專利名稱：一種提高輪臺白杏花粉萌發(fā)和生長的培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及果樹授粉受精技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高輪臺白杏花粉萌發(fā)和生長的培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
杏(Armeniaca vulgaris Lam)為落葉小喬木，薔薇科，李屬，杏果含有豐富的維生素A、維生素C、糖類、檸檬酸、蘋果酸等營養(yǎng)成分，性味甘酸、微溫，故具有生津止渴，清熱解毒之特點，有一定的保健和防癌作用，無論鮮食還是加工后食用都備受人們的青睞。中國杏廣泛分布于河北、北京、河南、山東、山西、陜西、甘肅、新疆等地，有2000多個品種，其中新疆有117種，以小白杏最出名。輪臺白杏(新S-SV-PA-017-2009)為新疆最具特色的優(yōu)良品種之一，又被新疆本地居民稱阿克西米西，可制干或鮮食。果實呈卵圓形，平均單果重 23. lg，果面白色，無茸毛；果肉黃白色；肉質(zhì)較細，纖維少，汁液多，味甜，有香氣。其可溶性固形物含量23%，品質(zhì)上等；果肉離核，仁甜，殼薄，單核重1. 78g，出仁率32. 4%。杏仁甜脆耐嚼，含油性，甘味悠長。
大多數(shù)杏品種為自交不親和，自交結(jié)實率低，生產(chǎn)上必須合理配置授粉品種，才能獲得相應(yīng)的產(chǎn)量和品質(zhì)。也常因花期低溫、沙塵和陰雨等不良氣候條件影響正常授粉而減產(chǎn)和降低品質(zhì)，人工授粉是提高杏產(chǎn)量的重要手段。
人工授粉用人工方法把植物花粉傳送到柱頭上以提高坐果率的技術(shù)措施。有目的地選擇親本進植物雜交育種的必要手段。在果樹生產(chǎn)上，對自花不結(jié)實、雌雄同株而異花以及雌雄異株的果樹；在缺乏授粉樹或花期氣候惡劣、影響正常自然授粉的情況下，也常需進行人工授粉。在生產(chǎn)上為提高人工授粉的效率常用液體噴粉，并常在溶液中添加促進花粉萌發(fā)和花粉管生長的物質(zhì)，如硼酸、蔗糖等，以提高授粉效果和節(jié)省花粉用量。
適宜溫度和pH值是保證培養(yǎng)基中花粉萌發(fā)和花粉管生長重要條件，過高或過低的溫度和PH值都會抑制花粉萌發(fā)和花粉管生長。張紹鈴等的研究結(jié)果表明果梅花粉萌發(fā)和花粉管生長所需的最適PH值為6. 5，丁長奎等對枇杷花粉研究表明其適宜pH值為4. 0 6.0。培養(yǎng)溫度對花粉萌發(fā)和花粉管生長也有重要影響。
促進花粉萌發(fā)和生長的生長調(diào)節(jié)劑主要有吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、赤霉素 (GA3)、2，4_ 二氯苯氧乙酸(2，4-D)、6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)、吲哚丁酸(IBA)和比久(B9) 等。除生長調(diào)節(jié)類物質(zhì)促花粉萌發(fā)和生長外，某化學(xué)物質(zhì)對花粉萌發(fā)和生長也有作用。
現(xiàn)有文獻記載邢軍，楊潔，鄭力.新疆杏子分布及貯藏保鮮的可行性分析研究 [J].新疆大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2005 ) :79-82.
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現(xiàn)有花粉萌發(fā)和生長存在的問題花粉萌發(fā)率低、花粉管生長較短、生長調(diào)節(jié)劑購買、使用不方便等，成為制約本領(lǐng)域發(fā)展的技術(shù)瓶頸。
本發(fā)明針對輪臺白杏花粉萌發(fā)率低和花粉管生長慢的生殖障礙，通過研究蔗糖， 硼酸、生長調(diào)節(jié)劑、PH值和溫度對輪臺白杏花粉萌發(fā)和生長的影響，得到適合花粉萌發(fā)和生長培養(yǎng)基。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種提高輪臺白杏花粉萌發(fā)和生長的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基是由瓊脂、蔗糖和硼酸為基本培養(yǎng)基組分，再分別加入生長調(diào)節(jié)劑為赤霉素(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸Q，4_D)或6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)制成，培養(yǎng)條件包括溫度和PH值。該培養(yǎng)基解決了其花粉萌發(fā)率低，花粉管較短和不易授粉受精的問題，為輪臺白杏找到一種提高萌發(fā)率的有效途徑。通過本發(fā)明所述的培養(yǎng)基提高了輪臺白杏花粉萌發(fā)和生長，操作簡便、成本低、周期短、萌發(fā)率高。
本發(fā)明所述的一種提高輪臺白杏花粉萌發(fā)和生長的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基是由質(zhì)量比為瓊脂、20-30%蔗糖、0.01-0. 03%硼酸和20_80mg/L赤霉素；或1 %瓊脂、20-30% 蔗糖、0.01-0. 03%硼酸和l-5mg/L萘乙酸；或1 %瓊脂、20-30%蔗糖、0. 01-0. 03%硼酸和 0. 1-0. 5mg/L 6-芐氨基腺嘌呤；或1 %瓊脂、20-30%蔗糖、0. 01-0. 03%硼酸和l_5mg/L吲哚乙酸；或瓊脂、20-30%蔗糖、0.01-0. 03%硼酸和20_40mg/L 2，4_ 二氯苯氧乙酸制成。
所述培養(yǎng)基的制備方法，將質(zhì)量比為瓊脂、20-30%蔗糖和0.01-0. 03%硼酸為基本培養(yǎng)基組分，再分別加入生長調(diào)節(jié)劑為20-80mg/L赤霉素、l-5mg/L萘乙酸、 0. 1-0. 5mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、l-5mg/L吲哚乙酸或20-40mg/L 2，4_ 二氯苯氧乙酸(2， 4-D)，溫度為20-30°C，pH值為5. 5-6. 0進行混合培養(yǎng)即可。
本發(fā)明的技術(shù)方案是在現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)上，采用離體培養(yǎng)法，將采集好的花粉，用棉棒均勻的彈在鋪有培養(yǎng)基的載玻片上，培養(yǎng)基以5-20 %的蔗糖、0-0. 1 %的硼酸和1 % 瓊脂為基本培養(yǎng)基組分，設(shè)置培養(yǎng)溫度為10-30°C，培養(yǎng)基pH值為4. 0-8. 0，再分別加入 0-200mg/L 的 GA3、0-40mg/L 的 NAA、0_40mg/L 的 6-BA、0_80mg/L 的 IAA 和 0_60mg/L 的 2，4-D培養(yǎng)；通過對萌發(fā)率(花粉萌發(fā)數(shù)/花粉總數(shù))和花粉管長度指標(biāo)進行測定分析，篩選最優(yōu)生長組合。解決了輪臺白杏花粉萌發(fā)率低，花粉管較短的問題，為輪臺白杏找到有效提高花粉萌發(fā)率的途徑。
本發(fā)明所述的一種提高輪臺白杏花粉萌發(fā)和生長的培養(yǎng)基，通過實施可達到以下有益效果
1、本發(fā)明通過選用培養(yǎng)基組分和培養(yǎng)條件進行花粉培養(yǎng)，促進花粉萌發(fā)和花粉管生長有效途徑之一。
2、操作方法簡單易行，不需要特殊的技術(shù)手段。
3、成本低，培養(yǎng)基成分價格便宜，尤其是研究中使用的生長調(diào)節(jié)劑，具有易溶于水、價格便宜，購買方便、使用簡便等優(yōu)點，在進行大量的液體授粉時會具有較優(yōu)的綜合效^ ο
5、本發(fā)明解決了輪臺白杏在培養(yǎng)基上萌發(fā)率低和生長緩慢的技術(shù)問題，可為輪臺白杏人工授粉技術(shù)研發(fā)奠定基礎(chǔ)。
培養(yǎng)基組分對花粉萌發(fā)和生長具有影響，隨蔗糖濃度增大，花粉萌發(fā)率和花粉生長呈先升后降趨勢；隨硼酸濃度增大，花粉萌發(fā)率和生長呈先升后降趨勢；隨生長調(diào)節(jié)劑 6八3、織八、^^、2，4-0或6-8八濃度增大，花粉萌發(fā)率和生長呈先升后降趨勢。
培養(yǎng)溫度花粉萌發(fā)和生長有顯著性影響，隨溫度的升高，花粉萌發(fā)和生長呈先升后降趨勢，溫度為20-30°C范圍內(nèi)適宜花粉萌發(fā)和生長。
培養(yǎng)基pH值花粉萌發(fā)和生長有顯著性影響，隨pH的升高，花粉萌發(fā)和生長呈先升后降趨勢，PH為5. 5-6. 0范圍內(nèi)適宜花粉萌發(fā)和生長。
具體實施方式
本發(fā)明所列舉的實施例，但并不限于所述的實施例。
實施例
選用的所有試劑和儀器都為本領(lǐng)域熟知的。
花粉的選擇與處理
選取鈴鐺期花蕾，剝下花藥盛于硫酸紙盒中，放置常溫下陰干，待花藥自行開裂散出花粉，將其收集裝入1. 5ml的離心管中封閉好放在冰箱冷凍室保存；
培養(yǎng)方法和時間
培養(yǎng)基配置使用瓊脂，分別放入濃度為0,5^^10%,15^^20%或25%的蔗糖和濃度分別為0、0. 01 %、0. 03 %、0. 05 %或0. 1 %的硼酸處理，將不同濃度的培養(yǎng)基倒置在載玻片上，用棉棒將花粉均勻的彈在載玻片的培養(yǎng)基上，放在底部鋪有濕潤紗布的培養(yǎng)皿中，每梯度重復(fù)3次，置于溫度25°C恒溫箱培養(yǎng)，24h后觀察萌發(fā)率和花粉管的長度；
篩選出最適培養(yǎng)基萌發(fā)率=已萌發(fā)的花粉粒數(shù)/花粉?？倲?shù)X 100%。
溫度在最適培養(yǎng)基組分下，設(shè)置培養(yǎng)基溫度分別為10、15、20、25和30°C進行培養(yǎng)，4h后取出培養(yǎng)基測定花粉萌發(fā)率及花粉管長度，確定最適的培養(yǎng)溫度；
pH值在最適培養(yǎng)基組分下，使用lmol/L鹽酸和lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基 PH值，pH值分別為4. 0,4. 5,5. 0,5. 5,6. 0,6. 5,7. 0,7. 5和8. 0，培養(yǎng)4h后取出測定花粉萌發(fā)率及花粉管長度，確定培養(yǎng)基的最適PH值。
配制質(zhì)量比為瓊脂、25%蔗糖和0.01%硼酸為基本培養(yǎng)基組分，再分別加入赤霉素(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4_ 二氯苯氧乙酸Q，4_D)或6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)混合，其中5種生長調(diào)節(jié)劑濃度梯度為
權(quán)利要求
1.一種提高輪臺白杏花粉萌發(fā)和生長的培養(yǎng)基，其特征在于，該培養(yǎng)基是由質(zhì)量比為瓊脂、20-30%蔗糖、0.01-0. 03%硼酸和20_80mg/L的赤霉素；或1 %瓊脂、20-30% 蔗糖、0.01-0. 03%硼酸和l-5mg/L萘乙酸；或1 %瓊脂、20-30%蔗糖、0. 01-0. 03%硼酸和 0. 1-0. 5mg/L 6-芐氨基腺嘌呤；或1 %瓊脂、20-30%蔗糖、0. 01-0. 03%硼酸和l_5mg/L吲哚乙酸；或瓊脂、20-30%蔗糖、0.01-0. 03%硼酸和20_40mg/L 2，4_ 二氯苯氧乙酸制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于將質(zhì)量比為瓊脂、 20-30%蔗糖和0. 01-0. 03%硼酸為基本培養(yǎng)基組分，再分別加入生長調(diào)節(jié)劑為20-80mg/ L赤霉素、l-5mg/L萘乙酸、0. 1-0. 5mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、l_5mg/L吲哚乙酸或20_40mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸，溫度為20-30°C，pH值為5. 5-6. 0進行混合培養(yǎng)即可。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提高輪臺白杏花粉萌發(fā)和生長的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基是由瓊脂、蔗糖和硼酸為基本培養(yǎng)基組分，在分別加入赤霉素、吲哚乙酸、萘乙酸、2，4-二氯苯氧乙酸或6-芐氨基腺嘌呤制成，培養(yǎng)條件包括培養(yǎng)個溫度和pH值。該培養(yǎng)基解決了其花粉萌發(fā)率低，花粉管生長較慢的技術(shù)問題，為輪臺白杏找到一種提高萌發(fā)率的有效途徑。通過本發(fā)明所述的培養(yǎng)基提高了輪臺白杏花粉萌發(fā)和生長，操作簡便、成本低、周期短、萌發(fā)率高，在核果類果樹生物學(xué)中具有廣泛的應(yīng)用前景。
文檔編號C12N5/04GK102517249SQ20111042044
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月15日
發(fā)明者孫慧瑛, 安曉芹, 廖康, 耿文娟 申請人:新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)