專利名稱：脂質(zhì)代謝改善劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及脂質(zhì)代謝改善劑，具體而言，涉及含有乳酸菌的菌體破壞物(brokencells)的脂質(zhì)代謝改善劑。另外，本發(fā)明涉及含有該脂質(zhì)代謝改善劑的功能性食品的制備方法、增強(qiáng)乳酸菌的脂質(zhì)代謝改善作用的方法、改善對象的脂質(zhì)代謝的方法、以及用于治療或預(yù)防脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙的藥物組合物。
背景技術(shù)：
有報告指出，乳酸菌或者雙歧乳桿菌的菌體、其培養(yǎng)物(培養(yǎng)液、培養(yǎng)上清以及它們的濃縮物等)對于脂質(zhì)代謝的改善，例如血中膽固醇的降低、體脂肪或內(nèi)臟脂肪的降低等有效(例如專利文獻(xiàn)I 6)。對于通過攝取乳酸菌在人類中實現(xiàn)的脂質(zhì)代謝改善作用也進(jìn)行很多驗證、報告，但是每個報告中結(jié)果不同，沒有固定的見解。例如對通過攝取乳酸菌在人類中實現(xiàn)的有效性進(jìn)行說明的文獻(xiàn)中，多數(shù)文獻(xiàn)中，或者乳酸菌的攝取量為大量，或者不完整地評價以安慰劑為對照、雙盲實驗、卡路里控制(例如非專利文獻(xiàn)I)。進(jìn)而，也有很多報告指出通過攝取乳酸菌未改善人類的脂質(zhì)代謝(例如非專利文獻(xiàn)2 4)。如果考慮到這些，則推測乳酸菌的脂質(zhì)代謝改善效果有可能非常微弱。乳酸菌由于為發(fā)酵微生物，因此通常認(rèn)為活菌是有效的，所以大多以活菌劑的方式利用。另一方面，為了提供表現(xiàn)出更高效力的脂質(zhì)代謝改善作用的制劑，開發(fā)了以乳酸菌的有機(jī)溶劑抽提物作為有效成分的乳酸菌處理物(專利文獻(xiàn)I)，但是其效果有限，不能令人滿意(參照后述的實施例5)。另一方面，近年由于飲食習(xí)慣的變化、運(yùn)動不足等，生活習(xí)慣病、代謝綜合征增加。生活習(xí)慣病和代謝綜合征與脂質(zhì)代謝異?；蛱谴x異常相關(guān)，結(jié)果導(dǎo)致動脈硬化、脂肪肝、高脂血癥、肥胖癥、高血壓 、糖尿病等癥狀及疾病的可能性高。另外已知在這種脂質(zhì)代謝異?；蛱谴x異常的狀態(tài)下，膽固醇、中性脂肪、內(nèi)臟脂肪等脂質(zhì)代謝指標(biāo)升高。為了預(yù)防或治療這種生活習(xí)慣病和代謝綜合征，依然謀求用于改善脂質(zhì)代謝的有效手段?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1:日本特開2007-284360號公報專利文獻(xiàn)2 日本特開2008-24680號公報專利文獻(xiàn)3 日本專利第4336992號專利文獻(xiàn)4 :日本特開2003-306436號公報專利文獻(xiàn)5 :日本專利第3777296號專利文獻(xiàn)6 :日本特公平第6-96537號非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)I =Indian Heart J. 42(5) :361-364, 1990 年非專利文獻(xiàn)2 J. Dairy Sc1. 72(11) :2885-2899，1989 年非專利文獻(xiàn)3 Eur. J. Clin. Nutr. 62(2) :232-237, 2008 年
非專利文獻(xiàn)4 J. Am. Coll. Nutr. 27(4) :441-447, 2008 年

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題本發(fā)明的目的在于，提供用于改善脂質(zhì)代謝的有效的手段和方法。另外，本發(fā)明的目的在于，提供用于治療或預(yù)防與脂質(zhì)代謝異常相關(guān)的疾病或障礙的手段和方法。用于解決問題的方案本發(fā)明人為了解決上述問題而進(jìn)行深入研究，結(jié)果偶然發(fā)現(xiàn)，通過破壞乳酸菌能表現(xiàn)出或增強(qiáng)脂質(zhì)代謝改善作用。該脂質(zhì)代謝改善作用是降低總膽固醇、低密度脂蛋白(LDL)-膽固醇、中性脂肪、動脈硬化指數(shù)和內(nèi)臟脂肪，提高高密度脂蛋白(HDL)-膽固醇和脂聯(lián)素，與沒有損傷的乳酸菌菌體和乳酸菌的有機(jī)溶劑抽提物相比優(yōu)異。本發(fā)明人由以上的發(fā)現(xiàn)想到可以將乳酸菌的菌體破壞物用于脂質(zhì)代謝改善劑中，從而完成本發(fā)明。因此，本發(fā)明如以下所述。[I] 一種脂質(zhì)代謝改善劑，其含有乳酸菌的菌體破壞物作為有效成分。[2]根據(jù)[I]中所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，乳酸菌為屬于選自由乳桿菌(Lactobacillus)屬、雙歧桿菌(Bifidobacterium)屬、腸球菌(Enterococcus)屬、明串珠菌(Leuconostoc)屬、鏈球菌(Streptococcus)屬、乳球菌(Lactococcus)屬、片球菌(Pediococcus)屬和魏斯氏菌(Wei ssella)屬組成的組中的屬的至少一種細(xì)菌。[3]根據(jù)[2]中所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，屬于乳桿菌(Lactobacillus)屬的細(xì)菌為選自由曬淀粉乳桿菌(Lactobacillusamylovorus)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)、干釀乳桿菌(Lactobacillus casei)、副干釀乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、玉米乳桿菌(Lactobacillus zeae)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)、羅伊乳桿菌(Lactobacillus reuteri)> 嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)、雞乳桿菌(Lactobacillus gal I inarum)、短乳桿菌(Lactobacillus brevis)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、植物乳桿菌(Lactobacillus pi ant arum)、德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp. BulGaricus)和約氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)組成的組中的至少一種。[4]根據(jù)[2]或[3]中所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，屬于乳桿菌(Lactobacillus)屬的細(xì)菌為選自由曬淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus)CP1563株、曬淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus)CP1562株和加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)CP3238株組成的組中的至少一種。[5]根據(jù)[2]中所述的脂質(zhì)代謝改善劑,其中，屬于雙歧桿菌(Bifidobacterium)屬的細(xì)菌為選自由短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)、長雙歧桿菌(Bifidobacteriumlongum)、假長雙歧桿菌(Bifidobacterium pseudolongum)> 動物雙歧桿菌(Bifidobacterium animalis)、青春雙岐桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)、兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum)、乳雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)、鏈狀雙歧桿菌(Bifidobacteriumcatenulatum)、假鏈狀雙歧桿菌(Bifidobacteriumpseudocatenulatum)和大雙歧桿菌(Bifidobacterium magnum)組成的組中的至少一種。
[6]根據(jù)[2]中所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，屬于腸球菌(Enterococcus)屬的細(xì)菌為選自由幾腸球菌(Enterococcusfaecalis)、希氏腸球菌(Enterococcus hirae)和屎腸球菌(Enterococcus faecium)組成的組中的至少一種。[7]根據(jù)[2]中所述的脂質(zhì)代謝改善劑,其中，屬于鏈球菌(Streptococcus)屬的細(xì)菌為嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus)。[8]根據(jù)[2]中所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，屬于明串珠菌(Leuconostoc)屬的細(xì)菌為選自由腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)和乳明串珠菌(Leuconostoclactis)組成的組中的至少一種。[9]根據(jù)[2]中所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，屬于乳球菌(Lactococcus)屬的細(xì)菌為選自由乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、植物乳球菌(Lactococcus pi ant arum)和棉子糖乳球菌(Lactococcus raffinolactis)組成的組中的至少一種。[10]根據(jù)[2]中所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，屬于片球菌(Pediococcus)屬的細(xì)菌為選自由戍糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)和有害片球菌(Pediococcusdamnosus)組成的組中的至少一種。[11]根據(jù)[2]中所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，屬于魏斯氏菌(Weissella)屬的細(xì)菌為選自由食竇魏斯氏菌(Weissellacibaria)、融合魏斯氏菌(Weissella confusa)、耐鹽魏斯氏菌(Weissella halotolerans)、赫倫魏斯氏菌(Weissella hellenica)、坎氏魏斯氏菌(Weissella kandleri)、泡菜魏斯氏菌(Weissellakimchii)、韓國魏斯氏菌(Weissella koreensis)、稍`小魏斯氏菌(Weissella minor)、類腸膜魏斯氏菌(Weissellaparamesenteroides)、土壤魏斯氏菌(Weissella soli)、泰國魏斯氏菌(Weissella thailandensis)和綠色魏斯氏菌(Weissellaviridescens)組成的組中的至少一種。[12]根據(jù)[I] [11]中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，菌體破壞物中的菌體的平均長徑為破壞前的0 90%。[13]根據(jù)[I] [12]中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，菌體破壞物中的菌體的平均長徑為0 2. 5 ii m。[14]根據(jù)[I] [13]中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，菌體破壞物通過物理性破壞來得到。[15]根據(jù)[I] [13]中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，菌體破壞物通過藥品處理來得到。[16]根據(jù)[I] [13]中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，菌體破壞物通過酶裂解來得到。[17]根據(jù)[I] [13]中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，菌體破壞物通過自身溶解(Iysis)來得到。[18]根據(jù)[I] [17]中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其為經(jīng)口給予用。[19]根據(jù)[I] [18]中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其具有使選自由總膽固醇、低密度脂蛋白(LDL)-膽固醇、中性脂肪、動脈硬化指數(shù)和內(nèi)臟脂肪組成的組中的至少一種降低的作用。[20]根據(jù)[I] [19]中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其具有使選自由高密度脂蛋白(HDL)-膽固醇和脂聯(lián)素組成的組中的至少一種升高的作用。[21]根據(jù)[I] [20]中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其用于飲食品、飼料或藥品。[22]根據(jù)[I] [21]中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其用于動脈硬化、高脂血癥、脂肪肝、肥胖癥、代謝綜合征、糖尿病、心肌梗塞或腦梗塞的預(yù)防或治療。[23] 一種飲食品、飼料或藥品，其添加有[I] [22]中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑。[24] 一種功能性飲食品的制備方法，該方法包括制備[I] [22]中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑的工序和將該脂質(zhì)代謝改善劑配合到飲食品中的工序。[25] 一種增強(qiáng)乳酸菌的脂質(zhì)代謝改善作用的方法，其特征在于，該方法包括破壞乳酸菌的工序。[26] 一種改善對象的脂質(zhì)代謝的方法，該方法包括向?qū)ο蠼o予乳酸菌的菌體破壞物。

[27] 一種用于治療或預(yù)防脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙的藥物組合物，其含有乳酸菌的菌體破壞物和藥學(xué)上可接受的載體。[28] 一種脂質(zhì)代謝改善劑的制備方法，該方法包括破壞乳酸菌的工序、測定所得到的菌體破壞物的脂質(zhì)代謝改善作用的工序和將具有脂質(zhì)代謝改善作用的菌體破壞物制劑化的工序。[29] 一種卩遼淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus)CP1563株、卩遼淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus)CP1562 株或它們的突變株。[30]根據(jù)[29]中所述的突變株，其菌體破壞物具有脂質(zhì)代謝改善作用。發(fā)明的效果通過本發(fā)明提供脂質(zhì)代謝改善劑。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑通過降低總膽固醇、LDL-膽固醇、中性脂肪、動脈硬化指數(shù)和/或內(nèi)臟脂肪，和/或升高HDL-膽固醇和/或脂聯(lián)素，可以使脂質(zhì)代謝正?；?，因此可以用于各種疾病或障礙的預(yù)防或治療。


圖1表示乳酸菌的破碎處理前(A)和破碎處理后(B)的菌體的電子顯微鏡照片。圖2為表示食物誘導(dǎo)性肥胖模型中的乳酸菌噬淀粉乳桿菌(Lactobacillusamylovorus)CP1563 株破碎物(disrupted cells)的效果(HDL-膽固醇)的圖。圖3為表示食物誘導(dǎo)性肥胖模型中的乳酸菌加氏乳桿菌(LactobaciIIusgasseri)CP3238株破碎物的效果(HDL-膽固醇)的圖。圖4為表示食物誘導(dǎo)性肥胖模型中的乳酸菌破碎物的用量依賴的效果(HDL-膽固醇)的圖。圖5為表示食物誘導(dǎo)性肥胖模型中的乳酸菌破碎物的用量依賴的效果(動脈硬化指數(shù))的圖。圖6為表示食物誘導(dǎo)性肥胖模型中的乳酸菌破碎物的抗代謝綜合征效果的圖。A表示HDL-膽固醇、B表示LDL-膽固醇、C表示中性脂肪、D表示動脈硬化指數(shù)、E表示高分子脂聯(lián)素、F表示內(nèi)臟脂肪重量。
圖7為將食物誘導(dǎo)性肥胖模型中的乳酸菌破碎物的效果與乳酸菌的有機(jī)溶劑抽提物的效果對比而表示的圖。圖8為表示食物誘導(dǎo)性肥胖模型中的不同破碎條件的乳酸菌破碎物的效果(HDL-膽固醇)的圖。圖9為表示食物誘導(dǎo)性肥胖模型中的乳酸菌噬淀粉乳桿菌(Lactobacillusamylovorus)CP1562株破碎物的效果(HDL-膽固醇)的圖。
具體實施例方式以下對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。本申請主張2010年6月8日申請的日本專利申請第2010-131188號的優(yōu)先權(quán)，包含上述專利申請的說明書和/或附圖中記載的內(nèi)容。本發(fā) 明基于下述發(fā)現(xiàn)通過破壞乳酸菌的菌體、可以表現(xiàn)出或增強(qiáng)乳酸菌的脂質(zhì)代謝改善作用。因此，本發(fā)明涉及含有乳酸菌的菌體破壞物的脂質(zhì)代謝改善劑以及其藥物和食品用途。本發(fā)明中使用的乳酸菌指的是通過發(fā)酵由糖類產(chǎn)生乳酸的細(xì)菌，例如含有屬于乳桿菌(Lactobacillus)屬、明串珠菌(Leuconostoc)屬、乳球菌(Lactococcus)屬、片球菌(Pediococcus)屬、腸球菌(Enterococcus)屬、雙歧桿菌(Bifidobacterium)屬、鏈球菌(Streptococcus)屬、魏斯氏菌(Weissella)屬等的細(xì)菌。本發(fā)明中，只要乳酸菌的菌體破壞物表現(xiàn)出脂質(zhì)代謝改善作用即可，可以使用在該技術(shù)領(lǐng)域中公知的乳酸菌株。需要說明的是，考慮到對動物給予、使動物攝取而優(yōu)選已確認(rèn)了動物中的安全性的菌株。對于乳酸菌的更具體的種類，作為屬于乳桿菌(Lactobacillus)屬的細(xì)菌，存在嗷淀粉乳桿菌(Lactobacillusamylovorus)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)、干酷乳桿菌(Lactobacillus casei)、副干酷乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、玉米乳桿菌(Lactobacillus zeae)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)、羅伊乳桿菌(Lactobacillus reuteri)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)、雞乳桿菌(Lactobacillus galI inarum)^ 短乳桿菌(Lactobacillus brevis)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、植物乳桿菌(Lactobacillus pi ant arum)、德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckiisubsp. BulGaricus)和約氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)等。另外，對于乳酸菌的具體的其它的種類，作為屬于雙歧桿菌(Bifidobacterium)屬的細(xì)菌，可列舉出短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)、長雙歧桿菌(Bifidobacteriumlongum)、假長雙歧桿菌(Bifidobacterium pseudolongum)、動物雙歧桿菌(Bifidobacterium animalis)、青春雙岐桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)、兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bif idum)、乳雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)、鏈狀雙歧桿菌(Bifidobacteriumcatenulatum)、假鏈狀雙歧桿菌(Bifidobacteriumpseudocatenu latum)和大雙歧桿菌(Bifidobacterium magnum)。作為屬于腸球菌(Enterococcus)屬的細(xì)菌，可列舉出類腸球菌([Enterococcus faecalis)、希氏腸球菌([Enterococcushirae)和屎腸球菌(Enterococcus faecium)。作為屬于鏈球菌(Streptococcus)屬的細(xì)菌，可列舉出嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)。作為屬于明串珠菌(Leuconostoc)屬的細(xì)菌，可列舉出腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)和乳明串珠菌(Leuconostoclactis)。作為屬于乳球菌(Lactococcus)屬的細(xì)菌，可列舉出乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、植物乳球菌(Lactococcus pi ant arum)和棉子糖乳球菌(Lactococcus raff inolactis) 作為屬于片球菌(Pediococcus)屬的細(xì)菌，可列舉出戍糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)和有害片球菌(Pediococcus damnosus)。作為屬于魏斯氏菌(Weissella)屬的細(xì)菌，可列舉出食竇魏斯氏菌(Weissellacibaria)、融合魏斯氏菌(Weissella confusa)、耐鹽魏斯氏菌(Weissella halotolerans)、赫倫魏斯氏菌(Weissella hellenica)、坎氏魏斯氏菌(Weissella kandleri)、泡菜魏斯氏菌(Weissellakimchii)、韓國魏斯氏菌(Weissella koreensis)、稍小魏斯氏菌(Weissella minor)、類腸膜魏斯氏菌(Weissellaparamesenteroides)、土壤魏斯氏菌(Weissella soli)、泰國魏斯氏菌(Weissella thailandensis)和綠色魏斯氏菌(Weissellaviridescens)。本發(fā)明中“脂質(zhì)代謝改善作用”指的是使脂質(zhì)代謝正?；蚋纳浦|(zhì)代謝異常的作用，具體而言，指的是血脂的降低作用、皮下脂肪和/或內(nèi)臟脂肪的代謝促進(jìn)作用、體重增加抑制作用、以及脂肪組織的機(jī)能正?；?。脂質(zhì)代謝改善作用可以通過測定血脂(總膽固醇、HDL-膽固醇、LDL-膽固醇、中性脂肪、甘油三酯)、脂肪量(內(nèi)臟脂肪和皮下脂肪)、體重量、脂肪組織的機(jī)能(脂聯(lián)素等)來判定。例如脂質(zhì)代謝改善作用為降低總膽固醇、LDL-膽固醇、中性脂肪、動脈硬化指數(shù)、內(nèi)臟脂肪量和體重中的至少一種的作用。另外，例如脂質(zhì)代謝改善作用為升高HDL-膽固醇和脂聯(lián)素中的至少一種的作用。這些指標(biāo)在該技術(shù)領(lǐng)域中周知，可以使用公知的方法和手段來測定。某種乳酸菌的菌體破壞物是否具有脂質(zhì)代謝改善作用可以如下判定制備乳酸菌的菌體破壞物，將其給予實驗動物等對象(例如肥胖模型動物等)，在對象中測定上述指標(biāo)，從而判定是否具有脂質(zhì)代謝改善作用。因此，本發(fā)明中，只要為通過上述方法評價菌體的破壞物具有脂質(zhì)代謝改善作用的乳酸菌，則可以使用任意的乳酸菌。作為具有這種脂質(zhì)代謝改善作用的優(yōu)選的乳酸菌，可列舉出卩遼淀粉乳桿 菌(Lactobacillus amylovorus) CP1563 株(FERMBP-11255)、噬淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus)CP1562 株(FERM BP-11379)和加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)CP3238 株(FERM BP-11256) 需要說明的是，噬淀粉乳桿菌(Lactobacillusamylovorus)CP1563 株和卩遼淀粉乳桿菌(Lactobacillusamylovorus)CP1562株為源自人的腸道的乳酸菌。加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)CP3238株為由市售的酸奶采集的乳酸菌。這些菌株在后述的實施例中已經(jīng)確認(rèn)了破壞菌體具有脂質(zhì)代謝改善作用，可以由獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利生物保藏中心(郵政編碼305-8566日本茨城縣筑波市東I 丁目I番地I筑波中心中央第6)獲得。另外，在以前有報告指出其菌體具有脂質(zhì)代謝改善作用的乳酸菌的情況下，通過使用其菌體破壞物可以期待脂質(zhì)代謝改善作用的增強(qiáng)。另外，本發(fā)明中上述具體的菌株的突變株只要具有脂質(zhì)代謝改善作用則也可以使用。例如曬淀粉乳桿菌(Lactobacillusamylovorus) CP1563株、曬淀粉乳桿菌(Lactobacillusamylovorus) CP1562 株和加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri) CP3238 株的突變株具有脂質(zhì)代謝改善作用的可能性高，這種突變株也包含在本發(fā)明中。本發(fā)明中，“突變株”指的是由母株得到的任意的株。具體而言，指的是通過由母株利用自然突變、用化學(xué)性或物理性的誘變劑進(jìn)行的誘發(fā)突變?nèi)斯ぬ岣咄蛔兊念l率的方法得到的株，或者通過特異性的突變誘發(fā)技術(shù)(例如基因重組)得到的株。對通過這種方法產(chǎn)生的微生物個體重復(fù)進(jìn)行篩選、分離，培育有用的微生物個體，由此可以得到具有目的性質(zhì)的突變株。例如源自卩遼淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus)CP1563株、卩遼淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus)CP1562 株或加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)CP3238株的突變株，可以通過利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法得到的乳酸菌的基因組DNA的擴(kuò)增片段的分子量分布，而容易地與其它的乳酸菌株相區(qū)別。如下簡單地說明，對于目的的乳酸菌，制備DNA試樣，通過使用具有特征性的序列(例如16S rDNA堿基序列)的引物的PCR法進(jìn)行基因擴(kuò)增，對所得到的片段的電泳圖譜進(jìn)行分析，由此可以判定是否為源自噬淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus)CP1563 株、曬淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus)CP1562株或加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)CP3238株的突變株。但是，確認(rèn)是否為突變株的方法不限于這種方法，可以通過菌學(xué)性質(zhì)等該技術(shù)領(lǐng)域中公知的方法來確認(rèn)是否為突變株。通過判定這種突變株的破壞物是否具有脂質(zhì)代謝改善作用，可以得到在本發(fā)明中可以用作菌體破壞物的菌株。乳酸菌可以通過使用乳酸菌的培養(yǎng)中通常使用的培養(yǎng)基、在適當(dāng)?shù)臈l件下培養(yǎng)來制備。培養(yǎng)中使用的培養(yǎng)基只要為含有碳源、氮源、無機(jī)鹽類等可以有效地進(jìn)行乳酸菌的培養(yǎng)的培養(yǎng)基即可，可以使用天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基中的任意一種，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以適當(dāng)選擇適于所使用的菌株的公知的培養(yǎng)基。作為碳源，可以使用乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、廢糖蜜等，作為氮源，可以使用酪蛋白的水解物、乳清蛋白質(zhì)水解物、大豆蛋白質(zhì)水解物等含有有機(jī)氮的物質(zhì)。另外，作為無機(jī)鹽類，可以使用磷酸鹽、鈉、鉀、鎂等。作為適于乳酸菌的培養(yǎng)的培養(yǎng)基，可列舉出例如MRS液體培養(yǎng)基、GAM培養(yǎng)基、BL培養(yǎng)基、BLB培養(yǎng)基(Briggs Liver Broth)、動物乳汁、脫脂乳、乳性乳清等?？梢詢?yōu)選使用經(jīng)過滅菌的MRS培養(yǎng)基。作為天然培養(yǎng)基，可以使用西紅柿汁、胡蘿卜汁、其它蔬菜汁，或者蘋果、菠蘿、葡萄果汁等。另外，乳酸菌的培養(yǎng)在200C 50°C、優(yōu)選25°C 42°C、更優(yōu)選約37°C下，在厭氧條件下進(jìn)行。溫度條件可以通過恒溫槽、罩式加熱器、夾套等調(diào)整。另外，厭氧條件下指的是乳酸菌可以增殖的程度的低氧環(huán)境下，例如通過使用厭氧腔、厭氧箱或加有脫氧劑的密閉容器或袋等，或者僅通過密閉培養(yǎng)容器，可以形成厭氧條件。培養(yǎng)的方式為靜置培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)、槽培養(yǎng)等。另外，培養(yǎng)時間可以為3小時 96小時。培養(yǎng)開始時的培養(yǎng)基的pH優(yōu)選維持在4.0 8. O。對乳酸菌的具體的制備例進(jìn)行簡單說明。例如使用噬淀粉乳桿菌(Lactobacillusamylovorus)CP1563 株、卩遼淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus)CP1562 株和加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri) CP3238株作為乳酸菌時,將乳酸菌接種到食品級的乳酸菌用培養(yǎng)基中，在約37°C下培養(yǎng)一晚(約18小時)。

培養(yǎng)后，所得到的乳酸菌培養(yǎng)物既可以直接使用，也可以進(jìn)一步根據(jù)需要利用離心分離等進(jìn)行粗純化和/或利用過濾等進(jìn)行固液分離、進(jìn)行滅菌操作。優(yōu)選進(jìn)行離心分離而僅回收乳酸菌的菌體。需要說明的是，本發(fā)明中使用的乳酸菌可以為濕潤菌體或干燥菌體。本發(fā)明中使用乳酸菌的菌體破壞物。本發(fā)明中“菌體破壞物”含有通過破碎、磨碎、酶處理、化學(xué)藥品處理、溶解等進(jìn)行了處理的菌體。另外，“破碎物”中例如含有在菌體的損傷后得到的水可溶性組分、有機(jī)溶劑可溶性組分、有機(jī)溶劑及水難溶性組分、有機(jī)溶劑和水不溶性組分。菌體的損傷可以使用該技術(shù)領(lǐng)域中公知的方法和儀器，例如通過物理性破碎、酶裂解處理、化學(xué)藥品處理或自身溶解處理等來進(jìn)行。物理性破碎可以通過濕式(以菌體懸浮液的狀態(tài)進(jìn)行處理)或干式(以菌體粉末的狀態(tài)進(jìn)行處理)中的任意一種進(jìn)行，可以通過使用均化器、球磨機(jī)、珠磨機(jī)、戴諾磨、行星磨等進(jìn)行的攪拌，通過使用噴射磨、弗氏壓碎器、細(xì)胞破碎機(jī)等形成的壓力，或者通過過濾器過濾來進(jìn)行菌體的損傷。酶裂解處理例如可以使用溶菌酶等酶來破壞乳酸菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。藥品處理可以使用甘油脂肪酸酯、大豆磷脂等表面活性劑來破壞乳酸菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。自身溶解處理可以通過一部分的乳酸菌自身的酶來溶解菌體。需要說明的是，本發(fā)明中由于沒有必要添加其它的試劑或成分，因此優(yōu)選為物理性破碎。例如利用攪拌進(jìn)行物理性破碎時，對菌體懸浮液或菌體粉末以50 lOOOOrpm、優(yōu)選以100 IOOOrpm進(jìn)行攪拌。用于制備破碎物的具體方 法，例如在公知的戴諾磨細(xì)胞破碎機(jī)(DYN0-MILL破碎裝置等)中，使用玻璃珠以圓周速度10.0 20.0m/s(例如約14.0m/s)、處理流速0.1 10L/10分鐘(例如約1L/10分鐘)、破碎槽溫度10 30°C (例如約15°C )下對乳酸菌的懸浮液處理I 7次(例如3 5次)，由此破碎菌體。另外，例如在公知的濕式噴射磨細(xì)胞破碎機(jī)(JN20 Nano Jet Pal等)中，以吐出壓力50 IOOOMPa(例如270MPa)、處理流速50 1000 (例如300ml/分鐘)對乳酸菌的懸浮液處理I 30次(例如10次)，由此破碎菌體。另外，在公知的干式行星磨細(xì)胞破碎機(jī)(G0T5 Galaxy5等)中，在各種球(例如氧化錯制IOmm球、氧化錯制5mm球、氧化招制Imm球)共存下以轉(zhuǎn)數(shù)50 IOOOOrpm(例如240rpm、190rpm)對乳酸菌的菌體粉末處理30分鐘 20小時(例如5小時)，由此也可以破碎菌體。還可以在公知的干式噴射磨細(xì)胞破碎機(jī)(Jet-O-Mizer等)中，在供給速度0. 01 IOOOOg/分鐘(例如0. 5g/分鐘)、吐出壓力I 1000kg/cm2 (例如6kg/cm2)的壓力下對乳酸菌的菌體粉末處理I 10次(例如I次)，由此破碎菌體。本發(fā)明中乳酸菌破壞物即使為菌體開孔的程度也能發(fā)揮效果，但是期望制備成菌體的平均長徑為破壞處理前的90%以下。例如通過溶解處理破壞菌體時，菌體的平均長徑有可能為0%。因此，按照使菌體破壞物中的菌體的平均長徑為破壞前的0 90%，優(yōu)選0 80%,0 70%、0 50%，進(jìn)一步優(yōu)選0 20%的方式來破壞乳酸菌。菌體破壞物中的菌體的平均長徑根據(jù)所使用的乳酸菌的種類而異，例如為0 2. 5 u m,優(yōu)選0 2 u m,進(jìn)一步優(yōu)選0 1. 5 u m、0 I u m,更進(jìn)一步優(yōu)選0 0. 5 u m。平均長徑具體而言通過實施例1中記載的方法測定。另外，可以根據(jù)需要對乳酸菌的菌體和/或菌體破壞物進(jìn)行進(jìn)一步處理。這種處理的例子如以下所記載。
通過將乳酸菌的菌體和/或菌體破壞物懸浮或稀釋到適當(dāng)?shù)娜軇┲校梢灾苽錇閼腋∥锘蛳♂屛?。作為可以使用的溶劑，可列舉出例如水、生理鹽水、磷酸緩沖生理鹽水(PBS)等。通過對乳酸菌的菌體和/或菌體破壞物進(jìn)行滅菌處理，可以制備為滅菌處理物。為了對乳酸菌的菌體和/或菌體破壞物進(jìn)行滅菌處理，例如可以進(jìn)行過濾滅菌、放射性殺菌、過熱式殺菌、加壓式殺菌等公知的滅菌處理。另外，通過對乳酸菌的菌體和/或菌體破壞物進(jìn)行加熱處理，可以制備為加熱處理物。為了制備加熱處理物，對乳酸菌的菌體和/或菌體破壞物用一定時間例如約10分鐘 I小時(例如約10 20分鐘)進(jìn)行高溫處理(例如80 150°C )。進(jìn)而，可以將乳酸菌的菌體和/或菌體破壞物干燥形成粉狀物或粒狀物。對具體的干燥方法沒有特別限定，可列舉出例如噴霧干燥、轉(zhuǎn)鼓干燥、真空干燥、冷凍干燥等，可以單獨(dú)或組合采用這些方法。此時，根據(jù)需要可以添加通常使用的賦形劑。進(jìn)而，可以由乳酸菌的菌體破壞物使用公知的分離-純化法將具有脂質(zhì)代謝改善作用的成分或組分純化。作為這種分離-純化法，可列舉出鹽沉淀和有機(jī)溶劑沉淀等利用溶解性的方法，透析、超濾、凝膠過濾等利用分子量差異的方法，離子交換色譜等利用電荷差異的方法，親合色譜等利用特異性結(jié)合的方法，疏水色譜、反相色譜等利用疏水性的方法等，這些方法可以使用一種或組合使用兩種以上。

上述處理可以進(jìn)行單一的處理或適當(dāng)組合多種來進(jìn)行。本發(fā)明中這種處理物還可以用于脂質(zhì)代謝改善劑中。上述得到的乳酸菌的菌體破壞物如果單獨(dú)或者與其它的成分一起作為脂質(zhì)代謝改善劑連續(xù)攝取則可以期待脂質(zhì)代謝的改善效果、和利用此效果實現(xiàn)的脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙的治療或預(yù)防效果。另外，脂質(zhì)代謝改善劑也可以添加到飲料、食品或飼料中來使用。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑含有上述乳酸菌的菌體破壞物作為有效成分，可以含有一種乳酸菌的菌體破壞物，也可以含有多種不同的乳酸菌的菌體破壞物，進(jìn)而還可以含有進(jìn)行了不同的破壞處理得到的多種菌體破壞物的組合。另外，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑中除了作為有效成分的乳酸菌的菌體破壞物之夕卜，只要不阻礙目的的作用，可以單獨(dú)或組合多種來添加后述的添加劑、其它的公知的脂質(zhì)代謝改善藥等。對本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑的形態(tài)沒有特別限定，例如可以形成片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、粉劑、糖漿劑、干糖漿劑、液劑、懸浮劑、吸入劑等經(jīng)口劑，栓劑等經(jīng)腸制劑，點滴齊U、注射劑等劑型。其中，優(yōu)選形成經(jīng)口劑。需要說明的是，液劑、懸浮劑等液體制劑可以為在即將服用之前溶解或懸浮在水或其它的適當(dāng)介質(zhì)中的方式，另外在片劑、顆粒劑的情況下可以用周知的方法對其表面進(jìn)行包衣。進(jìn)而，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑可以使用該技術(shù)領(lǐng)域中公知的技術(shù)形成緩釋制劑、延遲釋放制劑或即釋劑等釋放得到控制的制劑。這種劑型的脂質(zhì)代謝改善劑可以在上述成分中根據(jù)劑型配合通常使用的賦形劑、崩解劑、粘合劑、潤濕劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、潤滑劑、保存劑、表面活性劑、甜味劑、矯味劑、芳香劑、酸化劑、著色劑等添加劑，根據(jù)常規(guī)方法來制備。例如脂質(zhì)代謝改善劑形成藥物組合物時，可以配合藥學(xué)上可接受的載體或添加劑。作為這種藥學(xué)上可接受的載體和添加物的例子，除了水、藥學(xué)上可接受的有機(jī)溶劑、膠原、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、羧基乙烯基聚合物、海藻酸鈉、水溶性葡聚糖、水溶性糊精、羧甲基淀粉鈉、果膠、黃原膠、阿拉伯膠、酪蛋白、明膠、瓊脂、甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、石蠟、硬脂醇、硬脂酸、人血清白蛋白、甘露醇、山梨醇、乳糖、作為藥物添加物容許的表面活性劑等之外,還可列舉出脂質(zhì)體等人工細(xì)胞結(jié)構(gòu)物等。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑含有上述添加劑、其它的脂質(zhì)代謝改善藥等時，作為有效成分的乳酸菌的菌體破壞物的含量根據(jù)其劑型而異，但是按破壞處理前的乳酸菌的量計，通常處于0. 0001 99質(zhì)量％、優(yōu)選0. 001 80質(zhì)量％、更優(yōu)選0. 001 75質(zhì)量％的范圍內(nèi)，優(yōu)選形成可以管理每一天的給予量從而可以攝取有效成分的期望攝取量的方式。另夕卜，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑中含有的乳酸菌的菌體破壞物按破壞前的乳酸菌數(shù)計約IO7個/g 約IO12個/g,優(yōu)選約IO8個/g 約IO12個/g。作為可以添加或配合到本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑中的其它的脂質(zhì)代謝改善藥沒有特別限定，可列舉出降脂藥(他汀系藥物、貝特系藥物、二十碳五烯酸等)、維生素劑(煙酸、維生素E等)。進(jìn)而，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑中可以共存藥物、飲食品、飼料的制備中使用的各種添加劑、其它各種的物質(zhì)。作為這種物質(zhì)、添加劑,可列舉出各種油脂(例如大豆油、玉米油、紅花油、橄欖油等植物油，牛脂、沙丁魚油等動物油脂)、生藥(例如蜂王漿、人參等)、氨基酸(例如谷酰胺、半胱氨酸、亮氨酸、精氨酸等)、多元醇(例如乙二醇、聚乙二醇、丙二醇、甘油，山梨醇、赤蘚醇、木糖醇、麥芽糖醇、甘露醇等糖醇)、天然高分子(例如阿拉伯膠、瓊月旨、水溶性玉米纖維、明膠、黃原膠、酪蛋白、面筋或面筋水解物、卵磷脂、淀粉、糊精等)、維生素(例如維生素C、維生素B族等)、礦物質(zhì)(例如鈣、鎂、鋅、鐵等)、食物纖維(例如甘露聚糖、果膠、半纖維素等)、表面活性劑(例如甘油脂肪酸酯、脫水山梨糖醇脂肪酸酯等)、純化水、賦形劑(例如葡萄糖、玉米淀粉、乳糖、糊精等)、穩(wěn)定劑、PH調(diào)節(jié)劑、抗氧化劑、甜味劑、呈味成分、酸化劑、著色劑和香料等。

另外，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑中作為上述有效成分以外的功能性成分或添加劑例如可以配合牛磺酸、谷胱甘肽、肉毒堿、肌酸、輔酶Q、葡糖醛酸、葡糖醛酸內(nèi)酯、辣椒萃取物、生姜萃取物、可可萃取物、巴西可可萃取物、藤黃萃取物、茶氨酸、Y -氨基丁酸、辣椒素、辣椒素酯、各種有機(jī)酸、黃酮類、多酚類、兒茶素類、黃嘌呤衍生物、低聚果糖等難消化性低聚糖、聚乙烯基吡咯烷酮等。這些添加劑的配合量根據(jù)添加劑的種類和應(yīng)需的攝取量適當(dāng)決定，作為有效成分的乳酸菌的菌體破壞物的含量根據(jù)其劑型而異，但是期望按破壞處理前的乳酸菌的量計配合通常處于0. 0001 99質(zhì)量％、優(yōu)選0. 001 80質(zhì)量％、更優(yōu)選0. 001 75質(zhì)量％的范圍內(nèi)的量。給予或攝取本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑的對象為脊椎動物，具體而言，哺乳動物例如人、靈長類(猴、黑猩猩等)、家畜動物(牛、馬、豬、綿羊等)、寵物用動物(狗、貓等)、實驗動物(小鼠、大鼠等)以及爬蟲類和鳥類。特別是已經(jīng)表現(xiàn)出脂質(zhì)代謝異常的人、由于遺傳或環(huán)境性因素導(dǎo)致脂質(zhì)代謝異常風(fēng)險高的人、或者以前患有脂質(zhì)代謝異常的人作為對象是優(yōu)選的。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑的給予或攝取量根據(jù)對象的年齡及體重、給予-攝取路徑、給予-攝取次數(shù)、脂質(zhì)代謝異常的嚴(yán)重程度等而異，可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員的酌情處理，在寬范圍內(nèi)變更以可以達(dá)成目的的作用。例如經(jīng)口給予或攝取時，脂質(zhì)代謝改善劑中含有的乳酸菌的菌體破壞物按破壞處理前的乳酸菌的量計，每Ikg體重通常給予約IO6個 約IO12個、優(yōu)選約IO7個 約IO11個。對乳酸菌的菌體破壞物的含有比率沒有特別限定，根據(jù)制備的容易性、優(yōu)選的一天給予量等來適當(dāng)調(diào)節(jié)即可。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑由于安全性高而可以進(jìn)一步增加攝取量。每一天的攝取量可以I次攝取或分為數(shù)次攝取。另外，對其給予或攝取的頻率沒有特別限定，可以根據(jù)給予-攝取路徑、對象的年齡及體重、脂質(zhì)代謝異常的嚴(yán)重程度、由于脂質(zhì)代謝異常所導(dǎo)致的疾病或障礙的發(fā)病的有無、目的的效果(治療、預(yù)防等)等各種條件適當(dāng)選擇。對本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑的給予-攝取路徑?jīng)]有特別限定，可列舉出經(jīng)口給予或攝取、或者非經(jīng)口給予(例如直腸內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)給予)等。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑特別優(yōu)選經(jīng)口給予或攝取。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑具有對象的血脂的降低作用、皮下脂肪和/或內(nèi)臟脂肪的代謝促進(jìn)作用、體重增加抑制作用。具體而言，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑具有通過降低對象中的總膽固醇、LDL-膽固醇、中性脂肪、動脈硬化指數(shù)和/或內(nèi)臟脂肪，和/或升高HDL-膽固醇和/或脂聯(lián)素，而使脂質(zhì)代謝正?；淖饔?。因此，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑對于與脂質(zhì)代謝相關(guān)的疾病或障礙，表現(xiàn)出優(yōu)異的預(yù)防、改善和治療效果。另外，安全性高，容易長期連續(xù)攝取。因此，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑可以添加到飲食品和飼料中來使用。如上所述，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑可以作為藥物組合物或添加到功能性飲食品中來用于脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙的預(yù)防或治療中。本發(fā)明中“脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙”指的是由于脂質(zhì)代謝的異常所導(dǎo)致的疾病、障礙、癥狀或綜合征。脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙例如包括動脈硬化、高脂血癥、脂肪肝、肥胖癥、代謝綜合征、糖尿病以及心血管系統(tǒng)疾病(心肌梗塞、腦梗塞等)，但是不限`于此。另外，本發(fā)明中脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙的“預(yù)防或治療”指的是對于動物、人等對象，脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙的發(fā)病的預(yù)防、脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙的發(fā)病后(病態(tài))的治療，也指的是延遲或抑制脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙的發(fā)病。另外，還包括防止由于脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙而發(fā)生的疾病或障礙的發(fā)病。例如為了預(yù)防而使用本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑時，優(yōu)選對具有成為脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病-障礙的原因的遺傳性主要原因、環(huán)境性主要原因或其它的異常的對象，或者以前存在脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病-障礙的發(fā)病經(jīng)歷的對象給予或使其攝取。作為通過本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑治療或預(yù)防的對象的脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙可以為單獨(dú)的疾病或障礙、并發(fā)的疾病或障礙、或者還并發(fā)上述以外的其它疾病的疾病或障礙。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑還可以與其它的藥物、治療或預(yù)防方法等并用。這種其它的藥物可以與本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑一起形成一種制劑，或者形成不同的制劑同時或隔開間隔給予。如上所述，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑含有具有脂質(zhì)代謝改善作用且具有食用經(jīng)驗的乳酸菌，安全性高。進(jìn)而，由于即使添加到各種飲食品中也不會阻礙飲食品自身的風(fēng)味，因此可以添加到各種飲食品中連續(xù)地攝取，可以期待脂質(zhì)代謝的改善。
本發(fā)明的飲食品含有上述脂質(zhì)代謝改善劑。本發(fā)明中飲食品還包含飲料。含有本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑的飲食品除了通過脂質(zhì)代謝改善作用實現(xiàn)健康增進(jìn)的健康飲食品、功能性飲食品、特定保健用飲食品等之外，還含有可以配合上述脂質(zhì)代謝改善劑的全部飲食品。作為含有本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑的飲食品，特別優(yōu)選為功能性飲食品。本發(fā)明的“功能性飲食品”指的是對生物體具有一定的功能性的飲食品，例如包含包括特定保健用飲食品(含有帶條件的專用保健食品[特定保健用食品])及營養(yǎng)功能飲食品在內(nèi)的保健功能飲食品、特別用途飲食品、營養(yǎng)輔助飲食品、健康輔助飲食品、補(bǔ)充劑(例如片劑、包衣片、糖衣片、膠囊和液劑等各種劑型的補(bǔ)充劑)和美容飲食品(例如減肥飲食品)等全部所謂健康飲食品。另外，本發(fā)明的功能性飲食品包含適用基于CodeX(FA0/WH0聯(lián)合食品標(biāo)準(zhǔn)委員會)的食品標(biāo)準(zhǔn)的健康聲明(Health claim)的健康飲食品。作為飲食品的具體例，可列舉出經(jīng)管經(jīng)腸營養(yǎng)劑等流食、片劑型點心、片劑、咀嚼片、片劑、粉劑、散劑、膠囊劑、顆粒劑和飲劑等制劑方式的健康飲食品和營養(yǎng)輔助飲食品，綠茶、烏龍茶和紅茶等茶飲料、清涼飲料、果凍飲料、運(yùn)動飲料、乳飲料、碳酸飲料、蔬菜飲料、果汁飲料、發(fā)酵蔬菜飲料、發(fā)酵果汁飲料、發(fā)酵乳飲料(酸奶等)、乳酸菌飲料、乳飲料(咖啡牛奶、水果牛奶等)、粉末飲料、可可飲料、牛奶以及純凈水等飲料，奶油、果醬、撒在米飯上食用的調(diào)味食品和人造奶油等涂抹類，蛋黃醬、起酥油、乳蛋糕乳脂、調(diào)味汁類、面包類、米飯類、面類、面食類、味噌汁、豆腐、酸奶、湯或調(diào)味汁類、點心(例如餅干或小甜餅干類、巧克力、糖果、蛋糕、冰激凌、口香糖、片劑)等。本發(fā)明的飲食品可以如下制備除了配合上述脂質(zhì)代謝改善劑之外，還配合該飲食品的制備中使用的其它食品原材料、各種營養(yǎng)素、各種維生素、礦物質(zhì)、食物纖維、各種添加劑(例如呈味成分、甜味劑、有機(jī)酸等酸味劑、穩(wěn)定劑、香料)等，根據(jù)常規(guī)方法來制備。本發(fā)明的飲食品中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以考慮到飲食品的形態(tài)或所要求的味道或食感適當(dāng)規(guī)定脂質(zhì)代謝改善劑的配合量。通常所添加的脂質(zhì)代謝改善劑中的乳酸菌的菌體破壞物的總量按破壞處理前的乳酸菌的量計，通常為0. 0001 99質(zhì)量％、優(yōu)選0. 001 80質(zhì)量％、更優(yōu)選0. 001 75質(zhì)量％的脂質(zhì)代謝改善劑的配合量是合適的。由于本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑安全性高，從而可以進(jìn)一步增加其在飲食品中的配合量。優(yōu)選形成可以管理每一天的攝取量從而可以飲食脂質(zhì)代謝改善劑的期望攝取量的方式。如此通過以可以管理本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑的期望攝取量的方式飲食本發(fā)明的飲食品，提供使用該飲食品的對脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙的預(yù)防方法和改善方法。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員可以利用的任意的適當(dāng)方法而含有在飲食品中。例如可以將本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑制備成液體狀、凝膠狀、固體狀、粉末狀或顆粒狀后，將其配合到飲食品中。另外也可以將本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑直接混合或溶解在飲食品的原料中。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑還可以涂布、覆蓋、浸滲或噴吹到飲食品上。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑可以均勻或不均勻地分散在飲食品中。還可以制備加入有本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑的膠囊等。還可以用可食用薄膜、食用包衣劑等包入本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑。另外，可以向本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑中加入適當(dāng)?shù)馁x形劑等后，成型為片劑等形狀?？梢詫斜景l(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑的飲食品進(jìn)一步進(jìn)行加工，這種加工品也包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的飲食品的制備中還可以使用飲食品中慣用的各種添加物。作為添加物沒有特別限定，可列舉出發(fā)色劑(亞硝酸鈉等)、著色劑(桅子色素、紅102等)、香料(橙子香料等)、甜味劑(甜葉菊、阿斯巴甜等)、保存劑(乙酸鈉、山梨酸等)、乳化劑(硫酸軟骨素鈉、丙二醇脂肪酸酯等)、抗氧化劑(EDTA 二鈉、維生素C等)、pH調(diào)節(jié)劑(檸檬酸等)、化學(xué)調(diào)料(肌苷酸鈉等)、增稠劑(黃原膠等)、膨松劑(碳酸鈣等)、消泡劑(磷酸鈣)等、粘合劑(多磷酸鈉等)、營養(yǎng)強(qiáng)化劑(鈣強(qiáng)化劑、維生素A等)、賦形劑(水溶性糊精等)等。進(jìn)而，還可以進(jìn)一步添加人參萃取物、刺五加萃取物、桉樹萃取物、杜仲茶萃取物等功能性原材料。本發(fā)明的飲食品，由于如上所述具有脂質(zhì)代謝改善作用，對脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙發(fā)揮優(yōu)異的預(yù)防和改善作用，而且安全性高，無需擔(dān)心副作用。另外，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑的風(fēng)味良好，即使添加到各種飲食品中也不會阻礙該飲食品的風(fēng)味，因此所得到的飲食品容易長期連續(xù)攝取，可以期待脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙的優(yōu)異的預(yù)防和改善作用。進(jìn)而，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝改善劑不僅可以配合到人用的飲食品中，還可以配合到家畜、賽馬、寵物等的飼料中。飼料由于除了對象不是人以外與飲食品大致相同，因此涉及上述飲食品的記載對于飼料也可以同樣地適用。以下基于實施例對本發(fā)明進(jìn)行更具體的說明，但是本發(fā)明不被這些實施例所限定。[實施例1]如下制備乳酸菌卩遼淀粉乳桿菌(Lactobacillusamylovorus) CP1563株(FERMBP-11255)和加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)CP3238 株(FERM BP-11256) 卩遼淀粉乳桿菌(Lactobacillusamylovorus) CP1563株由人的幾便、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri) CP3238株由市售的酸奶采集、分離。通過16S rDNA堿基序列分析和表型的觀察，鑒定菌種。需要說明的是，在此所得到的菌株按照布達(dá)佩斯條約的規(guī)定在2010年5月25日保藏在獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利生物保藏中心(郵政編碼305-8566日本茨城縣筑波市東I 丁目I番地I筑波中心中央第6)，分別被賦予保藏號FERMBP-11255和FERMBP-11256。對于乳酸菌，使用自行配置的食品級的乳酸菌培養(yǎng)基在37°C下培養(yǎng)18小時，通過離心分離來收集菌體。使用去離子水洗滌、收集菌體后，再懸浮到適量的水中，在90°C的溫度下進(jìn)行殺菌。將殺菌后的懸浮液在以下的條件下用戴諾磨破碎。使用儀器DYN0-MILL破碎裝置(Mult1-lab 0. 6L、SHINMARU ENTERPRISESCORPORATION)圓周速度14.Om/s處理流速1L/10分鐘處理次數(shù)5次破碎槽溫度15°C使用玻璃珠直徑0. 5mm 0. 4L通過上述破碎(破壞)處理，乳酸菌懸浮液中的菌體的平均長徑縮小到處理前的68%(2. 77 u —1. 89 ii m)。菌體的平均長徑如下測定。將破碎(破壞)或非破碎(非破壞)乳酸菌冷凍干燥粉末5mg懸浮在純水Iml中，使用超聲波儀器USD-5R(AS ONE Corporation)在超聲波(輸出功率240W)下處理2分鐘進(jìn)行分散，制備測定樣品。將該測定樣品10 UL左右固定在使用離子濺射裝置的通過親水化處理(Hitachi High-Technologies Corporation制)進(jìn)行了親水化處理的試樣臺(日新EM株式會社S-KM、￠15 X 14X 6、鋁制)上后，利用離子濺射裝置實施Pt-Pd蒸鍍。蒸鍍處理使用離子灘射裝置 E-1010 (Hitachi High-Technologies Corporation),在祀/Pt-PcU真空度/7Pa、電流/12mA、時間/30s的蒸鍍裝置條件下進(jìn)行。通過掃描電子顯微鏡(SEM)進(jìn)行顯微鏡觀察拍攝，在下述測定條件下進(jìn)行10 20張的圖像拍攝，測定拍攝圖像中的菌體(包含粒狀)100個以上的長徑，算出其平均值作為平均長徑。需要說明的是，落在圖像端部的粒子不作為測定對象。膜樣菌體不作為測定對象。粒狀的菌體作為測定對象?！伴L徑”的測定對拍攝圖像使用圖像分析式粒徑分布軟件來進(jìn)行。由拍攝圖像測定“長徑”的分析方法中，測定與粒子(菌體)外接的面積最小的外接長方形的短邊、長邊中的長邊的長度，將其作為長徑。<測定條件>裝置條件加速電壓(ACCELERATINGVOLTAGE) /5kv, ff. D. /5. Omm倍率X5000圖像信號SE(二次電子(SECONDARYELECTRON))。破碎處理前和破碎處理后的菌體的顯微鏡照片分別如圖1的A和B所示。如圖1的B所示，通過破碎處理，得到完全斷裂的菌體(左)和僅開孔的菌體(右)。破碎后，將懸浮液冷凍干燥，得到破碎乳酸菌冷凍干燥粉末。未破碎菌體的情況(對照)則將殺菌后的液體直接冷凍干燥，得到非破碎乳酸菌冷凍干燥粉末。[比較例]作為比較例，制備專利文獻(xiàn)I所示的乳酸菌的有機(jī)溶劑抽提物。專利文獻(xiàn)I中記載了一種乳酸菌的有機(jī)溶劑抽提物，其如下制備向乳酸菌的干燥菌體中加入有機(jī)溶劑，進(jìn)行超聲波處理后，將其上清濃縮干固，向干固物中加入有機(jī)溶劑而制備。向乳酸菌曬淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus)CP1563株的冷凍干燥粉末IOg中加入IOOml的乙醇，超聲波處理5分鐘后，將其 離心分離(7500 X g、4°C、15分鐘)，由此回收上清。將所得到的上清用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮干固，向干固物中加入乙醇，得到Ig的抽提物。重復(fù)同樣的操作，得到總計15g的抽提物。[實施例2]本實施例中驗證乳酸菌對食物誘導(dǎo)性肥胖模型小鼠的效果。首先按照表I所示的配方混合原料，制備配合乳酸菌的高脂肪食物。[表 I]
權(quán)利要求
1.ー種脂質(zhì)代謝改善劑，其含有乳酸菌的菌體破壞物作為有效成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，菌體破壞物中的菌體的平均長徑為破壞前的O 90%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，菌體破壞物中的菌體的平均長徑為 0 2. 5 u m。
4.根據(jù)權(quán)利要求1 3中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，菌體破壞物通過破碎、藥品處理或溶解來得到。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 4中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其中，乳酸菌為選自由噬淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus) CP1563株、卩遼淀粉乳桿菌CP1562株、加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri) CP3238株和它們的突變株組成的組中的一種或兩種以上。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 5中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其具有使選自由總膽固醇、LDL-膽固醇、中性脂肪、動脈硬化指數(shù)和內(nèi)臟脂肪組成的組中的至少ー種降低的作用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1 6中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其具有使選自由HDL-膽固醇和脂聯(lián)素組成的組中的至少ー種升高的作用。
8.根據(jù)權(quán)利要求1 7中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其用于動脈硬化、高脂血癥、脂肪肝、肥胖癥、代謝綜合征、糖尿病、心肌梗塞或腦梗塞的預(yù)防或治療。
9.ー種飲食品、飼料或藥品，其添加有權(quán)利要求1 8中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑。
10.ー種功能性飲食品的制備方法，該方法包括制備權(quán)利要求1 8中任一項所述的脂質(zhì)代謝改善劑的エ序和將該脂質(zhì)代謝改善劑配合到飲食品中的エ序。
11.一種增強(qiáng)乳酸菌的脂質(zhì)代謝改善作用的方法，其特征在于，該方法包括破壞乳酸菌的エ序。
12.—種改善對象的脂質(zhì)代謝的方法，該方法包括向?qū)ο蠼o予乳酸菌的菌體破壞物。
13.一種用于治療或預(yù)防脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病或障礙的藥物組合物，其含有乳酸菌的菌體破壞物和藥學(xué)上可接受的載體。
14.ー種脂質(zhì)代謝改善劑的制備方法，該方法包括破壞乳酸菌的エ序和將具有脂質(zhì)代謝改善作用的菌體破壞物制劑化的エ序。
15.一種噬淀粉乳桿菌CP1563株、噬淀粉乳桿菌CP1562株或它們的突變株。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的突變株，其菌體破壞物具有脂質(zhì)代謝改善作用。
全文摘要
本發(fā)明提供用于改善脂質(zhì)代謝的有效的手段和方法、以及用于治療或預(yù)防與脂質(zhì)代謝異常相關(guān)的疾病或障礙的手段和方法。具體而言，本發(fā)明涉及含有乳酸菌的菌體破壞物作為有效成分的脂質(zhì)代謝改善劑、以及特征在于包括破壞乳酸菌的工序的增強(qiáng)乳酸菌的脂質(zhì)代謝改善作用的方法。
文檔編號A23L1/30GK103037878SQ20118002835
公開日2013年4月10日 申請日期2011年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月8日
發(fā)明者仲村太志, 石田優(yōu), 藤原茂 申請人:可爾必思株式會社