包含乳鐵蛋白的營(yíng)養(yǎng)組合物在支持抵抗疾病和狀況中的用途
【專利摘要】本公開涉及包含來自非人來源的乳鐵蛋白的營(yíng)養(yǎng)組合物在支持抵抗疾病或狀況中的用途。所述方法包括向人施用包含脂肪或脂類來源、蛋白來源、和由非人來源產(chǎn)生的乳鐵蛋白的營(yíng)養(yǎng)組合物。
【專利說明】包含乳鐵蛋白的營(yíng)養(yǎng)組合物在支持抵抗疾病和狀況中的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本公開一般性地涉及具有乳鐵蛋白、特別是由非人來源產(chǎn)生的乳鐵蛋白的營(yíng)養(yǎng)組合物領(lǐng)域，例如嬰兒配方(infant formulas),人乳強(qiáng)化劑,兒童膳食補(bǔ)充劑等。更具體地，本公開涉及通過向人施用包含乳鐵蛋白的營(yíng)養(yǎng)組合物，支持抵抗由細(xì)菌和病毒病原體導(dǎo)致的疾病或狀況的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前有各種用于人、尤其是年輕人的膳食組合物，在特定生命階段提供補(bǔ)充或者基本營(yíng)養(yǎng)。一般來說，用于嬰兒的商品化的膳食組合物力圖盡可能模擬人乳的組成和相關(guān)功能。通過其中一些具有生理活性的蛋白和摻合的脂肪成分的組合，膳食組合物得以配制為它們模擬人乳，用作完全或部分替代品。其它經(jīng)常在用于嬰兒的膳食組合物中使用的成分可包括碳水化合物來源如乳糖以及其它維生素、礦物質(zhì)和元素，認(rèn)為它們存在于人乳中用于被嬰兒吸收。
[0003]乳鐵蛋白是人乳中的基本蛋白之一，認(rèn)為它是具有大約80千道爾頓平均分子量的糖蛋白。其為鐵結(jié)合蛋白，具有以可逆的方式結(jié)合兩分子的鐵的能力，并能促進(jìn)人腸道內(nèi)鐵的吸收。在功能上，乳鐵蛋白調(diào)節(jié)鐵吸收，并且如此地，能夠結(jié)合基于鐵的自由基以及提供鐵用于免疫應(yīng)答。
[0004]在獲取商品化的有活力的(viable)膳食組合物中，由于在加工過程中活性的預(yù)期喪失，乳鐵蛋白的添加通常受到限制。例如，一般來說，加工嬰兒配方和其它產(chǎn)品如人乳強(qiáng)化劑和各種兒童產(chǎn)品中的溫度和PH需求降低乳鐵蛋白的特定功能，導(dǎo)致乳鐵蛋白不包含在最終的制劑中。另外，乳鐵蛋白通常僅被考慮其鐵結(jié)合性質(zhì)，因此在認(rèn)為該性質(zhì)被加工條件所減少的情況下，乳鐵蛋白可能通常被排除在制劑之外。
[0005]進(jìn)一步地，如現(xiàn)有技術(shù)已知，人母乳的鐵相對(duì)低，每升母乳含約0.3毫克鐵。雖然該量低，但是人嬰兒具有高的吸收率，從母乳中吸收大約一半的鐵。然而，當(dāng)人嬰兒被給予具有高水平鐵強(qiáng)化例如每升從約10毫克到約12毫克的現(xiàn)有技術(shù)配方時(shí)，嬰兒吸收小于約5%的總鐵。應(yīng)用現(xiàn)有技術(shù)配方中如此增加水平的鐵，事實(shí)上所有的鐵結(jié)合位點(diǎn)會(huì)預(yù)期被占據(jù)，因?yàn)槿殍F蛋白是已知的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。
[0006]現(xiàn)有技術(shù)配方的其它問題包括不能提供抑菌效果。這部分是由于使用具有被封閉或損壞的結(jié)合位點(diǎn)的乳鐵蛋白，因?yàn)橐志Ч辽俨糠峙c配方中存在的乳鐵蛋白結(jié)合鐵的程度有關(guān)。
[0007]相應(yīng)地，提供含有乳鐵蛋白特別是由非人來源產(chǎn)生的乳鐵蛋白的營(yíng)養(yǎng)組合物例如嬰兒配方、人乳強(qiáng)化劑、兒童膳食補(bǔ)充劑等將是有益的。鑒于在人，尤其是嬰兒和兒童中病毒性呼吸道感染的流行，提供支持抵抗病毒性呼吸道感染的營(yíng)養(yǎng)組合物將是特別有益的。優(yōu)選地，組合物中包含的乳鐵蛋白即使在高溫和低pH條件下加工后，也能夠支持抵抗由細(xì)菌和病毒病原體導(dǎo)致的疾病或狀況。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]簡(jiǎn)而言之，在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開涉及支持抵抗人中疾病或狀況例如病毒性呼吸道感染的方法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本公開涉及在人中支持抵抗由至少一種選自產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)、腸致病性大腸桿菌(EPEC)、流感嗜血桿菌(Haemophilusinfluenza)、產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(STEC)、腸聚集性大腸桿菌(EAEC)、鼠傷寒沙門氏菌血猜型XSaltnonella ser.Typhitnurium)、被氏志賀氏菌{Shigella /Vejrfleri)、輪狀病毒、諾如病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒及其組合的病原體導(dǎo)致的疾病或狀況的方法。所述方法包括向人施用包含(I)脂肪或脂類來源、(2)蛋白來源、和(3)由非人來源產(chǎn)生的乳鐵蛋白的營(yíng)養(yǎng)組合物。在某些實(shí)施方案中，疾病或狀況為病毒性的下呼吸道感染。
[0009]在一個(gè)實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物包含:
a.至多約7g/100kal的脂肪或脂類來源,更優(yōu)選約3g/100kcal到約7g/100kcal的脂肪或脂類來源；
b.至多約5g/100kcal的蛋白來源,更優(yōu)選約lg/100kcal到約5g/100kcal的蛋白來源；和
c.至少約10mg/100kCal的乳鐵蛋白，更優(yōu)選約70mg到約220mg/100kCal的乳鐵蛋白，并且最優(yōu)選約90mg到約190mg/100kCal的乳鐵蛋白。任選地，在某些實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物可以進(jìn)一步包含約0.lg/100kcal到約lg/100kcal的益生元組合物,例如包含聚葡萄糖和/或低聚半乳糖的益生元組合物。更優(yōu)選地，營(yíng)養(yǎng)組合物包含約0.3g/100kcal到約
0.7g/100kcal包含聚葡萄糖和低聚半乳糖組合的益生元組合物。在某些實(shí)施方案中，本公開涉及在人中支持抵抗由至少一種選自ETEC、EPEC、產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌、EAEC、鼠傷寒沙門氏菌血清型、福氏志賀氏菌或其組合的病原體導(dǎo)致的疾病或狀況的方法。
[0010]優(yōu)選地，乳鐵蛋白是非人乳鐵蛋白和/或通過遺傳修飾的生物產(chǎn)生的人乳鐵蛋白。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所使用的乳鐵蛋白使有效量的含乳鐵蛋白的營(yíng)養(yǎng)組合物可以施用于個(gè)體以支持抵抗由病毒或細(xì)菌病原體導(dǎo)致的疾病或狀況，即使在加工過程中，營(yíng)養(yǎng)組合物曾暴露于某些加工條件如巴氏滅菌中典型的pH和溫度波動(dòng)。
[0011]具體實(shí)施方案
在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開提供了通過向人施用包含脂類或脂肪來源、蛋白來源和來自非人來源的乳鐵蛋白的營(yíng)養(yǎng)組合物，支持抵抗由細(xì)菌或病毒病原體導(dǎo)致的人中的疾病或狀況例如病毒性呼吸道感染的方法。
[0012]如本文所用，“由非人來源產(chǎn)生的乳鐵蛋白”和“來自非人來源的乳鐵蛋白”各自指由人母乳之外的來源產(chǎn)生或者獲得的乳鐵蛋白。例如，本公開所使用的乳鐵蛋白包括通過遺傳修飾的生物產(chǎn)生的人乳鐵蛋白和非人乳鐵蛋白。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“生物”指任何連續(xù)生存的系統(tǒng)，例如動(dòng)物、植物、真菌或微生物。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“非人乳鐵蛋白”指具有不同于人乳鐵蛋白的氨基酸序列的氨基酸序列的乳鐵蛋白。
[0013]乳鐵蛋白是約80kD，根據(jù)物種含有I 一 4個(gè)聚糖的單鏈多肽。不同物種乳鐵蛋白的3D結(jié)構(gòu)非常類似，但不相同。每個(gè)乳鐵蛋白包含兩個(gè)同源的葉，稱為N —和C 一葉，分別指分子的N —末端和C 一末端部分。每葉進(jìn)一步由兩個(gè)亞葉或結(jié)構(gòu)域組成，它們形成裂縫，在裂縫處鐵離子(Fe3+)與碳酸(碳酸氫根)陰離子協(xié)同作用緊密結(jié)合。這些結(jié)構(gòu)域分別稱為NI，N2, Cl和C2。乳鐵蛋白的N末端具有強(qiáng)陽(yáng)離子肽區(qū)域，其負(fù)責(zé)許多重要的結(jié)合特性。乳鐵蛋白具有非常高的等電點(diǎn)(?PI9)，且其陽(yáng)離子性質(zhì)在其抵御細(xì)菌、病毒和真菌病原體的能力中發(fā)揮主要作用。在乳鐵蛋白的N末端區(qū)域中有幾個(gè)陽(yáng)離子氨基酸殘基簇，介導(dǎo)乳鐵蛋白對(duì)廣范圍微生物的生物學(xué)活性。例如，人乳鐵蛋白的N末端殘基I 一 47 (牛乳鐵蛋白的I 一 48)對(duì)于乳鐵蛋白的鐵非依賴性的生物學(xué)活性是關(guān)鍵的。在人乳鐵蛋白中，殘基2到5 (RRRR)和28到31 (RKVR)是N末端中富含精氨酸的陽(yáng)離子結(jié)構(gòu)域，對(duì)乳鐵蛋白的抗微生物活性是尤其關(guān)鍵的。在牛乳鐵蛋白中發(fā)現(xiàn)了 N末端中的類似區(qū)域(殘基17到42, FKCRRffQffRMKKLGAPSITCVRRAFA)?
[0014]如在出版物Biochemistry and Cell Biology, pp 275-281 (2006)中出現(xiàn)的“Perspectives on Interactions Between Lactoferrin and Bacteria，，中所述，來自不同宿主物種的乳鐵蛋白，其氨基酸序列可能不同，盡管它們?cè)趦?nèi)葉的末端區(qū)域帶有帶正電荷的氨基酸而共同具有相對(duì)高的等電點(diǎn)。用于本公開的合適的乳鐵蛋白包括與HLf(349 -364)片段處的氨基酸序列AVGEQELRKCNQWSGL具有至少48%同源性的那些。在一些實(shí)施方案中，乳鐵蛋白與HLf (349 - 364)片段處的氨基酸序列AVGEQELRKCNQWSGL具有至少65%的同源性，并且在一些實(shí)施方案中，至少75%的同源性。例如，可被接受用于本公開的非人乳鐵蛋白包括但不限于，牛乳鐵蛋白，豬乳鐵蛋白，馬乳鐵蛋白，水牛乳鐵蛋白，山羊乳鐵蛋白，鼠乳鐵蛋白和駱駝乳鐵蛋白。
[0015]用于本公開的乳鐵蛋白可以例如從非人動(dòng)物的奶中分離，或者通過遺傳修飾的生物產(chǎn)生。例如，在通過引用整體并入本文的美國(guó)專利號(hào)4，791，193中，Okonogi等公開了生產(chǎn)高純度牛乳鐵蛋白的方法。通常，所公開的方法包括3步。原料奶首先與弱酸性陽(yáng)離子交換劑接觸吸附乳鐵蛋白，然后是第二步，其中進(jìn)行清洗除去非吸附的物質(zhì)。隨后是解吸步驟，其中將乳鐵蛋白除去產(chǎn)生純化的牛乳鐵蛋白。其它方法可包括如在美國(guó)專利號(hào)7，368，141、5，849，885、5，919，913和5，861，491中描述的步驟，它們的公開內(nèi)容均通過引用整體并入。
[0016]乳鐵蛋白的益處，如用于本公開的某些實(shí)施方案中，是其支持抵抗由某些細(xì)菌和病毒病原體導(dǎo)致的疾病或狀況的`能力，所述病原體包括ETEC、EPEC、流感嗜血桿菌、STEC、EAEC、鼠傷寒沙門氏菌血清型、福氏志賀氏菌、輪狀病毒、諾如病毒、RSV、腺病毒及其組合。
[0017]在一個(gè)實(shí)施方案中，乳鐵蛋白在營(yíng)養(yǎng)組合物中以至少約10mg/100kCal的量存在，尤其當(dāng)所述營(yíng)養(yǎng)組合物意圖由兒童應(yīng)用時(shí)。在某些實(shí)施方案中，乳鐵蛋白的上限是約240mg/100kCal。在另一個(gè)實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物是嬰兒配方時(shí)，乳鐵蛋白在營(yíng)養(yǎng)組合物中以從約70mg到約220mg/100kCal的量存在；在另一個(gè)實(shí)施方案中，乳鐵蛋白以約90mg到約190mg/100kCal的量存在。用于嬰兒的營(yíng)養(yǎng)組合物可以包含從每毫升配方約0.5mg到約
1.5mg的量的乳鐵蛋白。在替代人乳的營(yíng)養(yǎng)組合物中，乳鐵蛋白可以從每毫升配方約0.6mg到約1.3 mg的量存在。
[0018]如所述，在一個(gè)實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物支持抵抗病毒性呼吸道感染。人、特別是嬰兒和兒童易發(fā)生病毒性呼吸道感染。病毒性的下呼吸道感染、尤其是那些由呼吸道合胞病毒導(dǎo)致的那些，可以是特別成問題的。事實(shí)上，呼吸道合胞病毒是嬰兒和兒童住院的主要原因，并且可以導(dǎo)致例如，支氣管炎、肺炎、和長(zhǎng)期并發(fā)癥例如喘鳴。因此，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開涉及支持抵抗病毒性下呼吸道感染的方法。在又一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開涉及支持抵抗呼吸道合胞體病毒感染的方法。例如，本公開的營(yíng)養(yǎng)組合物可用于支持免疫發(fā)育，更好地使機(jī)體對(duì)抗病毒性呼吸道感染，或是預(yù)防這種感染或是減少它們的嚴(yán)
重程度。
[0019]在某些實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物預(yù)防性地施用于不具有疾病或狀況例如病毒性呼吸道感染和/或由至少一種選自ETEC、EPEC、流感嗜血桿菌、STEC、EAEC、鼠傷寒沙門氏菌血清型、福氏志賀氏菌、輪狀病毒、諾如病毒、RSV、腺病毒及其組合的病原體導(dǎo)致的疾病或狀況的人。在其它實(shí)施方案中，被施用營(yíng)養(yǎng)組合物的人在營(yíng)養(yǎng)組合物被施用時(shí)，具有病毒性呼吸道感染或由至少一種病原體導(dǎo)致的疾病或狀況。
[0020]優(yōu)選地，營(yíng)養(yǎng)組合物被施用的人是嬰兒或兒童。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“嬰兒”通常定義為從出生到12個(gè)月年齡的人?！皟和焙汀皟和瘋儭倍x為年齡超過12個(gè)月到約12歲大的人。
[0021]優(yōu)選地，營(yíng)養(yǎng)組合物中的乳鐵蛋白對(duì)疾病或狀況具有與游離形式的乳鐵蛋白的活性同樣或類似的活性。換句話說，優(yōu)選地，乳鐵蛋白的活性沒有通過包含在營(yíng)養(yǎng)組合物中而顯著地減少。還優(yōu)選組合物中包含的乳鐵蛋白即使在高溫和低PH條件下加工后，也能夠支持抵抗由細(xì)菌和病毒病原體導(dǎo)致的疾病或狀況。在本公開的一個(gè)實(shí)施方案中，所用的乳鐵蛋白為非人乳鐵蛋白。
[0022]例如，令人驚訝地，牛乳鐵蛋白即使暴露于會(huì)預(yù)期破壞或嚴(yán)重限制人乳鐵蛋白的穩(wěn)定性或活性的條件即低PH (即低于7，并且甚至低如約4.6或更低)和/或高溫(即高于約65°C，并且高如約120°C )也保持某些殺菌活性。這些低pH和/或高溫條件在本文所述類型的營(yíng)養(yǎng)組合物的某些加工方案、例如巴氏滅菌期間可以預(yù)期。然而，雖然牛乳鐵蛋白具有與人乳鐵蛋白具有約70%序列同源性的氨基酸組成，并且在人乳鐵蛋白變得不穩(wěn)定或失活的條件下穩(wěn)定并且保持活性，牛乳鐵蛋白對(duì)人腸道中發(fā)現(xiàn)的不期望的細(xì)菌病原體具有殺菌活性。
[0023]在一些實(shí)施方案中，本公開的營(yíng)養(yǎng)組合物可以是嬰兒配方。術(shù)語(yǔ)“嬰兒配方”適用于通過作為人乳替代品滿足嬰兒營(yíng)養(yǎng)需求的液體或粉末形式的組合物。在美國(guó)，嬰兒配方的含量由21 C.F.R.§ § 100, 106和107下列出的聯(lián)邦法規(guī)規(guī)定。這些法規(guī)定義了常量營(yíng)養(yǎng)素、維生素、礦物質(zhì)和其它成分水平，以努力模擬人母乳的營(yíng)養(yǎng)和其它性質(zhì)。在一個(gè)單獨(dú)的實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品可以是人乳強(qiáng)化劑，意味著它是加入人乳以增加人乳營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的組合物。作為人乳強(qiáng)化劑，公開的組合物可以是粉末或者液體形式。在另一個(gè)實(shí)施方案中，公開的營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品可以是兒童營(yíng)養(yǎng)組合物。
[0024]本公開的營(yíng)養(yǎng)組合物可以提供最低、部分或全部的營(yíng)養(yǎng)支持。營(yíng)養(yǎng)組合物可以是營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑或膳食替代品。在一些實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物可以連同食物或另外的營(yíng)養(yǎng)組合物施用。在本實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物可以在對(duì)象攝取前與食物或其它營(yíng)養(yǎng)組合物互相混合，或可以在攝取食物或營(yíng)養(yǎng)組合物之前或之后施用給對(duì)象。營(yíng)養(yǎng)組合物可以施用于接受嬰兒配方、人乳、人乳強(qiáng)化劑或其組合的早產(chǎn)嬰兒。對(duì)于本公開的目的，“早產(chǎn)嬰兒”是少于37周妊娠后出生的嬰兒，而“足月嬰兒”是至少37周妊娠后出生的嬰兒。
[0025]營(yíng)養(yǎng)組合物可以但不需要是營(yíng)養(yǎng)全面的。技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到“營(yíng)養(yǎng)全面”取決于許多因素而變化，包括但不限于適用該術(shù)語(yǔ)的對(duì)象的年齡、臨床狀況和膳食攝入。通常，“營(yíng)養(yǎng)全面”指本公開的營(yíng)養(yǎng)組合物提供正常生長(zhǎng)所需的足量的所有碳水化合物，脂類，必需脂肪酸，蛋白質(zhì)，必需氨基酸，條件必需氨基酸，維生素，礦物質(zhì)和能量。如用于營(yíng)養(yǎng)物的，術(shù)語(yǔ)“必需”指不能由機(jī)體以足以用于正常生長(zhǎng)和保持健康的量合成且從而必需通過飲食補(bǔ)充的任何營(yíng)養(yǎng)物。如用于營(yíng)養(yǎng)物的，術(shù)語(yǔ)“條件必需”指在機(jī)體得不到足量的前體化合物用于發(fā)生內(nèi)源合成時(shí)的條件下必須通過飲食補(bǔ)充的營(yíng)養(yǎng)物。
[0026]通過限定，對(duì)于早產(chǎn)嬰兒為“營(yíng)養(yǎng)全面”的組合物將提供早產(chǎn)嬰兒生長(zhǎng)所需的定性和定量上足量的所有碳水化合物，脂類，必需脂肪酸，蛋白質(zhì)，必需氨基酸，條件必需氨基酸，維生素，礦物質(zhì)和能量。通過限定，對(duì)于足月嬰兒為“營(yíng)養(yǎng)全面”的組合物將提供足月嬰兒生長(zhǎng)所需的定性和定量上足量的所有碳水化合物，脂類，必需脂肪酸，蛋白質(zhì)，必需氨基酸，條件必需氨基酸，維生素，礦物質(zhì)和能量。通過限定，對(duì)于兒童為“營(yíng)養(yǎng)全面”的組合物將提供兒童生長(zhǎng)所需的定性和定量上足量的所有碳水化合物，脂類，必需脂肪酸，蛋白質(zhì)，必需氨基酸，條件必需氨基酸，維生素，礦物質(zhì)和能量。
[0027]營(yíng)養(yǎng)組合物可以以本領(lǐng)域已知的任何形式提供，包括粉末，凝膠，懸液，膏(paste),固體，液體，液體濃縮物或即用產(chǎn)品。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物是嬰兒配方，尤其是適于用作嬰兒唯一營(yíng)養(yǎng)源的嬰兒配方。
[0028]在優(yōu)選實(shí)施方案中，本文公開的營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品可以經(jīng)腸道施用。如本文所述，“經(jīng)腸道”指通過胃腸道或消化道或在胃腸道或消化道內(nèi)，“經(jīng)腸道施用”包括口服喂食、胃內(nèi)喂食、經(jīng)幽門施用或者向消化道內(nèi)的任何其它導(dǎo)入。
[0029]用于實(shí)施本公開的合適的脂肪或脂類來源可以是本領(lǐng)域中任何已知或使用的來源,包括但不限于,動(dòng)物來源,例如乳脂,黃油,奶油,卵黃脂質(zhì)；海洋來源,例如魚油,海洋油(marine oils)，單細(xì)胞油；蔬菜和植物油，例如玉米油，低芥酸菜籽油，葵花油，大豆油，棕櫚油精，椰子油，高油酸葵花油，月見草油，菜籽油，橄欖油，亞麻子(亞麻籽)油，棉籽油，高油酸紅花油，棕櫚硬脂(palm stearin),棕櫚仁油，小麥胚芽油；中鏈甘油三酯油和乳液和脂肪酸的酯，及其任意組合。
[0030]在某些實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物中包含的蛋白來源包括牛奶蛋白?？捎糜趯?shí)施本公開的牛奶蛋白來源包括但不限于，乳蛋白粉，乳蛋白濃縮物，乳蛋白分離物，脫脂奶固體，脫脂奶，脫脂奶粉，乳清蛋白，乳清蛋白分離物，乳清蛋白濃縮物，甜乳清，酸乳清，酪蛋白，酸酪蛋白，酪蛋白酸鹽(如酪蛋白酸鈉，酪蛋白酸鈉鈣，酪蛋白酸鈣)及其任意組合。
[0031]在Iv實(shí)施方案中，蛋白以完整蛋白提供。在其它實(shí)施方案中，蛋白以完整蛋白和水解程度在約4%和10%之間的部分水解蛋白的組合提供。在又一個(gè)實(shí)施方案中，蛋白來源可以補(bǔ)充以含谷氨酰胺肽。
[0032]在本公開的一個(gè)具體實(shí)施方案中，蛋白來源包含乳清和酪蛋白，且乳清對(duì)酪蛋白的比例與人母乳中發(fā)現(xiàn)的比例類似。例如，在某些實(shí)施方案中，乳清與酪蛋白的重量比從約20%乳清:80%酪蛋白到約80%乳清:20%酪蛋白。
[0033]在本公開的一個(gè)實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物可以包含一種或多種益生菌。術(shù)語(yǔ)“益生菌”指具有低病原性或無病原性、對(duì)宿主健康發(fā)揮有益效果的微生物。只要其實(shí)現(xiàn)意圖的結(jié)果，任何本領(lǐng)域已知的益生菌在本實(shí)施方案中都是可接受的。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，益生菌可以選自乳桿菌屬物種，鼠李糖乳桿菌GG {Lactobacillusrhamnosus 6K0，雙歧桿菌屬{Bifidobacterium)物種，短雙歧桿菌{Bifidobacteriumbrevis),長(zhǎng)雙歧桿菌(Bifidobacterium longum),和動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種BB-12{Bifidobacterium animal is subsp.1actis BB—12)。
[0034]如果包括在組合物內(nèi)，益生菌的量可以從每kg體重每天約IO4到約101°個(gè)菌落形成單位(cfu)變化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，益生菌的量可以從每kg體重每天約IO6到約IO9個(gè)菌落形成單位變化。在又一個(gè)實(shí)施方案中，益生菌的量可以是每kg體重每天至少約IO6個(gè)菌落形成單位。并且，公開的組合物還可以包括益生菌條件培養(yǎng)基成分。
[0035]在一個(gè)實(shí)施方案中，益生菌中的一種或多種是有活力的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，益生菌中的一種或多種是無活力的。如本文所述，術(shù)語(yǔ)“有活力的”指活微生物。術(shù)語(yǔ)“無活力的”或“無活力的益生菌”指非活的益生菌微生物、其細(xì)胞成分和其代謝物。這些無活力的益生菌可以已被熱殺滅或以其它方式滅活，但是保持有益影響宿主健康的能力。用于本公開的益生菌可以是天然發(fā)生的、合成的或通過遺傳操作生物開發(fā)的，無論這些新的來源是目前已知的或后來開發(fā)的。
[0036]在本公開的一個(gè)實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物可以包括包含一種或多種益生元的益生元組合物。如本文所述，術(shù)語(yǔ)“益生元”指通過選擇性刺激結(jié)腸中一種或有限數(shù)目的能改善宿主健康的細(xì)菌的生長(zhǎng)和/或活性而有益影響宿主的不可消化的食物成分?！耙嫔M合物”是包含一種或多種益生元的組合物。這些益生元可以是天然發(fā)生的、合成的或通過遺傳操作生物和/或植物開發(fā)的，無論這些新的來源是目前已知的或后來開發(fā)的。在某些實(shí)施方案中，本公開組合物中包含的益生元包括美國(guó)專利號(hào)7，572，474中教導(dǎo)的那些，該專利的公開內(nèi)容通過引用并入本文。
[0037]用于本公開的益生元可以是天然發(fā)生的、合成的或通過遺傳操作生物和/或植物開發(fā)的，無論這些新的來源是目前已知的或后來開發(fā)的。用于本公開的益生元可以包括寡糖，聚糖，和包含果糖、木糖、大豆、半乳糖、葡萄糖和甘露糖的其它益生元。更具體地，用于本公開的益生元可以包括乳果糖，低聚乳果糖，棉子糖，葡寡糖，菊粉，聚葡萄糖，聚葡萄糖粉，低聚半乳糖，低聚果糖，低聚異麥芽糖，大豆低聚糖，低聚乳果糖，低聚木糖，殼寡糖，低聚甘露糖，低聚阿拉伯糖，低聚唾液酸糖，低聚巖藻糖，和低聚龍膽糖。優(yōu)選地，營(yíng)養(yǎng)組合物包含聚葡萄糖(PDX)和/或低聚半乳糖(G0S)。任選地，除了聚葡萄糖和/或低聚半乳糖之外，營(yíng)養(yǎng)組合物還包含一種或多種附加的益生元。
[0038]如果包含在營(yíng)養(yǎng)組合物內(nèi)，營(yíng)養(yǎng)組合物中存在的益生元的總量可以是從約0.lg/100kcal到約lg/100kcal。更優(yōu)選地,營(yíng)養(yǎng)組合物中存在的益生元的總量可以是從約0.3 g/100kcal到約0.7 g/100kcal。至少20%的益生元應(yīng)當(dāng)包含低聚半乳糖和/或聚葡萄糖。
[0039]如果聚葡萄糖用于益生元組合物中，在一個(gè)實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物中聚葡萄糖的量可以為約0.lg/100kcal到約lg/lOOkcal的范圍。在另一個(gè)實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物內(nèi)的聚葡萄糖的量是從約0.2 g/100kcal到約0.6 g/100kcal的范圍內(nèi)。
[0040]如果低聚半乳糖用于益生元組合物中，在一個(gè)實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物中低聚半乳糖的量可以從約0.lg/100kcal到約lg/100kcal。在另一個(gè)實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物中的低聚半乳糖的量是從約0.2 g/lOOkcal到約0.5 g/lOOkcal。在某些實(shí)施方案中，益生元組合物中聚葡萄糖與低聚半乳糖的比例為約9:1到約1:9。
[0041]在一些實(shí)施方案中，本公開的營(yíng)養(yǎng)制劑可以進(jìn)一步包含長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸(LCPUFAs)來源。優(yōu)選地，LCPUFAs的來源包含二十二碳六烯酸(DHA)。其它合適的LCPUFAs包括，但不限于a-亞油酸，Y-亞油酸，亞油酸，亞麻酸，二十碳五烯酸(EPA)和花生四烯酸(ARA)0
[0042]在一個(gè)實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物補(bǔ)充以DHA和ARA 二者。在此實(shí)施方案中，ARA: DHA的重量比可以從約1:3到約9:1。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，ARAiDHA的重量比是約1:2到約4:1。
[0043]營(yíng)養(yǎng)組合物中長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸的量可以從約5 mg/100 kcal到約100 mg/100kcal 變化，更優(yōu)選從約 10 mg/100 kcal 到約 50 mg/100 kcal。
[0044]營(yíng)養(yǎng)組合物可以使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)補(bǔ)充以含DHA和ARA的油。例如，DHA和ARA可以通過替換組合物中正常存在的等量油例如高油酸葵花油來加入組合物。作為另一個(gè)實(shí)例，含有DHA和ARA的油可以通過替換不含DHA和ARA的組合物中正常存在的總脂肪摻合物的等量剩余部分(rest)來加入組合物。
[0045]如果使用，DHA和AM的來源可以是本領(lǐng)域已知的任何來源，例如海洋油，魚油，單細(xì)胞油，卵黃脂質(zhì)和腦脂質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，DHA和AM分別來源于單細(xì)胞Martek油，DHASC0?和ARASC0?，或其變體。DHA和ARA可以是天然形式，前提是LCPUFA來源的其余部分對(duì)嬰兒不造成任何實(shí)質(zhì)的有害效果?？蛇x地，DHA和ARA可以以精煉的形式應(yīng)用。
[0046]在本公開的一個(gè)實(shí)施方案中，DHA和ARA的來源是美國(guó)專利號(hào)5，374，567、5，550, 156和5，397，591中教導(dǎo)的單細(xì)胞油，這些專利的公開內(nèi)容通過引用整體并入本文。但是，本公開并不僅限于這些油。
[0047]在某些實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)組合物包含從約0.5mg/100kcal到約5mg/100kcal的鐵，包括結(jié)合到乳鐵蛋白上的鐵。
實(shí)施例
[0048]提供下面的實(shí)施例來闡釋本公開的營(yíng)養(yǎng)組合物的實(shí)施方案，但是其不應(yīng)解釋為對(duì)本公開的任何限制。基于對(duì)說明書或本文公開的營(yíng)養(yǎng)組合物或方法的實(shí)施的考慮，在本文權(quán)利要求范圍之內(nèi)的其它實(shí)施方案對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。意圖說明書連同實(shí)施例僅考慮為示例性的，本公開的范圍和精神由所附權(quán)利要求表明。
[0049]實(shí)施例1
本實(shí)施例示例乳鐵蛋白和嬰兒配方在體外對(duì)致腹灣性大腸桿菌(diarrengic E.coli )菌株生長(zhǎng)的影響。
[0050]獲得來自每個(gè)DEC種群(產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)，腸致病性大腸桿菌(EPEC)，產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(STEC)，腸聚集性大腸桿菌(EAEC))的15個(gè)臨床致腹瀉性大腸桿菌(diarrheageanic E.coli, DEC)菌株。如先前所述，菌株分離自來自具有腹灣的兒童的Peruvian隊(duì)列研究,并通過實(shí)時(shí)PCR鑒定致腹灣性大腸桿菌(diaheagenic E.coli )種群。另外，還獲得15個(gè)鼠傷寒沙門氏菌血清型的臨床分離物和15個(gè)福氏志賀氏菌分離物。
[0051]所有臨床菌株和標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室對(duì)照菌株在37°C在McConkey瓊脂培養(yǎng)基中生長(zhǎng)超過24小時(shí)。對(duì)于活力分析，菌株在37°C在溶源性肉湯中生長(zhǎng)18小時(shí)。菌株然后在PBS中清洗兩次，并在4500Xg離心5 min。僅對(duì)數(shù)中期的細(xì)菌被使用。
[0052]在蒸懼水中配制0、0.6、1、2、4、6、8和10 mg/ml乳鐵蛋白母液和0、0.6、1、2、4、6、8和10 mg/ml含2.1 g/100 kcal乳蛋白和1.8 mg/100 kcal鐵的嬰兒配方母液。[0053]含大約2 X IO8對(duì)數(shù)期細(xì)胞的臨床菌株培養(yǎng)物接種到含I %細(xì)菌用蛋白胨的96孔板中。每板還通過微量稀釋接種嬰兒配方或乳鐵蛋白母液，使每種菌株得以對(duì)0、0.6、1、2、
4、6、8或10 mg/ml乳鐵蛋白或嬰兒配方進(jìn)行測(cè)試。通過10倍稀釋的系列培養(yǎng)，板在37°C孵育并每30分鐘監(jiān)測(cè)生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)。然后在分光光度計(jì)和/或ELISA讀數(shù)器中監(jiān)測(cè)生長(zhǎng)。孵育18-20小時(shí)后，每個(gè)菌株的MIC記錄為導(dǎo)致完全細(xì)菌抑制的嬰兒配方或乳鐵蛋白的最低濃度。
[0054]還進(jìn)行測(cè)試乳鐵蛋白和嬰兒配方對(duì)每個(gè)菌株的活性的協(xié)同分析，并且如上文所述測(cè)量乳鐵蛋白/嬰兒配方組合對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響。對(duì)于這些協(xié)同分析，基于MIC研究和生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)的結(jié)果，對(duì)每種試劑單獨(dú)確定乳鐵蛋白和嬰兒配方的濃度。
[0055]實(shí)施例2
本實(shí)施例示例乳鐵蛋白和嬰兒配方在體外對(duì)致腹瀉性大腸桿菌菌株對(duì)人腸上皮細(xì)胞黏附的影響。
[0056]H印2細(xì)胞的分會(huì)合層(在24孔板中大約5X IO4細(xì)胞/孔)用實(shí)施例1中描述的產(chǎn)腸毒素大腸桿菌、腸致病性大腸桿菌、產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌、腸聚集性大腸桿菌、鼠傷寒沙門氏菌血清型或福氏志賀氏菌分離物感染。然后將含或不含10mg/ml乳鐵蛋白的嬰兒配方加入其中，使細(xì)菌對(duì)嬰兒配方的濃度為100:1的比例。然后，感染的H印2細(xì)胞層在37°C、5% CO2中孵育4小時(shí)。然后強(qiáng)力清洗Ifep2細(xì)胞以去除非黏附細(xì)菌。細(xì)胞用70%甲醇固定，用10%吉姆薩溶液染色，并在顯微鏡下檢查。另外，對(duì)于產(chǎn)腸毒素大腸桿菌、產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌、福氏志賀氏菌和鼠傷寒沙門氏菌血清型如先前報(bào)道進(jìn)行熒光肌動(dòng)蛋白染色法(FAS)分析。
[0057]實(shí)施例3
本實(shí)施例示例了乳鐵蛋白和嬰兒配方在體外在支持抵抗由細(xì)菌病原體導(dǎo)致的狀況或疾病中的效果。
[0058]獲得6至8周齡、體重20至24g、健康的雌性Balb/c品系小鼠，并分入實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組然后在感染前飼以200 μ?含75或165 mg/ml乳鐵蛋白的嬰兒配方，并且對(duì)照組在感染前飼以200 μ?嬰兒配方。調(diào)整所施用的嬰兒配方的量，使小鼠接受的量相當(dāng)于每天600 mg/kg和1333 mg/kg乳鐵蛋白。小鼠然后用300 ? IO8菌落形成單位(cfu)的鼠傷寒沙門氏菌血清型，200 ? IO8 cfu的朽1檬酸桿菌(OoAacier rot/efliia?) (EPEC的鼠模型)或200 μ? IO8 cfu福氏志賀氏菌感染。對(duì)于感染和處理前接種，使用管飼針。感染后，小鼠分別隨意接受含75或165 mg/ml乳鐵蛋白的嬰兒配方或單獨(dú)嬰兒配方7天。再次地，調(diào)整所施用的嬰兒配方的量，使小鼠接受的量相當(dāng)于每天600 mg/kg和1333 mg/kg乳鐵蛋白。感染后，每天監(jiān)測(cè)所有小鼠中的死亡率、體重和臨床體征(豎毛、駝背姿態(tài)和運(yùn)動(dòng)減少)，監(jiān)測(cè)7天。通過比較每個(gè)感染的小鼠的行為15分鐘來確定臨床體征的發(fā)生率。在感染后第10天，小鼠被處死，進(jìn)行心臟穿刺獲得血液培養(yǎng)物。對(duì)于組織病理學(xué)分析，摘除器官(結(jié)腸、肝臟和脾臟)。由對(duì)組別分配設(shè)盲以防止偏見的病理學(xué)家對(duì)器官中的炎癥和壞死程度進(jìn)行研究。
[0059]實(shí)施例4
本實(shí)施例示例了乳鐵蛋白和嬰兒配方在體外在支持抵抗由病毒病原體導(dǎo)致的狀況或疾病中的效果。[0060]如上述進(jìn)行實(shí)施例3,除了小鼠被輪狀病毒、諾如病毒、星狀病毒、腺病毒和杯狀病毒(Calicivus)株而不是細(xì)菌菌株感染。小鼠如上述被監(jiān)測(cè)和研究。
[0061]實(shí)施例5
【權(quán)利要求】
1.在人中支持抵抗疾病或狀況的方法，包括向人施用營(yíng)養(yǎng)組合物，所述營(yíng)養(yǎng)組合物包含: a)脂肪或脂類來源； b)蛋白來源；和 c)由非人來源產(chǎn)生的乳鐵蛋白，其中所述乳鐵蛋白與HLf(349 - 364)片段處的氨基酸序列AVGEQELRKCNQWSGL具有至少48%的同源性。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病或狀況是由至少一種選自產(chǎn)腸毒素大腸桿菌、腸致病性大腸桿菌、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenza)、產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌、腸聚集性大腸桿菌、鼠傷寒沙門氏菌血清型{Salmonella ser.Typhi murium)、場(chǎng)氏志賀氏菌{Shigella flexneri)、輪狀病毒、諾如病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒及其組合的病原體導(dǎo)致的疾病或狀況。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病或狀況是病毒性呼吸道感染。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述人是嬰兒或兒童。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述脂肪或脂類來源以約3g/100kcal到約7 g/100kcal的水平存在，以及所述蛋白來源以約I g/100 kcal到約5 g/100 kcal的水平存在。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述乳鐵蛋白以至少約10mg/100kcal的水平存在。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述乳鐵蛋白以約70mg/100kcal到約220mg/100kcal的水平存在。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述乳鐵蛋白選自非人乳鐵蛋白、通過遺傳修飾的生物產(chǎn)生的人乳鐵蛋白及其組合。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述乳鐵蛋白在人乳鐵蛋白變得不穩(wěn)定或失活的條件下是穩(wěn)定的并且保持活性。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述營(yíng)養(yǎng)組合物經(jīng)歷過巴氏滅菌條件。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述營(yíng)養(yǎng)組合物進(jìn)一步包含益生元組合物，所述益生元組合物包括選自低聚半乳糖、聚葡萄糖及其組合的化合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述營(yíng)養(yǎng)組合物包含約0.5mg/100kcal到約5mg/100kcal的鐵，包括結(jié)合到乳鐵蛋白上的鐵。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述乳鐵蛋白與HLf(349 — 364)片段處的氨基酸序列AVGEQELRKCNQWSGL具有至少65%的同源性。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述人在所述營(yíng)養(yǎng)組合物被施用時(shí)具有所述疾病或狀況。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述營(yíng)養(yǎng)組合物被預(yù)防性地施用，并且所述人在所述營(yíng)養(yǎng)組合物被施用時(shí)不具有所述疾病或狀況。
【文檔編號(hào)】A23L1/305GK103429092SQ201180062708
【公開日】2013年12月4日 申請(qǐng)日期:2011年12月15日 優(yōu)先權(quán)日:2010年12月29日
【發(fā)明者】A.維特克, C.穆尼奧斯, D.巴納瓦拉 申請(qǐng)人:Mjn 美國(guó)控股有限責(zé)任公司