專利名稱：一種nat1基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體的是涉及一種NATl基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片。
背景技術(shù)：
N-乙?；x是很多芳基胺類和肼類物質(zhì)的重要生物轉(zhuǎn)化途徑，由依賴于乙酰輔酶A的N-乙?；D(zhuǎn)移酶(NAT)催化，N-乙酰化轉(zhuǎn)移酶(N-acetyltrans f erase I, NAT)是機體內(nèi)催化含氮化合物使之乙?；拿赶?，它可以活化或降解含氮外 源性物質(zhì)，尤其是含有胺基的外源性致癌物。編碼NAT的基因有NATl和NAT2，位于第8對染色體(8p21. 3-23. I)上，有研究表明，人類NATl有更廣泛的組織分布，存在于結(jié)腸粘膜、肝、膀胱、紅細胞和淋巴細胞中，是結(jié)腸直腸組織中占優(yōu)勢的乙酰轉(zhuǎn)移酶，并參與炎癥性腸病患者5-氨基水楊酸在結(jié)腸粘膜中的代謝。本發(fā)明目標(biāo)檢測的NATI基因突變位點，如表所示
權(quán)利要求
1.一種NATl基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，包括有 (A).針對NATl基因不同多態(tài)性位點分別設(shè)計的野生型和突變型的ASPE引物對每條ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因多態(tài)性位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為:針對C135T位點的SEQ ID NO. 15及SEQ ID NO. 16 ;針對G136A位點的 SEQ IDNO. 17 及 SEQ ID NO. 18 ;針對 T216G 位點的 SEQ ID NO. 19 及 SEQ ID NO. 20 ;針對A328T 位點的 SEQ ID NO. 21 及 SEQ ID NO. 22 ;針對 A460T 位點的 SEQ ID NO. 23 及 SEQ IDNO. 24 ;針對 C106T 位點的 SEQ ID NO. 25 及 SEQ ID NO. 26 ;和 / 或針對 C199T 位點的 SEQID NO. 27 及 SEQID NO. 28 ;所述 tag 序列選自 SEQ ID NO. I SEQ ID NO. 14 ； (B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 29 SEQ ID NO. 42，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補配對； (C).用于擴增出需要檢測的、具有相應(yīng)多態(tài)性位點的目標(biāo)序列的引物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的NATl基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述擴增引物為針對 C135T、G136A、T216G、A328T、A460T 位點的 SEQ ID NO. 43 及 SEQ ID NO. 44 ;和 / 或針對 C106T、C199T 位點的 SEQ ID NO. 45 及 SEQ ID NO. 46。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的NATl基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述ASPE引物為針對C135T位點的由SEQ ID NO. I和SEQ ID NO. 15組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ IDNO. 16組成的序列；針對G136A位點的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 17組成的序列及由SEQ IDNO. 4和SEQ ID NO. 18組成的序列；針對T216G位點的由SEQ ID NO. 5和SEQID NO. 19組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 20組成的序列；針對A328T位點的由SEQ ID NO. 7和SEQID NO. 21組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 22組成的序列；針對A460T位點的由SEQID NO. 9和SEQ ID NO. 23組成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQID NO. 24組成的序列；針對C106T位點的由SEQ ID NO. 11和SEQ ID NO. 25組成的序列及由SEQ ID NO. 12和SEQ IDNO. 26組成的序列；和/或針對C199T位點的由SEQ ID NO. 13和SEQ ID NO. 27組成的序列及由SEQ ID NO. 14和SEQ ID NO. 28組成的序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的NATl基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是， (A).所述ASPE引物為針對C135T位點的由SEQID NO. I和SEQ ID NO. 15組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 16組成的序列；針對G136A位點的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 17組成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 18組成的序列；針對T216G位點的由SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 19組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 20組成的序列；針對A328T位點的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 21組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 22組成的序列；針對A460T位點的由SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 23組成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQ IDNO. 24組成的序列；針對C106T位點的由SEQ ID NO. 11和SEQ ID NO. 25組成的序列及由SEQID NO. 12和SEQ ID NO. 26組成的序列；和針對C199T位點的由 SEQ ID NO. 13 和 SEQ ID NO. 27 組成的序列及由 SEQ ID NO. 14 和 SEQ ID NO. 28組成的序列； (B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 29 SEQ ID NO. 42，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補配對；(C).所述擴增引物為:針對 C135T、G136A、T216G、A328T、A460T 位點的 SEQ ID NO. 43及 SEQ ID NO. 44 ;和針對 C106T、C199T 位點的 SEQ ID NO. 45 及 SEQ ID NO. 46
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的NATl基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述間隔臂為5-10個T。
6.用于NATl基因多態(tài)性檢測的特異性引物，其特征是，該特異性引物為針對C135T位點的 SEQ ID NO. 15 及 SEQ ID NO. 16 ;針對G136A位點的 SEQ ID NO. 17 及 SEQ ID NO. 18 ；針對 T216G 位點的 SEQ ID NO. 19 及 SEQ ID NO. 20 ;針對 A328T 位點的 SEQ ID NO. 21 及SEQ ID NO. 22 ;針對 A460T 位點的 SEQ ID NO. 23 及 SEQ ID NO. 24 ;針對 C106T 位點的 SEQID NO. 25 及 SEQ IDNO. 26 ;和 / 或針對 C199T 位點的 SEQ ID NO. 27 及 SEQ ID NO. 28。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種NAT1基因檢測液相芯片和特異性引物，該液相芯片主要包括有每種由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為針對C135T位點的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16；針對G136A位點的SEQID NO.17及SEQ ID NO.18；針對T216G位點的SEQ ID NO.19及SEQ ID NO.20；針對A328T位點的SEQ ID NO.21及SEQ ID NO.22；針對A460T位點的SEQ ID NO.23及SEQ ID NO.24；針對C106T位點的SEQ ID NO.25及SEQ ID NO.26；和/或針對C199T位點的SEQ ID NO.27及SEQID NO.28；有anti-tag序列包被的微球；擴增引物。本發(fā)明所提供的檢測液相芯片的檢測結(jié)果與測序法的吻合率高達100％，實現(xiàn)多個突變位點的野生型和突變型并行檢測。
文檔編號C12N15/11GK102952873SQ20111025173
公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月29日
發(fā)明者許嘉森, 吳詩揚 申請人:廣州益善生物技術(shù)有限公司