專利名稱：一種由側(cè)孢芽孢桿菌制備的微生物肥料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由新的側(cè)孢芽孢桿菌制備的微生物肥料以及其制備方法，屬于微生物肥料領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
我國人口多、耕地少，且隨著人口增長、工業(yè)和城市的發(fā)展耕地逐年遞減。為此，我國增加農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量的唯一可行途徑是提高單位面積產(chǎn)量。才能滿足工業(yè)發(fā)展和人口增加對農(nóng)產(chǎn)品的需求，化肥也就順理成章的得到了廣泛應(yīng)用。長期以來不合理使用化學(xué)肥料帶來的土壤板結(jié)、地力下降、生態(tài)破壞、環(huán)境污染以及農(nóng)副產(chǎn)品品質(zhì)下降問題，已經(jīng)受到國家有關(guān)部門和農(nóng)業(yè)科技界的高度重視。近幾十年來，我國一直努力探索合理施肥、克服化肥的弊端及提高化肥利用率的有效途徑。農(nóng)業(yè)肥料包括化學(xué)肥料和生物肥料，是我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)不可替代的重要生產(chǎn)資料。 其中，生物肥料作為農(nóng)業(yè)生物工程學(xué)科的重要分支和土壤肥料學(xué)的重要組成部分，近十年無論在基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究方面都得到了迅速發(fā)展。近幾年來我國微生物肥料發(fā)展很快， 有多家企業(yè)從事生產(chǎn)經(jīng)營，品種不斷增加，同時(shí)也有一些國外產(chǎn)品打入國內(nèi)市場。由于菌種等原因，目前市場的產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，生產(chǎn)應(yīng)用上出現(xiàn)了一些問題。據(jù)最近幾年農(nóng)業(yè)部監(jiān)督抽查、跟蹤抽查，國家統(tǒng)檢的情況看，抽查合格率不到60%，產(chǎn)品質(zhì)量問題主要是有效菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，保質(zhì)期過短。微生物肥料中有效活菌數(shù)是產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)，有效活菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，產(chǎn)品質(zhì)量就得不到保證，反映出來的是應(yīng)用效果不穩(wěn)定，其中原因主要是菌種問題，菌種在制備為微生物菌種劑后，在保藏過程中的存活能力下降，存活時(shí)間變短。這個(gè)問題實(shí)際上是由于這些微生物菌種劑所使用的菌種要么不能產(chǎn)生芽孢，要么產(chǎn)生芽孢的能力比較弱，或者產(chǎn)生的芽孢萌發(fā)能力差，不能很好渡過微生物菌種劑生產(chǎn)過程中的脅迫條件和庫存、保藏過程，在生產(chǎn)使用過程中表現(xiàn)為菌種活性下降，生產(chǎn)性能減弱，繁殖速度變慢，抗逆性差。因此，菌種問題一直困擾我國微生物肥料的生產(chǎn)和發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有微生物肥料中菌種存活能力低、有效活菌數(shù)不達(dá)標(biāo)、保質(zhì)期過短，從而產(chǎn)品質(zhì)量較差、應(yīng)用效果不穩(wěn)定等問題，本發(fā)明的目的是提供一種由新的微生物菌制備而成的微生物肥料及其制備方法。本發(fā)明中提到的百分比和比例均是指重量百分比和重量比例。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案
一種微生物肥料，其特征在于該肥料由新的側(cè)孢芽孢桿菌(Bacillus laterosporus), 保藏號(hào)為CGMCC No. 5090的微生物菌種劑與常規(guī)化肥或有機(jī)載體混合而成。具體的，該菌種被命名為“新側(cè)芽孢桿菌1號(hào)”，該菌種分離自高產(chǎn)農(nóng)田，并經(jīng)馴化，長期以來性狀穩(wěn)定。新側(cè)芽孢桿菌1號(hào)菌株在2010年7月22日提交中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏編號(hào)為CGMCC No. 5090，生物學(xué)命名Bacillus laterosporus，保藏單位地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所。該菌種的生物學(xué)特性為菌體桿狀，屬于芽孢桿菌屬，其細(xì)胞大小為0. 15 0. 18 X 215 510um，革蘭氏染色陽性，可變?yōu)殛幮裕挎邽闄E圓形，側(cè)生、中生或近中生，孢囊膨大，游離芽孢一邊比另一邊厚(獨(dú)木舟形)。能利用多種氮源、碳源，生長溫度20-55°C，最佳生長溫度37°C，最適PH7. 2。在不良條件下，菌體轉(zhuǎn)化產(chǎn)生芽孢，芽孢對不良環(huán)境抗逆性強(qiáng)， 可耐受100°C高溫20分鐘和干燥等惡劣條件。所述的側(cè)孢芽孢桿菌微生物菌種劑由如下方法制備而成
一、菌種保藏及活化培養(yǎng)
菌種以劃線培養(yǎng)的方式在新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)上保藏，短期保藏條件為4°C，每2 月活化1次；長期保藏條件為-20°C，每6個(gè)月活化1次。二、微生物培養(yǎng)
1、采用本發(fā)明提供的方法進(jìn)行微生物培養(yǎng)
1)自保存斜面取種后，劃線接入斜面培養(yǎng)基(新1培養(yǎng)基)，30—38°C培養(yǎng)箱靜置黑暗條件下培養(yǎng)36小時(shí)；
2)用無菌水沖洗斜面，形成菌懸液；
3)將1體積菌懸液接入約20體積的新1液體培養(yǎng)基中，30—38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；
4)將步驟3)得到的菌懸液加入到約5-10倍體積的新2培養(yǎng)基中，30—38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；
5)將步驟4)得到的菌懸液加入到約50-100倍體積的新3培養(yǎng)基中，35-38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；
6)將步驟5)得到的菌懸液加入到約5-10倍體積的新4培養(yǎng)基中，35-38°C培養(yǎng)有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO9個(gè)/ml數(shù)量級(jí)。2、采用傳統(tǒng)微生物發(fā)酵生產(chǎn)方法進(jìn)行微生物培養(yǎng)
培養(yǎng)基淀粉10%，豆餅粉10%，磷酸氫二鉀0. 2%，硫酸銨0. 1%，硫酸鎂0. 05%,氯化鐵 0. 001%，碳酸鈣 0. 01%，酵母膏 0. 01%, PH7. 2-7. 4。將菌種活化后接入IOOOml上述培養(yǎng)基中，三角瓶搖瓶160RPM，30—38°C培養(yǎng)16小時(shí)，然后按1%接種量接種到200L種子發(fā)酵罐中(仍為同種培養(yǎng)基)，通氣，30—38°C培養(yǎng)16 小時(shí)，再按10%接種量接到2000L發(fā)酵罐中(仍為同種培養(yǎng)基)，30— 38°C培養(yǎng)20小時(shí)后升溫至40—45°C在培養(yǎng)10小時(shí)，待80%菌體產(chǎn)生芽孢后停止發(fā)酵。三、微生物菌種劑的生產(chǎn)
將優(yōu)質(zhì)草炭粉(市售)進(jìn)行干熱滅菌后冷卻，根據(jù)想要得到微生物菌種劑中微生物的含量加入到發(fā)酵結(jié)束(傳統(tǒng)微生物發(fā)酵生產(chǎn)方法的或本發(fā)明提供的生產(chǎn)方法的)得到的發(fā)酵液中，進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，用造粒機(jī)造粒，低溫烘干獲得微生物菌種劑。本發(fā)明中所使用到的培養(yǎng)基有
新1號(hào)培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基):蛋白胨5g/L，氯化鈉5g/L，牛肉膏5g/L，瓊脂1. 5%_2. 0%， PH 調(diào)至 6. 5-7. 8。新1號(hào)液體培養(yǎng)基該培養(yǎng)基不含瓊脂，其他成分和含量與新1培養(yǎng)基相同，PH調(diào)至 6. 5-7.8。新2號(hào)培養(yǎng)基淀粉5g/L，蔗糖lg/L，酵母浸出汁0. 2g/L，蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/ L，硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 2g/L,氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8。新3號(hào)培養(yǎng)基淀粉10g/L，蔗糖5g/L，酵母浸出汁0. lg/L,蛋白胨0. 5g/L，豆餅粉 10g/L，硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8。新4號(hào)培養(yǎng)基淀粉10g/L，蔗糖2. 5g/L，酵母浸出汁0. lg/L,蛋白胨0. 5g/L，豆餅粉5g/L，硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8。以上所有培養(yǎng)基均在使用前經(jīng)高壓蒸汽滅菌(121°C，1. lkg/cm3，30分鐘)，冷卻。本發(fā)明還可采用傳統(tǒng)的微生物菌種劑生產(chǎn)中用到的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法制備微生物菌種劑。傳統(tǒng)的微生物菌種劑生產(chǎn)中用到的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的菌種目錄中有詳細(xì)的描述。具體地，草炭粉與發(fā)酵液的混合重量比例為2 - 10 :1，優(yōu)選的，混合比例為3 — 5 1，更優(yōu)選的，混合比例為4:1。具體地，所采用的普通化肥為常規(guī)氮、磷、鉀肥料，微生物菌種劑與普通化肥的混合重量比例為1 :5 - 15，優(yōu)選的，混合比例為1 :8 - 10。所采用的有機(jī)載體可以是本領(lǐng)域常用的有機(jī)肥，可采用雞糞、粉碎玉米芯、粉碎秸稈、煤渣等。具體可采用雞糞、粉碎玉米芯、 煤渣，三者混合比例為1 :1 一 5 :1 — 6，優(yōu)選三者混合比例為1 :2 :3。微生物菌種劑與有機(jī)載體的混合重量比例為1 :5 - 15，優(yōu)選的，混合比例為1 :7 - 10，更優(yōu)選的1 :9。有益的效果
使用本發(fā)明所提供的菌種生產(chǎn)的微生物菌種劑有較高的有效菌數(shù)和較長的保質(zhì)期，所制備的微生物肥料除了上述優(yōu)點(diǎn)外，增產(chǎn)效果明顯。在本菌種使用傳統(tǒng)發(fā)酵方式進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的菌種劑，入庫時(shí)進(jìn)行有效菌數(shù)檢測， 其結(jié)果明顯優(yōu)于市售其他微生物菌種劑中的有效菌數(shù)，有效菌數(shù)是國家標(biāo)準(zhǔn)的3. 3倍。解決了菌種數(shù)不達(dá)標(biāo)的問題。在本菌種使用本發(fā)明提供的發(fā)酵方式進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的菌種劑入庫時(shí)進(jìn)行有效菌數(shù)檢測，其結(jié)果明顯優(yōu)于市售其他微生物菌種劑中的有效菌數(shù)，有效菌數(shù)是國家標(biāo)準(zhǔn)的4 倍。也解決了菌種數(shù)不達(dá)標(biāo)的問題。本菌種使用傳統(tǒng)發(fā)酵方式進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的菌種劑在倉庫中保存2年后，進(jìn)行有效菌數(shù)檢測，其結(jié)果明顯優(yōu)于市售其他微生物菌種劑中的有效菌數(shù)，有效菌數(shù)是國家標(biāo)準(zhǔn)的3 倍。解決了保質(zhì)期短的問題。本菌種使用本發(fā)明提供的發(fā)酵方式進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的菌種劑在倉庫中保存2年后， 進(jìn)行有效菌數(shù)檢測，其結(jié)果明顯優(yōu)于市售其他微生物菌種劑中的有效菌數(shù)，有效菌數(shù)是國家標(biāo)準(zhǔn)的3. 6倍。解決了保質(zhì)期短的問題。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1利用傳統(tǒng)方法對新側(cè)1號(hào)進(jìn)行發(fā)酵制備微生物菌種劑
培養(yǎng)基淀粉3%，豆餅粉1%，蛋白胨0. 1%，硫酸銨0. 2%，磷酸氫二鉀0. 2%，酵母粉0. 1%， 碳酸鈣 0. 01%, PH7. 2-7. 4。
將菌種活化后接入IOOOml上述培養(yǎng)基中，三角瓶搖瓶160RPM 37°C培養(yǎng)16小時(shí)， 然后按1%接種量接種到200L種子發(fā)酵罐中(仍為同種培養(yǎng)基)，通氣，37°C培養(yǎng)16小時(shí)，再按10%接種量接到2000L發(fā)酵罐中(仍為同種培養(yǎng)基)，37°C培養(yǎng)20小時(shí)后升溫至42°C在培養(yǎng)10小時(shí)，待80%菌體產(chǎn)生芽孢后停止發(fā)酵。檢測菌體濃度，達(dá)到109，然后按1 :4的重量百分比與進(jìn)行干熱滅菌后冷卻的優(yōu)質(zhì)草炭粉(市售)混合，再進(jìn)行造粒，低溫烘干成為微生物菌種劑。實(shí)施例2 利用本發(fā)明提供的方法對新側(cè)1號(hào)進(jìn)行發(fā)酵制備微生物菌種劑
先對菌種進(jìn)行活化，再用5ml無菌水沖洗斜面，形成菌懸液，菌懸液接入500ml三角瓶， 該三角瓶含IOOml新1液體培養(yǎng)基，使用搖床培養(yǎng)18小時(shí)，培養(yǎng)條件為37°C，180-200rpm， 檢測菌體濃度，在濃度達(dá)到IO8數(shù)量級(jí)，進(jìn)行下一步；
將500ml三角瓶中的IOOml菌液轉(zhuǎn)接入2000ml三角瓶中，該三角瓶含700ml新2培養(yǎng)基，使用搖床培養(yǎng)20小時(shí)，培養(yǎng)條件為37°C，180-200rpm ；檢測菌體濃度，在濃度達(dá)到IO8數(shù)量級(jí)，進(jìn)行下一步；
將2000ml三角瓶中的菌液接入Im3發(fā)酵罐中，接入量為6升，該發(fā)酵罐中含有500L新 3培養(yǎng)基，發(fā)酵條件為溫度36-38°C，罐壓0. 5kg/cm,通氣量20m3/h，培養(yǎng)8小時(shí)；檢測菌體濃度，在濃度達(dá)到IO8數(shù)量級(jí)，進(jìn)行下一步；
將Im3發(fā)酵罐中的菌液接入5m3發(fā)酵罐，接入量為500升，該發(fā)酵罐含有3m3新4培養(yǎng)基，發(fā)酵條件為溫度36-38°C，罐壓0. ^g/cm，通氣量120m3/h，培養(yǎng)15小時(shí)。檢測菌體濃度，在濃度達(dá)到IO9數(shù)量級(jí)，停止發(fā)酵。然后按1 :4的比例與進(jìn)行干熱滅菌后冷卻的優(yōu)質(zhì)草炭粉(市售)混合，再進(jìn)行造粒，低溫烘干成為微生物菌種劑。實(shí)施例3對利用傳統(tǒng)方法制備的微生物菌種劑在未長時(shí)間庫存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測
按照常規(guī)的稀釋平板記數(shù)法檢測微生物菌種劑中的活菌含量。稱取微生物菌種劑1克 (庫存半個(gè)月)，用無菌水溶解，用無菌水稀釋至菌體數(shù)為20—100個(gè)/ml，然后移取Iml稀釋液到無菌培養(yǎng)皿中，加入適量新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)，充分混合后凝固，在37°C保溫箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)，統(tǒng)計(jì)平板上的菌落，重復(fù)三次以上，以平均值乘以該一克微生物菌種劑稀釋為菌體濃度為20—100個(gè)/ml時(shí)的毫升數(shù)即為每克微生物菌種劑的菌種數(shù)。我們對利用傳統(tǒng)方法制備的微生物菌種劑在未長時(shí)間庫存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測，檢測結(jié)果為 6. 6*108個(gè)/克，為國家標(biāo)準(zhǔn)的3. 3倍(國家標(biāo)準(zhǔn)為2. 0*108個(gè)/克)。解決了菌種劑微生物數(shù)目不達(dá)標(biāo)的問題。實(shí)施例4對利用本發(fā)明提供的方法制備的微生物菌種劑在未長時(shí)間庫存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測
按照常規(guī)的稀釋平板記數(shù)法檢測微生物菌種劑中的活菌含量。稱取微生物菌種劑1克 (庫存半個(gè)月)，用無菌水溶解，用無菌水稀釋至菌體數(shù)為20—100個(gè)/ml，然后移取Iml稀釋液到無菌培養(yǎng)皿中，加入適量新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)，充分混合后凝固，在37°C保溫箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)，統(tǒng)計(jì)平板上的菌落，重復(fù)三次以上，以平均值乘以該一克微生物菌種劑稀釋為菌體濃度為20—100個(gè)/ml時(shí)的毫升數(shù)即為每克微生物菌種劑的菌種數(shù)。我們對利用本發(fā)明提供的方法制備的微生物菌種劑在未長時(shí)間庫存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測，檢測結(jié)果為8*108個(gè)/克，為國家標(biāo)準(zhǔn)的4倍。解決了菌種劑微生物數(shù)目不達(dá)標(biāo)的問題。
實(shí)施例5對利用傳統(tǒng)方法制備的微生物菌種劑在長時(shí)間庫存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測
按照常規(guī)的稀釋平板記數(shù)法檢測微生物菌種劑中的活菌含量。稱取微生物菌種劑1克 (庫存兩年)，用無菌水溶解，用無菌水稀釋至菌體數(shù)為20—100個(gè)/ml，然后移取Iml稀釋液到無菌培養(yǎng)皿中，加入適量新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)，充分混合后凝固，在37°C保溫箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)，統(tǒng)計(jì)平板上的菌落，重復(fù)三次以上，以平均值乘以該一克微生物菌種劑稀釋為菌體濃度為20—100個(gè)/ml時(shí)的毫升數(shù)即為每克微生物菌種劑的菌種數(shù)。我們對利用傳統(tǒng)方法制備的微生物菌種劑在長時(shí)間庫存(兩年)的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測，檢測結(jié)果為 6*108個(gè)/克，為國家標(biāo)準(zhǔn)的3倍。解決了菌種劑微生物數(shù)目不達(dá)標(biāo)的問題和保藏期太短的問題。實(shí)施例6對利用本發(fā)明提供的方法制備的微生物菌種劑在長時(shí)間庫存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測
按照常規(guī)的稀釋平板記數(shù)法檢測微生物菌種劑中的活菌含量。稱取微生物菌種劑1克 (庫存兩年)，用無菌水溶解，用無菌水稀釋至菌體數(shù)為20—100個(gè)/ml，然后移取Iml稀釋液到無菌培養(yǎng)皿中，加入適量新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)，充分混合后凝固，在37°C保溫箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)，統(tǒng)計(jì)平板上的菌落，重復(fù)三次以上，以平均值乘以該一克微生物菌種劑稀釋為菌體濃度為20—100個(gè)/ml時(shí)的毫升數(shù)即為每克微生物菌種劑的菌種數(shù)。我們對利用本發(fā)明提供的方法制備的微生物菌種劑在長時(shí)間庫存(兩年)的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測，檢測結(jié)果為7. 2*108個(gè)/克，為國家標(biāo)準(zhǔn)的3. 6倍。解決了菌種劑微生物數(shù)目不達(dá)標(biāo)的問題和保藏期太短的問題。實(shí)施例7未長期庫存的微生物菌種劑與肥料混合后使用的效果
將雞糞、粉碎玉米芯、煤渣以1 :2 3重量比混合均勻，調(diào)整含水量為30%，在溫度大于 300C的條件下堆積7—10天，把庫存半個(gè)月的微生物菌種劑與之以1 :9的重量比混合，制成微生物肥料。將制成的微生物肥料在不同作物上進(jìn)行與基質(zhì)肥以及等價(jià)常規(guī)肥比較的小區(qū)肥效實(shí)驗(yàn)，每個(gè)小區(qū)面積0. 16畝，實(shí)驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)。實(shí)驗(yàn)時(shí)每畝施微生物肥料25公斤；基質(zhì)肥(經(jīng)由雞糞、粉碎玉米芯、煤渣以1 :2 3重量百分比混合均勻，調(diào)整含水量為30%后，在溫度大于30°C的條件下堆積7—10天制成)每畝施25公斤；等價(jià)常規(guī)肥(磷酸二氨尿素氯化鉀為3 :3:2混合)每畝施25公斤。均作為基肥，一次施完，不追加?？瞻讓φ詹皇┓省?shí)驗(yàn)結(jié)果如下(數(shù)據(jù)均為各肥料相對于空白對照的增產(chǎn)百分比)
權(quán)利要求
1.一種微生物肥料，其特征在于該肥料由側(cè)孢芽孢桿菌(Bacillus laterosporus)，保藏號(hào)為CGMCC No. 5090的微生物菌種劑與常規(guī)化肥或有機(jī)載體混合而成；所述的側(cè)孢芽孢桿菌微生物菌種劑由如下方法制備而成1)將CGMCCNo. 5090菌株劃線接入斜面培養(yǎng)基(新1培養(yǎng)基)，30— 38°C培養(yǎng)箱靜置黑暗條件下培養(yǎng)36小時(shí)；2)用無菌水沖洗斜面，形成菌懸液；3)將1體積菌懸液接入20體積的新1液體培養(yǎng)基中，30—38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；4)將步驟3)得到的菌懸液加入到5-10倍體積的新2培養(yǎng)基中，30—38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；5)將步驟4)得到的菌懸液加入到50-100倍體積的新3培養(yǎng)基中，35-38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；6)將步驟5)得到的菌懸液加入到5-10倍體積的新4培養(yǎng)基中，35-38°C培養(yǎng)有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO9個(gè)/ml數(shù)量級(jí)，停止發(fā)酵；然后按1 :3 — 5的比例與草炭土混合，造粒，低溫烘干獲得微生物菌種劑；其中上述培養(yǎng)基為新1號(hào)培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基):蛋白胨5g/L，氯化鈉5g/L，牛肉膏5g/ L,瓊脂 1. 5%-2. 0%, PH 調(diào)至 6. 5-7. 8，新1號(hào)液體培養(yǎng)基該培養(yǎng)基不含瓊脂，其他成分和含量與新1培養(yǎng)基相同，PH調(diào)至 6. 5-7. 8，新2號(hào)培養(yǎng)基淀粉5g/L，蔗糖lg/L，酵母浸出汁0. 2g/L，蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/L， 硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 2g/L,氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8，新3號(hào)培養(yǎng)基淀粉10g/L，蔗糖5g/L，酵母浸出汁0. lg/L,蛋白胨0. 5g/L，豆餅粉IOg/ L，硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8，新4號(hào)培養(yǎng)基淀粉10g/L,蔗糖2. 5g/L，酵母浸出汁0. lg/L,蛋白胨0. 5g/L，豆餅粉 5g/L,硫酸銨lg/L,磷酸二氫鉀0. 5g/L，氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8 ；所述的常規(guī)化肥為氮肥、磷肥和/或鉀肥，微生物菌種劑與普通化肥的混合重量比例為1 :5 — 15 ；所述的有機(jī)載體為雞糞、粉碎玉米芯及煤渣，三者混合重量比例為1 :1 一 5 1 - 6，微生物菌種劑與有機(jī)載體的混合重量比例為1 :5 - 15。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物肥料，其中微生物菌種劑與普通化肥的混合重量比例為 1 :8 — 10。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物肥料，其中微生物菌種劑與有機(jī)載體的混合重量比例為1 :9 ；有機(jī)載體雞糞、粉碎玉米芯和煤渣三者混合重量比例為1 :2 :3。
4.一種微生物肥料，其特征在于該肥料由側(cè)孢芽孢桿菌(Bacillus laterosporus)，保藏號(hào)為CGMCC No. 5090的微生物菌種劑與常規(guī)化肥或有機(jī)載體混合而成；所述的側(cè)孢芽孢桿菌微生物菌種劑由如下方法制備而成將CGMCC No. 5090菌株活化后接入1000ml培養(yǎng)基淀粉10%，豆餅粉10%，磷酸氫二鉀 0. 2%，硫酸銨0. 1%，硫酸鎂0. 05%,氯化鐵0. 001%,碳酸鈣0. 01%,酵母膏0. 01%, PH7. 2-7. 4 中，三角瓶搖瓶160RPM，30— 38°C培養(yǎng)16小時(shí)，然后按1%接種量接種到200L種子發(fā)酵罐中(仍為上述同種培養(yǎng)基)，通氣，30—38°C培養(yǎng)16小時(shí)，再按10%接種量接到2000L發(fā)酵罐中(仍為上述同種培養(yǎng)基)，30—38°C培養(yǎng)20小時(shí)后升溫至40—45°C在培養(yǎng)10小時(shí)，待80% 菌體產(chǎn)生芽孢后停止發(fā)酵；然后按1 :2 — 10的比例與草炭土混合，造粒，低溫烘干獲得微生物菌種劑；所述的常規(guī)化肥為氮肥、磷肥和/或鉀肥，微生物菌種劑與普通化肥的混合重量比例為1 :5 — 15 ；所述的有機(jī)載體為雞糞、粉碎玉米芯及煤渣，三者混合重量比例為1 1 - 5 1 - 6，微生物菌種劑與有機(jī)載體的混合重量比例為1 :5 - 15。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的微生物肥料，其中微生物菌種劑與普通化肥的混合重量比例為 1 :8 — 10。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的微生物肥料，其中微生物菌種劑與有機(jī)載體的混合重量比例為1 :9 ；有機(jī)載體雞糞、粉碎玉米芯和煤渣三者混合重量比例為1 :2 :3。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種微生物肥料及其制備方法，該微生物肥料包括一種新的側(cè)孢芽孢桿菌(Bacilluslaterosporus)，保藏號(hào)為CGMCCNo.5090。使用本發(fā)明所提供的菌種生產(chǎn)的微生物肥料劑有較高的有效菌數(shù)和較長的保質(zhì)期。
文檔編號(hào)C12R1/07GK102424626SQ20111026043
公開日2012年4月25日 申請日期2011年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月5日
發(fā)明者王莉, 麻林濤 申請人:王莉, 麻林濤