專利名稱：四種腹瀉病病原菌納米可視化基因芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用 新型提供了一四種腹瀉病病原菌的納米可視化基因芯片，使具有良好的特異性及重復(fù)性，在裸眼觀察條件下，檢測(cè)限可達(dá)100fM。
背景技術(shù)：
DNA芯片的基本原理是在固相支持物上固定核酸并通過(guò)雜交過(guò)程來(lái)檢測(cè)樣品。此基本原理實(shí)際來(lái)自于20世紀(jì)70年代出現(xiàn)的Southern blot和Northern blot技術(shù)。80年代中期，國(guó)際上幾個(gè)研究小組同時(shí)開(kāi)發(fā)了雜交測(cè)序的技術(shù)。基本原理是在固相支持物上固定成百上千個(gè)8堿基長(zhǎng)度的寡核苷酸片段，然后與待測(cè)序的DNA片段進(jìn)行雜交。由于不同的寡核苷酸的堿基序列是相互覆蓋的，通過(guò)計(jì)算機(jī)來(lái)分析雜交信號(hào)，便可以拼接出未知DNA的序列。Fodor等人1991年2月在Science雜志上發(fā)表論文,他們利用固相化學(xué)合成,光敏保護(hù)基團(tuán)及光刻掩膜技術(shù)，在固相支持底物上高密度合成了多肽和寡核苷酸，并用合成的多肽在固相支持物上與抗體進(jìn)行了親和反應(yīng)。隨后，1991年9月Science雜志發(fā)表了一篇評(píng)論，介紹了 Fodor等人在I. 28cm2的面積上原位光合成65，000個(gè)點(diǎn)的工作，第一次提出了 DNA芯片(DNA chip)的概念。到1995年，Schena等人在Science雜志上發(fā)表論文，將45個(gè)擬南芥基因固定在一張玻片上，并行檢測(cè)擬南芥植株不同組織及不同處理后45個(gè)基因表達(dá)的變化。此報(bào)導(dǎo)第一次將高精度機(jī)械手點(diǎn)樣技術(shù)，熒光標(biāo)記技術(shù)，雙信道熒光掃描技術(shù)及數(shù)據(jù)分析軟件結(jié)合在一起，可以說(shuō)是DNA芯片技術(shù)在基因表達(dá)分析中第一次真正意義上的應(yīng)用。隨后，用于基因表達(dá)分析的DNA芯片技術(shù)發(fā)展迅速，在玻片上點(diǎn)樣的密度越來(lái)越大。部分已經(jīng)完成基因組測(cè)序的微生物的全基因組DNA芯片已經(jīng)制備出來(lái)并應(yīng)用于各項(xiàng)研究中如釀酒酵母、結(jié)合桿菌、大腸桿菌以及白色念珠菌的全基因組DNA芯片。隨著人類基因組計(jì)劃的完成和功能基因組學(xué)研究的進(jìn)展，制作出人類全基因組DNA芯片將只是一個(gè)時(shí)間上的問(wèn)題。現(xiàn)在用生物芯片技術(shù)分析的物種包括人、酵母、小鼠、大鼠、黑猩猩、大猩猩、果蠅、線蟲(chóng)、玉米、水稻、棉花、細(xì)菌和病毒等。目前有超過(guò)3000篇的論文與芯片分析有關(guān)。這些論文從不同的角度表明了微數(shù)組技術(shù)的多樣性、不同研究單位的研究側(cè)重點(diǎn)以及此技術(shù)領(lǐng)域商業(yè)化產(chǎn)品的多樣性。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型的主要目的在于提供一種四種腹瀉病病源菌納米可視化基因芯片。本實(shí)用新型的技術(shù)內(nèi)容為四種腹瀉病病源菌納米可視化基因芯片，其是由聚苯乙烯材料制成之三孔芯片，并形成數(shù)組模式，芯片上取霍亂弧菌、痢疾桿菌、出血性大腸桿菌0157、空腸彎曲菌之DNA為探針。微孔板芯片每孔芯片的探針排列皆為4X4的矩陣。
以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步描述。
圖I為本實(shí)用新型的實(shí)施例圖。主要組件符號(hào)說(shuō)明I......芯片 2......微孔
具體實(shí)施方式
為了更充分理解本實(shí)用新型的技術(shù)內(nèi)容，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型的技 術(shù)方案進(jìn)一步介紹和說(shuō)明。本實(shí)用新型四種腹瀉病病源菌納米可視化基因芯片，系由聚苯乙烯材料制成之三孔芯片，并形成數(shù)組模式,芯片上取霍亂弧菌、痢疾桿菌、出血性大腸桿菌0157、空腸彎曲菌之DNA為探針。而微孔板芯片每孔芯片的探針排列皆為4X4的矩陣，本實(shí)用新型四種腹瀉病病源菌納米可視化基因芯片，基因芯片技術(shù)平臺(tái)一般包括5個(gè)部分芯片的基質(zhì)材料、把DNA固著到芯片上的裝置、核酸雜交控制系統(tǒng)、讀取雜交信號(hào)的光學(xué)掃描系統(tǒng)以及讀取和分析數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)軟件工具，由于不同的文獻(xiàn)對(duì)探針(probe)和靶標(biāo)(target)有不同的定義，這里我們的定義是固定在基質(zhì)載體上的DNA被稱為探針，而來(lái)自生物樣品的核酸被稱為靶標(biāo)。參考目前已發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)，我們從NCBI上下載所需微生物的GenBank文件，利用軟件primer premier5在保守序列上設(shè)計(jì)相關(guān)病毒的特異性引物及探針。在引物的設(shè)計(jì)過(guò)程中，盡可能使不同引物對(duì)之間的退火溫度趨于一致(4對(duì)引物退火溫度均在49-54°C之間)，以利于后期的多重PCR過(guò)程。設(shè)計(jì)的引物和探針序列見(jiàn)表I.
權(quán)利要求1.一種四種腹瀉病病原菌納米可視化基因芯片，其特征在于是由聚苯乙烯材料制成之三孔芯片，并形成數(shù)組模式,芯片上取霍亂弧菌、痢疾桿菌、出血性大腸桿菌0157、空腸彎曲菌之DNA為探針。
2.如權(quán)利要求I所述的四種腹瀉病病原菌納米可視化基因芯片，其特征在于其中，芯片每孔的探針排列皆為4X4的矩陣。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種四種腹瀉病病源菌納米可視化基因芯片，其系由聚苯乙烯材料制成之三孔芯片，并形成數(shù)組模式，芯片上取霍亂弧菌、痢疾桿菌、出血性大腸桿菌O157、空腸彎曲菌的DNA為探針。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK202482330SQ2011203498
公開(kāi)日2012年10月10日 申請(qǐng)日期2011年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月16日
發(fā)明者張曉龍, 張玲, 慈穎, 房健慧, 馬曉光, 馬愛(ài)敏 申請(qǐng)人:中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院