專利名稱：檢測貓叫綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種生物技術領域的基因芯片及使用方法、試劑盒，具體涉及一種檢測貓叫綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒。
背景技術：
貓叫綜合征(Cri-du-chat syndrome，CDCS)是由于5號染色體短臂缺失所引起的一種較為罕見的染色體病，是常染色體結構畸變所致疾病中常見的一種。新生兒發(fā)病率為 1/50000。該病的臨床特點主要是高調(diào)的貓叫樣哭聲，生長發(fā)育障礙和嚴重的智力低下，并具有特殊面容，如小頭、圓臉、眼距寬、內(nèi)眥贅皮、眼瞼下垂、斜視、小下頌、耳位低等，此外還有低出生體重、肌張力低下、先天性心臟病等，其中，高調(diào)的貓叫樣哭聲是具有診斷意義的特征。貓叫綜合征的大多數(shù)病例是在出生時或出生后有異?？蘼暥鴤涫茏⒁獾模嘘P貓叫綜合征的細胞分子遺傳學診斷目前有以下方法染色體常規(guī)顯帶技術分析，常用方法有 G顯帶、R顯帶、T顯帶、C顯帶、Q顯帶；此外，限制性片段長度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphisms, RFLP)分析,短串聯(lián)重復序列(short tandom repeats, STRs)多態(tài)性分析、Southern印跡技術和DOP-PCR(變性寡核苷酸引物PCR)技術都可用于貓叫綜合征的診斷分析。然而尚無一種快速、低成本、大通量和自動化檢測貓叫綜合征基因突變的方法。比較基因組雜交(CGH)芯片分析技術是一種突破性技術，能夠支持研究人員通過微陣列準確研究與疾病有關的染色體的變化。比較基因組雜交(CGH)芯片分析的原理是在一張芯片上用兩份標記不同熒光素的樣品(檢測樣品和對照樣品)同時進行雜交，從而快速而又直觀地檢測實驗樣品和對照樣品之間基因組DNA的拷貝數(shù)量的差異。CGH應用于疾病遺傳學的研究，可以提供一個全基因組的掃描圖，提示樣本DNA在整個染色體組的哪個特定位置存在擴增或缺失，那些發(fā)生擴增的區(qū)域，極有可能存在致病基因，而缺失區(qū)域即可能包含一些抑制基因。因此，需要一種新的技術方案來克服現(xiàn)有技術的上述缺陷和不足。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種檢測貓叫綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒。本發(fā)明的基因芯片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩(wěn)定性好，時間短，成本低。本發(fā)明還提供了前述檢測貓叫綜合征的基因芯片的使用方法及試劑盒。本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)第一方面，本發(fā)明提供了一種檢測貓叫綜合征的基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列。優(yōu)選地，所述固相載體選自載玻片、硅片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚本乙烯。第二方面，本發(fā)明還涉及前述檢測貓叫綜合征的基因芯片的使用方法，包括以下步驟 (a)制備樣品DNA片段；
(b)熒光標記上述DNA片段；(c)洗脫上述標記產(chǎn)物；(d)將標記產(chǎn)物與所述基因芯片雜交；(e)掃描檢測基因芯片的雜交信號，獲得結果。第三方面，本發(fā)明還涉及一種用于檢測貓叫綜合征的試劑盒，所述試劑盒包括權利要求1所述的基因芯片。優(yōu)選地，所述試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy3_dUTP。優(yōu)選地，該試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy5_dUTP。本發(fā)明具有如下的有益效果本發(fā)明的基因芯片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩(wěn)定性好，該芯片多次試驗重復性高；時間短，從樣本抽提到獲得掃描結果可在一天內(nèi)完成。
具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解為這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等分子克隆實驗室手冊見New York Cold Spring Harbor Laboratory出版社1989年版中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實施例本實施例的基因芯片由固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列，所述固相載體為玻片。本實施例基因芯片的固相載也可選用硝酸纖維素膜、硅片、尼龍膜或聚本乙烯。本實施例的寡核苷酸探針由安捷倫公司生產(chǎn)，同時本實施例的基因芯片也由安捷倫公司按照常規(guī)方法生產(chǎn)。本實施例基因芯片的使用方法，步驟如下(1)樣品DNA片段的制備取患者、正常人血液，采用常規(guī)方法抽提全基因組DNA(gDNA)。將水浴鍋溫度調(diào)到371和651，溶化10\8吐作『C (見下表)，短暫渦旋震蕩后離心數(shù)秒。對每個反應來說，將gDNA加入到適當?shù)臒o核酸酶的PCR管中，并加入無核酸酶的水使反應體積達到10. 1 μ L0在冰上準備酶切混合母液，按順序加入以下試劑
權利要求
1.一種檢測貓叫綜合征的基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，其特征在于，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列。
2.根據(jù)權利要求1所述的檢測貓叫綜合征的基因芯片，其特征在于，所述固相載體選自載玻片、硅片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚本乙烯。
3.—種如權利要求1所述檢測貓叫綜合征的基因芯片的使用方法，其特征在于，包括以下步驟(a)制備樣品DNA片段；(b)熒光標記上述DNA片段；(c)洗脫上述標記產(chǎn)物；(d)將標記產(chǎn)物與所述基因芯片雜交；(e)掃描檢測基因芯片的雜交信號，獲得結果。
4.一種用于檢測貓叫綜合征的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的基因芯片。
5.根據(jù)權利要求4所述的用于檢測貓叫綜合征的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy3-dUTP。
6.根據(jù)權利要求4所述的用于檢測貓叫綜合征的試劑盒，其特征在于，該試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy5-dUTP。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測貓叫綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒，所述基因芯片包括固相載體和固定在該固相載體上的探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO.1-50所示的核苷酸序列；所述使用方法包括如下步驟(a)制備樣品DNA片段；(b)熒光標記上述DNA片段；(c)洗脫上述標記產(chǎn)物；(d)將標記產(chǎn)物與所述基因芯片雜交；(e)掃描檢測基因芯片的雜交信號，獲得結果；本發(fā)明還涉及包含前述基因芯片的試劑盒。本發(fā)明的基因芯片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩(wěn)定性好，從樣本抽提到得到掃描結果可在一個工作日內(nèi)完成，成本低，適用于臨床患者基因突變檢測、產(chǎn)前診斷和正常人雜合子攜帶者檢測。
文檔編號C12Q1/68GK102559871SQ20111041007
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月9日 優(yōu)先權日2011年12月9日
發(fā)明者吳茜, 李笑天, 秦勝營, 賀林, 郭奇桑, 龔小會 申請人:上海交通大學, 復旦大學附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院