專利名稱：適合轉(zhuǎn)基因小麥定量檢測(cè)的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因引物設(shè)計(jì)及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物檢驗(yàn)檢疫小麥屬作物、食品、深加工產(chǎn)品轉(zhuǎn)基因檢測(cè)領(lǐng)域，更具體涉及一種利用 Real-time PCR 基于 PSG719 (Ta PSG719gene，F(xiàn)J497025.1)、UCB (Tu CypBgene, EU868840.1)基因小麥種屬特異性區(qū)段設(shè)計(jì)的用于小麥轉(zhuǎn)基因定量檢測(cè)中內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因引物，同時(shí)涉及一種轉(zhuǎn)基因小麥定量的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因引物的設(shè)計(jì)方法，還涉及一種轉(zhuǎn)基因小麥定量的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因引物的用途。
背景技術(shù)：
小麥作為世界第一大作物，由于受到轉(zhuǎn)基因技術(shù)的限制，小麥轉(zhuǎn)基因研究滯后于其它作物。近年來，我國(guó)在小麥轉(zhuǎn)基因方面也取得了初步的進(jìn)展，并獲得了一批具有抗病蟲、抗逆境及改善品質(zhì)的轉(zhuǎn)基因小麥新材料，部分品系已經(jīng)進(jìn)入環(huán)境釋放階段(尹鈞，李永春我國(guó)小麥轉(zhuǎn)基因研究的現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)中國(guó)農(nóng)業(yè)信息2009.13-17)。而人們也開始關(guān)注食品安全與健康，而與之相對(duì)的則是現(xiàn)有的轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展仍然在緩步前行。出于對(duì)轉(zhuǎn)基因食品可能存在的未知安全隱患的憂慮，同時(shí)也是對(duì)消費(fèi)者知情權(quán)
的保護(hù)，各國(guó)政府紛紛立法設(shè)立相關(guān)的檢測(cè)閾值以利于管理(c.A.Carter International
Approaches to the Labeling of Genetically Modified Foods Agricultural Issue
Center University of California 2003)。
權(quán)利要求
1.一種轉(zhuǎn)基因小麥定量的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因引物，其序列為SEQ ID N0:1所不。
2.—種轉(zhuǎn)基因小麥定量的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因引物，其序列為SEQ ID N0:2所示。
3.—種轉(zhuǎn)基因小麥定量的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因引物的設(shè)計(jì)方法，其步驟是: A、通過NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)BlastN篩選物種特異性好的基因，查找非同源區(qū)段設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增區(qū)段如下，同時(shí)將上下游序列進(jìn)行Primer-Blast，設(shè)置參數(shù)為:特異物種:禾本科；數(shù)據(jù)庫(kù):nr ； 利用Primer5 (Primer C0.Ltd.Canada)軟件設(shè)計(jì)的符合無錯(cuò)配,低發(fā)夾結(jié)構(gòu)，二聚體自由能低等要求的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因引物，其信息見下表:
4.權(quán)利要求1或2所述的一種轉(zhuǎn)基因小麥定量的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因引物在小麥轉(zhuǎn)基因定量檢測(cè)中的應(yīng) 用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種適合轉(zhuǎn)基因小麥定量檢測(cè)的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因引物設(shè)計(jì)及應(yīng)用，其步驟A.通過NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)BlastN篩選物種特異性好的基因，查找非同源區(qū)段設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增區(qū)段，將上下游序列進(jìn)行Primer-Blast檢測(cè)；B.選取16個(gè)不同物種種子和35個(gè)不同小麥品種滅菌消毒、萌發(fā)取葉片提取DNA；C.SouthernBlot鑒定候選特異性好的PSG719、UCB基因位點(diǎn)數(shù)為6個(gè)，拷貝數(shù)為2個(gè)；D.普通PCR鑒定內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因引物物種特異性；E.普通PCR鑒定內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因引物不同小麥品種間穩(wěn)定性。確定兩對(duì)引物做轉(zhuǎn)基因小麥檢測(cè)時(shí)的定性或定量檢測(cè)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因引物。方法易行，操作簡(jiǎn)便，定性檢測(cè)極限為0.95個(gè)小麥基因組，定量檢測(cè)為5個(gè)小麥基因組，通過Real-timePCR檢測(cè)，線性關(guān)系良好。
文檔編號(hào)C12N15/10GK103173521SQ20111043229
公開日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2011年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月21日
發(fā)明者廖玉才, 李和平, 趙正喜, 瞿波, 黃濤, 張靜柏, 左東云, 程偉, 楊鵬 申請(qǐng)人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)