專(zhuān)利名稱(chēng)：甜葉菊酶vi及萊鮑迪苷a轉(zhuǎn)化為萊鮑迪苷d的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及屬食品化工領(lǐng)域，具體涉及以萊鮑迪苷A為原料，由萊鮑迪苷A轉(zhuǎn)化為萊鮑迪苷D的方法，其關(guān)鍵在于催化劑甜葉菊酶VI及其制備方法。
背景技術(shù)：
甜菊糖苷是對(duì)甜葉菊提取物的一個(gè)總稱(chēng)，其甜味成分包括甜菊苷(Stevioside)，萊鮑迪苷 A、B、C、D、E (ebaudioside A/B/C/D/E),甜菊雙糖苷(Steviolbioside),杜克苷A(DulcosideA)等。甜葉菊源產(chǎn)于南美洲，已經(jīng)有幾百年的使用歷史。甜菊糖苷甜度高,熱量低的特點(diǎn)正好符合了現(xiàn)代人生活的需要。我國(guó)衛(wèi)生部1985年6月5日(85)衛(wèi)防字第37號(hào)文，批準(zhǔn)甜菊糖苷列為新增食品添加劑品種。世界衛(wèi)生組織食品添加劑聯(lián)合專(zhuān)家委員會(huì)(Joint FAO/WHO Expert Committee on Food AdditVIes,JECFA)也已經(jīng)確認(rèn)了其安全性。但傳統(tǒng)甜菊糖苷由于成分復(fù)雜，雜質(zhì)多，使其具有后苦味，這影響了它的廣泛使用和市場(chǎng)空間。研究表明，甜菊糖苷中不同糖苷成分的口感存在較為明顯的差異，表I中列舉了其不同糖苷的相對(duì)甜度及相對(duì)甜質(zhì)值。(Pure&Appl. Chem.，Vol. 69，No. 4，pp. 675-683，1997.)表I甜菊糖苷成分相對(duì)甜度及相對(duì)甜質(zhì)
權(quán)利要求
1.甜葉菊酶VI，其特征在于它是從甜葉菊的葉中提取得到，制備方法如下 (1)將甜葉菊葉片與PH值為7.0-9. O磷酸鹽緩沖液按1: 2-1 4m/v的重量體積比混合，于30-50°C浸泡O. 5-lh后進(jìn)行細(xì)胞壁破碎l_2h，得細(xì)胞漿； (2)離心步驟(I)所得細(xì)胞漿，取上清液過(guò)超濾膜，超濾膜規(guī)格為8-12kD，跨膜壓力控制在1.0-1.5MPa，收集截留液； (3)使用葡聚糖凝膠按分子量對(duì)步驟(2)所得截留液分段，其中分子量在50 56kD的酶即為甜葉菊酶VI。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甜葉菊酶VI，其特征在于它是從甜葉菊的葉中提取得到，制備方法如下 (1)將甜葉菊葉片與PH值為8.O磷酸鹽緩沖液按1: 3m/v的重量體積比混合，于40°C浸泡O. 5h后進(jìn)行細(xì)胞壁破碎lh，得細(xì)胞漿； (2)離心步驟(I)所得細(xì)胞漿，取上清液過(guò)超濾膜，超濾膜規(guī)格為10kD，跨膜壓力控制在1.5MPa，收集截留液； (3)使用葡聚糖凝膠按分子量對(duì)步驟(2)所得截留液分段，其中分子量在50 56kD的酶即為甜葉菊酶VI。
3.甜葉菊酶VI的制備方法，其特征在于它是從甜葉菊的葉中提取得到，制備方法如下 (1)將甜葉菊葉片與PH值為7.0-9. O磷酸鹽緩沖液按1:2-1: 4m/v的重量體積比混合，于30-50°C浸泡O. 5-lh后進(jìn)行細(xì)胞壁破碎l_2h，得細(xì)胞漿； (2)離心步驟(I)所得細(xì)胞漿，取上清液過(guò)超濾膜，超濾膜規(guī)格為8-12kD，跨膜壓力控制在1.0-1.5MPa，收集截留液； (3)使用葡聚糖凝膠按分子量對(duì)步驟(2)所得截留液分段，其中分子量在50 56kD的酶即為甜葉菊酶VI。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的甜葉菊酶VI的制備方法，其特征在于它是從甜葉菊的葉中提取得到，制備方法如下 (1)將甜葉菊葉片與pH值為8.O磷酸鹽緩沖液按1: 3m/v的重量體積比混合，于40°C浸泡O. 5h后進(jìn)行細(xì)胞壁破碎lh，得細(xì)胞漿； (2)離心步驟(I)所得細(xì)胞漿，取上清液過(guò)超濾膜，超濾膜規(guī)格為10kD，跨膜壓力控制在1.5MPa，收集截留液； (3)使用葡聚糖凝膠按分子量對(duì)步驟(2)所得截留液分段，其中分子量在50 56kD的酶即為甜葉菊酶VI。
5.萊鮑迪苷A轉(zhuǎn)化為萊鮑迪苷D的方法，其特征在于其步驟如下 A、將純度為>90%的萊鮑迪苷A按1: 6 1: lOm/v的重量體積比加水溶解； B、按下述重量配比加入尿嘧啶二磷酸葡萄糖，萊鮑迪苷A尿嘧啶二磷酸葡萄糖=15 5 15 9 ； C、按下述重量配比加入權(quán)利要求1或2所述的甜葉菊酶V1:萊鮑迪苷A 800-1200份、甜葉菊酶VI I份，然后在40 60°C、pH 6 8下反應(yīng)3 7h;優(yōu)選，萊鮑迪苷A 1000份、甜葉菊酶VI I份； D、過(guò)濾反應(yīng)液，干燥即得含有萊鮑迪苷D的固形物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的萊鮑迪苷A轉(zhuǎn)化為萊鮑迪苷D的方法，其特征在于步驟A中萊鮑迪苷A加水溶解時(shí)，水溫控制在30 40°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的萊鮑迪苷A轉(zhuǎn)化為萊鮑迪苷D的方法，其特征在于步驟A中萊鮑迪苷A加水溶解后，以60 120rpm的速度攪拌30 60min。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的萊鮑迪苷A轉(zhuǎn)化為萊鮑迪苷D的方法，其特征在于步驟D過(guò)濾反應(yīng)液時(shí)采用8-12kD超濾膜過(guò)濾；過(guò)濾時(shí)優(yōu)選跨膜壓力控制在O. 5 1. 5MPa。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的萊鮑迪苷A轉(zhuǎn)化為萊鮑迪苷D的方法，其特征在于步驟D過(guò)濾反應(yīng)液后，濃縮處理。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的萊鮑迪苷A轉(zhuǎn)化為萊鮑迪苷D的方法，其特征在于所述濃縮條件為在60-80°C濃縮反應(yīng)液。
全文摘要
本發(fā)明涉及屬食品化工領(lǐng)域，具體涉及以RA為原料，由RA轉(zhuǎn)化為RD的方法，其關(guān)鍵在于催化劑甜葉菊酶VI及其制備方法。本發(fā)明轉(zhuǎn)化方法為A、將純度為＞90％的RA按1∶6～1∶10m/v的重量體積比加水溶解；B、按下述重量配比加入U(xiǎn)DP-Glu，RA∶UDP-Glu＝15∶5～15∶9；C、按下述重量配比加入甜葉菊酶VI，RA∶甜葉菊酶VI＝800-1200∶1(優(yōu)選1000∶1)，然后在40～60℃、pH 6～8下反應(yīng)3～7h；D、過(guò)濾反應(yīng)液，干燥即得含有RD的固形物。RA轉(zhuǎn)化為RD的轉(zhuǎn)化率≥70％，固形物中RD含量為60％-70％，進(jìn)一步分離純化后可達(dá)80％，甚至可大于90％。
文檔編號(hào)C12N9/10GK103031283SQ20111029961
公開(kāi)日2013年4月10日 申請(qǐng)日期2011年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月8日
發(fā)明者李沁桐, 華君, 歐陽(yáng)勁, 秦嶺 申請(qǐng)人:成都華高瑞甜科技有限公司