專利名稱：一種快速提高顆石藻內(nèi)β-葡聚糖含量的培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及顆石藻的培養(yǎng)方法，具體涉及一種快速提高顆石藻內(nèi)β-葡聚糖含量的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
葡聚糖在細(xì)菌、真菌、高等植物以及微藻等生物體中都有代謝累積，具有抗腫瘤、抗感染、降低膽固醇、增強(qiáng)防護(hù)系統(tǒng)、噬菌作用以及免疫調(diào)節(jié)等功能，是動(dòng)物餌料添加劑、保健食品添加劑和活性免疫制劑的重要原料。從不同生物來(lái)源中提取葡聚糖，其得率、純度以及活性大小也都不同，因此，人們?nèi)匀辉谥铝τ诤Y選具有穩(wěn)定高含量和高生物活性的不同生物來(lái)源的葡聚糖。海洋微藻(如角毛藻、金藻3011和顆石藻)是海洋生物資源的重要組成部分，由于海洋微藻生長(zhǎng)速度快，更新周期短，不占用耕地等優(yōu)勢(shì)，是海洋資源開(kāi)發(fā)的重要對(duì)象。β -葡聚糖是藻類光合作用代謝產(chǎn)物，因此，從快速生長(zhǎng)的微藻中生產(chǎn)制備高含量、高純度和高生物活性的葡聚糖，是綜合開(kāi)發(fā)利用海洋微藻資源系列生產(chǎn)中的一個(gè)組成部分。顆石藻又稱圓石藻或球石藻，分布在溫度較低的冷水海域，適宜生長(zhǎng)溫度為15 25°C。如授權(quán)公告號(hào)為CN100375783，名稱為圓石藻的室外大面積養(yǎng)殖和加式方法的發(fā)明專利，就公開(kāi)了通過(guò)一級(jí)育苗、二級(jí)擴(kuò)種、三級(jí)擴(kuò)種、室外培養(yǎng)以密度10 15萬(wàn) cell/ml接種于鹽度(NaCl的重量含量)為2. 5 3. 0%、PH為7 9的海水培養(yǎng)液，該海水培養(yǎng)液中還添加有N、P、C和!^e元素，其中NaNO3濃度為0. 3 0. 8毫摩爾/升，K2HPO4濃度為0. 03 0. 08毫摩爾/升，培養(yǎng)至密度IO6 /毫升采收，該發(fā)明只是針對(duì)圓石藻的育種和擴(kuò)種及圓石藻成熟體中增加鈣和不飽和脂肪酸含量的培養(yǎng)方法，需要N、P、C和!^e等元素。 目前未發(fā)現(xiàn)提高葡聚糖含量的微藻培養(yǎng)的公開(kāi)報(bào)道，更未針對(duì)顆石藻中葡聚糖含量提高的培養(yǎng)方法報(bào)道，通常顆石藻成熟體的葡聚糖為20.36pg/Cell (干重計(jì))左右， 得率(β -葡聚糖純糖重量/藻粉重量)為0. 31%左右。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種β -葡聚糖含量顯著提高，且純度較高的快速提高顆石藻內(nèi)葡聚糖含量的培養(yǎng)方法。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為一種快速提高顆石藻內(nèi)β -葡聚糖含量的培養(yǎng)方法，包括將顆石藻苗接種于鹽度為25 30%。的海水培養(yǎng)液，在溫度為15 25°C，光照強(qiáng)度為2000 5000 Lux培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，在采收顆石藻成熟體前5 10小時(shí)， 在所述海水培養(yǎng)液中添加濃度為5g/L的磷酸二氫鈉溶液，所述海水培養(yǎng)液與所述磷酸二氫鈉溶液的體積比為1000: 0. 8 1. 2。
在所述海水培養(yǎng)液中所述顆石藻苗的接種密度為1. 9 2. IX 105cell/ml。
所述海水培養(yǎng)液中鹽度為25 沈％0。
所述培養(yǎng)條件中溫度為21 23°C，光照強(qiáng)度為2500 3000 Lux0
在于所述海水培養(yǎng)液與磷酸二氫鈉溶液的體積比為1000: 1。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于一種快速提高顆石藻內(nèi)β -葡聚糖含量的培養(yǎng)方法，包括將顆石藻苗接種于鹽度為25 30%。的海水培養(yǎng)液，在溫度為15 25°C，光照強(qiáng)度為2000 5000 Lux培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，在采收顆石藻成熟體前5 10小時(shí)，在海水培養(yǎng)液中添加濃度為5g/L的磷酸二氫鈉溶液，海水培養(yǎng)液與磷酸二氫鈉溶液的體積比為1000: 0. 8 1. 2。這樣在采收前最后5 10小時(shí)，是顆石藻成熟體的細(xì)胞密度最大時(shí)期，添加磷酸二氫鈉使顆石藻成熟體快速代謝，β -葡聚糖增殖迅速，累積率高，而培養(yǎng)5 10小時(shí)后就采收，消耗也較少，顆石藻成熟體內(nèi)的β-葡聚糖含量就較大，達(dá)到22pg/Cell (干重計(jì)) 以上，純度也達(dá)純度為93%以上，生物活性較高；因此本發(fā)明是一種β -葡聚糖含量顯著提高，且純度較高的快速提高顆石藻內(nèi)β-葡聚糖含量的培養(yǎng)方法。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
實(shí)施例1一種快速提高顆石藻內(nèi)β -葡聚糖含量的培養(yǎng)方法，以2. OX 105cell/ml接種密度將顆石藻苗接種于鹽度為25 沈％。的海水培養(yǎng)液中，在溫度為21 23°C，光照強(qiáng)度為 2500 3000 Lux培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，在采收顆石藻成熟體前8小時(shí)，在海水培養(yǎng)液中添加濃度為5g/L的磷酸二氫鈉溶液，海水培養(yǎng)液與磷酸二氫鈉溶液的體積比為1000:1，培養(yǎng)8小時(shí)至顆石藻成熟體采收，這樣得到的顆石藻成熟體內(nèi)β-葡聚糖含量為22.54pg/Cell (干重計(jì))左右，得率(β -葡聚糖純糖重量/藻粉重量)為0. 348%左右，純度為94. 21%。
實(shí)施例2一種快速提高顆石藻內(nèi)葡聚糖含量的培養(yǎng)方法，一種快速提高顆石藻內(nèi)葡聚糖含量的培養(yǎng)方法，以1. 9Χ 105cell/ml接種密度將顆石藻苗接種于鹽度為沈 觀％。的海水培養(yǎng)液中，在溫度為15 20°C，光照強(qiáng)度為3000 5000 Lux培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，在采收顆石藻成熟體前5小時(shí)，在海水培養(yǎng)液中添加濃度為5g/L的磷酸二氫鈉溶液海水培養(yǎng)液與磷酸二氫鈉溶液的體積比為1000: 1. 2，培養(yǎng)5小時(shí)至顆石藻成熟體采收，這樣得到的顆石藻成熟體β -葡聚糖為22. 26pg/cell (干重計(jì))左右，得率(β -葡聚糖純糖重量/藻粉重量)為0. 343%左右，純度為93. 94%。
實(shí)施例3一種快速提高顆石藻內(nèi)葡聚糖含量的培養(yǎng)方法，一種快速提高顆石藻內(nèi)葡聚糖含量的培養(yǎng)方法，以2. 1 X 105cell/ml接種密度將顆石藻苗接種于鹽度為觀 30%。的海水培養(yǎng)液中，在溫度為23 25°C，光照強(qiáng)度為2000 3000 Lux培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，在采收顆石藻成熟體前10小時(shí)，在海水培養(yǎng)液中添加濃度為5g/L的磷酸二氫鈉溶液，海水培養(yǎng)液與磷酸二氫鈉溶液的體積比為1000: 0. 8，培養(yǎng)10小時(shí)至顆石藻成熟體采收，這樣得到的顆石藻成熟體β -葡聚糖為22. 32pg/cell (干重計(jì))左右，純度為93. 43%。
對(duì)比例1與實(shí)施例1基本相同，所不同的只是在采收顆石藻成熟體前8小時(shí)，海水培養(yǎng)液中未添加磷酸二氫鈉溶液，最后得到的顆石藻成熟體β-葡聚糖為20.36pg/Cell (干重計(jì))左右， 得率(β -葡聚糖純糖重量/藻粉重量)為0. 31%左右，純度為91. 65%。
對(duì)比例2與實(shí)施例1基本相同，所不同的只是在采收顆石藻成熟體前8小時(shí)，海水培養(yǎng)液中添加磷酸二氫鈉溶液由濃度為75 g/L的NaNO3溶液替代，最后得到的顆石藻成熟體β -葡聚糖為19. 89pg/cell (干重計(jì))左右，得率(β -葡聚糖純糖重量/藻粉重量)為0. 307%左右， 純度為89. 73%。
從實(shí)施例與對(duì)比例比較就可以看出，實(shí)施例中β-葡聚糖含量比對(duì)比例顯著提高，純度也增加，生物活性增強(qiáng)，說(shuō)明在顆石藻成熟體的細(xì)胞密度最大時(shí)期，在1000L海水培養(yǎng)液中添加濃度為5g/L的磷酸二氫鈉溶液0. 8 1. 2L，有利于β -葡聚糖迅速增殖，同時(shí)葡聚糖消耗也較少，這樣采收的顆石藻葡聚糖得率較高，純度較大。
權(quán)利要求
1.一種快速提高顆石藻內(nèi)β-葡聚糖含量的培養(yǎng)方法，包括將顆石藻苗接種于鹽度為 25 30%。的海水培養(yǎng)液，在溫度為15 25°C，光照強(qiáng)度為2000 5000 Lux培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，其特征在于在采收顆石藻成熟體前5 10小時(shí)，在所述海水培養(yǎng)液中添加濃度為5g/L 的磷酸二氫鈉溶液，所述海水培養(yǎng)液與所述磷酸二氫鈉溶液的體積比為1000: 0. 8 1. 2。
2.如權(quán)利要求1所述的一種快速提高顆石藻內(nèi)葡聚糖含量的培養(yǎng)方法，其特征在于在所述海水培養(yǎng)液中所述顆石藻苗的接種密度為1. 9 2. 1 X 105cell/mL·
3.如權(quán)利要求1所述的一種快速提高顆石藻內(nèi)葡聚糖含量的培養(yǎng)方法，其特征在于所述海水培養(yǎng)液中鹽度為25 沈％0。
4.如權(quán)利要求1所述的一種快速提高顆石藻內(nèi)葡聚糖含量的培養(yǎng)方法，其特征在于所述培養(yǎng)條件中溫度為21 23°C，光照強(qiáng)度為2500 3000 Lux0
5.如權(quán)利要求1所述的一種快速提高顆石藻內(nèi)葡聚糖含量的培養(yǎng)方法，其特征在于所述海水培養(yǎng)液與磷酸二氫鈉溶液的體積比為1000: 1。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種快速提高顆石藻內(nèi)β-葡聚糖含量的培養(yǎng)方法，包括將顆石藻苗接種于鹽度為25～30‰的海水培養(yǎng)液，在溫度為15～25℃，光照強(qiáng)度為2000～5000Lux培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，在采收顆石藻成熟體前5～10小時(shí)，在海水培養(yǎng)液中添加濃度為5g/L的磷酸二氫鈉溶液，海水培養(yǎng)液與磷酸二氫鈉溶液的體積比為1000:0.8～1.2。這樣在采收前最后5～10小時(shí)，是顆石藻成熟體的細(xì)胞密度最大時(shí)期，添加磷酸二氫鈉使顆石藻成熟體快速代謝，β-葡聚糖增殖迅速，累積率高，而5～10小時(shí)就采收，消耗也較少，顆石藻成熟體內(nèi)的β-葡聚糖含量就較大，達(dá)到22pg/cell以上，純度也達(dá)純度為93%以上，生物活性較高。
文檔編號(hào)C12R1/89GK102517243SQ201110419070
公開(kāi)日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月15日
發(fā)明者嚴(yán)小軍, 劉寶寧, 周成旭, 田甜, 陳海敏, 駱其君 申請(qǐng)人:寧波大學(xué)