專利名稱：一種提高蛋白表達(dá)效率的方法及表達(dá)載體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高蛋白表 達(dá)效率的方法及表達(dá)載體。
背景技術(shù)：
外源基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)水平受多種因素的影響，如目的基因本身特性、轉(zhuǎn)錄效率、mRNA穩(wěn)定性、翻譯效率、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性等等。目的基因序列本身的特征，如稀有密碼子、終止子、二級(jí)結(jié)構(gòu)等常會(huì)影響其蛋白的表達(dá)水平；如果目的基因含有較多的稀有密碼子，常會(huì)造成重組蛋白的表達(dá)水平較低(Sorensen et al.，1989，J. Mol. Biol. 207， 365-377)；如果稀有密碼子集中出現(xiàn)在氨基端，則情況更為嚴(yán)重(Chen and Inouye, 1990, Nucl. Acids Res. 18,1465-1473)；目的基因中堿基突變會(huì)產(chǎn)生意外的終止密碼子從而導(dǎo)致蛋白翻譯水平的下降；mRNA轉(zhuǎn)錄子中復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)也會(huì)干擾翻譯的起始和延伸 (Tessier et al. 1984, Nucl. Acids Res. 12,7663-7675 ；Looman et al.1986, Nucl. Acids Res. 14,5481-5496)。盡管目的基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平與其蛋白水平不完全一致，但目的基因mRNA的高轉(zhuǎn)錄效率和高轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的穩(wěn)定性會(huì)在不同程度上提高目的蛋白的表達(dá)水平； 另外，重組蛋白的翻譯效率不僅受目的基因序列本身的影響，也受載體序列的影響。重組蛋白的穩(wěn)定性也會(huì)影響其在宿主細(xì)胞中的存在量。外源目的基因的mRNA在宿主細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)時(shí)，宿主細(xì)胞中tRNA的數(shù)量直接反映了該宿主物種mRNA的密碼子偏倚性；一個(gè)或多個(gè)tRNA的稀有或缺少可能導(dǎo)致翻譯的停止，tRNA不足可能導(dǎo)致翻譯延遲、成熟前翻譯終止、翻譯移碼和氨基酸錯(cuò)配(Ikemura 1985，Mol. Biol. Evol. 2,13-34)；盡管少量稀有密碼子的出現(xiàn)通常不會(huì)對(duì)目的蛋白的合成造成太大影響，但是如果一個(gè)基因中含有成串或多個(gè)稀有密碼子時(shí)，外源蛋白的表達(dá)將非常低、很難檢測(cè)到，因此目的基因中含過(guò)多的稀有密碼子被認(rèn)為是低表達(dá)水平和產(chǎn)生不完全產(chǎn)物的一個(gè)原因(Blake RD et al. 1984, J. Biomol. Stuct. Dyn. 2, 593-606 ；Robinson M et al.，1984，Nucleic. Acids Res. 12,6663-6671)；而當(dāng)在宿主菌中增加同類 tRNA 時(shí)那些含有稀有密碼子基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)量將大大提高(Brinkmarm U et al. 1989, Gene,85, 109-114.)。所以人們?cè)谶M(jìn)行外源目的基因重組表達(dá)時(shí)，常對(duì)外源基因的序列進(jìn)行改造，通過(guò)調(diào)整基因序列三聯(lián)密碼子最后一個(gè)堿基減少稀有密碼子出現(xiàn)的頻率以獲得高的蛋白表達(dá)量；目前尚未見(jiàn)有人工改變目的基因起始密碼子后緊鄰氨基酸組成以提高蛋白表達(dá)量的文獻(xiàn)或?qū)＠?。在影響外源基因表達(dá)水平的諸多因素中，表達(dá)載體的作用不可忽視，因?yàn)樗粌H決定了重組質(zhì)粒的拷貝數(shù)，也嚴(yán)重影響著mRNA的轉(zhuǎn)錄效率及穩(wěn)定性、翻譯起始的效率和重組蛋白的穩(wěn)定性。研究發(fā)現(xiàn)，能夠高效表達(dá)某一基因的表達(dá)載體對(duì)另一基因而言可能并不合適；所以在外源基因的重組表達(dá)中，往往需要根據(jù)實(shí)際情況，選擇合適的表達(dá)調(diào)控元件， 構(gòu)建合適的表達(dá)載體。一般來(lái)說(shuō)，構(gòu)建的表達(dá)載體應(yīng)滿足以下要求(1)蛋白表達(dá)量高，(2) 宿主適用范圍廣，(3)表達(dá)的產(chǎn)物容易純化。其中重組蛋白的表達(dá)量是優(yōu)先考慮的指標(biāo)。目前有關(guān)如何構(gòu)建高效表達(dá)載體已有很多報(bào)道，研究多集中在重組質(zhì)粒的元件包括啟動(dòng)子、 多克隆位點(diǎn)、終止密碼、融合蛋白標(biāo)簽、復(fù)制子、篩選標(biāo)記/報(bào)告基因等方面，尚檢索不到利用一些氨基酸的多密碼子特性在起始密碼子后添加人工序列構(gòu)建高效表達(dá)載體的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種提高蛋白表達(dá)效率的方法及表達(dá)載體，即應(yīng)用本發(fā)明的方法或表達(dá)載體可提高外源基因在宿主中的表達(dá)效率，使目的基因獲得高效率的表達(dá)，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。

本發(fā)明根據(jù)生物體內(nèi)常見(jiàn)氨基酸的密碼子簡(jiǎn)并情況，在重組表達(dá)相關(guān)基因時(shí)在目的基因起始密碼子或表達(dá)載體序列起始密碼子后引入一定數(shù)目的編碼多密碼子(4個(gè)或以上密碼子)氨基酸的核苷酸序列，這些編碼多密碼子氨基酸的核苷酸，其對(duì)應(yīng)的tRNA含量豐富，可以快速運(yùn)送相應(yīng)氨基酸參與蛋白合成，從而避免目的基因序列或載體編碼序列對(duì)應(yīng)tRNA缺乏所導(dǎo)致的mRNA翻譯延遲、移碼或停止，有效提高翻譯的起始、延伸效率，大大提高目的基因或載體融合的蛋白表達(dá)效率。本發(fā)明技術(shù)方案如下一種提高蛋白表達(dá)效率的表達(dá)載體，該表達(dá)載體起始密碼子ATG后含有一段編碼特定氨基酸片段的核苷酸，其特征在于(a)所述的特定氨基酸為有4個(gè)或以上密碼子的氨基酸；(b)所述的特定氨基酸序列的氨基酸數(shù)目不少于3個(gè)。(c)所述的表達(dá)載體，其特定氨基酸數(shù)目為3個(gè)、4個(gè)或5個(gè)。(d)所述的表達(dá)載體，其特定氨基酸數(shù)目還可以是6個(gè)或7個(gè)。(e)所述的表達(dá)載體為真核或原核表達(dá)載體。一種提高目的基因蛋白表達(dá)效率的方法，該方法通過(guò)在目的基因的起始密碼子 ATG后插入一段編碼特定氨基酸片段的核苷酸來(lái)提到表達(dá)效率，其特征在于所述的特定氨基酸序列為X1X2……Xn，其中X代表有4個(gè)或以上密碼子的氨基酸， η大于或等于3;本發(fā)明提供的提高有用基因蛋白表達(dá)效率的方法，不僅可以用于改造任意目的基因以提高其表達(dá)效率，還可以用于構(gòu)建具有高表達(dá)效率特征的表達(dá)載體。與現(xiàn)有技術(shù)相比， 本發(fā)明有以下有益效果利用本發(fā)明提供的提高基因蛋白表達(dá)效率的方法，可以用于改造任意目的基因，使目的蛋白的表達(dá)效率提高2 5倍；同時(shí)，利用本發(fā)明提供的方法，還可以對(duì)已有蛋白表達(dá)載體進(jìn)行改造，使其蛋白表達(dá)效率提高。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1在表達(dá)載體起始密碼子后插入編碼三個(gè)特定氨基酸序列的核酸序列來(lái)構(gòu)建高效表達(dá)載體一).在載體pGFPuv起始密碼子后插入編碼GlyGlySer (SEQ ID NO 1)的核酸序列1).合成載體構(gòu)建需要的各種引物
根據(jù)pGFPuv載體的全序列設(shè)計(jì)一對(duì)用于驗(yàn)證pGFPuv載體的引物，上游弓丨物為 Pl (pGFPuv-S) :GACATGA-GTAAAGGAGAAGAAC，下游弓丨物 P2 (pGFPuv-A) GCGTTATTTGTAGAGCTCAT。為在pGFPuv載體的第216位添加酶切位點(diǎn)Cla I，設(shè)計(jì)了上游引物 P3(pGFPuv216-F) CTCATCGATATGACCATGATTACG,下游弓丨物 P4(pGFPuv216-R) GAGATCGATAGCTGTTTCCTGTG，上下游引物在5'端都加保護(hù)堿基CTC。另外又設(shè)計(jì)了用于插入編碼GlyGlySer的核酸序列的引物p5和p6，上游引物P5 (高效-F) :TCTATCGATATGGGGGGT TCTATGATTACGCCAAGCTTGCA，含有Cla I酶切位點(diǎn)及起始密碼子ATG，下游引物P6 (高效-R) TGCAAGCTTGGCGTAATCATAGAACCCCCCATATCGATAGA，含有 Hind III 酶切位點(diǎn)；通過(guò)該引物對(duì)可在原載體起始密碼子位點(diǎn)后引入編碼氨基酸GlyGlySer的核苷酸序列GGGGGTTCT (SEQ ID NO 2)，這三個(gè)氨基酸分別有4、4、6個(gè)簡(jiǎn)并密碼子。2).進(jìn)行高效表達(dá)載體高效-GFPuv的構(gòu)建 以 P3 (pGFPuv216-F) CTCATCGATATGACCATGATTACG, P4 (pGFPuv216-R) GAGATCGATAGCTGTTTCCTGTG為引物，以pGFPuv質(zhì)粒為模板克隆pGFPuv的全長(zhǎng)，使pGFPuv質(zhì)粒在216位斷開(kāi)，并使兩端都加上酶切位點(diǎn)Cla I。PCR反應(yīng)在50 μ 1的總體積中進(jìn)行，以 2 μ 1的pGFPuv質(zhì)粒為模板，反應(yīng)條件為在95°C變性2min后開(kāi)始循環(huán)，然后95°C變性20s， 42. 3°C退火 20s，72°C延伸 Imin 45s，8 個(gè)循環(huán)后再 95°C變性 20s, 49. 8°C退火 20s，72°C延伸lmin 45s，30個(gè)循環(huán)后，在于72°C延伸lOmin。瓊脂糖凝膠電泳回收線性的p3p4GFPuv 片段。用 P5(高效-F) TCTATCGATATGGGGGGTTCTATGATTACGCCAAGCTTGCA, P6 (高效-R) :TG CAAGCTTGGCGTAATCATAGAACCCCCCATATCGATAGA,混合后退火形成 p5p6 雙鏈 DNA 片段，退火反應(yīng)條件為94°C，5min，53. 1°C退火5min，72°C延伸5min。瓊脂糖凝膠電泳回收并純化p5p6 雙鏈DNA片段?；厥盏?. 3Kb兩端帶有Cla I限制性位點(diǎn)的p3p4pGFPuv片段，用限制性內(nèi)切酶 Cla I和Hind III雙酶切此片段，回收酶切后的3. 3Kb的片段；同樣用限制性內(nèi)切酶Cla I 和Hind III雙酶切p5p6雙鏈DNA片段，經(jīng)瓊脂糖電泳回收50bp左右的片段。將2個(gè)回收產(chǎn)物連接，連接產(chǎn)物化轉(zhuǎn)E. coli DH5a感受態(tài)細(xì)胞，然后涂布于含氨芐青霉素的LB平板， 37°C培養(yǎng)16h后挑選單菌落于熒光顯微鏡下鏡檢，初步確定陽(yáng)性克隆，將之?dāng)U大培養(yǎng)并提取重組質(zhì)粒，用pl、p2引物擴(kuò)增單菌落，進(jìn)一步確定陽(yáng)性克隆，提取陽(yáng)性克隆的重組質(zhì)粒并進(jìn)行測(cè)序，確定核苷酸序列GGGGGTTCT已正確的插入起始密碼子后，測(cè)序驗(yàn)證正確的重組質(zhì)粒命名為高效-GFPuv質(zhì)粒。3).高效-GFPuv質(zhì)粒的擴(kuò)大培養(yǎng)及提取將高效-GFPuv質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5 α，37°C恒溫培養(yǎng)16h后，挑取單菌落， 370C，220rmf培養(yǎng)至0D600值至1. O左右，用OMAGE質(zhì)粒小量提取試劑盒提取質(zhì)粒，將提取的重組質(zhì)?；D(zhuǎn)入大腸桿菌DH5 α中進(jìn)行綠色熒光蛋白的表達(dá)(以pGFPuv載體質(zhì)粒作為對(duì)照)，熒光顯微鏡下觀察熒光狀態(tài)，并進(jìn)行綠色熒光蛋白的原核表達(dá)。挑取化轉(zhuǎn)有pGFPuv 和高效-GFPuv重組質(zhì)粒的單菌落接種到含氨芐青霉素的新鮮LB液體培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng) 8-10h,之后按1 %接種到新鮮的LB液體培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)到0D600值至0. 6時(shí)用Im mol/ L的IPTG誘導(dǎo)，28°C誘導(dǎo)5h后，離心收集菌體，將菌體裂解后分別收集上清和沉淀，進(jìn)行 SDS-PAGE。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在分子量約為31kD處，綠色熒光蛋白被誘導(dǎo)表達(dá)，且高效-GFPuv載體組的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組pGFPuv ；將誘導(dǎo)表達(dá)的GFP樣品進(jìn)過(guò)不完全變性的SDS-PAGE電泳后，使用FujiFilm(LAS 3000)凝膠成像系統(tǒng)，在GFP模式下經(jīng)過(guò)藍(lán)光激發(fā)，GFP的蛋白條帶可以看到亮綠色的條帶，其他的蛋白條帶看不到，起到了類似于Western-blot的作用。4). pG FPuv和高效-GFPuv綠色熒光蛋白表達(dá)量的統(tǒng)計(jì)分析采用Bradford法及電泳掃描法進(jìn)行蛋白表達(dá)量的測(cè)定，波長(zhǎng)為595nm時(shí)，不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的光密度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定樣品的光密度值，計(jì)算總蛋白含量；同時(shí)進(jìn)行SDS-PAGE，凝膠掃描，計(jì)算機(jī)分析測(cè)定表達(dá)蛋白百分含量，根據(jù)蛋白濃度推算其表達(dá)量。 誘導(dǎo)表達(dá)的GFP綠色熒光蛋白的分子量都在31kD左右，對(duì)照組pGFPuv的GFP蛋白表達(dá)量不足全菌蛋白的8%，而高效重組表達(dá)載體高效-GFPuv的則為23%。由此可見(jiàn)，通過(guò)在原商品化載體PGFPuv的起始密碼子ATG后添加編碼三個(gè)多密碼子(甘氨酸、絲氨酸分別有4 個(gè)和6個(gè)簡(jiǎn)并密碼子)氨基酸GlyGlySer的核酸序列，可以使該載體的相關(guān)蛋白表達(dá)量提高3倍多。核酸序列GGGGGTTCT還可以用SEQ ID NO :3_6的核酸序列，或是編碼GlyGlySer 的其他核酸序列來(lái)替代。具體操作時(shí)就是將引物P5、p6的核酸序列進(jìn)行改造，使編碼 GlyGlySer的核酸序列分別為SEQ IDNO :3_6。如用SEQ ID NO 3來(lái)替代GGGGGTTCT，具體步驟如下1).引物序列信息 P5 的引物改為 p7 TCTATCGATATGGGAGGTAGCATGATTACGCCAAGCTTGCA ；其中下劃線為替代的堿基序列；P6 的引物改為 p8 TGCAAGCTTGGCGTAATCATGCTACCTCCCATATCGATAGA ；其中下劃線為替代的堿基序列。2).高效表達(dá)載體高效-GFPuv的構(gòu)建用引物p3和p4擴(kuò)增pGFPuv質(zhì)粒得到p3p4GFPuv片段，再用p7、p8引物退火形成 p7p8雙鏈DNA片段，分別用限制性內(nèi)切酶Cla I和Hind III雙酶切p3p4GFPuv片段和p7p8 雙鏈DNA片段，酶切產(chǎn)物回收后連接，連接產(chǎn)物化轉(zhuǎn)Ε. coli DH5a感受態(tài)細(xì)胞后，用pl、p2 引物擴(kuò)增單菌落，電泳檢測(cè)確定陽(yáng)性克隆并將陽(yáng)性克隆測(cè)序，保證核苷酸序列GGGGGTTCT 已正確插入起始密碼子后。重組質(zhì)粒命名為p7p8高效-GFPuv質(zhì)粒。3). p7p8高效-GFPuv質(zhì)粒的擴(kuò)大培養(yǎng)及提取將p7p8高效-GFPuv質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5 α，37°C恒溫培養(yǎng)16h后，挑取單菌落， 將單菌落擴(kuò)大培養(yǎng)后，提取P7p8高效-GFPuv質(zhì)粒，將提取的質(zhì)?；D(zhuǎn)入大腸桿菌DH5 α中進(jìn)行綠色熒光蛋白的表達(dá)，并以PGFPuv載體質(zhì)粒作為對(duì)照。將誘導(dǎo)表達(dá)的GFP蛋白進(jìn)過(guò)不完全變性的SDS-PAGE電泳后，使用FujiFilm(LAS 3000)凝膠成像系統(tǒng)，在GFP模式下經(jīng)過(guò)藍(lán)光激發(fā)檢測(cè)表達(dá)的蛋白量。4).蛋白表達(dá)量的統(tǒng)計(jì)分析采用Bradford法及電泳掃描法進(jìn)行蛋白表達(dá)量的測(cè)定，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，對(duì)照組pGFPuv的GFP蛋白表達(dá)量不足全菌蛋白的8 %，而高效重組表達(dá)載體組p7p8高效-GFPuv 表達(dá)的GFP蛋白則達(dá)到25%。二 ).在載體pGFPuv起始密碼子后插入其它的編碼三個(gè)特定氨基酸序列的核酸序列
在載體pGFPuv起始密碼子后插入編碼GlyGlySer的核苷酸序列可用編碼其它三個(gè)特定氨基酸序列的核酸序列替代，重組表達(dá)載體的綠色熒光蛋白表達(dá)量均有2 3倍的提高。例如，GlyGlySer可被序列為SEQ ID NO :7_21的氨基酸序列替代，其對(duì)應(yīng)的核苷酸序列分別為SEQ ID NO :22-31，對(duì)應(yīng)關(guān)系如下表。
權(quán)利要求
1.一種提高蛋白表達(dá)效率的表達(dá)載體，該表達(dá)載體起始密碼子ATG后含有一段編碼特定氨基酸片段的核苷酸，其特征在于(a)上述的特定氨基酸為有4個(gè)或以上密碼子的氨基酸；(b)上述的特定氨基酸片段的氨基酸殘基數(shù)目不少于3個(gè)。
2.如權(quán)利要求1所述的表達(dá)載體，其特征在于上述的氨基酸片段的氨基酸殘基數(shù)目為 3個(gè)。
3.如權(quán)利要求1所述的表達(dá)載體，其特征在于上述的氨基酸片段的氨基酸殘基數(shù)目為 4個(gè)。
4.如權(quán)利要求1所述的表達(dá)載體，其特征在于上述的氨基酸片段的氨基酸殘基數(shù)目為 5個(gè)。
5.如權(quán)利要求1所述的表達(dá)載體，其特征在于上述的氨氨基酸片段的氨基酸殘基數(shù)目為6個(gè)以上。
6.如權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體，其特征在于上述的氨基酸片段的序列為SEQID NO 1或SEQ ID NO 7-21中的任一個(gè)。
7.如權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體，其特征在于上述的氨基酸片段的序列為SEQID NO 49 或 SEQ ID NO 53-64 中的任一個(gè)。
8.如權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體，其特征在于上述的氨基酸片段的序列為SEQID NO 89 或 SEQ ID NO :91_93 中的任一個(gè)。
9.如權(quán)利要求5所述的表達(dá)載體，其特征在于上述的氨基酸片段的序列為SEQID NO 94,SEQ ID NO 96-99,SEQ ID NO :101_104、SEQ ID NO 106-108 或 SEQ ID N0:110_112 中的任一個(gè)。
10.如權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體，其特征在于上述的氨基酸片段，其編碼核苷酸的序列為 SEQ ID NO 2-6, SEQ ID NO 22-48 或 SEQ ID NO :113_140 中的任一個(gè)。
11.如權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體，其特征在于上述的氨基酸片段，其編碼核苷酸的序列為 SEQ ID NO 50-52 或 SEQ ID NO 65-88 中的任一個(gè)。
12.如權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體，其特征在于上述的氨基酸片段，其編碼核苷酸的序列為 SEQ ID NO :90ο
13.如權(quán)利要求5所述的表達(dá)載體，其特征在于上述的氨基酸片段，其編碼核苷酸的序列為 SEQ ID NO 95, SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 105 或 SEQ ID NO: 109 中的任一個(gè)。
14.如權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)所述的表達(dá)載體，其特征在于上述的表達(dá)載體為原核表達(dá)載體或真核表達(dá)載體。
15.一種提高目的基因蛋白表達(dá)效率的方法，該方法通過(guò)在目的基因的起始密碼子 ATG后插入一段編碼特定氨基酸片段的核苷酸來(lái)實(shí)現(xiàn)，其特征在于(a)上述的特定氨基酸為有4個(gè)或以上密碼子的氨基酸；(b)上述的特定氨基酸片段的氨基酸殘基數(shù)目不少于3個(gè)。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于上述的氨基酸序列的氨基酸數(shù)目為3個(gè)。
17.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于上述的氨基酸片段的氨基酸殘基數(shù)目為4個(gè)。
18.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于上述的氨基酸片段的氨基酸殘基數(shù)目為5-7 個(gè)。
19.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于上述的氨基酸片段的序列為SEQIDNO=U SEQ ID NO 7-2USEQ ID NO 49、SEQ ID NO 53-64、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO :91_94、SEQ ID NO 96-99, SEQ ID NO 101-104 或 SEQ ID NO 106-112 中的任一個(gè)。
20.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于上述的氨基酸片段，其編碼核苷酸的序列為 SEQ ID NO :2-6、SEQ ID NO 22-48、SEQ ID NO 50-52、SEQ ID NO :65_88、SEQ ID NO 90,SEQ ID NO 95,SEQ ID NO 100,SEQ ID NO 105、SEQID N0:109 或 SEQ ID NO 113-140 中的任一個(gè)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提高蛋白表達(dá)效率的表達(dá)載體，該表達(dá)載體起始密碼子ATG后含有一段編碼特定氨基酸片段的核苷酸，其特征在于(a)上述的特定氨基酸為有4個(gè)或以上密碼子的氨基酸；(b)上述的特定氨基酸片段的氨基酸殘基數(shù)目不少于3個(gè)。另外，本發(fā)明還提供了一種提高目的基因蛋白表達(dá)效率的方法，該方法通過(guò)在目的基因的起始密碼子ATG后插入一段編碼特定氨基酸片段的核苷酸來(lái)實(shí)現(xiàn)，其中特定氨基酸為有4個(gè)或以上密碼子的氨基酸且氨基酸殘基數(shù)目不少于3個(gè)。本發(fā)明提供的提高基因蛋白表達(dá)效率的方法，不僅可以用于改造任意目的基因以提高其表達(dá)效率，還可以用于構(gòu)建具有高表達(dá)效率特征的表達(dá)載體。與現(xiàn)有技術(shù)相比，利用本發(fā)明的載體或方法，可以使目的基因的蛋白表達(dá)效率提高2～5倍。
文檔編號(hào)C12N15/67GK102333870SQ201180001670
公開(kāi)日2012年1月25日 申請(qǐng)日期2011年2月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月16日
發(fā)明者劉慶慧, 劉筍, 史成銀, 張慶利, 梁艷, 黃倢 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所