專利名稱：七十個大鼠源miRNA及其相應的miRNA前體和反義寡核苷酸的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學專業(yè)領域，涉及屬于大鼠源miRNA的七十個新miRNA、miRNA 前體和其反義寡核苷酸序列，以及在制備治療神經再生藥物中的用途。
背景技術：
周圍神經損傷是常見的臨床病癥，而周圍神經損傷后能夠再生。miRNACmicroRNA, 微RNA)是一類具有19 25nt的RNA分子，由其前體分子在酶的作用下加工生成，其前體序列一般為70 120nt，廣泛存在于生物體中。由于miRNA在各種生物體中具有保守性， 因此普遍認為miRNA的功能是參與生命的一些基本過程；在動物機體，miRNA通過轉錄后調控許多基因和蛋白的表達，在發(fā)育、分化、增殖、細胞的存活與癌變以及神經系統(tǒng)等發(fā)揮重要作用?；A和臨床研究表明，miRNA無論在正常生理過程還是在疾病過程中都是重要的調節(jié)因子。許多miRNA呈現(xiàn)組織特異性表達，因此在調控組織特異性和組織特異性基因的功能中發(fā)揮重大作用。近年來的研究發(fā)現(xiàn)miRNA與神經再生有著極為密切的關系，例如， miRNA在軸突生長及突觸功能和可塑性等方面具有調控作用。周圍神經損傷后，施萬細胞的增殖對周圍神經修復具有重要作用，因此作為轉錄后調控的與增殖有關miRNA的發(fā)現(xiàn)和功能鑒定對周圍神經損傷的修復具有十分重要的意義。

發(fā)明內容
由于各種意外造成的神經損傷的發(fā)病率逐年增加；而神經損傷后，再生能力差，致殘率高，因此針對神經損傷和治療的生物分子的發(fā)現(xiàn)具有重要的應用價值。本發(fā)明以大鼠坐骨神經離斷后的L4-6背根神經節(jié)和近端神經為材料進行miRNA 的Solexa測序。測序結果經過SOAP軟件與大鼠基因組序列比對，MIREAP軟件分析miRNA 前體的發(fā)夾結構，濾掉自由能大于-20 kcal/mol的候選miRNA，基于miRBaSel7.0過濾掉已報道的miRNA，MiPred軟件進一步過濾掉功能上非保守的虛擬的miRNA前體等生物信息學分析，并進一步通過RT-PCR驗證。然后對這些新的miRNA進行功能篩選，結果發(fā)現(xiàn)了增殖有關的七十個新的miRNA。本發(fā)明所提供的miRNA克隆自大鼠坐骨神經離斷后的L4-6背根神經節(jié)和近端神經，成熟miRNA序列長度約為22nt，其前體序列具有miRNA前體典型的二級結構，符合miRNA的結構特征。本發(fā)明的目的是提供七十個新的miRNA、miRNA前體和其反義寡核苷酸序列，以及該發(fā)明所涉及的miRNA、miRNA前體和其反義寡核苷酸在制備神經損傷藥物中的用途。本發(fā)明的具體技術方案如下
本發(fā)明所提供的七十個大鼠源miRNA包含如下任一種序列
(1)miRNA-sx18 5，CAUAAGUGUAGAGAGUCUGUAGU 染色體定位 lq31
(2)miRNA-sxl95，TCAACCCAGGGCAGACACTCAGA 染色體定位 7ql3
(3)miRNA-sx205，TCAACCCAGGGCAGACACTCAGA 染色體定位 7ql3(4)miRNA-sx2l 5，TTGAGGATGTGTGGTGCAAAGC染色體定位 10q24
(5)miRNA-sx225，TTGTAGGAGGACTGGAGCACGA染色體定位 10q21
(6)miRNA-sx235，TGCTTTCGGAGTGTTCCTGTGC染色體定位 Ilqll
(7)miRNA-sx245，AGGAAGTGAGGGTGGCTGGCTAGC染色體定位 Ilq2I
(8)miRNA-sx255，GGCATTTGGGATTGTGTTCA染色體定位 llq23
(9)miRNA-sx265，AGGAGATAGGACCTGAGCACCCG染色體定位 13q24
(10)miRNA-sx275，TGGCCTGGTGGGATTGCTGTTGGC染色體定位 15pl2
(11)miRNA-sx285，AGCAGGGAGAGCTACAGAGCTTTG染色體定位 17pl4
(12)miRNA-sx295，CCACGGATTTTTCTCGAATGA 18pl3 染色體定位 18pl3
(13)miRNA-sx305，AAGATGGTTGACTGTAGCTGACAG染色體定位 18ql2. 3
(14)miRNA-sx315，CAGACAGAGGCCTGGGAAGTCAGA染色體定位 19qll
(15)miRNA-sx325，AAAGAAGAAAGCAGCACTCACG染色體定位 19ql2
(16)miRNA-sx335，TTCCAGGGACTGAGCACGGCACC染色體定位 lq32
(17)miRNA-sx345，TTGTGAAACACGGCTGTCTTGT染色體定位 20pl2
(18)miRNA-sx355，TGGTGGTAGAACGTAAGTTGCT染色體定位 2qll
(19)miRNA-sx365，AGTTGGGGCTGTAGTGGGGCTG染色體定位 3q36
(20)miRNA-sx375，AGTTGGGGCTGTAGTGGGGCTG染色體定位 3q36
(21)miRNA-sx385，AGTTGGGGCTGTAGTGGGGCTG染色體定位 3q36
(22)miRNA-sx395，AGAAGGACAGGAATCTGGTGTT染色體定位 3q41
(23)miRNA-sx405，TGCAGCATGGATGAGAACTTGGC染色體定位 3q31
(24)miRNA-sx415，CTCCAAAGGGAATATGCAAAGGG染色體定位 3q35
(25)miRNA-sx425，TAGGGATGAAGTGTGGGACTGC染色體定位 3q43
(26)miRNA-sx435，ATGGGGATACAGGACAGCAAGC染色體定位 5q33
(27)miRNA-sx445，GCTAGGAATAGAGCATAGTGGT染色體定位 5q36
(28)miRNA-sx455，CGCGGGTGTGGAGGGAGTGAGC染色體定位 5q36
(29)miRNA-sx465，GAAGCCGGGTTCTGTAGCCTCG染色體定位 6ql6
(30)miRNA-sx475，TCCTTGGGGGCTGGGCTGGAG染色體定位 7qll
(31)miRNA-sx485，TAAGGGTAGCAAGAGTAGGTGG染色體定位 7q34
(32)miRNA-sx495，TGGATGGCACCAGGCTCTCGGC染色體定位 8ql3
(33)miRNA-sx505，CCAAGAAGGCTAGGGACTGCG染色體定位 8q31
(34)miRNA-sx515，ATGACAGAGAATCTCCTGACGC染色體定位 9q37
(35)miRNA-sx885，CTGGGGACAGATGGCTGGCTGA染色體定位 2q43
(36)miRNA-sx535，CTGACTTACTCCCTCTGTGC染色體定位 12ql6
(37)miRNA-sx545，CGGACCATGTGAACCAGAGTGC染色體定位 16ql2. 5
(38)miRNA-sx555，GGTAGATTTAGCGAATGTCCAT染色體定位 18pll
(39)miRNA-sx565，CAGGTGTTGGAGAGTTGATGG染色體定位 4q34
(40)miRNA-sx575，AGGGACCCCGAGGGAGGGCAGG染色體定位 6q32
(41)miRNA-sx585，TGGTCTGTGAGCCTTACGGTCC染色體定位 6q32
(42)miRNA-sx595，GTAGGTTCCGGCCAGTAGGAGT染色體定位 10ql2(43miRNA--sx605ACACATGGCGCTCAACTCTGCAG染色體定位10ql2(44miRNA--sx615ATGAGACTCAGTGGCACTCTGG染色體定位12pl2(45miRNA--sx625ACTTGCATGTACACTTTCCTGA染色體定位12pll(46miRNA--sx635TGGCCTGGTGGGATTGCTGTTGG染色體定位15pl2(47miRNA--sx645AAGGTCGGCCAAGCAGGGCAGA染色體定位16pl4(48miRNA--sx655ATGGAGATATTCTGTTGGTTGG染色體定位lq52(49miRNA--sx665TCGGAGACCGAGACCTGGGCCC染色體定位2q45(50miRNA--sx675CATGTTCCACTCACTCTCAGA染色體定位3q36(51miRNA--sx685ATTCAGATGGGCAGATTGGGAA染色體定位4q22(52miRNA--sx695AGTGCTAGGAACCAAACTCTGT染色體定位5q22(53miRNA--sx705TGTGATGTGTGTATGTATATGTA染色體定位4q44(54miRNA--sx715TACAACACAGAGACAAGCAGAA染色體定位18ql2. 1(55miRNA--sx725AGAGATGGTGGGATATGTGGA染色體定位2q31(56miRNA--sx735TAAAACAGAACCAACAGATTGGC染色體定位3q35(57miRNA--sx745AGTTGGTTCAGGATCCGTCTGATG染色體定位lq31(58miRNA--sx755TGTAGGAAAGGAGTGTGGAGAC染色體定位9q21(59miRNA--sx765TGGTCATGGTTCATGAACTGGAGC染色體定位5q24(60miRNA--sx775TTGGAGTGGGGACCGTGCAGAGA染色體定位8q32(61miRNA--sx785TGTAGTTGTTATTGTTGTTGCT染色體定位2q22(62miRNA--sx795CAAGAGTTCTGAAGTCACTGGT染色體定位3pl2(63miRNA--sx805CAGGTGTTGGAGAGTTGATGGGA染色體定位4q34(64miRNA--sx815TGGCTCACTGACCTCTACTTTGC染色體定位7q34(65miRNA--sx825GGGGGGTCTAGAGGTGCATGGT染色體定位7q36(66miRNA--sx835TACATACCTACATACACACAGA染色體定位17ql2. 3(67miRNA--sx845GGTGTGGGTAGCAAAGGTAGATCT染色體定位lq43(68miRNA--sx855TGCTCTGTCCAGAGTTAGGGAGA染色體定位18pl2(69miRNA--sx865CCCAACTAGGTGGGAGGTGAGC染色體定位18qll(70miRNA--sx875TTCAGATGGGCAGATTGGGAAGT染色體定位4q22
據此，本發(fā)明所提供的七十個大鼠源miRNA的前體RNA包含如下任一序列
(1)miRNA-sx18 前體
5 ’ GAUG⑶UGUGGAGACACAGCUUCUCUUCACUUAUUAUAUUUCAUUCCU UAUAAUCAUAAGUGUAGAGAGUCUGUA⑶CACCACCCAU
(2)miRNA-sx 19 前體
5 ’ ACACUCAGAACCU⑶GACA⑶⑶⑶⑶CAACCCAGGGUAGACACUCAGAA CCU ⑶ GACA ⑶⑶⑶⑶ CAACCCAGGGCAGACACUCAGAACCUGAGACU
(3)miRNA-sx20前體
5 ’ ACA⑶⑶⑶⑶CAACCCAGGGCAGACACUCAGAACCU⑶GACA⑶⑶⑶G UCAACCCAGGGUAGACACUCAGAACCU⑶G
(4)miRNA-sx21前體5，GAAGGAGG⑶UUGAGGAU⑶⑶GGUGCAAAGCCAAAGCAUCUGUUUAU⑶C CAGCUCUGGCUUUCGCGCUACCUUCCUAUUCAACACAUCCAGA
(5)miRNA-sx22前體
5 ’ AAGACUCCCACAUUGCUUCAGUCCAUCUUAUCUUCAGCUCUUCUCUCAAGCAA CAGAAAGCAUGCUUGUAGGAGGACUGGAGCACGACAGGACAGCA
(6)miRNA-sx23前體
5 ’ UCCUGCCAUUCCAGGUCCACUCUGCUGAGCACU⑶GACAUCACCCACUGCUU UCGGAGUGUUCCUGUGCCUGGCUUGGG
(7)miRNA-sx24前體
5 ’ UUUGCAAUAAAGGAA⑶GAGGGUGGCUGGCUAGCCAGGGCAGGCAGGCCA CAACUUUCACUUCUAGGAAUGCUUU
(8)miRNA-sx25前體
5 ’ UGUAUAAAUAGGCAUUUGGGAUUGUGUUCAUG⑶UUGCUU⑶CAGCGCAGGAC AA⑶⑶⑶GAUUAU⑶U
(9)miRNA-sx26前體
5’ UCGA⑶GAGUAGGAGAUAGGACCUGAGCACCCGG⑶GACCAGCCAGCCG G⑶GCCAGCGCCUUCUGUCCACAGCAAACCUCUG
(10)miRNA-sx27前體
5 ’ UCCCAGCCAGCCCUGGAAUCCCUGCAGGCACACCAGA⑶CGGAUCUGUGG CCUG⑶GGGAUUGCUGUUGGCAUGGCUGUGU
(11)miRNA-sx28前體
5 ’ CUUUUCAUUGAGCAGGGAGAGCUACAGAGCUUU⑶CACGCACACACAAGG CUCAGUCCUCCCU⑶CAGUGCUCAGAAGG
(12)miRNA-sx29前體
5 ’ UGAAAAUCAAGCUUAUUUAAUGUGUC⑶⑶CUGCCAGGCAACAGCCCACGG AUUUUUCUCGAAUGAGCUUAUUUUC
(13)miRNA-sx30前體
5 ’ A⑶⑶⑶GACACUUGGCGA⑶CAAUCAUCUUGGUCUAAUUGCUCUGAUGAAGAU GGUUGACUGUAGCUGACAGUGCCUACAUA
(14)miRNA-sx31前體
5 ’ CCACCU⑶UGCUCU⑶CUUCCAGCUUCUGGGCGGGCCAUCCUCCUGGUAGGC AGACAGAGGCCUGGGAA⑶CAGACUGCCGG⑶G
(15)miRNA-sx32前體
5 ’ UUGAAGCACAGCCUUCA⑶CUGCUUUUUCUUCUCACUGGGAGAGCA⑶GAA AAGAAGAAAGCAGCACUCACGGCUGACUUUA
(16)miRNA-sx33前體
5 ’ GGCAUCU⑶UUUCCAGGGACUGAGCACGGCACCUACACUUUCAUAU⑶⑶CUG CUGCCAGGGCCUUGCUCAGGCCUGUGGAGGACCCUCUGCUC
(17)miRNA-sxIM 前體5，GGA⑶CCCAGCAG⑶UAGUGGCUGCU⑶UUCACCGCUCACCUAUGAAGGAG AGUU⑶GAAACACGGCU⑶CUUGUGCUGGGACUC
(18)miRNA-sx35前體
5 ’ ACCCUGGCACCCUCAGCUCCUUACC⑶UCCUCCUAGCACCU⑶UGGAAUGUC ⑶GCUG⑶GGUAGAACGUAA⑶UGCU⑶GAGUGGGG
(19)miRNA-sx36前體
5 ’ GUGGGGCUACA⑶UGGGGCUGUA⑶UAGGCUGUAGUUGGGCUGUAGUUGGG CCUGUAGUGGGGCUGUA⑶UGGGGCUGUAGUGGGGCUGUAGUUGGGGC
(20)miRNA-sx37前體
5 ’ GUUGAGGCUGUAGUGGGGCUACA⑶UGGGGCUGUA⑶UAGGGUGUAGUAGG GCUGUAGUUGGGCUGUA⑶UGGGGCUGUAGUGGGGCUGUAGUUGGGAC
(21)miRNA-sx38前體
5 ’ GUGGGGCUGUA⑶UGGGGCUGUAGUGGGGCUGUA⑶GGGGGCUGUA⑶GGG GCUGUA⑶UGGGGCUGUAG
(22)miRNA-sx39前體
5 ’ AAGAGACAUCAGAAGGACAGGAAUCUGGUGUUUUGCUAAUCAGACUCUUGU CCUCUCCCUGUCUAAC
(23)miRNA-sx40前體
5 ’ AGACUGACUCUGCAGCAUGGAUGAGAACUUGGCUCUGCCUA⑶GCCAA⑶G CCAUCAAUUGCUGCUGCUACU⑶UUG
(24)miRNA-sx41前體
5 ’ CUAUUGCUAACUCUGCAUCAUUCCCUGGG⑶GGUAUGCUAAGGAAGCUCACCUU GCU⑶UCUCCAAAGGGAAUAUGCAAAGGGAAGAGUG⑶G
(25)miRNA-sx42前體
5 ’ GGGGCCC⑶⑶⑶CCUAUACU⑶GGUCCCUCCAACAAGUCCGUGGAUGUCCU GGGAG ⑶⑶⑶ UAGGGAUGAA ⑶⑶ GGGACUGCCAGAGGGCUC
(26)miRNA-sx43前體
5 ’ AGGAUGCAGGAACAGCUAGCU⑶CUGGUCCUCCUCUGCUUCCUUACCA⑶GAG AUGGGGAUACAGGACAGCAAGCU ⑶⑶ GGUCC
(27)miRNA-sx44前體
5 ’ GGGUGCAGUGGCUAGGAAUAGAGCAUA⑶GGUAGAGCUUC⑶GAAGCCACA UGCUCAAUUCCUAUCACUGCUGAGGCUUG
(28)miRNA-sx45前體
5 ’ GACCAGGACUGCUCCUCUCCUCUCACCCUCGCGGGCGGGGACACUACUACG CCCGCGGGUGUGGAGGGA⑶GAGCUAGAGGGGGU
(29)miRNA-sx46前體
5 ’ GA⑶UGGGGCGAAGCCGG⑶UCUGUAGCCUCGCUCUAGCGGGCUGCGGAC GCUGAGCGCUCGA⑶CAACUCU
(30)miRNA-sx47前體5，CACCCCCCCCCCCCGCCCAUCCCUCCUGCGCCUGCUCCGUU⑶CAGGUCCUU GGGGGCUGGGCUGGAGG⑶GGGG⑶U
(31)miRNA-sx48前體
5 ’ AGGACCUGGGUAAGGGUAGCAAGAGUAGGUGGCCAGGGAACGCCCCACCU UGACUUGCAUUCCCUUCUCAGACCUG
(32)miRNA-sx49前體
5 ’ GGCAGAGCUCUGGAUGGCACCAGGCUCUCGGCCCUUGUAUGGAA⑶CAGAG CCGAGCCUGGAAGCUGCCAGGACUCUGAG
(33)miRNA-sx50前體
5’ GAACUCACGGCCAAGAAGGCUAGGGACUGCGGUUUCUCGGUGGACCCGCCG CGGUCCU⑶GG⑶CUUCUUUGCCGAGAGAAC
(34)miRNA-sx51前體
5 ’ GUCCUUGUGGAUGACAGAGAAUCUCCUGACGCUU⑶UUCUUUCUGCCGCUGAG GAUGCUCUCUGUCUCCUUCCACAC⑶GCU
(35)miRNA-sx88前體
5’ CAGGGUUUUGCUGGGGACAGAUGGCUGGCUGAGA⑶CAACUCUUGAAAUC UCCGGGCAGGUUUGUGCCCAUCAAUUCCCCG
(36)miRNA-sx53前體
5 ’ CAUCAUCAGGGCACAGAGAGGGCAAGCUUAGCUGUGUGUCCUUGGACAA⑶UA CCAACUGACUUACUCCCUCUGUGCCCUGAGGCUG
(37)miRNA-sx54前體
5 ’ AUGCCGUCCGCGGACCAU⑶GAACCAGAGUGCAGGCUCUCACUUCCCUCU⑶⑶ UCUCCUCGGUUCAGGUACGGCUG
(38)miRNA-sx55前體
5 ’ GAGCUUCUGGGGUAGAUUUAGCGAAUGUCCAUUAUGACUCACAUUGACAUUUG UCUUUAAUCU⑶UCCUUACAGUUG
(39)miRNA-sx56前體
5 ’ GAUCAGCAGCCAG⑶⑶UGGAGAGUUGAUGGGAUCACUACUCACUAACUCUUC CCACUUCUCUUCUACCCUCAG⑶UG⑶GAUG
(40)miRNA-sx57前體
5 ’ U⑶GA⑶⑶GAGGGACCCCGAGGGAGGGCAGGCUGCCCCAGGCCCUGC CCCCUCCAGGAAGCCUUCUUGCUCCAG
(41)miRNA-sx58前體
5 ’ CUCUAGUGUGUG⑶CU⑶GAGCCUUACG⑶CCUGUGUACACUCUAGUGUGUGG UCU⑶GAGCCUUAUG⑶CCUGUGUACACUCCAGU
(42)miRNA-sx59前體
5 ’ CUUCCUGCAGGUAG⑶UCCGGCCAGUAGGA⑶UUUGGAAUUUUGGGAAUUCCC UGGCCUGGCUCCUCACCGCAACUCUGU
(43)miRNA-sx60前體5，CCCGGUGGACAGAGUGUGUGUGUCUGUGUGGAGGAGACAGGA⑶UGCCCAC ACAUGGCGCUCAACUCUGCAGGAUAAAUACA
(44)miRNA-sx61前體
5’ GGGCU⑶GCCAUGAGACUCA⑶GGCACUCUGGAAG⑶UGUCCAGAGGCCAC UGUGCUCUCUGAUAAUCGCCGAGCUCU
(45)miRNA-sx62前體
5 ’ CCAUCUCCUCACUUGCAUGUACACUUUCCUGAGGGCCUCCUCAAACCCAGGAAG UUGUGCAUGCAGGAAAGGAGGCGU
(46)miRNA-sx63前體
5 ’ CCCAGCCAGCCCUGGAAUCCCUGCAGGCACACCAGA⑶CGGAUCU⑶GGCCU G⑶GGGAUUGCUGUUGGCAUGGCU⑶G
(47)miRNA-sx64前體
5 ’ GCGCUGGAAGCAGGCCCUGGUUGGCUUCCUCCCAAGGAGAGCU⑶GGGAAG ⑶CGGCCAAGCAGGGCAGAAAACAAGCAA
(48)miRNA-sx65前體
5 ’ AAGCUUAACCAUGGAGAUAUUCU⑶UG⑶UGGGUUUUGAUAGCCCUUUUGACU GAAUAAUCUCCAUAAUUACCAUU
(49)miRNA-sx66前體
5 ’ ACUGAGACCUGGGCCCCGGACUUGCUGAUGUA⑶GACCGCUAUCGGAGACCGA GACCUGGGCCCCGGACUUGCU
(50)miRNA-sx67前體
5 ’ GGUGCAGGUACAU⑶UCCACUCACUCUCAGACGAAAACAGAGAGGCUCUGG GAGAG ⑶⑶ GGGACCAGUACCUUCCCCU
(51)miRNA-sx68前體
5 ’ CUUUGCGUUGAUUCAGAUGGGCAGAUUGGGAAGUAGUCUUUGCACAUGAUGCU AGCUUCCCUUUCUGAAUAUCUGUAGAA⑶UAAUAU
(52)miRNA-sx69前體
5 ’ UAACCGUAUGA⑶GCUAGGAACCAAACUCUGUGCUUACAGAUGAUCAGAGU UCAAUUCCCAGCACCCACACGGGGG
(53)miRNA-sx70前體
5 ’ UGUAUAUGUAUGUGCAUGUGCAU⑶⑶⑶GGUGUAUAU⑶⑶⑶⑶GGUGUA U ⑶⑶⑶ GAUGUGUGUAUGUAUAUGUAUAUGAUGUAU
(54)miRNA-sx71前體
5 ’ UAACAACUUCUACAACACAGAGACAAGCAGAACCAUGUACUAACCAGGAA CUG ⑶ UUUGCUCGCAUCA ⑶⑶ UGGAA ⑶ CACUC
(55)miRNA-sx72前體
5’ UUUCUACCACAGAGAUG⑶GGGAUAUGUGGAAAGAAACACAAAACUAGAAC GUCCACAUCUCUGACCACCUCCGUG⑶UGGACU
(56)miRNA-sx73前體5，CUUUGGCUUCUAAAACAGAACCAACAGAUUGGCUUUCUU⑶UGUUUAUGGAAG AGCUAAUUCCCAAUCUUUGCAUCU⑶UUUAGUAAUA⑶UAUGC
(57)miRNA-sx74前體
5 ’ GUCUGCUUGCAGUUGGUUCAGGAUCC⑶CUGAUGGUAAUACCAAGUCCACAGA AGGAUCCUGCCACC⑶GAGCGGGA
(58)miRNA-sx75前體
5 ’ GAGAAGAUCCUGUAGGAAAGGAGUGUGGAGACUUUCUGAGAA⑶GACUCC AGUCUUCUUUCCUUUUGGCCCUUUUCC
(59)miRNA-sx76前體
5 ’ CUGGGUAACAUG⑶CAUGGUUCAUGAACUGGAGCGGGUCCAUCGUGUGUGU UCCAGUUCAACCUU⑶CCCU⑶UCCUUA
(60)miRNA-sx77前體
5 ’ GAGGG⑶CUCUUGGAGUGGGGACCGUGCAGAGAAUGUGUAAACAACUGAG CCCUGUAUGGACACCACUUCAGGAAUCAAGAACGCCGAUCCUGA
(61)miRNA-sx78前體
5 ’ ACAACAACAACUACUACAACAACAACAACUACUACUACUACUACUACUA⑶U GUAGUU⑶UAUU⑶UGUUGCUGUUGCUGUUG
(62)miRNA-sx79前體
5 ’ ⑶GCUUUCCAGGGAUAGGGGCUUCUUAGCUCU⑶GG⑶CAGUUGGUGCUCAAG AGUUCUGAA⑶CACUG⑶CUCUGAGCAG
(63)miRNA-sx80前體
5 ’ GAUCAGCAGCCAG⑶⑶UGGAGAGUUGAUGGGAUCACUACUCACUAACUCUUC CCACUUCUCUUCUACCCUCAG⑶UG⑶GAUG
(64)miRNA-sx81前體
5 ’ UCUAGCCCU⑶GGCUCACUGACCUCUACUUUGCAA⑶UA⑶UGCAAAGUACAG UUAGUUGAGCUUCUGGGACGGU
(65)miRNA-sx82前體
5 ’ GCCGGCU⑶GGUCCGCAGCACCCCCUAGACCCCCGGCAGGCUCUGAUCGCG GGGGGUCUAGAGGUGCAUGGUCCAACCCCGG
(66)miRNA-sx83前體
5 ’ GUGUGUAUAUGUCUGUGUGUAU⑶UAUGUGUGUAU⑶GAGUAUAUAUGUACA UACCUACAUACACACAGACAGAAGCACA
(67)miRNA-sx84前體
5 ’ GUU⑶GAGUCGGUGUGGGUAGCAAAGGUAGAUCUAAUCAUAGUAAAACUGAC CUACCUCUUGCCUUCCACA⑶GAGCCAUCUCU
(68)miRNA-sx85前體
5 ’ GCCUCCCACAGCCUCCCAGCACUGGACAUGAGUCCA⑶CAUAGCCUGCUCUG UCCAGA⑶UAGGGAGACCUUG⑶GGG
(69)miRNA-sx86前體5，CUGCUGCCCACCCAACUAG⑶GGGAG⑶GAGCAGAGAGUGCCCACAGGUCC UGCUGCCCACCCAACUAG⑶GGGAG⑶GAGCAGCGGA (70)miRNA-sx87 前體
5 ’ UUUGCGUUGAUUCAGAUGGGCAGAUUGGGAAGUAGUCUUUGCACAUGAUGCUA GCUUCCCUUUCUGAAUAUCUGUAGAA⑶UAAUAU
據此，本發(fā)明所提供的七十個大鼠源miRNA的反義寡核苷酸包含如下任一序列 (l)miR-sxl8 反義寡核苷酸 5，，ACTACAGACTCTCTACACTTATG
2) miRNA-sx 19 反義富核苷酸5，TCTGAGTGTCTGCCCTGGGTTGA3)miRNA-sx20 反義害核苷酸5，TCTGAGTGTCTGCCCTGGGTTGA4)miRNA-sx21 反義害核苷酸5，GCTTTGCACCACACATCCTCAA5)miRNA-sx22 反義害核苷酸5，TCGTGCTCCAGTCCTCCTACAA6)miRNA-sx33 反義害核苷酸5，GCACAGGAACACTCCGAAAGCA7)miRNA-sx44 反義害核苷酸5，GCTAGCCAGCCACCCTCACTTCCT8)miRNA-sx25 反義害核苷酸5，TGAACACAATCCCAAATGCC9)miRNA-sx26 反義富核苷酸5，CGGGTGCTCAGGTCCTATCTCCT10)miRNA-sx27反義S 核苷酸 5GCCAACAGCAATCCCACCAGGCCAll)miRNA-sx28反義; 核苷酸 5CAAAGCTCTGTAGCTCTCCCTGCT12)miRNA-sx29反義; 核苷酸 5TCATTCGAGAAAAATCCGTGG13)miRNA-sx30反義; 核苷酸 5CTGTCAGCTACAGTCAACCATCTT14)miRNA-sx31反義; 核苷酸 5TCTGACTTCCCAGGCCTCTGTCTG15)miRNA-sx32反義; 核苷酸I 5，CGTGAGTGCTGCTTTCTTCTTT16)miRNA-sx33反義; 核苷酸I 5，GGTGCCGTGCTCAGTCCCTGGAA17)miRNA-sx34反義; 核苷酸I 5，ACAAGACAGCCGTGTTTCACAA18)miRNA-sx35反義; 核苷酸I 5，AGCAACTTACGTTCTACCACCA19)miRNA-sx36反義; 核苷酸I 5，CAGCCCCACTACAGCCCCAACT20)miRNA-sx37反義; 核苷酸I 5，CAGCCCCACTACAGCCCCAACT21)miRNA-sx38反義; 核苷酸I 5，CAGCCCCACTACAGCCCCAACT22)miRNA-sx39反義; 核苷酸I 5，AACACCAGATTCCTGTCCTTCT23)miRNA-sx40反義; 核苷酸I 5，GCCAAGTTCTCATCCATGCTGCA24)miRNA-sx41反義; 核苷酸I 5，CCCTTTGCATATTCCCTTTGGAG25)miRNA-sx42反義; 核苷酸I 5，GCAGTCCCACACTTCATCCCTA26)miRNA-sx43反義; 核苷酸I 5，GCTTGCTGTCCTGTATCCCCAT27)miRNA-sx44反義; 核苷酸I 5，ACCACTATGCTCTATTCCTAGC28)miRNA-sx45反義; 核苷酸I 5，GCTCACTCCCTCCACACCCGCG29)miRNA-sx46反義; 核苷酸I 5，CGAGGCTACAGAACCCGGCTTC30)miRNA-sx47反義; 核苷酸I 5，CTCCAGCCCAGCCCCCAAGGA31)miRNA-sx48反義; 核苷酸I 5，CCACCTACTCTTGCTACCCTTA32)miRNA-sx49反義; 核苷酸I 5，GCCGAGAGCCTGGTGCCATCCA33)miRNA-sx50反義S 核苷酸t(yī) 5，CGCAGTCCCTAGCCTTCTTGG(34miRNA-sx51 反義塵時亥苷酸5，GCGTCAGGAGATTCTCTGTCAT(35miRNA-sx88 反義:寡核苷酉t 5TCAGCCAGCCATCTGTCCCCAG(36miRNA--sx53反義塵時亥苷酸5，GCACAGAGGGAGTAAGTCAG(37miRNA--sx54反義塵時亥苷酸5，GCACTCTGGTTCACATGGTCCG(38miRNA--sx55反義塵時亥苷酸5，ATGGACATTCGCTAAATCTACC(39miRNA--sx56反義塵時亥苷酸5，CCATCAACTCTCCAACACCTG(40miRNA--sx57反義塵時亥苷酸5，CCTGCCCTCCCTCGGGGTCCCT(41miRNA--sx58反義塵時亥苷酸5，GGACCGTAAGGCTCACAGACCA(42miRNA--sx59反義塵時亥苷酸5，ACTCCTACTGGCCGGAACCTAC(43miRNA--sx60反義塵時亥苷酸5，CTGCAGAGTTGAGCGCCATGTGT(44miRNA--sx61反義塵時亥苷酸5，CCAGAGTGCCACTGAGTCTCAT(45miRNA--sx62反義塵時亥苷酸5，TCAGGAAAGTGTACATGCAAGT(46miRNA--sx63反義塵時亥苷酸5，CCAACAGCAATCCCACCAGGCCA(47miRNA--sx64反義塵時亥苷酸5，TCTGCCCTGCTTGGCCGACCTT(48miRNA--sx65反義塵時亥苷酸5，CCAACCAACAGAATATCTCCAT(49miRNA--sx66反義塵時亥苷酸5，GGGCCCAGGTCTCGGTCTCCGA(50miRNA--sx67反義塵時亥苷酸5，TCTGAGAGTGAGTGGAACATG(51miRNA--sx68反義塵時亥苷酸5，TTCCCAATCTGCCCATCTGAAT(52miRNA--sx69反義塵時亥苷酸5，ACAGAGTTTGGTTCCTAGCACT(53miRNA--sx70反義塵時亥苷酸5，TACATATACATACACACATCACA(54miRNA--sx71反義塵時亥苷酸5，TTCTGCTTGTCTCTGTGTTGTA(55miRNA--sx72反義塵時亥苷酸5，TCCACATATCCCACCATCTCT(56miRNA--sx73反義塵時亥苷酸5，GCCAATCTGTTGGTTCTGTTTTA(57miRNA--sx74反義塵時亥苷酸5，CATCAGACGGATCCTGAACCAACT(58miRNA--sx75反義塵時亥苷酸5，GTCTCCACACTCCTTTCCTACA(59miRNA--sx76反義塵時亥苷酸5，GCTCCAGTTCATGAACCATGACCA(60miRNA--sx77反義塵時亥苷酸5，TCTCTGCACGGTCCCCACTCCAA(61miRNA--sx78反義塵時亥苷酸5，AGCAACAACAATAACAACTACA(62miRNA--sx79反義塵時亥苷酸5，ACCAGTGACTTCAGAACTCTTG(63miRNA--sx80反義塵時亥苷酸5，TCCCATCAACTCTCCAACACCTG(64miRNA--sx81反義塵時亥苷酸5，GCAAAGTAGAGGTCAGTGAGCCA(65miRNA--sx82反義塵時亥苷酸5，ACCATGCACCTCTAGACCCCCC(66miRNA--sx83反義塵時亥苷酸5，TCTGTGTGTATGTAGGTATGTA(67miRNA--sx84反義塵時亥苷酸5，AGATCTACCTTTGCTACCCACACC(68miRNA--sx85反義塵時亥苷酸5，TCTCCCTAACTCTGGACAGAGCA(69miRNA--sx86反義塵時亥苷酸5，GCTCACCTCCCACCTAGTTGGG(70miRNA--sx87反義塵時亥苷酸5，ACTTCCCAATCTGCCCATCTGAA。 本發(fā)明提供的miRNA及其前體序列、反義寡核苷酸序列也可采用化學合成的方法得到；為增強其穩(wěn)定性、生物利用度、組織靶向性等藥學特征，可對其進行硫代修飾或甲氧基修飾，也可采取兩種方法結合修飾。本發(fā)明提供的miRNA及其前體序列、反義寡核苷酸序列可用于制備治療周圍神經損傷修復的藥物?？梢砸云鋯为毣蚧旌闲问綖橛行ЫM分配制成非腸道給藥制劑，依據給藥模式、受害者的體征以適量劑量給藥，也可采用基因治療的方法，以治療或病毒為表達載體，使其在周圍神經損傷部位高效表達。
具體實施例方式1.動物模型構建和樣品制備
成年雄性 SD大鼠(180 220 g)被麻醉后(10 mg/kg xylazine, 95 mg/kg keUamine, acepromazine 0.7 mg/kg),左后肢外側坐骨神經被切開一個1 cm長的切口，然后皮膚被縫合。動物飼養(yǎng)在合適的溫度和濕度條件下進行，每天12 h光照，自由飲水和采食。坐骨神經切斷后的0，1，4，7和14天，處死大鼠，取大鼠坐骨神經離斷后的L4-6背根神經節(jié)和坐骨神經缺口處向上0. 5 cm的近端神經用于分析。提取和Solexa測序
用1Trizol提取總RNA，Solexa測序送北京基因組研究所(BGI)進行。18 30 nt的小RNA經過凝膠純化，連接到Solexa測序接頭，連接產物被純化、逆轉錄和PCR擴增。擴增產物經過凝膠純化后進行測序，測序得到的圖像文件被轉換成數字信號，在移去雜質信號和接頭序列后，結果被計算機分析處理。新miRNA的預測
從Solexa測序得到的小分子RNA序列首先用SOAP軟件與大鼠基因組序列比對； MIREAP用來分析候選miRNA的發(fā)夾結構；濾掉自由能大于_20 kcal/mol的候選miRNA ； 基于miRBaSel7. 0，過濾掉已報道的miRNA ；MiPred進一步過濾掉功能上非保守的虛擬的 miRNA 前體(pre-miRNA)。RT-PCR 分析
同Solexa測序的小分子RNA用來進行定量RT - PCR分析；10 ng的RNA用莖環(huán)逆轉錄引物和TaqMan反轉錄試劑盒(ABI)逆轉錄到cDNA。然后進行PCR實驗，用三蒸水作為陰性模板對照，進行PCR分析。對施萬細胞增殖的影響
根據miRNA成熟體的序列，分別設計合成了它們的mimic及inhibitor，用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)施萬細胞，利用Lipofectamine RNAiMAX (invitrogen)反轉入細胞，M孔板 mimic用量為6 pmol, inhibitor用量為12 pmol,培養(yǎng)液為無血清的DMEM，按說明書操作。5-8小時后加含10%血清的完全培養(yǎng)液。培養(yǎng)36小時后，進行增殖實驗如下運用BrdU ELISA KIT (Roche)進行增殖實驗。具體實驗步驟根據說明書，簡單描述如下，將轉染36 小時的96孔板中的細胞中加入BrdU標記液，孵育4 h后固定，經一抗及二抗孵育后Leica DC 300F正置熒光顯微鏡進行觀察和拍照，隨機選取10個視野計數細胞個數；也可以酶標儀上檢測其OD值，間接反映增殖細胞數。
權利要求
1.七十個大鼠源miRNA，其特征在于包含如下任一 miRNA序列(1)miRNA-sx18 5，CAUAAGUGUAGAGAGUCUGUAGU染色體定位 lq31(2)miRNA-sxl95，TCAACCCAGGGCAGACACTCAGA染色體定位 7ql3(3)miRNA-sx205，TCAACCCAGGGCAGACACTCAGA染色體定位 7ql3(4)miRNA-sx2l 5，TTGAGGATGTGTGGTGCAAAGC染色體定位 10q24(5)miRNA-sx225，TTGTAGGAGGACTGGAGCACGA染色體定位 10q21(6)miRNA-sx235，TGCTTTCGGAGTGTTCCTGTGC染色體定位 Ilqll(7)miRNA-sx245，AGGAAGTGAGGGTGGCTGGCTAGC染色體定位 llq21(8)miRNA-sx255，GGCATTTGGGATTGTGTTCA染色體定位 llq23(9)miRNA-sx265，AGGAGATAGGACCTGAGCACCCG染色體定位 13q24(10)miRNA-sx275，TGGCCTGGTGGGATTGCTGTTGGC染色體定位 15pl2(11)miRNA-sx285，AGCAGGGAGAGCTACAGAGCTTTG染色體定位 17pl4(12)miRNA-sx295，CCACGGATTTTTCTCGAATGA 18pl3 染色體定位？(13)miRNA-sx305，AAGATGGTTGACTGTAGCTGACAG染色體定位 18ql2. 3(14)miRNA-sx315，CAGACAGAGGCCTGGGAAGTCAGA染色體定位 19qll(15)miRNA-sx325，AAAGAAGAAAGCAGCACTCACG染色體定位 19ql2(16)miRNA-sx335，TTCCAGGGACTGAGCACGGCACC染色體定位 lq32(17)miRNA-sx345，TTGTGAAACACGGCTGTCTTGT染色體定位 20pl2(18)miRNA-sx355，TGGTGGTAGAACGTAAGTTGCT染色體定位 2qll(19)miRNA-sx365，AGTTGGGGCTGTAGTGGGGCTG染色體定位 3q36(20)miRNA-sx375，AGTTGGGGCTGTAGTGGGGCTG染色體定位 3q36(21)miRNA-sx385，AGTTGGGGCTGTAGTGGGGCTG染色體定位 3q36(22)miRNA-sx395，AGAAGGACAGGAATCTGGTGTT染色體定位 3q41(23)miRNA-sx405，TGCAGCATGGATGAGAACTTGGC染色體定位 3q31(24)miRNA-sx415，CTCCAAAGGGAATATGCAAAGGG染色體定位 3q35(25)miRNA-sx425，TAGGGATGAAGTGTGGGACTGC染色體定位 3q43(26)miRNA-sx435，ATGGGGATACAGGACAGCAAGC染色體定位 5q33(27)miRNA-sx445，GCTAGGAATAGAGCATAGTGGT染色體定位 5q36(28)miRNA-sx455，CGCGGGTGTGGAGGGAGTGAGC染色體定位 5q36(29)miRNA-sx465，GAAGCCGGGTTCTGTAGCCTCG染色體定位 6ql6(30)miRNA-sx475，TCCTTGGGGGCTGGGCTGGAG染色體定位 7qll(31)miRNA-sx485，TAAGGGTAGCAAGAGTAGGTGG染色體定位 7q34(32)miRNA-sx495，TGGATGGCACCAGGCTCTCGGC染色體定位 8ql3(33)miRNA-sx505，CCAAGAAGGCTAGGGACTGCG染色體定位 8q31(34)miRNA-sx515，ATGACAGAGAATCTCCTGACGC染色體定位 9q37(35)miRNA-sx88 5，CTGGGGACAGATGGCTGGCTGA染色體定位 2q43(36)miRNA-sx535，CTGACTTACTCCCTCTGTGC染色體定位 12ql6(37)miRNA-sx545，CGGACCATGTGAACCAGAGTGC染色體定位 16ql2. 5(38)miRNA-sx555，GGTAGATTTAGCGAATGTCCAT染色體定位 18pll(39miRNA--sx565CAGGTGTTGGAGAGTTGATGG染色體定位4q34(40miRNA--sx575AGGGACCCCGAGGGAGGGCAGG染色體定位6q32(41miRNA--sx585TGGTCTGTGAGCCTTACGGTCC染色體定位6q32(42miRNA--sx595GTAGGTTCCGGCCAGTAGGAGT染色體定位10ql2(43miRNA--sx605ACACATGGCGCTCAACTCTGCAG染色體定位10ql2(44miRNA--sx615ATGAGACTCAGTGGCACTCTGG染色體定位12pl2(45miRNA--sx625ACTTGCATGTACACTTTCCTGA染色體定位12pll(46miRNA--sx635TGGCCTGGTGGGATTGCTGTTGG染色體定位15pl2(47miRNA--sx645AAGGTCGGCCAAGCAGGGCAGA染色體定位16pl4(48miRNA--sx655ATGGAGATATTCTGTTGGTTGG染色體定位lq52(49miRNA--sx665TCGGAGACCGAGACCTGGGCCC染色體定位2q45(50miRNA--sx675CATGTTCCACTCACTCTCAGA染色體定位 3q36(51miRNA--sx685ATTCAGATGGGCAGATTGGGAA染色體定位4q22(52miRNA--sx695AGTGCTAGGAACCAAACTCTGT染色體定位5q22(53miRNA--sx705TGTGATGTGTGTATGTATATGTA染色體定位4q44(54miRNA--sx715TACAACACAGAGACAAGCAGAA染色體定位18ql2. 1(55miRNA--sx725AGAGATGGTGGGATATGTGGA染色體定位2q31(56miRNA--sx735TAAAACAGAACCAACAGATTGGC染色體定位3q35(57miRNA--sx745AGTTGGTTCAGGATCCGTCTGATG染色體定位lq31(58miRNA--sx755TGTAGGAAAGGAGTGTGGAGAC染色體定位9q21(59miRNA--sx765TGGTCATGGTTCATGAACTGGAGC染色體定位5q24(60miRNA--sx775TTGGAGTGGGGACCGTGCAGAGA染色體定位8q32(61miRNA--sx785TGTAGTTGTTATTGTTGTTGCT染色體定位2q22(62miRNA--sx795CAAGAGTTCTGAAGTCACTGGT染色體定位3pl2(63miRNA--sx805CAGGTGTTGGAGAGTTGATGGGA染色體定位4q34(64miRNA--sx815TGGCTCACTGACCTCTACTTTGC染色體定位7q34(65miRNA--sx825GGGGGGTCTAGAGGTGCATGGT染色體定位7q36(66miRNA--sx835TACATACCTACATACACACAGA染色體定位17ql2. 3(67miRNA--sx845GGTGTGGGTAGCAAAGGTAGATCT染色體定位lq43(68miRNA--sx855TGCTCTGTCCAGAGTTAGGGAGA染色體定位18pl2(69miRNA--sx865CCCAACTAGGTGGGAGGTGAGC染色體定位18qll(70miRNA--sx875TTCAGATGGGCAGATTGGGAAGT染色體定位4q220
2.權利要求1所述的鼠源miRNA，其特征在于包含該序列進行了硫代修飾、甲氧基修飾或兩者的結合修飾。
3.權利要求1所述的鼠源miRNA，其特征在于該序列通過化學合成獲得。
4.權利要求1所述的鼠源miRNA，其特征在于該序列通過構建真核細胞表達載體進行表達獲得。
5.權利要求4所述的鼠源miRNA，其特征在于所述載體為質粒載體或病毒載體。
6.根據權利要求1所述七十個大鼠源miRNA的前體RNA，其特征在于包含如下任一序(1)miRNA-sx18 前體(5 ’ GAUG⑶UGUGGAGACACAGCUUCUCUUCACUUAUUAUAUUUCAUUCCU UAUAAUCAUAAGUGUAGAGAGUCUGUA⑶CACCACCCAU (2)miRNA-sx 19 前體(5 ’ ACACUCAGAACCU⑶GACA⑶⑶⑶⑶CAACCCAGGGUAGACACUCAGAA CCU ⑶ GACA ⑶⑶⑶⑶ CAACCCAGGGCAGACACUCAGAACCUGAGACU(3)miRNA-sx20前體(5 ’ ACA⑶⑶⑶⑶CAACCCAGGGCAGACACUCAGAACCU⑶GACA⑶⑶⑶G UCAACCCAGGGUAGACACUCAGAACCU⑶G(4)miRNA-sx21前體(5 ’ GAAGGAGG⑶UUGAGGAU⑶⑶GGUGCAAAGCCAAAGCAUCUGUUUAU⑶C CAGCUCUGGCUUUCGCGCUACCUUCCUAUUCAACACAUCCAGA(5)miRNA-sx22前體(5 ’ AAGACUCCCACAUUGCUUCAGUCCAUCUUAUCUUCAGCUCUUCUCUCAAGCAA CAGAAAGCAUGCUUGUAGGAGGACUGGAGCACGACAGGACAGCA(6)miRNA-sx23前體(5 ’ UCCUGCCAUUCCAGGUCCACUCUGCUGAGCACU⑶GACAUCACCCACUGCUU UCGGAGUGUUCCUGUGCCUGGCUUGGG(7)miRNA-sx24前體(5 ’ UUUGCAAUAAAGGAA⑶GAGGGUGGCUGGCUAGCCAGGGCAGGCAGGCCA CAACUUUCACUUCUAGGAAUGCUUU(8)miRNA-sx25前體(5 ’ UGUAUAAAUAGGCAUUUGGGAUUGUGUUCAUG⑶UUGCUU⑶CAGCGCAGGAC AA⑶⑶⑶GAUUAU⑶U(9)miRNA-sx26前體(5’ UCGA⑶GAGUAGGAGAUAGGACCUGAGCACCCGG⑶GACCAGCCAGCCG G⑶GCCAGCGCCUUCUGUCCACAGCAAACCUCUG(10)miRNA-sx27前體(5 ’ UCCCAGCCAGCCCUGGAAUCCCUGCAGGCACACCAGA⑶CGGAUCUGUGG CCUG⑶GGGAUUGCUGUUGGCAUGGCUGUGU(11)miRNA-sx28前體(5 ’ CUUUUCAUUGAGCAGGGAGAGCUACAGAGCUUU⑶CACGCACACACAAGG CUCAGUCCUCCCU⑶CAGUGCUCAGAAGG(12)miRNA-sx29前體(5 ’ UGAAAAUCAAGCUUAUUUAAUGUGUC⑶⑶CUGCCAGGCAACAGCCCACGG AUUUUUCUCGAAUGAGCUUAUUUUC(13)miRNA-sx30前體(5，A⑶⑶⑶GACACUUGGCGA⑶CAAUCAUCUUGGUCUAAUUGCUCUGAUGAAGAUGGUUGACUGUAGCUGACAGUGCCUACAUA(14)miRNA-sx31前體·5 ’ CCACCU⑶UGCUCU⑶CUUCCAGCUUCUGGGCGGGCCAUCCUCCUGGUAGGC AGACAGAGGCCUGGGAA⑶CAGACUGCCGG⑶G(15)miRNA-sx32前體·5 ’ UUGAAGCACAGCCUUCA⑶CUGCUUUUUCUUCUCACUGGGAGAGCA⑶GAA AAGAAGAAAGCAGCACUCACGGCUGACUUUA(16)miRNA-sx33前體·5 ’ GGCAUCU⑶UUUCCAGGGACUGAGCACGGCACCUACACUUUCAUAU⑶⑶CUG CUGCCAGGGCCUUGCUCAGGCCUGUGGAGGACCCUCUGCUC(17)miRNA-sxIM 前體·5 ’ GGA⑶CCCAGCAG⑶UAGUGGCUGCU⑶UUCACCGCUCACCUAUGAAGGAG AGUU⑶GAAACACGGCU⑶CUUGUGCUGGGACUC(18)miRNA-sx35前體·5 ’ ACCCUGGCACCCUCAGCUCCUUACC⑶UCCUCCUAGCACCU⑶UGGAAUGUC ⑶GCUG⑶GGUAGAACGUAA⑶UGCU⑶GAGUGGGG(19)miRNA-sx36前體·5 ’ GUGGGGCUACA⑶UGGGGCUGUA⑶UAGGCUGUAGUUGGGCUGUAGUUGGG CCUGUAGUGGGGCUGUA⑶UGGGGCUGUAGUGGGGCUGUAGUUGGGGC(20)miRNA-sx37前體·5 ’ GUUGAGGCUGUAGUGGGGCUACA⑶UGGGGCUGUA⑶UAGGGUGUAGUAGG GCUGUAGUUGGGCUGUA⑶UGGGGCUGUAGUGGGGCUGUAGUUGGGAC(21)miRNA-sx38前體·5 ’ GUGGGGCUGUA⑶UGGGGCUGUAGUGGGGCUGUA⑶GGGGGCUGUA⑶GGG GCUGUA⑶UGGGGCUGUAG(22)miRNA-sx39前體·5 ’ AAGAGACAUCAGAAGGACAGGAAUCUGGUGUUUUGCUAAUCAGACUCUUGU CCUCUCCCUGUCUAAC(23)miRNA-sx40前體·5 ’ AGACUGACUCUGCAGCAUGGAUGAGAACUUGGCUCUGCCUA⑶GCCAA⑶G CCAUCAAUUGCUGCUGCUACU⑶UUG(24)miRNA-sx41前體·5 ’ CUAUUGCUAACUCUGCAUCAUUCCCUGGG⑶GGUAUGCUAAGGAAGCUCACCUU GCU⑶UCUCCAAAGGGAAUAUGCAAAGGGAAGAGUG⑶G(25)miRNA-sx42前體·5 ’ GGGGCCC⑶⑶⑶CCUAUACU⑶GGUCCCUCCAACAAGUCCGUGGAUGUCCU GGGAG ⑶⑶⑶ UAGGGAUGAA ⑶⑶ GGGACUGCCAGAGGGCUC(26)miRNA-sx43前體·5，AGGAUGCAGGAACAGCUAGCU⑶CUGGUCCUCCUCUGCUUCCUUACCA⑶GAGAUGGGGAUACAGGACAGCAAGCU ⑶⑶ GGUCC(27)miRNA-sx44前體·5 ’ GGGUGCAGUGGCUAGGAAUAGAGCAUA⑶GGUAGAGCUUC⑶GAAGCCACA UGCUCAAUUCCUAUCACUGCUGAGGCUUG(28)miRNA-sx45前體·5 ’ GACCAGGACUGCUCCUCUCCUCUCACCCUCGCGGGCGGGGACACUACUACG CCCGCGGGUGUGGAGGGA⑶GAGCUAGAGGGGGU(29)miRNA-sx46前體·5 ’ 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UCUUUAAUCU⑶UCCUUACAGUUG(39)miRNA-sx56前體·5，GAUCAGCAGCCAG⑶⑶UGGAGAGUUGAUGGGAUCACUACUCACUAACUCUUCCCACUUCUCUUCUACCCUCAG⑶UG⑶GAUG(40)miRNA-sx57前體、5 ’ U⑶GA⑶⑶GAGGGACCCCGAGGGAGGGCAGGCUGCCCCAGGCCCUGC CCCCUCCAGGAAGCCUUCUUGCUCCAG(41)miRNA-sx58前體、5 ’ CUCUAGUGUGUG⑶CU⑶GAGCCUUACG⑶CCUGUGUACACUCUAGUGUGUGG UCU⑶GAGCCUUAUG⑶CCUGUGUACACUCCAGU(42)miRNA-sx59前體、5 ’ CUUCCUGCAGGUAG⑶UCCGGCCAGUAGGA⑶UUUGGAAUUUUGGGAAUUCCC UGGCCUGGCUCCUCACCGCAACUCUGU(43)miRNA-sx60前體、5 ’ CCCGGUGGACAGAGUGUGUGUGUCUGUGUGGAGGAGACAGGA⑶UGCCCAC ACAUGGCGCUCAACUCUGCAGGAUAAAUACA(44)miRNA-sx61前體、5’ GGGCU⑶GCCAUGAGACUCA⑶GGCACUCUGGAAG⑶UGUCCAGAGGCCAC UGUGCUCUCUGAUAAUCGCCGAGCUCU(45)miRNA-sx62前體、5 ’ CCAUCUCCUCACUUGCAUGUACACUUUCCUGAGGGCCUCCUCAAACCCAGGAAG UUGUGCAUGCAGGAAAGGAGGCGU(46)miRNA-sx63前體、5 ’ CCCAGCCAGCCCUGGAAUCCCUGCAGGCACACCAGA⑶CGGAUCU⑶GGCCU G⑶GGGAUUGCUGUUGGCAUGGCU⑶G(47)miRNA-sx64前體、5 ’ GCGCUGGAAGCAGGCCCUGGUUGGCUUCCUCCCAAGGAGAGCU⑶GGGAAG ⑶CGGCCAAGCAGGGCAGAAAACAAGCAA(48)miRNA-sx65前體、5 ’ AAGCUUAACCAUGGAGAUAUUCU⑶UG⑶UGGGUUUUGAUAGCCCUUUUGACU 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7.權利要求6所述的鼠源miRNA的的前體RNA，其特征在于該序列通過化學合成獲得。
8.權利要求6所述的鼠源miRNA的的前體RNA，其特征在于該序列通過構建真核細胞表達載體進行表達獲得。
9.權利要求8所述的鼠源miRNA的的前體RNA，其特征在于所述載體為質粒載體或病毒載體。
10.根據權利要求1所述的七十個大鼠源miRNA的反義寡核苷酸包含如下任一序列l(wèi))miR-SX18反義寡核苷酸5’‘ACTACAGACTCTCTACACTTATG2)miRNA-sxl9反義Λ核苷酸5，TCTGAGTGTCTGCCCTGGGTTGA3)miRNA-sx20反義塵核苷酸5，TCTGAGTGTCTGCCCTGGGTTGA4)miRNA-sx21反義塵核苷酸5，GCTTTGCACCACACATCCTCAA5)miRNA-sx22反義塵核苷酸5，TCGTGCTCCAGTCCTCCTACAA6)miRNA-sx33反義塵核苷酸5，GCACAGGAACACTCCGAAAGCA7)miRNA-sx44反義塵核苷酸5，GCTAGCCAGCCACCCTCACTTCCT8)miRNA-sx25反義塵核苷酸5，TGAACACAATCCCAAATGCC9)miRNA-sx26反義書核苷酸5，CGGGTGCTCAGGTCCTATCTCCT10)miRNA-sx27 反義;S核苷酸5GCCAACAGCAATCCCACCAGGCCAll)miRNA-sx28 反義;S核苷酸5CAAAGCTCTGTAGCTCTCCCTGCT12)miRNA-sx29 反義;S核苷酸5TCATTCGAGAAAAATCCGTGG13)miRNA-sx30 反義;S核苷酸5CTGTCAGCTACAGTCAACCATCTT14)miRNA-sx31 反義;S核苷酸5TCTGACTTCCCAGGCCTCTGTCTG15)miRNA-sx32 反義;S核苷酸5，CGTGAGTGCTGCTTTCTTCTTT16)miRNA-sx33 反義;S核苷酸5，GGTGCCGTGCTCAGTCCCTGGAA17)miRNA-sx34 反義;S核苷酸5，ACAAGACAGCCGTGTTTCACAA(18miRNA--sx35反義3S核苷酸I 5，AGCAACTTACGTTCTACCACCA(19miRNA--sx36反義3S核苷酸I 5，CAGCCCCACTACAGCCCCAACT(20miRNA--sx37反義3S核苷酸I 5，CAGCCCCACTACAGCCCCAACT(21miRNA--sx38反義3S核苷酸I 5，CAGCCCCACTACAGCCCCAACT(22miRNA--sx39反義3S核苷酸I 5，AACACCAGATTCCTGTCCTTCT(23miRNA--sx40反義3S核苷酸I 5，GCCAAGTTCTCATCCATGCTGCA(24miRNA--sx41反義3S核苷酸I 5，CCCTTTGCATATTCCCTTTGGAG(25miRNA--sx42反義3S核苷酸I 5，GCAGTCCCACACTTCATCCCTA(26miRNA--sx43反義3S核苷酸I 5，GCTTGCTGTCCTGTATCCCCAT(27miRNA--sx44反義3S核苷酸I 5，ACCACTATGCTCTATTCCTAGC(28miRNA--sx45反義3S核苷酸I 5，GCTCACTCCCTCCACACCCGCG(29miRNA--sx46反義3S核苷酸I 5，CGAGGCTACAGAACCCGGCTTC(30miRNA--sx47反義3S核苷酸I 5，CTCCAGCCCAGCCCCCAAGGA(31miRNA--sx48反義3S核苷酸I 5，CCACCTACTCTTGCTACCCTTA(32miRNA--sx49反義3S核苷酸I 5，GCCGAGAGCCTGGTGCCATCCA(33miRNA--sx50反義3S核苷酸I 5，CGCAGTCCCTAGCCTTCTTGG(34miRNA--sx51反義3S核苷酸I 5，GCGTCAGGAGATTCTCTGTCAT(35miRNA--sx88反義3S核苷酸I 5，TCAGCCAGCCATCTGTCCCCAG(36miRNA--sx53反義3S核苷酸I 5，GCACAGAGGGAGTAAGTCAG(37miRNA--sx54反義3S核苷酸I 5，GCACTCTGGTTCACATGGTCCG(38miRNA--sx55反義3S核苷酸I 5，ATGGACATTCGCTAAATCTACC(39miRNA--sx56反義3S核苷酸I 5，CCATCAACTCTCCAACACCTG(40miRNA--sx57反義3S核苷酸I 5，CCTGCCCTCCCTCGGGGTCCCT(41miRNA--sx58反義3S核苷酸I 5，GGACCGTAAGGCTCACAGACCA(42miRNA--sx59反義3S核苷酸I 5，ACTCCTACTGGCCGGAACCTAC(43miRNA--sx60反義3S核苷酸I 5，CTGCAGAGTTGAGCGCCATGTGT(44miRNA--sx61反義3S核苷酸I 5，CCAGAGTGCCACTGAGTCTCAT(45miRNA--sx62反義3S核苷酸I 5，TCAGGAAAGTGTACATGCAAGT(46miRNA--sx63反義3S核苷酸I 5，CCAACAGCAATCCCACCAGGCCA(47miRNA--sx64反義3S核苷酸I 5，TCTGCCCTGCTTGGCCGACCTT(48miRNA--sx65反義3S核苷酸I 5，CCAACCAACAGAATATCTCCAT(49miRNA--sx66反義3S核苷酸I 5，GGGCCCAGGTCTCGGTCTCCGA(50miRNA--sx67反義3S核苷酸I 5，TCTGAGAGTGAGTGGAACATG(51miRNA--sx68反義3S核苷酸I 5，TTCCCAATCTGCCCATCTGAAT(52miRNA--sx69反義3S核苷酸I 5，ACAGAGTTTGGTTCCTAGCACT(53miRNA--sx70反義3S核苷酸I 5，TACATATACATACACACATCACA(54miRNA--sx71反義3S核苷酸I 5，TTCTGCTTGTCTCTGTGTTGTA(55miRNA--sx72反義3S核苷酸I 5，TCCACATATCCCACCATCTCT(56miRNA--sx73反義3S核苷酸t(yī) 5，GCCAATCTGTTGGTTCTGTTTTA(57)miRNA-sx74反義3S核苷酸I 5，CATCAGACGGATCCTGAACCAACT(58)miRNA-sx75反義3S核苷酸I 5，GTCTCCACACTCCTTTCCTACA(59)miRNA-sx76反義3S核苷酸I 5，GCTCCAGTTCATGAACCATGACCA(60)miRNA-sx77反義3S核苷酸I 5，TCTCTGCACGGTCCCCACTCCAA(61)miRNA-sx78反義3S核苷酸I 5，AGCAACAACAATAACAACTACA(62)miRNA-sx79反義3S核苷酸I 5，ACCAGTGACTTCAGAACTCTTG(63)miRNA-sx80反義3S核苷酸I 5，TCCCATCAACTCTCCAACACCTG(64)miRNA-sx81反義3S核苷酸I 5，GCAAAGTAGAGGTCAGTGAGCCA(65)miRNA-sx82反義3S核苷酸I 5，ACCATGCACCTCTAGACCCCCC(66)miRNA-sx83反義3S核苷酸I 5，TCTGTGTGTATGTAGGTATGTA(67)miRNA-sx84反義3S核苷酸I 5，AGATCTACCTTTGCTACCCACACC(68)miRNA-sx85反義3S核苷酸I 5，TCTCCCTAACTCTGGACAGAGCA(69)miRNA-sx86反義3S核苷酸I 5，GCTCACCTCCCACCTAGTTGGG(70)miRNA-sx87反義3S核苷酸t(yī) 5，ACTTCCCAATCTGCCCATCTGAA。
11.權利要求10所述的的七十個大鼠源miRNA反義寡核苷酸，該核苷酸選自DNA或RNA。
12.權利要求10所述的鼠源miRNA的反義寡核苷酸，其特征在于該序列通過化學合成獲得。
13.權利要求10所述的鼠源miRNA的反義寡核苷酸，其特征在于該序列通過構建真核細胞表達載體進行表達獲得。
14.權利要求13所述的鼠源miRNA的反義寡核苷酸，其特征在于所述載體為質粒載體或病毒載體。
15.權利要求1、6、10任一項所述的七十個大鼠源miRNA、前體RNA、反義寡核苷酸及其表達載體在制備治療周圍神經損傷藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了七十個與大鼠坐骨神經離斷過程相關的miRNA序列、其前體序列和反義寡核苷酸序列，以及其在制備治療周圍神經損傷藥物中的用途。
文檔編號C12N15/113GK102337267SQ20111032456
公開日2012年2月1日 申請日期2011年10月24日 優(yōu)先權日2011年10月24日
發(fā)明者丁斐, 于彬, 周松林, 李石營, 錢天梅, 顧曉松, 顧蕓 申請人:南通大學