濕度以及氣體條件，必須將細胞反應(yīng)器置于二氧化碳培養(yǎng)箱中才可以使用，而且細胞反應(yīng)器和一種細胞反應(yīng)器及包括該反應(yīng)器的人工肝支持系統(tǒng)不能實現(xiàn)細胞動態(tài)接種、動態(tài)培養(yǎng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述生物反應(yīng)器的缺點，提供一種細胞動態(tài)接種、灌流培養(yǎng)、不需要將細胞反應(yīng)器置于二氧化碳培養(yǎng)箱中的三維細胞動態(tài)培養(yǎng)反應(yīng)器。解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是在反應(yīng)器外殼體內(nèi)設(shè)置有反應(yīng)器內(nèi)殼體，反應(yīng)器外殼體與反應(yīng)器內(nèi)殼體保持有間隙，形成水流通道，反應(yīng)器外殼體的左側(cè)下部設(shè)置伸入到反應(yīng)器內(nèi)殼體內(nèi)下部的進氣管，反應(yīng)器內(nèi)殼體的上端設(shè)置安裝有出氣單向閥門的密封上蓋，反應(yīng)器內(nèi)殼體的側(cè)壁上設(shè)置有出液管，反應(yīng)器內(nèi)殼體內(nèi)的下部設(shè)置加工有通氣孔的支撐板，支撐板與反應(yīng)器內(nèi)殼體內(nèi)底部之間形成與進氣管相聯(lián)通的氣室，支撐板上設(shè)置有下防水透氣膜，下防水透氣膜上部設(shè)置有細胞培養(yǎng)支架，細胞培養(yǎng)支架的上表面設(shè)置有上防水透氣膜，進液管的下端插入到反應(yīng)器內(nèi)殼體內(nèi)穿過細胞培養(yǎng)支架至下防水透氣膜的上表面，進液管通過導(dǎo)管與蠕動泵的出口相聯(lián)通，蠕動泵的進口通過安裝在導(dǎo)管上的細胞懸液出液閥門與細胞懸液瓶相聯(lián)通、通過安裝在導(dǎo)管上的細胞培養(yǎng)液出液閥門與細胞培養(yǎng)液瓶相聯(lián)通、通過安裝在導(dǎo)管上的緩沖液閥門與緩沖液瓶相聯(lián)通，出液管通過安裝在導(dǎo)管上的細胞懸液進液閥門與細胞懸液瓶相聯(lián)通、通過安裝在導(dǎo)管上的細胞培養(yǎng)液進液閥門與細胞培養(yǎng)液瓶相聯(lián)通、通過安裝在導(dǎo)管上的廢液閥門與廢液瓶相聯(lián)通。本發(fā)明的細胞培養(yǎng)支架為多孔細胞培養(yǎng)支架。本發(fā)明的多孔細胞培養(yǎng)支架為絲素蛋白/羥基磷灰石/膠原蛋白復(fù)合多孔支架、 殼聚糖/羥基磷灰石三維多孔支架、聚乳酸-聚乙醇酸共聚物/羥基磷灰石/膠原蛋白復(fù)合多孔支架中的任意一種。本發(fā)明采用絲素蛋白/羥基磷灰石/膠原蛋白復(fù)合多孔支架制備成細胞培養(yǎng)支架，在二氧化碳環(huán)境中，細胞粘附在細胞支架上，細胞培養(yǎng)液在細胞培養(yǎng)支架上循環(huán)流動， 不需要將粘附有細胞的細胞培養(yǎng)支架放置在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)，實現(xiàn)細胞動態(tài)接種、細胞動態(tài)培養(yǎng)，簡化了工藝，減少了設(shè)備，縮短了細胞培養(yǎng)時間，降低了細胞培養(yǎng)費用， 本發(fā)明可用于貼壁細胞的培養(yǎng)。


圖1是本發(fā)明一個實施例的結(jié)構(gòu)示意圖。圖2是人骨肉瘤細胞MG-63在支架上動態(tài)培養(yǎng)48小時后放大1500倍的環(huán)境掃描電子顯微鏡圖。圖3是人骨肉瘤細胞MG-63在支架上動態(tài)培養(yǎng)48小時后放大1000倍的環(huán)境掃描電子顯微鏡圖。圖4是人結(jié)腸癌細胞Lovo在支架上動態(tài)培養(yǎng)48小時后放大4000倍的環(huán)境掃描電子顯微鏡圖。圖5是人結(jié)腸癌細胞Lovo在支架上動態(tài)培養(yǎng)48小時后放大1000倍的環(huán)境掃描電子顯微鏡圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進一步詳細說明，但本發(fā)明不限于這些實施例。實施例1在圖1中，本實施例的三維細胞動態(tài)培養(yǎng)反應(yīng)器是由反應(yīng)器外殼體1、反應(yīng)器內(nèi)殼體2、進液管3、上防水透氣膜4、出液管5、蠕動泵6、緩沖液閥門7、細胞培養(yǎng)液出液閥門8、 細胞懸液出液閥門9、細胞懸液進液閥門10、細胞懸液瓶11、細胞培養(yǎng)液進液閥門12、細胞培養(yǎng)液瓶13、緩沖液瓶14、廢液閥門15、廢液瓶16、細胞培養(yǎng)支架17、下防水透氣膜18、支撐板19、進氣管20、密封上蓋21、出氣單向閥門22聯(lián)接構(gòu)成。在反應(yīng)器外殼體1內(nèi)安裝有反應(yīng)器內(nèi)殼體2，反應(yīng)器外殼體1和反應(yīng)器內(nèi)殼體2的形狀為圓柱形，反應(yīng)器外殼體1和反應(yīng)器內(nèi)殼體2采用有機玻璃制成，反應(yīng)器外殼體1與反應(yīng)器內(nèi)殼體2保持有間隙，形成水流通道，反應(yīng)器外殼體1與反應(yīng)器內(nèi)殼體2之間左端形成進水口 a、右端形成出水口 b，37°C的循環(huán)水從進水口 a進入，流經(jīng)反應(yīng)器外殼體1與反應(yīng)器內(nèi)殼體2之間的水流通道，從出水口 b流出。反應(yīng)器外殼體1的左側(cè)下部安裝有進氣管20， 進氣管20插入到反應(yīng)器外殼體1內(nèi)，進氣管20的內(nèi)端伸入到反應(yīng)器內(nèi)殼體2內(nèi)的下部。在反應(yīng)器內(nèi)殼體2的上端通過螺紋聯(lián)接安裝有密封上蓋21，密封上蓋21上通過螺紋聯(lián)接安裝有出氣單向閥門22。反應(yīng)器內(nèi)殼體2的右側(cè)有出液管5，出液管5的外端部為加工有孔的封閉管，出液管5與反應(yīng)器內(nèi)殼體2連為一體相聯(lián)通。反應(yīng)器內(nèi)殼體2內(nèi)的下部安裝有支撐板19，支撐板19上加工有通氣孔，支撐板19與反應(yīng)器內(nèi)殼體2內(nèi)底部之間保持有距離，形成氣室，氣室與進氣管20相聯(lián)通，氣室內(nèi)底部裝有25°C電阻率為18. 2MQ-cm 的超純水，超純水用于提供濕度，無菌的二氧化碳與空氣的混合氣可進入到氣室內(nèi)，從密封上蓋21上的出氣單向閥門22流出，二氧化碳與空氣的混合氣中，二氧化碳與空氣的體積比為5 95。支撐板19上放置有下防水透氣膜18，下防水透氣膜18為市場上銷售的商品， 由美國Sigma Technonologies htl. LLC公司銷售，下防水透氣膜18用于通氣和防止下防水透氣膜18上的水流下。反應(yīng)器內(nèi)殼體2下防水透氣膜18上部裝有細胞培養(yǎng)支架17，本實施例的細胞培養(yǎng)支架17采用多孔支架，具體采用絲素蛋白/羥基磷灰石/膠原蛋白復(fù)合多孔支架，細胞培養(yǎng)支架17用于粘附細胞和容納細胞培養(yǎng)液，細胞培養(yǎng)液采用(ibico公司生產(chǎn)的DMEM高糖培養(yǎng)液和胎牛血清的混合溶液，在混合溶液中，DMEM細胞培養(yǎng)液與牛血清溶液的體積比為9 1。細胞培養(yǎng)支架17的上表面放置有上防水透氣膜4，上防水透氣膜 4和下防水透氣膜18為相同的商品，上防水透氣膜4用于保濕通氣。進液管3的下端插入到反應(yīng)器內(nèi)殼體2內(nèi)穿過細胞培養(yǎng)支架17至下防水透氣膜18的上表面，進液管3通過導(dǎo)管與蠕動泵6的出口相聯(lián)通，蠕動泵6的進口通過安裝在導(dǎo)管上的細胞懸液出液閥門9與細胞懸液瓶11相聯(lián)通，細胞懸液瓶11通過安裝在導(dǎo)管上的細胞懸液進液閥門10與出液管 5相聯(lián)通，蠕動泵6可將細胞懸液注入到細胞培養(yǎng)支架17上并循環(huán)流動；蠕動泵6的進口通過安裝在導(dǎo)管上的細胞培養(yǎng)液出液閥門8與細胞培養(yǎng)液瓶13相聯(lián)通，細胞培養(yǎng)液瓶13 通過安裝在導(dǎo)管上的細胞培養(yǎng)液進液閥門12與出液管5相聯(lián)通，蠕動泵6可將細胞培養(yǎng)液注入到細胞培養(yǎng)支架17上并循環(huán)流動；蠕動泵6的進口通過安裝在導(dǎo)管上的緩沖液閥門7 與緩沖液瓶14相聯(lián)通，蠕動泵6可將磷酸緩沖溶液注入到細胞培養(yǎng)支架17上，磷酸緩沖溶液用于漂洗粘附在細胞培養(yǎng)支架17上的細胞；廢液瓶16通過安裝在導(dǎo)管上的廢液閥門15 與出液管5相聯(lián)通，漂洗后的磷酸緩沖溶液經(jīng)安裝在導(dǎo)管上的廢液閥門15流入到廢液瓶16 內(nèi)。這種結(jié)構(gòu)的三維細胞動態(tài)培養(yǎng)反應(yīng)器，不需要將粘附有細胞的細胞培養(yǎng)支架17 放置在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)，實現(xiàn)細胞動態(tài)接種、細胞動態(tài)培養(yǎng)，簡化了工藝，減少了設(shè)備，縮短了細胞培養(yǎng)時間，降低了細胞培養(yǎng)費用。本實施例的絲素蛋白/羥基磷灰石/膠原蛋白復(fù)合多孔支架由發(fā)明人制備，其制備方法如下1、制備絲素蛋白溶液取去蛹的蠶繭20g，加入0. 02mol/L Na2CO3水溶液2000g，煮沸30分鐘，取出擰干， 用蒸餾水沖洗干凈；再重復(fù)上述操作2次，50°C真空干燥，得到脫膠蠶絲；將5g脫膠蠶絲置于50g 9. 3mo 1/L LiBr溶液中，50°C保溫至脫膠蠶絲完全溶解，裝入截流分子量為3500道爾頓的透析袋中，在lml/min流速的蒸餾水中透析5天，離心分離，所得上清液為絲素蛋白溶液，用考馬斯亮藍法測定絲素蛋白溶液的質(zhì)量濃度，用蒸餾水稀釋至絲素蛋白溶液的質(zhì)量濃度為6%，5°C儲存?zhèn)溆谩?、制備支架將4g粒徑為180 250 μ m的NaCl、0. 16g羥基磷灰石混合均勻，NaCl與羥基磷灰石的質(zhì)量比為1 0.04，裝填入體積為IOmL的注射器中，加入4mL質(zhì)量分數(shù)為6%的膠原蛋白溶液與質(zhì)量分數(shù)為6%的絲素蛋白溶液的體積比為1 3的混合液，推動注射器的活塞柄，使混合液通過NaCl與羥基磷灰石的混合物，室溫放置M小時，從注射器出粘結(jié)塊，用體積分數(shù)為70%的乙醇溶液浸泡30分鐘，用超純水徹底清洗，制備成絲素蛋白/羥基磷灰石/膠原蛋白復(fù)合多孔支架。實施例2在本實施例中，反應(yīng)器內(nèi)殼體2內(nèi)的支撐板19上放置有下防水透氣膜18，反應(yīng)器內(nèi)殼體2下防水透氣膜18上部裝有細胞培養(yǎng)支架17，本實施例的細胞培養(yǎng)支架17采用殼聚糖/羥基磷灰石三維多孔支架，殼聚糖/羥基磷灰石三維多孔支架由發(fā)明人制備。其它零部件以及零部件的聯(lián)接關(guān)系與實施例1相同。殼聚糖/羥基磷灰石三維多孔支架的制備方法如下1、溶解殼聚糖和羥基磷灰石將Ig殼聚糖(脫乙酰度為80^-95^),0. Ig羥基磷灰石溶解于IOOmL 20g/L 的乙酸水溶液中，攪拌6小時，離心去氣泡，得到殼聚糖與羥基磷灰石的混合液。2、制備殼聚糖/羥基磷灰石三維多孔復(fù)合支架以SW2微球為致孔劑，將粒徑為100 150 μ m的SW2微球加入20mL帶針頭的注射器中，用杵擠壓、夯實SiO2微球，直至其在注射器中的位置不發(fā)生改變?yōu)橹?，SiO2微球的加入量為注射器容積的0. 25，再向注射器中加入殼聚糖與羥基磷灰石的混合液，混合液的加入量與SiA微球的體積相同，推動注射器的活塞柄，使混合液流過緊密排列的SiA微球，將注射器置于真空干燥箱中60°C干燥M小時，從注射器中取出粘結(jié)塊，用刀切去粘結(jié)塊上、下表面層，將切去上、下表面層的粘結(jié)塊置于0. 05g/mL的NaOH水溶液中煮沸3小時， 用水沖洗至中性，在冰箱中-20°C預(yù)凍12 M小時，用液氮預(yù)凍30分鐘，-50°C冷凍干燥 24小時，制備成殼聚糖/羥基磷灰石三維多孔復(fù)合支架材料。實施例3在本實施例中，反應(yīng)器內(nèi)殼體2內(nèi)的支撐板19上放置有下防水透氣膜18，反應(yīng)器內(nèi)殼體2下防水透氣膜18上部裝有細胞培養(yǎng)支架17，本實施例的細胞培養(yǎng)支架17采用聚乳酸-聚乙醇酸共聚物/羥基磷灰石/膠原蛋白復(fù)合多孔支架，聚乳酸-聚乙醇酸共聚物 /羥基磷灰石/膠原蛋白復(fù)合多孔支架由發(fā)明人制備。其它零部件以及零部件的聯(lián)接關(guān)系與實施例1相同。以制備聚乳酸-聚乙醇酸共聚物/羥基磷灰石/膠原蛋白復(fù)合多孔支架IOOg為例，所用的原料及其配比為聚乳酸-聚乙醇酸共聚物95g羥基磷灰石2. 5g膠原蛋白2.5g其制備方法如下
取聚乳酸-聚乙醇酸共聚物95g、羥基磷灰石2. 5g、膠原蛋白2. 5g，混合均勻，用壓片機冷壓成直徑為3cm、厚度為1. 5cm的圓片，圓片的具體尺寸可在直徑為2 5cm、厚度為1 2cm的范圍內(nèi)按照反應(yīng)釜的大小確定。將壓片放入模具中，模具置于超臨界(X)2反應(yīng)釜中，關(guān)閉(X)2放氣閥，設(shè)定反應(yīng)壓力為18MPa、反應(yīng)溫度為45°C、0)2流速為IOmL/分鐘， 打開(X)2鋼瓶閥、高壓泵和溫度控制閥，使壓力和溫度達到設(shè)定值，反應(yīng)45分鐘，打開(X)2放氣閥，關(guān)閉CO2鋼瓶閥、高壓泵和反應(yīng)釜的開關(guān)，壓力降至常壓后從反應(yīng)釜中取出模具，制備成復(fù)合多孔支架材料。本發(fā)明的使用方法和操作步驟如下1、動態(tài)接種先將三維細胞動態(tài)培養(yǎng)反應(yīng)器(除蠕動泵外)滅菌處理，進氣管20通過管道與二氧化碳氣瓶聯(lián)通，將二氧化碳氣體與空氣的無菌混合氣輸入到反應(yīng)器內(nèi)殼體2內(nèi)，用蠕動泵6將細胞懸液以5ml/min的流速經(jīng)進液管3泵入反應(yīng)器內(nèi)殼體2內(nèi)進入細胞培養(yǎng)支架17 循環(huán)流動，持續(xù)1小時進行動態(tài)接種，動態(tài)接種完成后，關(guān)閉蠕動泵6，靜置3小時，使細胞粘附在細胞培養(yǎng)支架17上，用蠕動泵6將磷酸緩沖液淋以lml/min的流速洗掉在細胞培養(yǎng)支架17上未粘附的細胞和粘附不牢固的細胞，直至反應(yīng)器內(nèi)殼體2流出液中無細胞流出止， 使細胞完全粘附在細胞培養(yǎng)支架17上，沖洗后的磷酸緩沖液流入廢液瓶16。2、動態(tài)培養(yǎng)用蠕動泵6將細胞培養(yǎng)液以lml/min的流速經(jīng)進液管3泵入反應(yīng)器內(nèi)殼體2內(nèi)進入細胞培養(yǎng)支架17循環(huán)流動，持續(xù)48小時，完成細胞的動態(tài)培養(yǎng)。為了驗證本發(fā)明的有益效果，發(fā)明人采用本發(fā)明實施例1制備的三維細胞動態(tài)培養(yǎng)反應(yīng)器對人骨肉瘤細胞MG-63、人結(jié)腸癌細胞Lovo進行動態(tài)培養(yǎng)，各種實驗情況如下培養(yǎng)方法與上述動態(tài)培養(yǎng)方法相同。動態(tài)培養(yǎng)48小時后，用Quanta200環(huán)境掃描電子顯微鏡觀察，結(jié)果見圖2 圖5。由圖2 圖5表明，細胞均勻地分布在支架中，在支架的孔中和孔邊緣都均勻的分布著細胞。細胞表面的偽足和微絨毛顯示細胞生長狀態(tài)良好。因此，利用該細胞動態(tài)培養(yǎng)反應(yīng)器可以使細胞更均勻地生長在細胞培養(yǎng)支架17上。
權(quán)利要求
1.一種三維細胞動態(tài)培養(yǎng)反應(yīng)器，其特征在于在反應(yīng)器外殼體(1)內(nèi)設(shè)置有反應(yīng)器內(nèi)殼體O)，反應(yīng)器外殼體(1)與反應(yīng)器內(nèi)殼體( 保持有間隙，形成水流通道，反應(yīng)器外殼體(1)的左側(cè)下部設(shè)置伸入到反應(yīng)器內(nèi)殼體O)內(nèi)下部的進氣管(20)，反應(yīng)器內(nèi)殼體(2) 的上端設(shè)置安裝有出氣單向閥門0 的密封上蓋(21)，反應(yīng)器內(nèi)殼體( 的側(cè)壁上設(shè)置有出液管(5)，反應(yīng)器內(nèi)殼體O)內(nèi)的下部設(shè)置加工有通氣孔的支撐板(19)，支撐板(19)與反應(yīng)器內(nèi)殼體O)內(nèi)底部之間形成與進氣管00)相聯(lián)通的氣室，支撐板(19)上設(shè)置有下防水透氣膜(18)，下防水透氣膜(18)上部設(shè)置有細胞培養(yǎng)支架(17)，細胞培養(yǎng)支架(17) 的上表面設(shè)置有上防水透氣膜G)，進液管C3)的下端插入到反應(yīng)器內(nèi)殼體( 內(nèi)穿過細胞培養(yǎng)支架(17)至下防水透氣膜(18)的上表面，進液管C3)通過導(dǎo)管與蠕動泵(6)的出口相聯(lián)通，蠕動泵(6)的進口通過安裝在導(dǎo)管上的細胞懸液出液閥門(9)與細胞懸液瓶(11) 相聯(lián)通、通過安裝在導(dǎo)管上的細胞培養(yǎng)液出液閥門(8)與細胞培養(yǎng)液瓶(1 相聯(lián)通、通過安裝在導(dǎo)管上的緩沖液閥門(7)與緩沖液瓶(14)相聯(lián)通，出液管( 通過安裝在導(dǎo)管上的細胞懸液進液閥門(10)與細胞懸液瓶(11)相聯(lián)通、通過安裝在導(dǎo)管上的細胞培養(yǎng)液進液閥門(12)與細胞培養(yǎng)液瓶(13)相聯(lián)通、通過安裝在導(dǎo)管上的廢液閥門(15)與廢液瓶(16) 相聯(lián)通。
2.按照權(quán)利要求1所述的三維細胞動態(tài)培養(yǎng)反應(yīng)器，其特征在于所述的細胞培養(yǎng)支架(17)為多孔細胞培養(yǎng)支架。
3.按照權(quán)利要求2所述的三維細胞動態(tài)培養(yǎng)反應(yīng)器，其特征在于所述的多孔細胞培養(yǎng)支架為絲素蛋白/羥基磷灰石/膠原蛋白復(fù)合多孔支架、殼聚糖/羥基磷灰石三維多孔支架、聚乳酸-聚乙醇酸共聚物/羥基磷灰石/膠原蛋白復(fù)合多孔支架中的任意一種。
全文摘要
一種三維細胞動態(tài)培養(yǎng)反應(yīng)器，在反應(yīng)器外殼體內(nèi)設(shè)相互之間保持有間隙的反應(yīng)器內(nèi)殼體，反應(yīng)器外殼體的左側(cè)下部設(shè)伸入到反應(yīng)器內(nèi)殼體內(nèi)下部的進氣管，反應(yīng)器內(nèi)殼體的上端設(shè)裝有出氣單向閥門的密封上蓋，反應(yīng)器內(nèi)殼體側(cè)壁上設(shè)出液管，反應(yīng)器內(nèi)殼體內(nèi)下部設(shè)加工有通氣孔的支撐板，支撐板上設(shè)上部裝有細胞培養(yǎng)支架的下防水透氣膜，細胞培養(yǎng)支架上表面設(shè)上防水透氣膜，進液管的下端插入到下防水透氣膜上表面，進液管與蠕動泵出口相聯(lián)通，蠕動泵進口與細胞懸液瓶、細胞培養(yǎng)液瓶、緩沖液瓶相聯(lián)通，出液管與細胞懸液瓶、細胞培養(yǎng)液瓶、廢液瓶相聯(lián)通。本發(fā)明實現(xiàn)細胞動態(tài)接種、細胞動態(tài)培養(yǎng)，減少了設(shè)備，縮短了細胞培養(yǎng)時間，可用于貼壁細胞的培養(yǎng)。
文檔編號C12M1/04GK102304476SQ20111024227
公開日2012年1月4日 申請日期2011年8月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月22日
發(fā)明者張志琪, 牟朝麗, 祁小妮 申請人:陜西師范大學(xué)