專利名稱：一株施氏假單胞菌及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株菌種及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用，具體涉及一株施氏假單胞菌及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
聚合物生產(chǎn)菌株在采油上的應(yīng)用主要在微生物調(diào)剖方面，微生物調(diào)剖(Microbial plugging)技術(shù)，是通過注入微生物或激活地層本源微生物，利用微生物生長繁殖及代謝過程中產(chǎn)生的氣體、生物聚合物和無機(jī)鹽沉淀形成生物膜的作用，調(diào)整注入井吸水剖面，達(dá)到調(diào)剖堵水提高采收率的目的，而目前的現(xiàn)有技術(shù)中，缺少優(yōu)秀的生物聚合物生產(chǎn)菌株應(yīng)用于微生物采油現(xiàn)場，限制了生物聚合物生產(chǎn)菌株的在采油作業(yè)中作用的發(fā)揮。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株能發(fā)酵生成生物聚合物、調(diào)剖堵水提高采收率的施氏假單胞菌及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是
一株施氏假單胞菌(/^ewi/offloaas stutzeri)W\ CGMCC Νο·5Μ1，其 16S rDNA 基因序列為
CGAGCTACCATGCAGTCGAGCGGATGAAGAGAGCTTGCTCTCCGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCC TAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGTTTCGAAAGGAACGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCAG GGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCG ACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGC AGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAA GCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCAGTAAGCTAATACCTTGCTGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTA ACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGT GGTTCGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTGGCGAGCTAGAGTATGGCA GAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCT GGGCTAATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAAC GATGTCGACTAGCCGTTGGGATCCTTGAGATCTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACG GCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACG CGAAGAACCTTACCAGGCCTTGACATGCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAGCTCTGACACAGG TGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGT TACCAGCACGTTAAGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCA TCATGGCCCTTACGGCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCT AATCCCATAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTG AATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCTCCAG AAGTAGCTAGTCTAACCTTCGGGGGACGGTACCACG ；上述16S rDNA基因序列的長度為1417個核苷酸。一株施氏假單胞菌 G^ei/i/offloaas stutzeri) DPI CGMCC No. 5M1 的培養(yǎng)方法，是將施氏假單胞菌(/^ei/i/offloaas StutzerOWl CGMCC No. 5241接種到專用培養(yǎng)基，在50°C 的培養(yǎng)溫度下，搖床轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)72小時；
所述的專用培養(yǎng)基的配方為
種子瓶葡萄糖2. 0g、玉米漿0. Sg、淀粉1. 0g、硝酸鈉0. 3g、磷酸氫二鈉0. lg、磷酸氫二鉀0. lg、磷酸二氫鉀0. 05g、硫酸鎂0. 05g、氯化鈉0. lg、氯化鈣0. 005g、pH值7. 3 ；
發(fā)酵瓶葡萄糖6. 0g、玉米漿1. Sg、淀粉3. 0g、硝酸鈉0. 5g、磷酸氫二鈉0. 15g、磷酸氫二鉀0. lg、磷酸二氫鉀0. 05g、硫酸鎂0. 05g、氯化鈉0. 5g、氯化鈣0. 005g、pH值7. 3。所述的一株施氏假單胞菌G^ei/i/offloaas stutzeri)W\ CGMCC No. 5241 在提高油田采收率中的應(yīng)用。所述的一株施氏假單胞菌G^ei/i/offloaas stutzeri)W\ CGMCC No. 5241 在制備油田開發(fā)生物解堵劑中的應(yīng)用。本發(fā)明具有以下優(yōu)點
本發(fā)明提供的施氏假單胞菌株，可應(yīng)用于低滲透性油田的三次開發(fā)，通過注入微生物， 利用微生物生長繁殖及代謝過程中產(chǎn)生的氣體、生物聚合物和無機(jī)鹽沉淀形成生物膜的作用，菌體細(xì)胞及其代謝產(chǎn)出的生物聚合物對高滲透層帶起較好的選擇性封堵作用，從而改善層間油水運動狀況，擴(kuò)大波及區(qū)域，調(diào)整注入井吸水剖面，達(dá)到調(diào)剖堵水提高采收率的目的。應(yīng)用光學(xué)和電子顯微鏡對聚合物進(jìn)行了觀察，發(fā)現(xiàn)生物聚合物是一種水不溶性的相互纏繞的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；利用紙層析分析其酸水解產(chǎn)物是葡萄糖，推斷生物聚合物為纖維素類物質(zhì)。此外，該菌培養(yǎng)方法簡單易操作，生長繁殖迅速，具有擴(kuò)大化生產(chǎn)的可行性，具有較高的研究、應(yīng)用及市場價值。


圖1為不同溫度條件下施氏假單胞菌菌株DPl的生長曲線。圖2為不同培養(yǎng)時間施氏假單胞菌菌株DPl的生長曲線。圖3為巖心1中0. IPV施氏假單胞菌菌株DPl的采收率與壓力曲線。圖4為巖心2中0. 3PV施氏假單胞菌菌株DPl的采收率與壓力曲線。圖5為巖心3中0. 5PV施氏假單胞菌菌株DPl的采收率與壓力曲線。圖6為巖心4中0. 7PV施氏假單胞菌菌株DPl的采收率與壓力曲線。圖7為不同巖心即不同滲透率模型中施氏假單胞菌菌株DPl的采收率曲線。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。本發(fā)明所涉及的施氏假單胞菌G^ewi/offloaas stutzeri) DPI,已于2011年9月9 日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No. 5241。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；下述實施例中所用的實驗材料，如無特殊說明，均為常規(guī)生化試劑。一、施氏假單胞菌菌株G^ei/i/offloftas stutzeri) DPI CGMCC No. 5M1 的分離篩選與純化
1、培養(yǎng)基
種子瓶糖2. Og,玉米槳0. 6g，硝酸鈉0. 2g，磷酸氫二鈉0. Ig,磷酸二氫鉀0. 05g,硫酸鎂0. 05g,氯化鈉0. 5g，氯化鉀0. 2g，氯化鈣0. 005g, pH 7. 2
發(fā)酵瓶糖10g，玉米槳1. 8g，硝酸鈉0. 6g，磷酸氫二鈉0. 2g，磷酸氫二鉀0. lg，硫酸鎂0. 05g,氯化鈉0. 5g，氯化鉀1. Og,氯化鈣0. 05g, ρΗ7· 2
2、培養(yǎng)條件
培養(yǎng)溫度50°C，搖床轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分。通過顯微鏡觀察菌株的生長情況。圖1為不同溫度條件下施氏假單胞菌菌株DPl的生長曲線，圖2為不同培養(yǎng)時間施氏假單胞菌菌株DPl 的生長曲線。施氏假單胞菌菌株DPl在50°C條件下培養(yǎng)，測定72小時內(nèi)發(fā)酵液黏度，見表1。表1發(fā)酵液粘度隨培養(yǎng)時間變化
權(quán)利要求
1.一株施氏假單胞菌 O^ewi/offloaas stutzeri)Wl CGMCC Νο·5Μ1，其 16S rDNA 基因序列為CGAGCTACCATGCAGTCGAGCGGATGAAGAGAGCTTGCTCTCCGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCC TAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGTTTCGAAAGGAACGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCAG GGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCG ACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGC AGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAA GCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCAGTAAGCTAATACCTTGCTGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTA ACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGT GGTTCGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTGGCGAGCTAGAGTATGGCA GAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCT GGGCTAATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAAC GATGTCGACTAGCCGTTGGGATCCTTGAGATCTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACG GCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACG CGAAGAACCTTACCAGGCCTTGACATGCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAGCTCTGACACAGG TGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGT TACCAGCACGTTAAGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCA TCATGGCCCTTACGGCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCT AATCCCATAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTG AATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCTCCAG AAGTAGCTAGTCTAACCTTCGGGGGACGGTACCACG ；上述16S rDNA基因序列的長度為1417個核苷酸。
2.一株施氏假單胞菌(/^ewi/offloaas stutzeri)W\ CGMCC No. 5241的培養(yǎng)方法，是將施氏假單胞菌(/^ei/i/offloaas StutzerOWl CGMCC No. 5241接種到專用培養(yǎng)基，在50°C的培養(yǎng)溫度下，搖床轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)72小時；所述的專用培養(yǎng)基的配方為種子瓶葡萄糖2. 0g、玉米漿0. Sg、淀粉1. 0g、硝酸鈉0. 3g、磷酸氫二鈉0. lg、磷酸氫二鉀0. lg、磷酸二氫鉀0. 05g、硫酸鎂0. 05g、氯化鈉0. lg、氯化鈣0. 005g、pH值7. 3 ；發(fā)酵瓶葡萄糖6. 0g、玉米漿1. Sg、淀粉3. 0g、硝酸鈉0. 5g、磷酸氫二鈉0. 15g、磷酸氫二鉀0. lg、磷酸二氫鉀0. 05g、硫酸鎂0. 05g、氯化鈉0. 5g、氯化鈣0. 005g、pH值7. 3。
3.權(quán)利要求1所述的一株施氏假單胞菌O^ei/i/offloaasstutzeri)W\ CGMCC No. 5241 在提高油田采收率中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1所述的一株施氏假單胞菌O^ei/i/offloaasstutzeri)W\ CGMCC No. 5241 在制備油田開發(fā)生物解堵劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一株施氏假單胞菌菌株DP1CGMCCNo.5241及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用。施氏假單胞菌DP1的培養(yǎng)方法是將施氏假單胞菌DP1接種到專用培養(yǎng)基，50℃下，搖床轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)72小時；專用培養(yǎng)基的配方為種子瓶葡萄糖、玉米漿、淀粉、硝酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鈉、氯化鈣；發(fā)酵瓶葡萄糖、玉米漿、淀粉、硝酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鈉、氯化鈣。本發(fā)明應(yīng)用于低滲透性油田的三次開發(fā)，利用微生物生長繁殖及代謝過程中產(chǎn)生的氣體、生物聚合物和無機(jī)鹽沉淀形成生物膜的作用，改善層間油水運動狀況，達(dá)到調(diào)剖堵水提高采收率的目的。
文檔編號C12N1/20GK102559551SQ201210001458
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月5日
發(fā)明者張積耀, 李世強(qiáng), 梁凱強(qiáng), 江紹靜, 洪玲, 王香增, 薛媛, 趙麗, 高瑞民 申請人:陜西延長石油(集團(tuán))有限責(zé)任公司研究院