專利名稱：一種高純度總狀蕨藻多酚的制備方法及其用于保鮮蝦的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化學(xué)工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種高純度總狀蕨藻多酚的制備方法及其保鮮蝦的方法。采用制得的高純度總狀蕨藻多酚保鮮蝦，安全性高，保鮮效果好，可為個體工商戶、超市、冷庫及農(nóng)產(chǎn)品保鮮加工基地等提供服務(wù)。
背景技術(shù)：
總狀蕨藻(Caulerparacemosa)屬綠藻門(Chlorophyta)蕨藻科(Caulerpaceae),是一種大型可食性綠藻,分布區(qū)域為熱帶和亞熱帶海域的低潮間帶，在我國海南、廣東、廣西、臺灣省等地廣泛分布，但至今尚未得到有效利用。目前，國內(nèi)外學(xué)者對總狀蕨藻研究主要集中在多糖及其抗腫瘤活性的研究，而對其多酚的制備工藝及其作為水產(chǎn)品保鮮劑領(lǐng)域的應(yīng)用尚未見報道。植物多酚又稱植物單寧，廣泛存在于植物體內(nèi)，是指來源于莽草酸途徑和苯丙氨酸代謝途徑的具有多個羥基酚類植物成分的總稱，其分子量在500 3000Da之間，在植物中的含量僅次于纖維素、半纖維素和木質(zhì)素，常見種類如沒食子酸、兒茶素、花青素、鞣花酸和熊果苷等。多酚類化合物具有顯著的抑制脂質(zhì)氧化、清除自由基和抗菌防腐等生物活性。如被廣泛關(guān)注的茶多酚、蘋果多酚和葡萄多酚等均顯示了良好的抗氧化活性。目前，隨著海洋活性物質(zhì)的研究，海藻多酚已經(jīng)引起了大家的廣泛關(guān)注，已對褐藻、紅藻進行了廣泛的研究，而其應(yīng)用也得到了大家的關(guān)注。如中國專利CN 1063619C “海藻多酚抗氧化劑的制備及其應(yīng)用方法”即研究了從海藻中提取多酚用于防止食品腐敗，但是該方法采用乙醇冷提，提取率較低，不利于海藻資源的高效利用；中國專利CN101194647B “一種用海藻多酚保鮮草莓的新方法”即研究了從海藻中提取多酚用于草莓保鮮，該方法與專利“CN 1063619 C”比較，在乙醇冷提時采用搖床動態(tài)提取，提取率會有所增加，但是該方法提取時間長，而后續(xù)處理中僅僅采用乙醚和三氯甲烷脫除小極性和中等極性的物質(zhì)，而對于水相中的多糖、蛋白等雜質(zhì)未采取方法去除，從而得到的多酚粗提物含有大量雜質(zhì)，另外制備工藝中采用三氯甲烷存在安全隱患。因此，以上兩種方法制備的海藻多酚雖然具有一定的應(yīng)用價值，但是由于其工藝上存在的缺陷，多酚的含量相對較低，含有大量的雜質(zhì)和存在安全隱患，從而限制了其用途和實際應(yīng)用效果。以總狀蕨藻為原料，利用微波提取結(jié)合大孔樹脂精制多酚研究處于空白階段，對于其在蝦保鮮上的應(yīng)用也尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的第一個技術(shù)問題是提供一種高純度總狀蕨藻多酚的制備方法，以總狀蕨藻為原料，資源豐富，制得的多酚純度高、且具有較高的活性。本發(fā)明所要解決的第二個技術(shù)問題是提供一種高純度總狀蕨藻多酚用于保鮮蝦的方法。
本發(fā)明解決上述第一個技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為一種高純度總狀蕨藻多酚的制備方法，其特征在于包括以下步驟I)將總狀蕨藻干燥至恒重，再粉碎過篩后，得到總狀蕨藻粉末；2)將總狀蕨藻粉末與60 80% (v/v)的乙醇按照質(zhì)量體積比1: 15 30配比，置于微波輔助提取裝置中提取15 25min，提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于40°C以下去除乙醇，得濃縮液；3)在所得的濃縮液中加入O. 8 1.2 (體積倍數(shù))的水(優(yōu)選等體積)，然后按照體積比1:1 2的比例依次用乙醚、乙酸乙酯進行萃取，將乙酸乙酯萃取物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于40°C以下去除乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取物；4)將乙酸乙酯萃取物制成10mg/mL 20mg/mL的溶液,按照萃取物溶液與大孔樹脂重量體積比1: 10 20的比例加到大孔樹脂柱上，依次用2 3倍柱體積的水，25 35%乙醇，55 65%乙醇洗脫，收集55 65%乙醇洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于40°C以下去除乙醇，濃縮液進行冷凍干燥即制得多酚保鮮劑。作為改進，所述的步驟I)的具體過程為將總狀蕨藻于35 40°C干燥至恒重，于粉碎機中粉碎，過60 120目篩，得總狀蕨藻粉末。再改進，所述的步驟2)中微波提取時微波功率為600 800W。作為優(yōu)選，所述的步驟2)，3)和4)中的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上去除溶劑均需避光條件下進行。所述的步驟3)依次用乙醚、乙酸乙酯進行萃取，萃取3次。所述的步驟4)依次用2 3倍柱體積的水，30%乙醇，60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于40°C以下去除乙醇。最后，所述的步驟4)中的大孔樹脂為D101。本發(fā)明解決上述第二個技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為一種高純度總狀蕨藻多酚用于保鮮蝦的方法，其特征在于先將高純度總狀蕨藻多酚配制成O. 3% O. 5%的水溶液作為保鮮液，按照質(zhì)量體積比1:1 2的比例將蝦置于保鮮液中5 10分鐘，取出后浙水2 3分鐘，然后在4±1°C條件下貯藏。最后，所述蝦為南美白對蝦、中國對蝦、斑節(jié)對蝦或鷹爪蝦。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于1、本發(fā)明工藝科學(xué)合理，通過微波提取法同時融合大孔樹脂精制等手段進行制備，使總狀蕨藻多酚最大程度地釋放出來，提高多酚純度，同時制得多酚具有較高的活性；2、本發(fā)明采用的原料是總狀蕨藻，資源豐富，目前尚未有效開發(fā)，對海藻產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要的意義；3、本發(fā)明是以天然總狀蕨藻多酚及低溫來聯(lián)合保鮮蝦，安全，無毒，可替代化學(xué)殺菌劑、防腐劑用于蝦的防腐和保鮮，避免了化學(xué)殺菌劑引發(fā)的環(huán)境污染、食品安全、致畸致癌等多種問題。經(jīng)本發(fā)明方法保鮮的蝦，在4±1°C條件下貯藏10天后，品質(zhì)優(yōu)于同濃度、同條件下經(jīng)茶多酚、山梨酸鉀和Vc保鮮的蝦。


圖1是本發(fā)明實施例不同制備物采用ZORBAX 300SB-C18HPLC分析所得的色譜圖，其中(a)為75%乙醇提取物，(b)為乙酸乙酯萃取物，(c)為大孔樹脂精制時60%乙醇洗脫物；圖2是本發(fā)明實施例中不同制備物采用紅外光譜檢測的譜圖，其中(a)為75%乙醇提取物，(b)為乙酸乙酯萃取物，(c)為大孔樹脂精制時60%乙醇洗脫物。
具體實施例方式以下結(jié)合附圖實施例對本發(fā)明作進一步詳細描述。一種高純度總狀蕨藻多酚的制備及其保鮮蝦的方法，制備工藝流程如下總狀蕨藻一烘干一粉碎、過篩一提取一液液萃取一大孔樹脂精制一冷凍干燥一海藻多酚固體物一海藻多酚溶液一選取新鮮蝦一多酚溶液浸泡一浙水一低溫儲藏一鮮度指標分析。具體步驟為1、取總狀蕨藻IOOg于38±2°C干燥至恒重，于粉碎機中粉碎，過60目篩，得總狀蕨藻粉末。2、將總狀蕨藻粉末20g與400mL 75 (v/v) %的乙醇置于微波輔助提取裝置中，在微波功率700W條件下提取時間20min，提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于38±2°C避光去除乙醇，得濃縮液約100mL。3、將所得的濃縮液中加入水至體積為200mL，依次用200mL的乙醚和乙酸乙酯萃取三次，將乙酸乙酯萃取物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于38±2°C避光去除乙酸乙酯，得固體物
O.78g04、將O. 78g乙酸乙酯萃取物制成15mg/mL的水溶液，加入到柱體積為IOOOmL的大孔樹脂柱上，依次用2000mL的水，30 (v/v) %乙醇和60 (v/v) %乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于38±2°C避光去除乙醇，濃縮液冷凍干燥即制得總狀蕨藻多酚230mgo5、選取500g新鮮南美白對蝦4份，分別置于O. 5 L O. 3%的總狀蕨藻多酚、茶多酚、山梨酸鉀和Vc保鮮液中，5分鐘后取出，浙水3分鐘，然后在4± 1°C條件下貯藏。6、保鮮冷藏南美白對蝦于9天時，檢測其酸價、過氧化值、揮發(fā)性鹽基氮(TVB-N值)和細菌總數(shù)。所得的總狀蕨藻多酚制備物中，經(jīng)過Folin-Ciocalteu法檢測多酚含量為130.33mgGAE/g。保鮮南美白對蝦的酸價和過氧化值的測定參照GB/T 5009.37-2003 4.1規(guī)定的方法進行，TVB-N值的測定參照GB/T 5009. 44-2003 4.1規(guī)定的方法進行，細菌總數(shù)參照GB/T4789. 2-2003規(guī)定的方法進行。結(jié)果表明，總狀蕨藻多酚制備物在抗脂肪酸酸敗、抗氧化和防腐抗菌等方面優(yōu)于相同濃度下的茶多酚、山梨酸鉀和Vc (表I)。表I不同保鮮液處理對南美白酸價、過氧化值、TVB-N值和細菌總數(shù)的影響
權(quán)利要求
1.一種高純度總狀蕨藻多酚的制備方法，其特征在于包括以下步驟 1)將總狀蕨藻干燥至恒重，再粉碎過篩后，得到總狀蕨藻粉末； 2)將總狀蕨藻粉末與60 80%(v/v)的乙醇按照質(zhì)量體積比1: 15 30配比，置于微波輔助提取裝置中提取15 25min，提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于40°C以下去除乙醇，得濃縮液； 3)在所得的濃縮液中加入O.8 1. 2體積倍數(shù)的水，然后按照體積比1:1 2的比例依次用乙醚、乙酸乙酯進行萃取，將乙酸乙酯萃取物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于40°C以下去除乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取物； 4)將乙酸乙酯萃取物制成10mg/mL 20mg/mL的萃取物溶液,按照萃取物溶液與大孔樹脂重量體積比1: 10 20的比例加到大孔樹脂柱上，依次用2 3倍柱體積的水，25 35%乙醇，55 65%乙醇洗脫，收集55 65%乙醇洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于40°C以下去除乙醇，濃縮液進行冷凍干燥即制得多酚保鮮劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的步驟I)的具體過程為將總狀蕨藻于35 40°C干燥至恒重，于粉碎機中粉碎，過60 120目篩，得總狀蕨藻粉末。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中微波提取時微波功率為 600 800W。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的步驟2)，3)和4)中的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上去除溶劑均需避光條件下進行。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的步驟4)中的大孔樹脂為DlOl。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的步驟3)依次用乙醚、乙酸乙酯進行萃取，萃取3次。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的步驟4)依次用2 3倍柱體積的水，30 %乙醇，60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于40°C以下去除乙醇。
8.—種權(quán)利要求1至7任一權(quán)利要求制得的高純度總狀蕨藻多酚用于保鮮蝦的方法，其特征在于先將高純度總狀蕨藻多酚配制成O. 3% O. 5%的水溶液作為保鮮液，按照質(zhì)量體積比1:1 2的比例將蝦置于保鮮液中5 10分鐘，取出后浙水2 3分鐘，然后在4±1°C條件下貯藏。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述蝦為南美白對蝦、中國對蝦、斑節(jié)對蝦或鷹爪蝦。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高純度總狀蕨藻多酚的制備方法以及用于保鮮蝦的方法，將總狀蕨藻粉末與60～80％的乙醇按照質(zhì)量體積比1∶15～30配比，微波提取15～25min，提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上去除乙醇；將濃縮液中加入等體積的水，然后按照體積比1∶1～2的比例依次用乙醚、乙酸乙酯進行萃取，將乙酸乙酯萃取物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上去除乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取物；將乙酸乙酯萃取物制成10mg/mL～20mg/mL的溶液，按照萃取物溶液與大孔樹脂重量體積比1∶10～20的比例加到大孔樹脂柱上，依次用2～3倍柱體積的水，30％乙醇，60％乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上去除乙醇，冷凍干燥即制得多酚保鮮劑。本發(fā)明資源豐富、工藝科學(xué)合理，制得多酚具有較高的純度及活性，用于保鮮蝦品質(zhì)優(yōu)，且安全，無毒。
文檔編號A23L3/3472GK103054131SQ20111027664
公開日2013年4月24日 申請日期2011年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月8日
發(fā)明者王斌, 李忠瑞, 鄧尚貴, 曲有樂 申請人:浙江海洋學(xué)院