專利名稱：預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者對(duì)化療藥物敏感性的方法和試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患 者對(duì)化療藥物敏感性的方法和試劑盒，特別涉及一種通過測(cè)定子宮內(nèi)膜癌患者ΑΡ-2 α基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rsl045385基因型來預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者對(duì)化療藥物敏感性的方法和試劑盒，屬于醫(yī)學(xué)生物技術(shù)和基因診斷領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
子宮內(nèi)膜癌，又稱為子宮體癌，是婦科常見的惡性腫瘤。子宮內(nèi)膜癌的治療以手術(shù)治療為主，化學(xué)治療(化療)，是子宮內(nèi)膜癌的輔助治療方式。近年來化療在子宮內(nèi)膜癌治療中的價(jià)值越來越受到重視?；煵粌H用于晚期患者的姑息治療和有嚴(yán)重內(nèi)科并發(fā)癥、高齡等不宜手術(shù)治療的病例，而且用于手術(shù)病理分期后具有高危因素者的輔助治療或手術(shù)切除范圍不足的補(bǔ)充治療。術(shù)后化療可降低早期子宮內(nèi)膜癌患者的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率，使死亡風(fēng)險(xiǎn)降低。本發(fā)明涉及到的AP-2ci基因是AP-2轉(zhuǎn)錄因子家族中的一個(gè)重要成員。AP-2基因家族在胚胎發(fā)育，細(xì)胞分化和腫瘤發(fā)生方面都有重要的調(diào)控作用，現(xiàn)在已鑒定屬于該家族的成員有ΑΡ_2α、ΑΡ_2β、ΑΡ-2 γ、ΑΡ-2 δ和AP-2 ε。近來，越來越多的研究表明，ΑΡ_2 α 不僅是胚胎發(fā)育過程中的一個(gè)重要調(diào)控因子，而且參與腫瘤發(fā)生發(fā)展過程。AP-2CI調(diào)控許多參與細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的基因，從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)和腫瘤轉(zhuǎn)移。AP-2CI蛋白在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)水平與化療敏感性有關(guān)，ΑΡ-2 α蛋白表達(dá)高的患者(腫瘤細(xì)胞)對(duì)順鉬、依托泊苷、 紫杉醇、阿霉素、吉西他濱等化療藥物敏感，反之，ΑΡ-2 α蛋白表達(dá)低的患者(腫瘤細(xì)胞)對(duì)這些化療藥物有耐藥性(Wajapeyee N等，Cancer Res 2005;65:8628-8634; Jonckheere N 等，Br J Cancer 101: 637-644.)。MicroRNA (miRNA)是一類由內(nèi)源基因編碼的長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，它通過不完全互補(bǔ)結(jié)合到目標(biāo)靶mRNA 3'非翻譯區(qū)(UTR)上并阻止目標(biāo)基因的表達(dá)。miRNA在細(xì)胞分化、生物發(fā)育及疾病發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮巨大作用，越來越多的引起研究人員的關(guān)注。許多研究發(fā)現(xiàn)miRNA-200家族(包括miR-200b，miR-200c, miR-429, 以下統(tǒng)稱為miR-200b/200c/429)在許多癌(尤其子宮內(nèi)膜癌)組織中的表達(dá)顯著高于相應(yīng)的正常組織，而且miR-200b/200c/429在癌細(xì)胞中的高表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性降低(Lee JW 等，Genecol Oncol, 2011 120 56-62 ； Hamano R 等，Clin Cancer Res, 2011， 17:3029-3038)。單核苷酸多態(tài)性(SNP)是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，它是人類可遺傳的變異中最常見的一種。目前，已有研究表明個(gè)體對(duì)藥物的反應(yīng)、疾病易感性等都與SNP相關(guān)(許玲等，世界消化雜志，2005，13:592-595)。因此，研究SNP 位點(diǎn)與腫瘤患者耐藥性的關(guān)系可以為個(gè)性化用藥和預(yù)后判斷提供指導(dǎo)作用。目前已有通過檢測(cè)SNP位點(diǎn)預(yù)測(cè)癌癥、高血壓繼發(fā)性左心室肥厚、腦卒中等疾病易感性的方法(專利號(hào) ZL200910043021. 0，ZL200710064639. 6，ZL200810102698. 2)，但尚未有通過檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)預(yù)測(cè)癌癥患者對(duì)化療藥物敏感性的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的 有兩個(gè)一是提供一種預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者對(duì)化療藥物敏感性的方法，用于彌補(bǔ)目前通過檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)預(yù)測(cè)癌癥患者對(duì)化療藥物敏感性方面的空白；二是提供一種預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者對(duì)化療藥物敏感性的試劑盒，用于實(shí)際預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者對(duì)化療藥物敏感性。本發(fā)明公開的預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者對(duì)化療藥物的敏感性的方法，通過檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者的ΑΡ-2 α基因單核苷酸位點(diǎn)rsl045385的基因型來實(shí)現(xiàn)預(yù)測(cè)。所述的檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者ΑΡ-2 α基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn) rsl045385基因型的方法，在PCR擴(kuò)增與測(cè)序時(shí)使用的引物堿基序列為正向引物 5' -GGGACTGAGTCACCACCTTC- 3‘；反向引物 5' -GAATCGTGTTGCCAGAGAAAG- 3‘。一種用所述的引物制成的預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者化療藥物敏感性的試劑盒，該試劑由下列試劑混合而成
125 ml 2. 5mmol/L 10'PCR 緩沖液，100 ml 2. 5mmol/L dNTP 混合液，50 ml 10mmol/L 正向引物，50 ml 10mmol/L 反向引物，6. 5 ml 5 unit/ml Taq DNA 聚合酶，1 ml 無菌蒸餾水，試劑盒包含50次反應(yīng)用量。本發(fā)明公開的預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌化療藥物敏感性的方法通過測(cè)定子宮內(nèi)膜癌患者 ΑΡ-2α基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rsl045385基因序列來實(shí)現(xiàn)檢測(cè)目的，有如下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)
1、對(duì)樣品沒有限制，可通過血液、腹水、病理切片等樣品來提取患者DNA;
2、測(cè)定簡(jiǎn)單，只需對(duì)患者提取的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增和DNA測(cè)序即可完成測(cè)定，不需要提取細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，時(shí)間短，效率高；
3、本發(fā)明的方法和試劑盒對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者的測(cè)定，可以為個(gè)性化用藥和預(yù)后判斷提供指導(dǎo)作用。下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，并非對(duì)本發(fā)明的限制。


圖1 :ΑΡ-2 α基因的3' UTR上的π Κ-200ν200( /429結(jié)合位點(diǎn)(箭頭所指為SNP rsl045385 位點(diǎn))。圖2 在子宮頸癌細(xì)胞HeLa細(xì)胞中過表達(dá)miR_200b/200c/429導(dǎo)致ΑΡ_2α蛋白水平下降。圖3 在子宮頸內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-IA中干擾miR_200b/200c/429的表達(dá)導(dǎo)致ΑΡ-2 α 蛋白水平上升。圖4 :ΑΡ-2 α基因多態(tài)性影響π Κ-200ν200(;/429對(duì)ΑΡ-2 α表達(dá)的調(diào)控。圖5 :ΑΡ-2 α基因多態(tài)性影響子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞對(duì)順鉬的敏感性。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:
檢測(cè)ΑΡ-2 α基因單核苷酸位點(diǎn)rsl045385基因型的PCR引物的設(shè)計(jì)1、從Ensembl 數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.ensembl.org)上下載包含 rsl045385 位點(diǎn)的 ΑΡ-2 α基因的DNA序列，其中SNP位點(diǎn)上下游各選取300 bp ；
2、將上述序列用Primer3軟件或其他引物設(shè)計(jì)軟件來設(shè)計(jì)引物。引物設(shè)計(jì)要遵循以下原則引物長(zhǎng)度為If 30 bp，引物GC含量在409Γ60%之間，堿基要隨機(jī)分布，尤其3'端不應(yīng)超過3個(gè)連續(xù)的G或C，引物自身及引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，擴(kuò)增產(chǎn)物的長(zhǎng)度為 150 500 bp ；
3、檢測(cè)引物的特異性引物設(shè)計(jì)完成以后，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行BLAST檢測(cè)，如果引物與其它基因不具有互補(bǔ)性，就可以進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。用設(shè)計(jì)好的引物擴(kuò)增人基因組DNA，將PCR反應(yīng)產(chǎn)物在瓊脂糖膠上電泳，并在紫外分析儀上觀察PCR產(chǎn)物。PCR產(chǎn)物應(yīng)為單一的條帶，分子量大小為預(yù)期大小一致。實(shí)施例2 檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌化療敏感性的方法和試劑盒
試劑盒為50人份，包括下列試劑125 ml 10'PCR緩沖液，100 ml dNTP混合液(各 2. 5mM) , 50 ml 正向引物(10 mM), 50 ml 反向引物(10 mM), 6. 5 ml Taq DNA 聚合酶(5 unit/ml)，1 ml無菌蒸餾水。使用步驟如下
1、采取患者外周血Iml或者病理切片提取基因組DNA ； 2、按下列組分配制PCR反應(yīng)液2. 5 ml 10'PCR緩沖液，2 ml dNTP混合液(各 2. 5mM), 1 ml 正向引物(10 mM), 1 ml 反向引物(10 mM), 50 ng DNA, 1.5 ml Taq DNA 聚合酶(5 unit/ml)，加水至 25ml ；
3、將步驟2所得溶液放到PCR擴(kuò)增儀上，按下列反應(yīng)條件設(shè)定PCR反應(yīng)程序94°C預(yù)變性2分鐘，然后進(jìn)行30個(gè)循環(huán)(每個(gè)循環(huán)包括94°C變性30秒，56 °C退火30秒，72°C延伸 30秒)，，最后72 °C延伸5分鐘；
4、反應(yīng)結(jié)束后，取5ml PCR產(chǎn)物加入1 ml 6X加樣緩沖液，在含溴化乙錠的1. 5%瓊脂糖膠上電泳，當(dāng)溴酚藍(lán)至膠長(zhǎng)度的1/2時(shí)，取出膠在紫外分析儀上觀察PCR產(chǎn)物。PCR產(chǎn)物應(yīng)為單一的條帶，分子量大小為217 bp ；
5、剩余的20ml PCR產(chǎn)物送測(cè)序公司直接測(cè)序，測(cè)序引物為正向引物 5 ‘ -gggactgagtcaccaccttc- 3 ‘弓 L 5 ‘ —gaatcgtgttgccagagaaag— 3 ‘；
6、用bl2seq 軟件(http//blast, ncbi. nlm. nih. gov/Blast. cgi)將測(cè)得的引物和下列序列進(jìn)行比對(duì)，根據(jù)比對(duì)結(jié)果和測(cè)序峰圖判定基因型(aa型，ac型，cc型)。aa型患者對(duì)化療藥物不敏感，cc型患者對(duì)化療藥物敏感，ac型患者對(duì)藥物敏感性介于aa型和cc型之間。gggactgagt caccaccttc ccttacatac ttcagttcag attgtagcca tacttaaaaa
gccaaaagat gatgacaaca tttttatcag tmttgtgaat aaacttgaac acaaatacac gaagttccat gtcatgtctt cagttgtaga agtttttcct ctttaaggta aagcgaccaa cttgaacttt ctctggcaac acgattc
注m為多態(tài)性位點(diǎn)rsl045385，a或c。實(shí)施例3 生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)調(diào)控ΑΡ-2 α基因的miRNA
我們米用 4 個(gè)在線軟件 TargetScan (http //www. targetscan. org/)，MicroCosm Targets(http//www. ebi. ac. uk/enright-srv/microcosm)，DIANA-microT (http//diana. cslab. ece. ntua. gr/microT)禾口 miRanda(http://www. microrna. org)予頁測(cè) AP-2 α 基因上miRNA結(jié)合位點(diǎn)。這4個(gè)軟件預(yù)測(cè)的結(jié)果不完全相同，但都預(yù)測(cè)出在ΑΡ-2α基因的 3'端非翻譯區(qū)(3' UTR)的第517至537位核苷酸是miR-200b，miR_200c和miR-429的結(jié)合位點(diǎn)(圖1)。通過查詢 Ensembl 數(shù)據(jù)庫(kù)(http //www. ensembl. org)，我們發(fā)現(xiàn)在 miR_200b， miR-200c和miR-429的結(jié)合位點(diǎn)上有一個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(rsl045385)(圖1中黑色箭頭所示)。實(shí)施例4: miR_200b/200c/429對(duì)子宮內(nèi)膜癌和子宮頸癌細(xì)胞中ΑΡ_2α蛋白表達(dá)的影響
子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-IA和子宮頸癌細(xì)胞系HeLa均購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù)。HEC-IA 和HeLa細(xì)胞在37°C、5% C02、90%相對(duì)濕度培養(yǎng)箱中，分別用McCoy’ s 5a和DMEM完全培養(yǎng)液(加10%新生牛血清、2 mM L-谷氨酸、青霉素和鏈霉素)進(jìn)行培養(yǎng)。待細(xì)胞密度至70%，用脂質(zhì)體Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑盒(Invitrogen公司)將miRNA模擬體和miRNA抑制劑(購(gòu)自上海吉瑪公司)分別轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞和HEC-IA細(xì)胞。脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染步驟如下在轉(zhuǎn)染前將細(xì)胞從完全培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)入到無血清無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。每IOcm皿孔miRNA模擬體或miRNA抑制劑用量為600 pmol，用無血清無抗生素的培養(yǎng)液稀釋到1.5 mL，輕輕混勻，室溫靜置5 min0同時(shí)取30 μ L脂質(zhì)體用無血清無抗生素的培養(yǎng)液稀釋到1.5 mL，輕輕混勻，室溫靜置5min。將上述稀釋的脂質(zhì)體和miRNA 模擬體(miRNA抑制劑RNA)混勻，室溫靜置20min。然后滴加入細(xì)胞培養(yǎng)皿中，輕輕混勻，常規(guī)條件培養(yǎng)。讓DNA/脂質(zhì)體復(fù)合物與細(xì)胞接觸6h后，換成有血清和抗生素的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染36h后，吸去培養(yǎng)液，用PBS緩沖液漂洗細(xì)胞，吸凈PBS，再加入2 mL的1 X 裂解緩沖液(50 mM Tris-HCl (pH 7. 2), 150 mM NaCl, 1% (v/v) Triton X-100, 1% (w/ ν) sodium deoxycholate, 0.1% (w/v) SDS)搖勻。-80°C冰箱內(nèi)放置 15min，37°C培養(yǎng)箱內(nèi)溫育5min，重復(fù)凍溶一次，使細(xì)胞充分裂解。用細(xì)胞刮將細(xì)胞從小孔上刮下，將細(xì)胞裂解液及細(xì)胞用移液槍轉(zhuǎn)入1. 5mL的離心管，置于冰上。旋渦震蕩10-15sec，12000Xg于4°C離心2min。取上清液轉(zhuǎn)移至干凈的離心管中。 將蛋白樣品首先用15 %的SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳。通過電轉(zhuǎn)移的方法(恒壓lOOv，4°C電轉(zhuǎn)移1.5h)將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印至PVDF膜，然后將膜表面的蛋白質(zhì)再用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行特異性檢測(cè)。將轉(zhuǎn)印好的尼龍膜用含10%脫脂奶粉的TBS緩沖液(10 mM Tris-HCl (pH 7. 4)，0. 9 % NaCl)作為封閉劑封閉60min。膜浸沒加入按1 1000用封閉劑稀釋的AP-2 α單克隆抗體，于搖床中搖Ih讓稀釋的抗體與PVDF膜充分結(jié)合。用TBS 緩沖液洗膜4次，每次lOmin。將辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG (稀釋2000倍)作為第二抗體加入封閉劑，使膜浸沒其中于搖床中繼續(xù)搖lh。用TBS緩沖液洗膜4次。最后用 DAB溶液顯色。結(jié)果顯示，未轉(zhuǎn)染的或轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照的HeLa細(xì)胞中，ΑΡ-2 α蛋白表達(dá)高，而加入 miR-200b, miR_200c或miR-429后，細(xì)胞中ΑΡ-2 α蛋白量顯著下降(圖2)。未轉(zhuǎn)染的或轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照的HEC-I細(xì)胞中，AP-2ci蛋白量極微，而干擾 miR-200b, miR_200c或miR-429后，細(xì)胞中ΑΡ-2 α蛋白量顯著上升(圖3)。
實(shí)施例5 :ΑΡ-2 α基因多態(tài)性影響細(xì)胞中π Κ-200ν200(;/429對(duì)ΑΡ-2 α基因表達(dá)的調(diào)控
按實(shí)施例2中的方法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染、提取蛋白質(zhì)和Western雜交。在6cm培養(yǎng)皿上培養(yǎng)HEK293細(xì)胞，并將Myc-AP_2融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒 pMyc-AP-2 α (A)禾Π pMyc-AP-2 α (C)質(zhì)粒分別與 miRNA共轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。pMyc-AP-2 α (A) 和pMyc-AP-2 α (C)為本研究室構(gòu)建的含有ΑΡ_2 α全長(zhǎng)序列(包括編碼區(qū)序列和3 ‘ -UTR) 的Myc-AP-2融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒，這2種質(zhì)粒區(qū)別在于多態(tài)性位點(diǎn)rsl045385的堿基不同， 前者為A，后者為C，其它序列均完全相同。轉(zhuǎn)染后36小時(shí)提取蛋白質(zhì)并Western雜交方法檢測(cè)ΑΡ_2α的表達(dá)。結(jié)果表明，在轉(zhuǎn)入miRNA陰性對(duì)照的細(xì)胞中，pMyc-AP-2 α (A) 和pMyc-AP-2 α (C)表達(dá)量一致，而在轉(zhuǎn)染miR-200b，miR-200c或miR-429的細(xì) 胞中，pMyc-AP-2 α (C)表達(dá)量顯著高于pMyc-AP-2 α (A)圖4)。這些結(jié)果說明多態(tài)性位點(diǎn)rsl045385 A突變?yōu)镃后， miR-200b, miR-200c 和 miR-429 不再和和 AP-2 3 ‘ -UTR 結(jié)合，從而 AP-2 α 表達(dá)提高。實(shí)施例6: ΑΡ-2 α基因多態(tài)性影響子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞對(duì)順鉬的敏感性
按實(shí)施例2中的方法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染。在6cm培養(yǎng)皿上培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系 HEC-1A，并將Myc-AP-2融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒pMyc-AP-2 α (A)和pMyc-AP-2 α (C)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染后12小時(shí)后，用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個(gè)細(xì)胞，把細(xì)胞懸浮在 10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中備用。細(xì)胞計(jì)數(shù)后，把細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)皿中，每皿 50,100,200 個(gè)細(xì)胞。培養(yǎng)4小時(shí)后，加入不同濃度的順鉬(cisplatin，美國(guó)SIGMA公司生產(chǎn))處理6小時(shí)，然后換成新鮮完全培養(yǎng)基。置37°C 5% C02及飽和濕度的環(huán)境下，靜置培養(yǎng)2周。當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時(shí)，終止培養(yǎng)。棄去上清液，用PBS小心浸洗2 次。用甲醇固定15分鐘，然后去固定液，加適量Giemsa染色液染15分鐘，然后用流水緩慢洗去染色液，空氣干燥。將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片，用肉眼直接計(jì)數(shù)克隆，最后計(jì)算克隆形成率和細(xì)胞存活率(surviving fraction)。結(jié)果(圖5)表明在細(xì)胞中順鉬濃度大于IOmM時(shí)，轉(zhuǎn)pMyc-AP-2 α (C)的細(xì)胞中細(xì)胞存活率顯著低于轉(zhuǎn)染pMyc-AP-2 α (A)的細(xì)胞，說明多態(tài)性位點(diǎn)rsl045385 A突變?yōu)镃后， 細(xì)胞對(duì)順鉬的敏感性增加。
權(quán)利要求
1.一種預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者對(duì)化療藥物敏感性的方法，其特征在于通過測(cè)定子宮內(nèi)膜癌患者AP-2CI基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rsl045385的基因型來實(shí)現(xiàn)預(yù)測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者AP-2ci基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn) rsl045385基因序列的方法，其特征在于PCR擴(kuò)增與測(cè)序時(shí)使用的引物堿基序列為正向引物 5' -gggactgagtcaccaccttc- 3‘；反向弓丨物 5' -gaatcgtgttgccagagaaag- 3‘ 0
3.一種用如權(quán)利要求2所述的引物制成的預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者化療藥物敏感性的試劑盒，其特征在于該試劑由下列試劑混合而成125 ml 2. 5mmol/L 10'PCR緩沖液，100 ml 2. 5mmol/L dNTP 混合液，50 ml 10mmol/L 正向引物，50 ml 10mmol/L 反向引物，6. 5 ml 5 unit/ml Taq DNA聚合酶，1 ml無菌蒸餾水，試劑盒包含50次反應(yīng)用量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者對(duì)化療藥物敏感性的方法和試劑盒，通過檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者AP-2α基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs1045385基因型來預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者對(duì)化療藥物的敏感性。利用本發(fā)明的方法和試劑盒來與預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者對(duì)化療藥物敏感性，方法簡(jiǎn)單、時(shí)間短、效率高，可以為個(gè)性化用藥和預(yù)后判斷提供指導(dǎo)作用。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102382894SQ20111039124
公開日2012年3月21日 申請(qǐng)日期2011年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月1日
發(fā)明者丁小鳳, 向雙林, 周建林, 周暢, 張健, 胡翔 申請(qǐng)人:湖南師范大學(xué)