專利名稱：一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)l-苯丙氨酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種發(fā)酵生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法，特別是一種利用重組谷氨酸棒桿菌生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法。
背景技術(shù)：
苯丙氨酸(WienylalanindJPD，L-α -氨基-β -苯基丙酸，有外消旋DL-型、 L-型和D-型三種，其中具有生物活性的光學(xué)異構(gòu)體為L(zhǎng)-苯丙氨酸(L-Phenylalanine， L-Phe)(

圖1-1)，比旋光度為-35. 1°。L-Phe又名L-苯基-氨基丙酸，常溫下為白色或無(wú)色結(jié)晶性粉末固體，水中溶解度為^.6g/L，難溶于甲醇、乙醇和乙醚。L-Phe在自然界中廣泛存在于卵、乳和動(dòng)物蛋白中，含量5 % -6 % ；L-Phe也存在于植物性蛋白質(zhì)中，含量約為 1%。表I-IL-Phe及其衍生物的主要用途
權(quán)利要求
1.一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法，其特征在于將重組谷氨酸棒桿菌活化后制備發(fā)酵種子，發(fā)酵種子以8%的接種量轉(zhuǎn)入發(fā)酵培養(yǎng)基，于30°C、200rpm條件下培養(yǎng)72h。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述重組谷氨酸棒桿菌過(guò)量表達(dá)3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖酸7-磷酸合成酶DS。
3.權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于活化用培養(yǎng)基組成為(g/L)蛋白胨10，氯化鈉 10，酵母粉5，葡萄糖5，斜面培養(yǎng)基添加瓊脂20，PH 7. 0。
4.權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于發(fā)酵種子用培養(yǎng)基組成為(g/L)葡萄糖25，玉米漿35，硫酸銨5，尿素2，磷酸二氫鉀1，七水合硫酸鎂0.5，pH 7.0-72，裝液量 20mL/250mLo
全文摘要
一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)L-苯丙氨酸(Phe)的方法，屬于代謝工程領(lǐng)域。本發(fā)明采用載體pXMJ19，將來(lái)源于谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacterium glutamicum)中編碼3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖酸7-磷酸合成酶DS的基因aroG在谷氨酸棒狀桿菌模式菌株ATCC 13032中過(guò)量表達(dá)，獲得了一株產(chǎn)L-Phe的谷氨酸棒狀桿菌工程菌株C.glutamicum/aroG。過(guò)量表達(dá)aroG基因提高了L-Phe合成途徑中的前提物質(zhì)3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖酸7-磷酸(DAHP)的積累，從而大幅度提高了L-Phe產(chǎn)量，最終通過(guò)誘導(dǎo)表達(dá)aroG基因，L-Phe提高到了0.61g/L，而出發(fā)菌株ATCC 13032作為對(duì)照菌株在整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中檢測(cè)不到L-Phe的積累。
文檔編號(hào)C12R1/15GK102399835SQ20111031146
公開(kāi)日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2011年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月14日
發(fā)明者周景文, 堵國(guó)成, 康振, 張傳志, 王天文, 陳堅(jiān) 申請(qǐng)人:江南大學(xué)