專利名稱：：制備耐貯存益生菌食品的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明概括地涉及制備包含活益生微生物的耐貯存(shelfstable)食品的方法。
背景技術(shù)：
：益生微生物(益生菌)是通過增加人腸道中的有益菌而有益地改善宿主健康的微生物。確信的是，益生菌通過抑制致病菌、預(yù)防腸疾病、改善乳糖不耐癥人群的乳糖利用并有助于控制血清膽固醇水平來改善健康(Adamiec,2009)。益生微生物(還稱為益生菌細(xì)胞)通常包含在乳制品中，所述乳制品具有相對短的保質(zhì)期并需要保持冷藏。例如，目前益生菌通常被添加到發(fā)酵乳(fermentedmilks)和酸乳酪(yoghurts)中。然而，對在干燥或半干耐貯存食品中的益生菌遞送存在越來越多的關(guān)注。干燥食品在室溫下通常具有6個月至I年的保質(zhì)期。然而，在這些條件下，益生菌通常在數(shù)月內(nèi)失去它們的活力(Ubbink&Kruger,2006)并在幾周內(nèi)降低至在功能上無意義的水平。當(dāng)在環(huán)境條件下貯存時，還難以在半干食品中保持益生菌的活力(Lee&Sakninen,2009)。在耐貯存食品中的益生菌的存活具有高商業(yè)重要性。因此,研究人員在產(chǎn)品加工、貯存和胃滯留期間保持益生菌活力的嘗試中，試圖使用各種不同的微囊化技術(shù)和多種食品成分來包囊益生菌(AnalandSingh,2007)。還已使用了各種干燥方法。然而，這些技術(shù)已產(chǎn)生不同的結(jié)果，并且沒有開發(fā)出能夠在室溫下將益生菌活力保持對于在商業(yè)上用于耐貯存食品而言足夠長的時間的方法。因此，本領(lǐng)域需要提供用于獲得在室溫下保持益生微生物活力或至少為公眾提供有用選擇的產(chǎn)品的方法。發(fā)明概述本發(fā)明涉及制備直接用作食品或用作食品成分的耐貯存的活益生微生物的方法。第一方面，本發(fā)明提供制備可食用(consumable)包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物(agglomeration)的方法，其包括:a)用滲透壓休克(osmoticallyshocked)的益生微生物的懸浮液至少部分地包覆包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒；以及b)干燥所述包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物；其中所述可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物包含活益生微生物。第二方面，本發(fā)明提供制備可食用包衣顆粒或其團(tuán)聚物的方法，其包括:a)用滲透壓休克的益生微生物的懸浮液至少部分地包覆包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒；以及b)干燥所述包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物；其中所述可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物包含活益生微生物，并且其中使用流化床設(shè)備進(jìn)行步驟a)和b)。第三方面，本發(fā)明提供制備可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物的方法，其包括:a)用滲透壓休克的益生微生物的懸浮液至少部分地包覆包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒；以及b)干燥所述包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物；并且其中所述干燥的包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物包含至少IO7Cfu/克的活益生微生物；并且其中所述活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于21ogcfu/克。在一實施方案中，所述干燥的包衣顆粒的團(tuán)聚物包含包埋的益生微生物。第四方面，本發(fā)明提供通過本發(fā)明方法制備的可食用包衣顆粒或其團(tuán)聚物。第五方面，本發(fā)明提供可食用顆粒和/或所述顆粒的團(tuán)聚物，所述顆粒包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪，并包覆有滲透壓休克的益生微生物。第六方面，本發(fā)明提供可食用產(chǎn)品，其包含本發(fā)明的可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物。第七方面，本發(fā)明提供藥物組合物，其包含本發(fā)明的可食用包衣顆粒或其團(tuán)聚物以及藥學(xué)可接受的賦形劑。在上述方面中:在一實施方案中，細(xì)菌選自干酪乳桿菌(L.casei)CRL431(ATCC編號55344)、干酪乳桿菌ATCC393、嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)ATCC4356、鼠李糖乳桿菌(L.rbamnosus)ATCC53103和乳糖雙歧桿菌(B.lactis)BB12。在另一實施方案中，所述包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒包括乳粉(dairypowder),優(yōu)選奶粉(milkpowder)在另一實施方案中，在20°C至50°C下干燥所述包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物。在該說明書中，當(dāng)引用專利說明書、其它外部文獻(xiàn)或其它信息來源時，通常是為了提供背景來討論本發(fā)明特征的目的。除非另外具體指出，對此類外部文獻(xiàn)的參考不應(yīng)解釋為承認(rèn)此類文獻(xiàn)或其它信息來源在任何范圍內(nèi)為現(xiàn)有技術(shù)或形成本領(lǐng)域公知常識的一部分。附圖簡述圖1為示出可用于本發(fā)明的頂噴霧流化床團(tuán)聚物干燥系統(tǒng)的示意過程的示意圖。圖2為示出干酪乳桿菌CRL431細(xì)胞在MRS肉湯中的生長曲線的圖。在圖上標(biāo)示的值為在每一時間點的3個樣品的平均OD值。圖3為示出與冷凍干燥的干酪乳桿菌CRL431培養(yǎng)物(■)相比，當(dāng)用熱(.)、滲透()、復(fù)合應(yīng)激(X)和無應(yīng)激的對照(▲)使細(xì)胞預(yù)適應(yīng)時，在25°C下貯存48周的包埋干酪乳桿菌CRL431細(xì)胞的穩(wěn)定性的圖。圖4為示出當(dāng)包埋入復(fù)合基質(zhì)中并在壓縮干糧(cerealbars)(■)和巧克力醬(chocolatespreads)(▲)中強化時益生菌干酪乳桿菌CRL431的穩(wěn)定性的圖。圖5為示出在受控干燥之前和之后藻酸鹽膠囊的細(xì)胞負(fù)載的圖。在所有四個濕樣品中的初始細(xì)胞計數(shù)高于10.0Ologcfu/克。圖6為示出當(dāng)在藻酸鹽中包囊并在25°C下貯存4周時干酪乳桿菌CRL431活力的圖。圖7為示出當(dāng)在藻酸鹽中包囊并進(jìn)一步包覆在脂質(zhì)中并在25。C下貯存4周時干酪乳桿菌CRL431活力的圖。圖8是一系列示出在25°C下長達(dá)8個月的貯存之后的細(xì)胞活力的圖。將嗜酸乳桿菌ATCC4356(圖8A)、鼠李糖乳桿菌ATCC53103(圖8B)、干酪乳桿菌ATCC393(圖8C)和乳糖雙歧桿菌BB12(圖8D)的滲透應(yīng)激(osmoticallystressed)的細(xì)胞(■)與無應(yīng)激的細(xì)胞()進(jìn)行對比。由(▲)示出冷凍干燥的細(xì)胞。圖9為示出在25°C下貯存12周的包埋的干酪乳桿菌CRL431的穩(wěn)定性的圖。該圖示出與使用噴霧干燥(X)和冷凍干燥O而干燥的滲透應(yīng)激的細(xì)胞相比，用新技術(shù)()滲透應(yīng)激和包囊的干酪乳桿菌細(xì)胞的活力。對照樣品(.)表示相同細(xì)菌的商購冷凍干燥的顆粒。圖10為示出與全脂奶粉(▲)和脫脂奶粉(■)相比，本發(fā)明的益生菌成分()的粒度分布的圖。圖11為示出與全脂奶粉(▲)和脫脂奶粉()相比，本發(fā)明的益生菌成分(■)的流動性的圖。圖12為示出在添加和不添加本發(fā)明的益生菌成分的情況下麥乳精(maltedmilk)飲料的感官性質(zhì)的圖。圖13為示出與在乳蛋白分離物中包囊的滲透應(yīng)激的干酪乳桿菌細(xì)胞(■)和在葡萄糖中包囊的滲透應(yīng)激的干酪乳桿菌細(xì)胞(▲)相比，本發(fā)明產(chǎn)品()的貯存活力的圖。發(fā)明詳述本發(fā)明的方法可用于制備包含活益生微生物的可食用顆粒及其團(tuán)聚物。這些可食用顆粒和團(tuán)聚物可用于制備可食用產(chǎn)品，例如食品、飲料、飲食補充劑和營養(yǎng)保健品。所述微生物在可食用產(chǎn)品中保持相對長時間的活力，使得該可食用產(chǎn)品就益生微生物而言為“耐貯存的”。因為在本發(fā)明方法的過程中將益生微生物摻入包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的包衣顆?；蝾w粒團(tuán)聚物中或其上，因此所述益生微生物保持活力。因此，本發(fā)明的方法制備可在含益生菌的可食用食品的生產(chǎn)中用作成分的可食用顆粒，所述食品無需冷藏而保持益生微生物的活力。定義如本說明書所用的術(shù)語“包含”表示“至少部分由…組成”。當(dāng)解釋本說明書中包括該術(shù)語的表述時，在每一表述或權(quán)利要求中以該術(shù)語為前序的特征均需要存在，但其它特征也可存在。相關(guān)的術(shù)語如“包括”以相同方式解釋。術(shù)語“包衣顆?！卑ㄒ巡糠职碌念w粒，但不包括形成液態(tài)懸浮液部分的顆粒。換言之，顆粒為所得產(chǎn)品提供了形狀。術(shù)語“至少部分地包覆”表示待包衣顆粒與一些細(xì)菌懸浮液有接觸。顆?？梢允?，但不必是被細(xì)菌懸浮液完全覆蓋的。如本說明書中所用的術(shù)語“可食用產(chǎn)品”表示對人和/或動物的食用而言是安全的產(chǎn)品。其可以是與水、奶、果汁或成為飲料的任意其它液體混合的食品或產(chǎn)品。其還可以是飲食補充劑或營養(yǎng)保健品。用于本發(fā)明方法的益生微生物聯(lián)合國糧食和農(nóng)業(yè)組織(FAO)和世界衛(wèi)生組織(WHO)將益生微生物定義為“當(dāng)以足量方式給予時為宿主提供健康益處的活微生物”。包含至少IO6-1O7Cfu/克的產(chǎn)品被認(rèn)為提供了健康益處(FA0/WH0，2001)。因此，本發(fā)明可使用的益生菌包括已被確定為對宿主具有有益作用的任何微生物，并可以包括尚未被確認(rèn)為具有有益宿主作用的菌株?？墒秤冒骂w?；蚱鋱F(tuán)聚物可包含來自一種或多種株、種或?qū)俚囊嫔⑸?。已知諸如乳酸菌和雙歧桿菌的細(xì)菌可用作益生菌，但諸如某些種類的酵母的其它微生物也可用于本發(fā)明的方法。例如，可用于本發(fā)明的益生菌株可以選自:酵母，例如酵母菌屬(Saccharomyce)、德巴利酵母屬(Debaromyces)、多形假絲酵母(CandidawPichia)和球擬酵母屬(Torulopsis);霉菌，例如曲霉菌屬(Aspergillus)、根霉菌屬(Rhizopus)、毛霉菌屬(Mucor)、青霉菌屬(Penicillium)和球擬酵母屬(Torulopsis);以及諸如以下屬的細(xì)菌:雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)、擬桿菌屬(Bacteroides)、梭菌屬(Clostridium)、梭桿菌屬(Fusobacterium)、蜜蜂球菌屬(Melissococcus)、丙酸桿菌屬(Propionibacterium)、鏈球菌屬(Streptococcus)、腸球菌屬(Enterococcus)、乳球菌屬(Lactococcus)、考克氏菌屬(Kocuriaw)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、消化鏈球菌屬(Peptostrepococcus)、芽抱桿菌屬(Bacillus)、片球菌屬(Pediococcus)、微球菌屬(Micrococcus)、明串珠菌屬(Leuconostoc)、魏斯氏菌屬(Weissella)、氣球菌屬(Aerococcus)、酒球菌屬(Oenococcus)和乳桿菌屬(Lactobacillus)，或它們的混合物。在一實施方案中，用于本發(fā)明的益生微生物選自:黑曲霉(AspergiIIusniger)、米曲霉(A.0ryzae)、凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)、遲緩芽孢桿菌(B.1entus)、地衣芽抱桿菌(B.1icheniformis)、馬鈴薯桿菌(B.mesentericus)、短小芽孢桿菌(B.pumilus)、枯草桿菌(B.subtilis)、納豆芽孢桿菌(B.natto)、嗜淀粉擬桿菌(Bacteroidesamylophilus)、多毛擬桿菌(Bac.capiI1sus)、棲瘤胃擬桿菌(Bac.ruminocola)、豬擬桿菌(Bac.suis)、青春雙歧桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)、動物雙歧桿菌(B.animalis)、短雙歧桿菌(B.breve)、兩岐雙歧桿菌(B.bifidum)、嬰兒雙歧桿菌(B.1nfiantis)、乳糖雙歧桿菌(B.lactis)、長雙歧桿菌(B.1ongum)、假長雙歧桿菌(B.pseudolongum)、嗜熱雙歧桿菌(B.thermophilum)、Candidapintolepesi1、肉毒梭菌(Clostridiumbutyricum)、乳脂腸球菌(Enterococcuscremoris)、雙醋酸乳腸球菌(E.diacetylactis)、屎腸球菌(E.faecium)、中間型腸球菌(E.1ntermedius)、乳酸腸桿菌(E.lactis)、蒙氏腸球菌(E.muntdi)、嗜熱腸球菌(E.thermophiIus)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、脆壁克魯維酵母(Kluyveromycesfragilis)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)、食品乳桿菌(L.alimentarius)、嗷淀粉乳桿菌(L.amylovorus)、卷曲乳桿菌(L.crispatus)、短乳桿菌(L.brevis)、干酪乳桿菌(L.casei)、彎曲乳桿菌(L.curvatus)、纖維二糖乳桿菌(L.cel1biosus)、德氏乳桿菌保加利亞亞種(L.delbrueckiiss.bulgaricus)、香腸乳桿菌(L.farciminis)、發(fā)酵乳桿菌(L.fermentum)、加氏乳桿菌(L.gasseri)、鼠李糖乳桿菌GG株(L.GG)、瑞士乳桿菌(L.helveticus)、乳酸乳桿菌(L.lactis)、胚芽乳桿菌(L.piantarum)、保加利亞乳桿菌(L.bulgaricus)、約翰遜乳桿菌(L.johnsonii)、羅伊乳桿菌(L.reuteri)、鼠李糖乳桿菌(L.rhamnosus)、清酒乳桿菌(L.sakei)、唾液乳桿菌(L.salivarius)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、腸膜樣明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)>啤酒片球菌(P.cereviseae(有害片球菌(damnosus)))、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、戍糖片球菌(P.pentosaceus)、費氏丙酸桿菌(Propionibacteriumfreudenreichii)>謝曼丙酸桿菌(Prop,shermanii)>釀酒酵母(Saccharomycescereviseae)、肉葡萄球菌(Staphylococcuscarnosus)、木糖葡萄球菌(Staph,xylosus)、嬰兒鏈球菌(Streptococcusinfantarius)、唾液鏈球菌嗜熱亞種(Strep,salivariusss.thermophilus)、嗜熱鏈球菌(Strep,thermophilus)、乳酸鏈球菌(Strep,lactis)以及它們的混合物。在另一實施方案中，所述益生微生物選自:短雙歧桿菌R070、短雙歧桿菌株優(yōu)格(yakult)、乳糖雙歧桿菌Bbl2、長雙歧桿菌R023、兩岐雙歧桿菌R071、嬰兒雙歧桿菌R033、長雙歧桿菌BB536、乳糖雙歧桿菌BB12、乳糖雙歧桿菌HN019(HOWRU)、長雙歧桿菌SBT-2928以及它們的混合物。在另一實施方案中，所述益生微生物選自:胚芽乳桿菌299v、嗜酸乳桿菌BG2R)4、嗜酸乳桿菌INT-9、胚芽乳桿菌ST31、羅伊乳桿菌、約翰遜乳桿菌LA1、嗜酸乳桿菌NCFB1748、干釀乳桿菌代田株(LactobacilluscaseiShirota)、嗜酸乳桿菌NCFM、嗜酸乳桿菌DDS-1、德氏乳桿菌德氏亞種(Lactobacillusdelbrueckiisubspeciesdelbrueckii)、德氏乳桿菌保加利亞亞種2038型、嗜酸乳桿菌SBT-2062、短乳桿菌、唾液乳桿菌UCC118、干酪乳桿菌431、干酪乳桿菌ATCC393、嗜酸乳桿菌ATCC4356、鼠李糖乳桿菌ATCC53103、胚芽乳桿菌ATCC8014、胚芽乳桿菌LP293V、副干酪乳桿菌副干酪亞種F19(LactobacillusparacaseisubspparacaseiF19),以及它們的混合物。在另一實施方案中，所述益生微生物選自:乳酸乳球菌乳脂亞種(Lactococcuslactissubspeciescremoris)(乳脂鏈球菌)、乳酸乳球菌乳酸亞種(Lactococcuslactissubspecieslactis)NCD0712、乳酸乳球菌乳酸亞種NIAI527、乳酸乳球菌乳酸亞種NIAI1061、乳酸乳球菌乳酸亞型雙醋酸乳變種(Lactococcuslactissubspecieslactisbiovardiacetylactis)NIAI8W、乳酸乳球菌乳酸亞型雙醋酸乳變種ATCC13675，以及它們的混合物。在另一實施方案中，所述益生微生物選自:唾液鏈球菌嗜熱亞種(Streptococcussalivarussubspeciesthermophilus)1131型、屎腸球菌SF68、鮑氏酵母菌(Saccharomycesboulardii)(麥酒酵母菌(SaccharomycescerevisiaeHansen)CBS5296)，以及它們的混合物。在一實施方案中，所述益生微生物選自:約翰遜乳桿菌、干酪乳桿菌、乳糖雙歧桿菌、副干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、胚芽乳桿菌、嗜熱鏈球菌，以及它們的混合物。在一實施方案中，所述益生微生物為細(xì)菌。在另一實施方案中，所述細(xì)菌為乳桿菌屬、雙歧桿菌或其混合物。在一實施方案中，所述細(xì)菌選自干酪乳桿菌CRL431(ATCC編號55344)、干酪乳桿菌ATCC393、嗜酸乳桿菌ATCC4356、鼠李糖乳桿菌ATCC53103和乳糖雙歧桿菌BB12。在一實施方案中，所述益生微生物為干酪乳桿菌431。制備益生微生物的方法是本領(lǐng)域中公知的。例如，可從供應(yīng)商處購得益生菌的培養(yǎng)物，然后可將其懸浮在合適的肉湯例如MRS肉湯中并在其中生長。可通過測量懸浮液的UV吸光度來監(jiān)控細(xì)菌的生長?？稍谌魏芜m于微生物生長的液體生長培養(yǎng)基中制備用于本發(fā)明的益生微生物。這樣的培養(yǎng)基對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是已知的。例如，液體生長培養(yǎng)基可以是LB肉湯或MRS肉湯。當(dāng)微生物為乳酸菌時，優(yōu)選乳清或奶基生長培養(yǎng)基(例如補充有礦物質(zhì)和氮源的干酪乳清或脫脂奶)。滲透壓休克的微生物的懸浮液在本發(fā)明的方法中，將益生微生物在與包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒結(jié)合之前滲透壓休克。本文所用的術(shù)語“滲透壓休克”和“滲透應(yīng)激”是指細(xì)胞周圍的溶質(zhì)濃度突然變化，導(dǎo)致穿過細(xì)胞膜的水的移動快速變化。在高濃度溶質(zhì)(例如鹽)的情況下，水通過滲透而被抽出細(xì)胞。滲透壓休克微生物細(xì)胞的方法是本領(lǐng)域中已知的，并且任何方法可用于本發(fā)明。在一實施方案中，將益生微生物通過增加益生微生物的懸浮液的滲透性而滲透壓休克。在一實施方案中，通過增加益生微生物的懸浮液的溶質(zhì)濃度而增加滲透性。任何形式的食用鹽均可用于本發(fā)明以滲透壓休克益生微生物。優(yōu)選使用的鹽例如氯化鈉、氯化銨、碳酸氫鈉、氯化鉀、檸檬酸鈉、檸檬酸鉀和氯化鉀。或者，可通過添加其它溶質(zhì)例如無機(jī)鹽、糖衍生物(例如乳糖、葡萄糖、蔗糖或海藻糖)或多元醇化合物(如甘油或山梨醇)來滲透壓休克益生微生物的懸浮液。在一實施方案中，益生微生物的懸浮液的溶質(zhì)濃度增加至約0.2M至約2M的溶質(zhì)。在另一實施方案中，益生微生物懸浮液的溶質(zhì)濃度增加至約0.2M至約IM的溶質(zhì)。在另一實施方案中，益生微生物的懸浮液的溶質(zhì)濃度增加至約0.4M至約0.8M的溶質(zhì)。在一實施方案中，將氯化鈉添加至益生微生物的懸浮液中，以使所述懸浮液包含約0.2M至約IM的氯化鈉，優(yōu)選約0.4M至約0.8M、更優(yōu)選約0.6M的氯化鈉。所述懸浮液通常包含益生微生物在其中生長的培養(yǎng)基。在另一實施方案中，將葡萄糖添加至益生微生物的懸浮液中，以使所述懸浮液包含約0.4M至約2M的葡萄糖，優(yōu)選約0.8M至約1.6M、更優(yōu)選約1.2M的葡萄糖。為了進(jìn)行滲透壓休克過程，可向益生菌細(xì)胞在其中生長的培養(yǎng)基補充溶質(zhì)，然后繼續(xù)細(xì)胞生長。然而，還可將細(xì)胞沉淀(pelleted)，然后重懸浮在新鮮的含滲透壓休克劑的培養(yǎng)基中。如由本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的那樣，所述懸浮液必須在其被滲透壓休克之前包含相對高濃度的益生微生物。優(yōu)選地，將濃度為0.2M至1.5M的鹽、糖衍生物或多元醇化合物摻入益生菌生長培養(yǎng)基中以滲透壓休克培養(yǎng)物。0.4M至0.8M、例如0.6M的濃度是優(yōu)選的。優(yōu)選地，不將益生微生物的懸浮液滲透壓休克，直至其達(dá)到106-1012cfu/ml培養(yǎng)基、更優(yōu)選106-109cfu/ml的濃度。在一實施方案中，當(dāng)益生微生物達(dá)到106cfu/ml培養(yǎng)基的濃度時，將懸浮液滲透壓休克。在一些實施方案中，當(dāng)懸浮液達(dá)到ΙΟ7、108、109、101(ι、10η或1012cfu/ml培養(yǎng)基的濃度時，將其滲透壓休克。滲透壓休克益生微生物的方法不導(dǎo)致活細(xì)胞的顯著減少。因此，在用于本發(fā)明方法的滲透壓休克的懸浮液(包覆懸浮液)中的益生菌細(xì)胞的濃度優(yōu)選為106cfu/ml至1012cfu/mL.更優(yōu)選地,所述包覆懸浮液包含108cfu/ml至1012cfu/ml。最優(yōu)選地,所述包覆懸浮液包含10ncfu/ml至1012cfu/ml。在一實施方案中，益生微生物的懸浮液具有約6至7的pH。在一實施方案中，將益生微生物的懸浮液滲透壓休克2至10小時。在另一實施方案中,將益生微生物的懸浮液滲透壓休克4至8小時。除了將益生菌細(xì)胞滲透壓休克之外，在一些實施方案中，可將細(xì)胞熱激(heatshock)。用于本發(fā)明方法的包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒用于本發(fā)明方法的顆粒必須包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪。用于本發(fā)明方法的顆粒通常包含可食用物質(zhì)的粉末。在一實施方案中，所述顆粒包含3wt%的碳水化合物、3wt%的蛋白質(zhì)和至少3wt%的脂肪。在一實施方案中，所述顆粒包含至少5wt%、10wt%、15wt%、20wt%、25wt%、30wt%、35wt%、40wt%、45wt%、50wt%、55wt%、60wt%、65wt%或70wt%的碳水化合物。在一實施方案中，所述顆粒包含至少5wt%、10wt%、15wt%、20wt%、25wt%、30wt%、35wt%>40wt%>45wt%>50wt%>55wt%>60wt%>65wt%或70wt%的蛋白質(zhì)。在一實施方案中，所述顆粒包含至少5wt%、10wt%、15wt%、20wt%、25wt%、30wt%、35wt%、40wt%、45wt%、50wt%、55wt%、60wt%、65wt%或70wt%的脂肪。在一實施方案中，所述顆粒包含1-60重量％的脂肪、5-80重量％的蛋白質(zhì)、5_80重量％的碳水化合物，其中所述顆粒包含的脂肪、碳水化合物和蛋白質(zhì)的量小于或等于100%。更優(yōu)選地，所述顆粒包含3-40重量％的脂肪、10-50重量％的蛋白質(zhì)、10_60重量％的碳水化合物，其中所述顆粒包含的脂肪、碳水化合物和蛋白質(zhì)的量小于或等于100%。最優(yōu)選地，所述顆粒包含20-35重量％的脂肪、25-45重量％的碳水化合物和15-30重量％的蛋白質(zhì)，其中所述顆粒包含的脂肪、碳水化合物和蛋白質(zhì)的量小于或等于100%。在一實施方案中，所述顆粒基本由碳水化合物和蛋白質(zhì)組成?？梢源嬖谏倭康闹?.5wt%)。在一實施方案中,待包衣顆粒為粉末形式。所述粉末可以是乳粉。或者，待包衣粉末可以是大豆基的，例如大豆蛋白質(zhì)分離物或大豆蛋白質(zhì)濃縮物?；蛘撸路勰┛梢栽谄浣M成中包含植脂末(non-dairycreamer)、麥芽糊精、可可粉、麥芽粉(maltpowder)或淀粉?；蛘?，所述粉末可以包含任意這些成分的混合物。在一實施方案中，所述顆粒包含奶粉。在一實施方案中，所述顆粒包含脫脂奶粉。在另一實施方案中，所述顆粒包含植脂末。在又一實施方案中，所述顆粒包含奶粉和植脂末的混合物。所述顆粒還可以包含礦物質(zhì)、維生素和其它大分子(例如益生元(prebiotics)、食用纖維、肽、游離脂肪酸、植物素等)以及小百分比的水分。在一實施方案中，所述顆?；居扇榉劢M成。包覆和干燥顆粒以制備包含活益生微生物的可食用包衣顆粒或其團(tuán)聚物在本發(fā)明的方法中，滲透壓休克的益生微生物的懸浮液用于至少部分地包覆包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒。包衣顆粒可以部分地團(tuán)聚。團(tuán)聚是使較小顆粒集合以通過將它們粘附在一起而形成較大顆粒的過程。在顆粒團(tuán)聚的情況下，滲透壓休克的益生微生物不僅包覆顆粒，而且還自身被其它顆粒圍繞或包覆。然后,干燥包衣顆?；虬骂w粒的團(tuán)聚物?？墒褂萌魏问诡w粒至少部分地被滲透壓休克的益生微生物的懸浮液包覆的方法來進(jìn)行本發(fā)明的方法。在優(yōu)選的實施方案中，包衣顆粒是團(tuán)聚的。通常，引入的干燥空氣具有20-65°C、優(yōu)選30-60°C的溫度。在一實施方案中，本發(fā)明方法在約20-50°C的溫度下進(jìn)行。在另一實施方案中，溫度為約30-45°C，更優(yōu)選30-35。Co—方面，本發(fā)明提供制備可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物的方法，其包括:a)用滲透壓休克的益生微生物的懸浮液至少部分地包覆包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒；以及b)在20-50°C下干燥所述包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物；其中所述可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物包含活益生微生物。在一實施方案中，使用流化床設(shè)備進(jìn)行所述方法。在流化床方法中存在三種相。固體(基體材料)、液體(粘合材料)和氣體(流化空氣)均彼此同時接觸。流化床促進(jìn)相之間的高水平接觸。流化床加工包括在使固體/流體混合物表現(xiàn)為流體的條件下引導(dǎo)壓縮流體通過固體顆粒物質(zhì)。在流化床干燥中，流化氣體提供熱量以蒸發(fā)液相。在一實施方案中，在具有20-40°C、優(yōu)選30-35°C的出口溫度的流化床設(shè)備中進(jìn)行所述方法?；蛘?，可以通過其它方法例如真空干燥進(jìn)行干燥。圖1例示本發(fā)明的優(yōu)選方法，其中固體基體材料(包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒)被放置在具有精細(xì)固位板(fineretentionplate)和在其底部上的空氣分配板的倒置截錐(invertedtruncatedcone)中。暖空氣流經(jīng)分配板,并且包埋基質(zhì)變得流化，而包含滲透壓休克的益生菌細(xì)胞的液體被精細(xì)地噴射在基體材料上。優(yōu)選地，干燥空氣的濕度保持在最小的實際相對濕度，例如35%至50%的相對濕度。在幾個濕潤-干燥循環(huán)之后，噴射漿體的水部分引起芯材料的團(tuán)聚。益生菌細(xì)胞被截留在團(tuán)聚的微小顆粒中，并且最終水由于干燥作用而被蒸發(fā)出。獲得具有與最初基體材料相同或更低水平的水活性(Aw)的自由流動的粒狀粉末物質(zhì)。優(yōu)選地，在完成干燥過程之后，可食用顆粒的直徑為約35-100μπι，更優(yōu)選40-95μm,最優(yōu)選50-80μm。然而，當(dāng)顆粒團(tuán)聚時,可以觀察到達(dá)Iμm的直徑。當(dāng)使用流化床設(shè)備時，粒度可受到霧化氣壓、液體噴射速率和流化空氣溫度的影響。當(dāng)這些因素高時，則獲得較低直徑的顆粒。其它影響因素包括噴嘴錐度和與粉末床的鄰近程度。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠選擇合適的設(shè)定以制備所需尺寸范圍的顆粒。如需要，可使用粒度降低步驟，例如研磨或碾磨。本發(fā)明的方法提供了對保存益生微生物的其它方法例如冷凍干燥、噴射干燥或包囊的替代方法。本發(fā)明的方法具有下列優(yōu)勢，即，其不導(dǎo)致細(xì)胞活力的任何顯著損失，并且制備其中M生微生物長時間保持活力的廣品。因此，一方面，本發(fā)明提供制備可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物的方法，其包括a)用滲透壓休克的益生微生物的懸浮液至少部分地包覆包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒；以及b)干燥所述包衣顆粒或其團(tuán)聚物；其中所述可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物包含至少107cfu/克的活益生微生物。另一方面，本發(fā)明提供制備可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物的方法，其包括a)用滲透壓休克的益生微生物的懸浮液至少部分地包覆包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒；以及b)干燥所述包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物；并且其中所述可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物包含至少107cfu/克的活益生微生物；并且其中所述活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于21ogcfu/克。在上述方面中在一實施方案中，所述可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物包含至少108cfu/克的活益生微生物。在另一實施方案中，所述可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物包含至少109cfu/克的活益生微生物。在另一實施方案中，所述可食用包衣顆粒或其團(tuán)聚物包含至少101(lcfU/克的活益生微生物。在另一實施方案中，所述可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物包含至少10ncfu/克的活益生微生物。在一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于1.81ogcfu/克。在一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于1.61ogcfu/克。在一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于1.41ogcfu/克。在一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于1.21ogcfu/克。在一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于1.Ologcfu/克。在一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于0.81ogcfu/克。在另一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于0.61ogcfu/克。在另一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于0.41ogcfu/克。在另一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于0.21ogcfu/克。在一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存12個月之后降低了小于2.0logcfu/克。在一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存12個月之后降低了小于1.81ogcfu/克。在另一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存12個月之后降低了小于1.61ogcfu/克。在一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存12個月之后降低了小于1.41ogcfu/克。在另一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存12個月之后降低了小于1.21ogcfu/克。在另一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存12個月之后降低了小于1.0logcfu/克。在另一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存12個月之后降低了小于0.81ogcfu/克。在另一實施方案中，使用流化床設(shè)備進(jìn)行步驟a)和b)。在另一實施方案中，在約20-50°C下干燥包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物?？赏ㄟ^在室溫下貯存一段時間之后計數(shù)cfu/克來評價可食用顆?；蚱鋱F(tuán)聚物的穩(wěn)定性?？筛淖冑A存條件。當(dāng)不需要濕度控制時，樣品應(yīng)優(yōu)選被密封在密閉容器中以確保最大穩(wěn)定性。在一方面，本發(fā)明提供制備包含至少IO7Cfu/克活干酪乳桿菌431的可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物的方法，其包括:a)用滲透壓休克的干酪乳桿菌431細(xì)胞的懸浮液至少部分地包覆包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒；以及b)干燥所述包衣顆粒或其團(tuán)聚物；其中使用流化床設(shè)備進(jìn)行步驟a)和b);并且其中活干酪乳桿菌431細(xì)胞的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于Ilogcfu/克。在一實施方案中，在20-50°C下進(jìn)行步驟a)和b)。在一實施方案中，活干酪乳桿菌細(xì)胞的濃度在室溫下貯存12個月之后降低了小于21ogcfu/克。在一實施方案中，所述包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒包括乳粉。通過本發(fā)明方法制備的顆粒和顆粒團(tuán)聚物具有作為可食用食品中的成分的應(yīng)用。獨特的加工條件確保了在顆粒上和顆粒之間包覆的益生微生物長時間保持活力。一方面，本發(fā)明提供通過本發(fā)明方法制備的可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物。另一方面，本發(fā)明提供可食用包衣顆粒和/或這樣的顆粒的團(tuán)聚物，所述顆粒包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪，并至少部分包覆有滲透壓休克的益生微生物。在上述方面中:在一實施方案中，所述可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物包含至少ΙΟ7、108、IO9UOltl或IO11Cfu/克的活益生微生物。在另一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于2、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0、0.8、0.6、0.4或0.21ogcfu/克。在另一實施方案中，活益生微生物的濃度在室溫下貯存12個月之后降低了小于2、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0或0.8logcfu/克。在另一實施方案中，所述益生微生物為干酪乳桿菌431?？墒秤檬称吠ǔＴ诎l(fā)酵乳制品例如酸乳酪中發(fā)現(xiàn)益生微生物。這些產(chǎn)品必須冷藏并具有短的保質(zhì)期。更難以制備包含足夠多量的活益生微生物以具有健康益處的谷類制品。這樣的產(chǎn)品需要具有長保質(zhì)期(長達(dá)六個月或一年)并且活益生微生物的細(xì)胞計數(shù)可能在幾天內(nèi)下降至顯著水平。然而，本發(fā)明的顆粒和團(tuán)聚物持續(xù)數(shù)月保持高活益生微生物水平，因此理想地用于可食用食品，特別是需要長保質(zhì)期的那些產(chǎn)品。因此，本發(fā)明還提供包含本發(fā)明的可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物的可食用食品。為確保可食用產(chǎn)品中的益生菌細(xì)胞的活力保持盡可能長的時間，應(yīng)盡快使用包含益生菌的顆?；蚱鋱F(tuán)聚物。優(yōu)選地，經(jīng)干燥和包衣的顆粒包含約IO9-1OiciCfu/克。優(yōu)選地，使用l-10%(w/w)的通過本發(fā)明方法制備的包衣顆粒來強化食品，從而該強化食品包含IO7-1O9Cfu/克。更優(yōu)選地，通過本發(fā)明方法制備的食品或成分包含IO7至IOltlCfu/克，最優(yōu)選IO7至IO9Cfu/克。然而，更低的量例如約IO3-1O5的量也可能提供有益作用。包含活益生菌細(xì)胞的顆?？捎米魇称?。例如，干燥的顆?？梢允枪?fù)原并例如用作鮮奶替代物的乳粉。所述包含活益生微生物的顆?？捎糜诟稍锸称坊虬敫墒称分?。食品或飲料中的水的可用性被稱為食品的水活性(Aw)，由食品中的水量而測定。水活性影響微生物生長和最終可食用產(chǎn)品的耐貯存性。干燥的食品被定義為具有Aw〈0.25的值，而半干食品被定義為0.4-0.8的Aw值。純水具有10.0的水活性。在本發(fā)明中，可以有用地?fù)饺腩w粒的干燥和半干食品的實例為粉末、乳基飲料、麥芽/大豆/谷物基飲料、早餐谷物食品如什錦谷物早餐片(muesliflake)、水果和蔬菜汁粉末、壓縮干糧和/或巧克力條、糖果、糊狀食品(spreads)、面粉、奶或果昔(smoothies)。可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物特別適于摻入谷物中或其上。然而,可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物可以在水中復(fù)原以制得液體飲料之后直接食用。所使用的可食用顆?；蚱鋱F(tuán)聚物的用量隨其所要摻入的可食用產(chǎn)品而改變。例如，乳制品可以補充有多達(dá)10%w/w的可食用包衣顆粒及其團(tuán)聚物。包覆有顆粒的谷類可以僅包含l%w/w或2%w/w。優(yōu)選地，摻入顆粒及其團(tuán)聚物上及其中的益生微生物在室溫下存活6個月至I年。在可食用顆粒或其團(tuán)聚物中觀察到的活益生微生物濃度的逐漸降低反映在可食用食品中。例如，可食用顆?；蚱鋱F(tuán)聚物的約llogcfu/克的損失降導(dǎo)致其所摻入的可食用食品的約llogcfu/克的損失。這種損失比通常在室溫下保存的包含益生微生物的產(chǎn)品中所觀察到的損失更低。損失是足夠低的，使得即使在數(shù)月之后，可食用產(chǎn)品仍能夠遞送足以向消費者提供健康益處的益生微生物。通過本發(fā)明方法制備的包衣顆粒或團(tuán)聚顆?？芍苯佑米魇称罚蚴称返某煞?，或飲食補充劑或營養(yǎng)保健品。在一實施方案中，所述食品或食品成分為糖果、奶、奶制品、奶粉、復(fù)原乳、酸乳(culturedmilk)、酸乳酪、優(yōu)酪乳(drinkingyoghurt)、凝固性酸乳酪(setyoghurt)、飲料(drink)、乳制飲料(dairydrink)、奶飲料(milkdrink)、食品添加劑、飲料添加劑、飲食補充劑、營養(yǎng)品(nutritionalproduct)、醫(yī)療食品、營養(yǎng)保健品(nutraceutical)或藥物。這些產(chǎn)品可以包含任何消費者可食用產(chǎn)品，其能夠攜帶碳水化合物、蛋白質(zhì)或任選存在的脂肪或它們的組合。合適的消費者可食用產(chǎn)品的實例包括:含水產(chǎn)品(aqueousproduct)、烘烤物品、糖果產(chǎn)品(包括巧克力、凝膠、冰激凌、谷物、復(fù)原水果產(chǎn)品、零食棒(snackbar)、食物棒(foodbar)、什錦谷物早餐條(mueslibar)、糊狀食品、調(diào)味醬(sauces)、沙司(dips)、乳制品(包括酸乳酪和奶酪)、飲料(包括乳基和非乳基飲料)、奶、奶粉、運動補充劑(包括乳基和非乳基運動補充劑)、果汁、食品添加劑(如蛋白末(proteinsprinkles))以及飲食補充劑產(chǎn)品(包括日常補充片劑、膠囊劑、軟凝膠劑和散劑)。本文可用的合適的營養(yǎng)組合物可以類似形式提供。優(yōu)選地，通過本發(fā)明方法制備的顆粒可以是干燥、半干燥(sem1-dried)或中度干燥(intermediatedried)的食品,例如乳基或大豆基粉末、乳基粉狀飲料、麥芽/大豆/谷物基飲料、早餐谷物食品、水果或蔬菜汁粉末?；蛘?，通過本發(fā)明方法制備的顆粒用于增強半干燥或中度干燥的食品，例如乳基或大豆基營養(yǎng)粉末、乳基粉狀飲料、麥芽/大豆/谷物基飲料、早餐谷物食品、水果或蔬菜汁粉末、壓縮干糧、巧克力棒、糖果、糊狀食品、調(diào)味醬或果昔。待治療的疾病已對益生微生物在預(yù)防和治療疾病中的作用進(jìn)行了許多研究。益生菌例如鼠李糖乳桿菌GG和乳糖雙歧桿菌BB-12與預(yù)防和治療感染性腹瀉特別是由輪狀病毒在兒童中引起的腹瀉有關(guān)(FA0/WH0，2001)。益生菌還被認(rèn)為在個體用抗生素治療之后可用于恢復(fù)腸道微生物區(qū)系，從而防止和/或治療艱難梭菌(Clostridiumdifficile)的異常升高，所述異常升高可導(dǎo)致腹瀉(FA0/WH0,2001)。已證明乳酸菌在體內(nèi)有效地抑制幽門螺桿菌(Helicobacterpylori)的生長，已知所述幽門螺桿菌誘發(fā)乙型胃炎、消化性潰瘍和胃癌(FA0/WH0，2001)。目前仍在進(jìn)行支持用益生菌治療炎性綜合征和腸綜合征如隱窩炎和局限性腸炎的研究。其它研究使益生菌與預(yù)防一些癌癥和輔助緩解便秘相關(guān)聯(lián)。研究者已證明益生菌能夠調(diào)節(jié)免疫參數(shù)，例如在老年人中激活天然殺傷細(xì)胞、誘發(fā)粘液產(chǎn)生、激活巨噬細(xì)胞、刺激益生作用部位的SlgA和嗜中性粒細(xì)胞以及刺激升高的外周免疫球蛋白。其它研究已證明益生菌可用于治療心血管疾病、泌尿生殖道疾病、細(xì)菌性陰道病、酵母性陰道炎(yeastvaginitis)和泌尿道感染(FA0/WH0，2001)。因此，已證明用益生菌治療個體產(chǎn)生廣泛的健康益處。本發(fā)明的顆粒及其團(tuán)聚物可用于藥物應(yīng)用。一方面，本發(fā)明包括包含包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物以及藥學(xué)可接受的賦形劑的藥物組合物?，F(xiàn)以非限制性方式通過參考下列實施例而闡述本發(fā)明的各方面。泛言之，本發(fā)明還可(獨立或共同地)存在于本申請說明書所涉及或所指明的各部分、要素和特征，存在于所述部分、要素或特征的兩種或更多種的任一或所有組合，并且其中本文提及的具體整數(shù)具有本發(fā)明所涉及領(lǐng)域的已知等同物，此類已知等同物視為援引加入本文，如同單獨所述。實施例使用干酪乳桿菌CRL431菌株進(jìn)行實施例1_5。實施例1-干酪乳桿菌CRL431菌株的生長期的確定該實驗設(shè)計為測定實驗菌株干酪乳桿菌CRL431的對數(shù)期的開始、中點和終點以及靜止期的持續(xù)時間。通過使用分光光度計(Hitachi，Inc.)測量培養(yǎng)基(MRS肉湯)的光密度的變化來確定細(xì)菌生長期。將冷凍干燥的細(xì)胞在MRS肉湯中連續(xù)復(fù)水3天，然后以1.0%(ν/ν)在IOml的MRS肉湯中接種并在37°C下孵育。還將在瓶中的預(yù)消毒胨水(每個9ml)在37°C下保持以供稀釋目的。在每一時間點，將300μI的培養(yǎng)基無菌轉(zhuǎn)移入9ml胨水瓶中。將培養(yǎng)基用0.2%胨水稀釋并使用渦流攪拌器徹底混合。然后，在610nm的波長下測量稀釋的培養(yǎng)基的光密度。以2小時間隔采集讀數(shù)，共持續(xù)24小時。確認(rèn)的是，從初始接種時間起，干酪乳桿菌CRL431的對數(shù)中期和早期靜止期分別為14小時和20小時。在圖2中示出顯示干酪乳酸菌CRL431生長曲線的實驗結(jié)果。實施例2-休克處理滲透壓休克處理使干酪乳桿菌CKL431細(xì)胞連續(xù)生長三代。通常，益生菌細(xì)胞的一個生長周期在17-20小時中完成。在該時期之后，將接種物接種到新鮮的生長培養(yǎng)基中以生長另一代。該過程在獲得最終細(xì)胞之前重復(fù)三次。在生長周期進(jìn)行連續(xù)3天之后，用2%(v/v)接種(4X400mlMRS肉湯+4X8ml接種物)制備批量培養(yǎng)物，并且在37°C下孵育。將細(xì)胞如實施例1所述孵育14小時，直至達(dá)到對數(shù)中期。在四個400ml培養(yǎng)基的兩個中各自添加IOOml另外的預(yù)消毒MRS肉湯(其包含16gm的氯化鈉)。在最終500ml培養(yǎng)基中的鹽濃度為0.6M。其它兩瓶培養(yǎng)基為陰性對照，其各自補充有IOOml無菌MRS肉湯。將所有四個瓶再孵育6小時，直至細(xì)胞達(dá)到它們的靜止生長期(從接種起20小時)。然后，通過將四個瓶子在7500RPM下離心10分鐘來獲得每一瓶中的細(xì)胞沉淀，由此收集細(xì)胞。然后，將細(xì)胞沉淀各自重懸浮于0.2%胨水中，通過輕微振搖而洗滌，并且進(jìn)一步離心以收集洗滌的細(xì)胞沉淀。從每一瓶中獲得約5克的細(xì)胞沉淀。熱激處理用2%(v/v)的再生培養(yǎng)原種(revivedculturestock)接種MRS肉湯(2X400ml),并在37。C下孵育20小時。然后，將包含接種的培養(yǎng)基的duran瓶放置在預(yù)熱至50°C的循環(huán)水浴中。在輕微振搖下將瓶子在水浴中保持30分鐘。在30分鐘之后，將培養(yǎng)基通過在瓶子周圍的循環(huán)自來水而立即冷卻至室溫。細(xì)胞收集、洗滌和沉淀采集方法與上述相同。熱激和滲透壓休克組合處理細(xì)胞制備和滲透壓休克處理與上述相同。然而，在生長20小時之后，將細(xì)胞洗滌并從含氯化鈉的培養(yǎng)基中移除，重懸浮于新鮮的無菌MRS肉湯中，然后進(jìn)行上述方法的熱激。實施例3-使用流化床干燥器的包埋細(xì)胞生長條件、滲透壓休克、熱激、組合應(yīng)激和細(xì)胞收集操作與實施例1和2所述相同。通過添加0.2%無菌胨水而將由離心和后續(xù)洗滌獲得的細(xì)胞沉淀形成懸浮液。對于每一樣品，將從2L的MRS肉湯獲得的12.5克細(xì)胞沉淀補充至25ml以供噴射。制備全脂奶粉(FonterraCo-Operative,NZ)和商購植脂末(來自Kerry的V混物，以得到表I所示的最終組合物。anablanca35C)的干表I乳脂25.92%植物脂肪3.5%乳碳水化合物(乳糖)34.20%葡萄糖5.85%乳蛋白質(zhì)22.07%礦物質(zhì)5.14%水分3.32%將兩百五十克的該混合粉末放置流化床干燥器(GlattInc.Germany)中。將25mL的干酪乳桿菌細(xì)胞漿體間歇性地噴射在粉末床上以確保細(xì)胞均勻且徹底地分散在基質(zhì)中。同時進(jìn)行流化和干燥步驟以噴射細(xì)菌細(xì)胞漿體。將流化空氣保持在48-55°C。定期測試樣品的水活性(Aw)值，并繼續(xù)干燥直至Aw達(dá)到0.25以下。每一樣品的干燥過程約消耗I小時。然后，將干燥樣品包裝在雙層低密度聚乙烯(LDPE)袋中，并在沒有濕度控制或干燥條件下在25°C下貯存，從而模擬商用展示貨架的貯存環(huán)境。使用標(biāo)準(zhǔn)傾注平板法定期測試樣品以獲得活乳酸桿菌的細(xì)胞計數(shù)。為將該方法結(jié)果與冷凍干燥技術(shù)進(jìn)行比較，通過使細(xì)胞在MRS肉湯中生長并轉(zhuǎn)移入復(fù)原脫脂奶然后凍干而制備冷凍干燥的干酪乳桿菌樣品。然后，將干燥的培養(yǎng)物以l%(w/w)與流化床干燥試驗所用相同的包埋基質(zhì)(參見表I)干混，并且在類似貯存條件下進(jìn)行耐貯存分析。結(jié)果重復(fù)兩次，這些結(jié)果的平均值在圖3的對數(shù)標(biāo)度中示出并在以下進(jìn)行討論。結(jié)果對于四種樣品中的每一種，初始細(xì)胞濃度高于109CfU/gm水平。如下表2所示。權(quán)利要求1.制備可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物的方法，其包括:a)用滲透壓休克的益生微生物的懸浮液至少部分地包覆包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒；以及b)干燥所述包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物；其中所述可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物包含活益生微生物。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述益生微生物選自干酪乳桿菌(L.casei)CRL431、干酪乳桿菌ATCC393、嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)ATCC4356、鼠李糖乳桿菌(L.rhamnosus)ATCC53103和乳糖雙歧桿菌(B.lactis)BB12。3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述益生微生物為使用NaCl進(jìn)行滲透壓休克的。4.如權(quán)利要求1至3中任一項所述的方法，其中所述包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒包括奶粉。5.如權(quán)利要求1至4中任一項所述的方法，其中使用流化床設(shè)備進(jìn)行步驟a)和b)。6.如權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述干燥的包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物包含至少IOiciCfu/克的活益生微生物。7.如權(quán)利要求1至6中任一項所述的方法，其中所述活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于21ogcfu/克。8.如權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述活益生微生物的濃度在室溫下貯存12個月之后降低了小于2.0logcfu/克。9.如權(quán)利要求1至8中任一項所述的方法，其中在約20-50°C下進(jìn)行步驟b)。10.制備包含至少IO7Cfu/克的活干酪乳桿菌431的可食用包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物的方法，其包括:a)用滲透壓休克的干酪乳桿菌431細(xì)胞的懸浮液至少部分地包覆包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪的顆粒；以及b)干燥所述包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物；其中使用流化床設(shè)備進(jìn)行步驟a)和b);并且其中活干酪乳桿菌431細(xì)胞的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于llogcfu/克。11.通過權(quán)利要求1至10中任一項所述的方法而制備的包衣顆?；蚱鋱F(tuán)聚物。12.可食用顆粒和/或此等顆粒的團(tuán)聚物，所述顆粒包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪，并包覆有滲透壓休克的益生微生物。13.可食用顆粒和/或此等顆粒的團(tuán)聚物，所述顆粒包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪，并包覆有滲透壓休克的益生微生物；其中活益生微生物的濃度在室溫下貯存6個月之后降低了小于2.0logcfu/克。14.可食用顆粒和/或此等顆粒的團(tuán)聚物，所述顆粒包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和任選存在的脂肪，并包覆有滲透壓休克的益生微生物；其中活益生微生物的濃度在室溫下貯存12個月之后降低了小于2.0logcfu/克。15.可食用產(chǎn)品，其包含權(quán)利要求10至14中任一項所述的包衣顆粒或其團(tuán)聚物。16.如權(quán)利要求15所述的可食用產(chǎn)品，其為糖果、奶、奶制品、奶粉、復(fù)原乳、酸乳、酸乳酪、優(yōu)酪乳、凝固性酸乳酪、飲料、乳制飲料、奶飲料、食品添加齊、飲料添加齊、谷物、飲食補充劑、營養(yǎng)品、醫(yī)療食品、營養(yǎng)保健品或藥物。17.藥物組合物，其包含權(quán)利要求11至14中任一項所述的包衣顆粒或其團(tuán)聚物。全文摘要本發(fā)明提供了用于制備需要長保質(zhì)期的益生菌食品的成分，所述成分包含耐貯存益生微生物。所述成分是通過用滲透壓休克的益生微生物的懸浮液包覆顆?；蚱鋱F(tuán)聚物并干燥產(chǎn)物而制備的。文檔編號A23L1/29GK103180432SQ201180051650公開日2013年6月26日申請日期2011年8月25日優(yōu)先權(quán)日2010年8月26日發(fā)明者A·納格,S·達(dá)斯,H·辛格申請人:梅西大學(xué)