專利名稱：通過酶法生產(chǎn)啶南平衍生物的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及用于生產(chǎn)可用作為害蟲控制劑的唳南平(pyripyropene)衍生物的方法。更具體地，其涉及用于生產(chǎn)在I位和11位具有酰氧基以及在7位具有羥基的啶南平衍生物的方法。
背景技術：
如W02006/129714(專利文件I)和W02008/066153 (專利文件2)中所述，在I位
和11位具有酰氧基以及在7位具有羥基的啶南平衍生物是對昆蟲害蟲發(fā)揮控制作用的化合物。作為用于生產(chǎn)在I位和11位具有酰氧基以及在7位具有羥基的啶南平衍生物的方法，W02006/129714和日本特開259569/1996 (專利文件3)中已經(jīng)公開了使用1，7，11-三酰氧基衍生物作為原料、從通過非選擇性水解酰氧基產(chǎn)生的多個產(chǎn)物中純化和分離所述啶南平衍生物的方法。此外，日本特開259569/1996描述了使用保護基的組合用于合成啶南平衍生物的用途。Journal of Antibiotics第49卷,第11期,第1149頁，1996年(非專利文件I)和Bioorganic Medicinal Chemistry Letter 第 5 卷,第 22 期,第 2683 頁，1995 年(非專利文件2)和日本特開269065/1996(專利文件4)已經(jīng)公開了合成實例，其中使用保護基將?；氲?位。W02009/022702(專利文件5)已經(jīng)公開了使用保護基從1，7，11-三去乙酰基啶南平A生產(chǎn)1，11- 二酰基-1，7，11-三去乙?；つ掀紸的方法。迄今為止，在I位和11位具有酰氧基以及在7位具有羥基的啶南平衍生物的已知生產(chǎn)方法是使用1，7，11-三酰氧基衍生物的非選擇性水解或者在多步驟中使用保護基的生產(chǎn)方法，但在工業(yè)生產(chǎn)中，期望進一步改進生產(chǎn)效率，例如降低生產(chǎn)費用、改進產(chǎn)率、簡化純化和分離或者縮短步驟的數(shù)目?，F(xiàn)有技術參考專利文件[專利文件1]冊2006/129714[專利文件2]W02008/066153[專利文件3]日本特開259569/1996[專利文件4]日本特開269065/1996
[專利文件5]冊2009/022702非專利文件[非專利文件I] Journal of Antibiotics 第 49 卷,第 11 期,第 1149 頁，1996 年[非專利文件2]Bioorganic Medicinal Chemistry Letter 第 5 卷，第 22 期，第2683 頁，1995 年發(fā)明概述本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了用于在更簡單的條件下和以更短的步驟、使用啶南平類似物作為合成原料、通過借助微生物的酶法或者通過酶法和化學轉(zhuǎn)化的組合獲得所需1，11-二酰氧基衍生物的方法，所述啶南平類似物作為天然存在的產(chǎn)物獲得(Journal of Antibiotics (1996)49 (3)，292-298，Pure AppI. Chem.，第 71 卷，第 6 期，第 1059-1064頁，1999 年；W094/09147 ；日本特開 239385/1996 ；日本特開 259569/1996 (專利文件 3)；Bioorganic Medicinal Chemistry Letter 第 5 卷,第 22 期,第 2683 頁，1995 年(非專利文件 2);和 W02004/060065)。因此，本發(fā)明的目的是提供用于使用微生物酶法生產(chǎn)1，11- 二酰氧基衍生物的方法。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，提供了用于生產(chǎn)由下式A所表示的化合物的方法[化學式I]
,HA
RO[其中R表示線性、分支或者環(huán)狀C2_6烷基羰基(當該基團的的烷基部分是分支或者環(huán)狀時R為C3_6燒基擬基)]，該方法包括以下步驟，用由下式B所表示的化合物培養(yǎng)其中引入了至少一種下文(I)至(III)的多核苷酸或者包含該至少一種多核苷酸的重組載體的微生物[化學式2]
權(quán)利要求
1.用于生產(chǎn)由下式A所表示的化合物的方法 [化學式I]
2.根據(jù)權(quán)利要求I的生產(chǎn)方法，其中根據(jù)權(quán)利要求I的由式B所表示的化合物是下式BI所表示的化合物 [化學式3]
3.根據(jù)權(quán)利要求I的生產(chǎn)方法，包括以下步驟用根據(jù)權(quán)利要求I的式B所表示的化合物培養(yǎng)包含質(zhì)粒pCCl-PPl、質(zhì)粒pPP2或質(zhì)粒pPP3或者選自這些質(zhì)粒的一個或多個載體的微生物,并分離根據(jù)權(quán)利要求I的式A所表示的化合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2的生產(chǎn)方法，其包括以下步驟用根據(jù)權(quán)利要求I的式B所表示的化合物培養(yǎng)其中引入了至少一種下文(IV)至(V)的多核苷酸或者包含該至少一種多核苷酸的重組載體的微生物，并分離根據(jù)權(quán)利要求I的式A所表示的化合物 (IV)分離的多核苷酸，具有編碼SEQID NO :270的氨基酸序列或者與其基本上等同的氨基酸序列的核苷酸序列；和 (V)分離的多核苷酸，具有至少一種選自以下(I)至(4)的核苷酸序列的核苷酸序列 (1)以下(a)的核苷酸序列， (a)SEQ ID NO :266中所示的核苷酸序列的16220至18018的核苷酸序列， (2)核苷酸序列，其能在嚴格條件下與(I)的核苷酸序列的互補序列雜交，并且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質(zhì)基本上等同的蛋白質(zhì)， (3)(I)的核苷酸序列，其中缺失、替換、插入或者添加了一個或多個核苷酸，并且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質(zhì)基本上等同的蛋白質(zhì)，和 (4)核苷酸序列，其與(I)的核苷酸序列的多核苷酸具有至少90%同一'丨生,并且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質(zhì)基本上等同的蛋白質(zhì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項的生產(chǎn)方法，進一步包括以下步驟使用酰化劑?；上率紻所表示的化合物的I和11位的羥基[化學式4]
6.根據(jù)權(quán)利要求5的生產(chǎn)方法，進一步包括以下步驟水解下式C所表示的化合物的I 位的乙酰基和當V為乙?；鶗r11位的乙?；? [化學式5]
7.根據(jù)權(quán)利要求6的生產(chǎn)方法，進一步包括以下步驟用啶南平E培養(yǎng)其中引入了至少一種下文(VI)至(VII)的多核苷酸或者包含該至少一種多核苷酸的重組載體的微生物，并分離根據(jù)權(quán)利要求6的式C所表示的化合物 (VI)分離的多核苷酸，具有編碼至少一種選自SEQID NO :269和275的氨基酸序列的核苷酸序列；和 (VII)分離的多核苷酸,具有至少一種選自以下(I)至(4)的核苷酸序列的核苷酸序列 (1)以下(a)和(b)的核苷酸序列 (a)SEQ ID NO :266中所示的核苷酸序列的13266至15144的核苷酸序列，和 (b)SEQID NO 266中所示的核苷酸序列的25824至27178的核苷酸序列， (2)核苷酸序列，其能在嚴格條件下與(I)的核苷酸序列的互補序列雜交，并且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質(zhì)基本上等同的蛋白質(zhì)， (3)(I)的核苷酸序列，其中缺失、替換、插入或者添加了一個或多個核苷酸，并且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質(zhì)基本上等同的蛋白質(zhì)，和 (4)核苷酸序列，其與(I)的核苷酸序列的多核苷酸具有至少90%同一'丨生,并且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質(zhì)基本上等同的蛋白質(zhì)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的生產(chǎn)方法，包括以下步驟用啶南平E培養(yǎng)包含質(zhì)粒pPP2或質(zhì)粒PPP9的微生物，并分離根據(jù)權(quán)利要求6的式C所表示的化合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求6的生產(chǎn)方法，進一步包括以下步驟用去乙酰啶南平E培養(yǎng)其中引入了至少一種下文(VIII)至(IX)的多核苷酸或者包含該至少一種多核苷酸的重組載體的微生物,并分離根據(jù)權(quán)利要求6的式C所表示的化合物 (VIII)分離的多核苷酸，具有編碼至少一種選自SEQID NO :269、274和275的氨基酸序列或者與其基本上等同的氨基酸序列的核苷酸序列；和 (IX)分離的多核苷酸,具有至少一種選自以下(I)至(4)的核苷酸序列的核苷酸序列 (1)以下(a)、(b)和(c)的核苷酸序列 (a)SEQ ID NO :266中所示的核苷酸序列的13266至15144的核苷酸序列，和 (b)SEQID NO 266中所示的核苷酸序列的23205至24773的核苷酸序列，和 (c)SEQID NO :266中所示的核苷酸序列的25824至27178的核苷酸序列， (2)核苷酸序列，其能在嚴格條件下與(I)的核苷酸序列的互補序列雜交，并且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質(zhì)基本上等同的蛋白質(zhì)， (3)(I)的核苷酸序列，其中缺失、替換、插入或者添加了一個或多個核苷酸，并且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質(zhì)基本上等同的蛋白質(zhì)，和 (4)核苷酸序列，其與(I)的核苷酸序列的多核苷酸具有至少90%同一'丨生,并且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質(zhì)基本上等同的蛋白質(zhì)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的生產(chǎn)方法，包括以下步驟用去乙酰啶南平E培養(yǎng)包含質(zhì)粒PPP2或質(zhì)粒pPP9且還包含質(zhì)粒pPP7的微生物，并分離根據(jù)權(quán)利要求6的式C所表示的化合物。
11.質(zhì)粒pCCl-PPl、質(zhì)粒pPP2、質(zhì)粒pPP3、質(zhì)粒pPP7或質(zhì)粒pPP9、或者一個或多個選自這些質(zhì)粒的載體的用途，用于生產(chǎn)由式A所表示的化合物。
12.包含質(zhì)粒pCCl-PPl、質(zhì)粒pPP2、質(zhì)粒pPP3、質(zhì)粒pPP7或質(zhì)粒pPP9、或一個或多個選自這些質(zhì)粒的載體的轉(zhuǎn)化體的用途，用于生產(chǎn)由式A所表示的化合物。
13.根據(jù)權(quán)利要求2的式BI所表示的化合物。
14.根據(jù)權(quán)利要求5的式D所表示的化合物。
全文摘要
提供了通過酶法生產(chǎn)由下式A所表示的啶南平衍生物的方法。本發(fā)明的生產(chǎn)方法允許在更簡單的條件下并以更短的步驟生產(chǎn)啶南平衍生物，[化學式1][其中R表示線性、分支或者環(huán)狀C2-6烷基羰基(當該基團的烷基部分是分支或者環(huán)狀時R為C3-6烷基羰基)]。
文檔編號C12N15/09GK102791871SQ20118000718
公開日2012年11月21日 申請日期2011年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月26日
發(fā)明者三富正明, 后藤公彥, 土田麻里子, 尾山和彥, 山本憲太朗 申請人:明治制果藥業(yè)株式會社