專利名稱：：小麥人工染色體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
。具體而言，本發(fā)明涉及在小麥中獲得人工小染色體的方法。本發(fā)明通過(guò)將含有擬南芥端粒序列的植物載體轉(zhuǎn)化小麥，而在小麥中發(fā)生端粒介導(dǎo)的染色體的切割，進(jìn)而獲得小麥人工小染色體。本發(fā)明還涉及對(duì)所獲得的小麥中的小染色體進(jìn)行檢測(cè)的方法。本發(fā)明還涉及人工小染色體技術(shù)在小麥基因工程中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：植物基因工程技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)歷了近30年，作為現(xiàn)代生物技術(shù)的核心技術(shù)，其已經(jīng)在農(nóng)牧業(yè)，食品，環(huán)保等方面顯示出了廣闊的應(yīng)用前景。植物基因工程技術(shù)主要是將外源基因構(gòu)建到可表達(dá)的重組載體中，并通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)或者通過(guò)粒子轟擊轉(zhuǎn)化到宿主基因組中表達(dá)，最終改變植物性狀[1-2]。然而，當(dāng)?shù)幕蚬こ碳夹g(shù)也存在著許多局限性。例如，多基因轉(zhuǎn)化，目前應(yīng)用傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因方法實(shí)現(xiàn)多基因的共轉(zhuǎn)化難度較大，這極大地限制了對(duì)數(shù)量性狀基因及代謝復(fù)合物與多產(chǎn)物的合成所涉及的多個(gè)基因的同時(shí)轉(zhuǎn)化[3-4];外源基因在整合到宿主基因組中時(shí)，往往整合進(jìn)內(nèi)源基因而導(dǎo)致內(nèi)源基因失去功能；同時(shí)轉(zhuǎn)化的隨機(jī)性使得轉(zhuǎn)入的外源基因很難進(jìn)行操控。隨著作物基因工程和人工染色體技術(shù)的發(fā)展，出現(xiàn)了人工微小染色體[5]技術(shù)，人工染色體可以作為外源基因表達(dá)的獨(dú)立平臺(tái)，由于不用整合到宿主基因組中，所以不會(huì)引起宿主基因的插入失活以及轉(zhuǎn)基因的位置效應(yīng)。而且通過(guò)位點(diǎn)特異重組系統(tǒng)，多個(gè)基因可以以有序的方式添加到小染色體上。因此，小染色體的出現(xiàn)提供了解決常規(guī)轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在的問(wèn)題的有效途徑。端粒(tolemere)是染色體末端的DNA重復(fù)序列，是染色體末端的一種特殊結(jié)構(gòu)，端粒的功能除保證DNA完整復(fù)制外，還在維持染色體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定(保護(hù)染色體不分解和染色體重排及末端不相互融合等)。許多多細(xì)胞真核生物的端粒序列都已被克隆[6-8]。Farr等將克隆的人類端粒序列導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞中驗(yàn)證端粒功能，發(fā)現(xiàn)新轉(zhuǎn)入的端粒序列能夠在染色體上產(chǎn)生新的端粒[9-10]。目前科學(xué)家利用端粒介導(dǎo)截短法和從頭染色體誘導(dǎo)合成法成功構(gòu)建了人類人工染色體，然后通過(guò)同源重組等方法向人類人工染色體中插入各種用途的基因序列，現(xiàn)已經(jīng)用于基因治療和醫(yī)療蛋白的生產(chǎn)[11]。植物的人工染色體較哺乳動(dòng)物和人類細(xì)胞的研究而言起步較晚，無(wú)論是基于天然染色體改造的自上而下策略，還是將克隆的染色體功能元件人工組裝的自下而上策略在植物的研究中都只是出于起步階段。在植物中，利用自下而上策略第一個(gè)微小染色體的成功報(bào)道是在玉米，Carlson等[12]在體外將標(biāo)記基因篩選基因及著絲粒重復(fù)序列連接成環(huán)，重組載體不含端粒序列，但是可以在細(xì)胞中完成微小染色體的組裝，由于它不含有端粒結(jié)構(gòu)，能否作為一種穩(wěn)定的載體系統(tǒng)還有待研究。Ananiev等[13]將玉米的著絲粒序列、端粒序列及選擇標(biāo)記基因等在體外連接，通過(guò)粒子轟擊的方法導(dǎo)入宿主細(xì)胞中，最終組裝成為微小染色體。Yu等[14，15]利用含有2.6kb的擬南芥端粒序列載體成功的將截短法應(yīng)用在B染色體和四倍體玉米中的A染色體，截短的染色體對(duì)玉米的生長(zhǎng)發(fā)育沒(méi)有明顯影響。這是端粒介導(dǎo)的染色體截?cái)嗉夹g(shù)在植物中的首次報(bào)道，也為植物人工染色體的成功應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。Chee等[16]同樣的利用端粒介導(dǎo)的染色體截短法在擬南芥中成功的獲得截短的穩(wěn)定遺傳的小染色體，研究發(fā)現(xiàn)四倍體的Wa-I的轉(zhuǎn)化效率要高于二倍體的Col-Ο，這可能是由于多倍體的植株更能忍受截短染色體給基因組帶來(lái)的沖擊。小麥?zhǔn)橇扼w，也是重要的糧食作物，考慮到植物物種間的差異，采用端粒重復(fù)序列能否在小麥中構(gòu)建人工染色體尚不清楚。目前小麥人工染色體的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本領(lǐng)域需要研究用于在小麥中創(chuàng)建穩(wěn)定遺傳的人工小染色體的方法以及該方法進(jìn)一步的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明通過(guò)將含有擬南芥端粒序列的植物載體轉(zhuǎn)化小麥，而在小麥中發(fā)生端粒介導(dǎo)的染色體的切割，進(jìn)而獲得小麥人工小染色體。本研究證明了2.6kb的擬南芥端粒序列重復(fù)對(duì)于小麥中端粒介導(dǎo)的染色體的切割是高效的，可以通過(guò)這一技術(shù)獲得小麥人工體以及帶有小染色體的轉(zhuǎn)基因小麥工程株，利于對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步轉(zhuǎn)多基因改造。因此，本發(fā)明一方面提供在小麥中創(chuàng)建人工小染色體的方法，所述方法包括用含有擬南芥端粒重復(fù)序列的載體轉(zhuǎn)化小麥，所述擬南芥端粒重復(fù)序列在小麥中導(dǎo)致端粒介導(dǎo)的染色體的切割。本發(fā)明另一方面提供對(duì)創(chuàng)建的人工小染色體進(jìn)行檢測(cè)的方法，其中利用熒光原位雜交技術(shù)和/或雙色熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)化植株的染色體切割。本發(fā)明還一方面提供產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因小麥的方法，所述方法包括用含有擬南芥端粒重復(fù)序列的載體轉(zhuǎn)化小麥，所述擬南芥端粒重復(fù)序列在小麥中導(dǎo)致端粒介導(dǎo)的染色體的切割。在本發(fā)明的方法中，優(yōu)選地采用通過(guò)基因槍轟擊法進(jìn)行轉(zhuǎn)化。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，獲得帶有小麥人工小染色體的轉(zhuǎn)基因小麥工程株，進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作，以獲得轉(zhuǎn)基因小麥新種質(zhì)。所述轉(zhuǎn)基因操作包括轉(zhuǎn)多基因操作，從而獲得具有特殊性狀或者可以合成特殊代謝產(chǎn)物，但并不影響常染色體傳遞以及植物正常性狀的轉(zhuǎn)基因小麥新種質(zhì)。本發(fā)明還一方面涉及小麥育種的方法，所述方法包括根據(jù)本發(fā)明的方法在小麥中創(chuàng)建人工小染色體的步驟。在創(chuàng)建獲得人工小染色體后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作，所述轉(zhuǎn)基因操作包括轉(zhuǎn)多基因操作，從而獲得具有特殊性狀或者可以合成特殊代謝產(chǎn)物，但并不影響常染色體傳遞以及植物正常性狀的轉(zhuǎn)基因小麥新品種。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述載體優(yōu)選地包含與擬南芥端粒重復(fù)序列連接的Ubiquitin啟動(dòng)子。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所用的擬南芥端粒重復(fù)序列為SEQIDN0:4所示的序列。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，本發(fā)明的方法適用于各種小麥，包括普通六倍體小麥，如隴春23。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述載體優(yōu)選地為PWY86-UBI載體，含有本發(fā)明的質(zhì)粒pWY86_UBI的根癌土壤桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)JV3101-pffY86-UBI已經(jīng)在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏日期為2012年I月11日，保藏編號(hào)為CGMCCNo.5708。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)化采用小麥的幼胚進(jìn)行轉(zhuǎn)化。本發(fā)明還涉及通過(guò)本發(fā)明的方法創(chuàng)建的人工小染色體。因此，具體而言，本發(fā)明提供了帶有端粒重復(fù)序列的植物載體PWY86-UBI，其用于小麥轉(zhuǎn)化時(shí)可以在小麥中發(fā)生端粒介導(dǎo)的染色體的切割，進(jìn)而獲得小麥小染色體和帶有小染色體的轉(zhuǎn)基因小麥工程株。本發(fā)明的還提供了在小麥中獲得人工小染色體的方法，該方法包括pWY86-UBI載體轉(zhuǎn)化植物組織，將轉(zhuǎn)化的植物組織培育成植株。所述的轉(zhuǎn)化可通過(guò)基因槍轟擊法進(jìn)行。本發(fā)明還提供了對(duì)所獲得的小麥中的小染色體進(jìn)行檢測(cè)的方法?？梢岳脽晒庠浑s交技術(shù)和/或雙色熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)化植株的染色體切割。本發(fā)明也提供了帶有小麥人工小染色體的轉(zhuǎn)基因小麥工程株，可以利用其進(jìn)行進(jìn)一步的轉(zhuǎn)多基因操作，獲得具有特殊性狀或者可以合成特殊代謝產(chǎn)物，但并不影響常染色體傳遞以及植物正常性狀的轉(zhuǎn)基因小麥新種質(zhì)。本發(fā)明的方法在小麥中構(gòu)建的人工小染色體在有絲分裂中能夠穩(wěn)定存在，利用這些因染色體的切割而產(chǎn)生的小染色體可以容易地進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化等后續(xù)操作。圖I.pffY86-UBI的酶切電泳圖(泳道I:Direct_loadStarMarkerPlus(D2000Plus)Marker;泳道2pffY86-UBI質(zhì)粒的HindIII酶切結(jié)果；泳道4pffY86-5質(zhì)粒的HindIII酶切對(duì)照；圖2.pffY86-UBI的質(zhì)粒示意圖3:圖3a和圖3b.轉(zhuǎn)基因植株T0-3-18；圖4:圖4a和圖4b.轉(zhuǎn)基因植株T0-3-24。生物材料的保藏信息含有本發(fā)明的質(zhì)粒pWY86_UBI的根癌土壤桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)JV3101-pffY86-UBI已經(jīng)在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏日期為2012年I月11日，保藏編號(hào)為CGMCCNo.5708，該保藏單位的地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所具體實(shí)施方式實(shí)施例一·pffY86-UBI載體的改造I.pWY86-UBI的獲得(I)用PWY86質(zhì)粒(參見(jiàn)參考文獻(xiàn)[15])轉(zhuǎn)化大腸桿菌，挑取部分轉(zhuǎn)化子提質(zhì)粒，同時(shí)，設(shè)計(jì)引物(pUbi-AHF/Nost-AHR，見(jiàn)SEQIDNo:1和2)擴(kuò)增pUBI-Bar-Tnos與pEASY-T載體(購(gòu)自北京全式金公司)相連接，同時(shí)引入了Avrll/Hindlll酶切位點(diǎn)。Ubiquitin啟動(dòng)子是一個(gè)在單子葉植物中有較強(qiáng)表達(dá)的啟動(dòng)子，PWY86與T-pUBI-Bar-Tnos同時(shí)進(jìn)行AvrII單酶切(購(gòu)自NEB公司)，T4DNA酶連接(購(gòu)自TAKALA公司)，連接后的載體HindIII單酶切檢測(cè)，表明連接成功(圖I)。pUBI-Bar-Tnos序列見(jiàn)SEQIDNo:3。本實(shí)施例中所用的擬南芥端粒重復(fù)序列見(jiàn)SEQIDNo:4。(2)獲得改造好的PWY86-UBI，作為小麥人工小染色體制備的起始載體(圖2)。含有質(zhì)粒pWY86_UBI的根癌土壤桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)JV3101-pffY86-UBI已經(jīng)在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏日期為2012年I月11日，保藏編號(hào)為CGMCCNo.5708。二.pffY86-UBI載體通過(guò)基因槍遺傳轉(zhuǎn)化春小麥品種隴春23將含有端粒序列的PWY86-UBI載體進(jìn)行基因槍遺傳轉(zhuǎn)化，春小麥品種隴春23用于基因槍轉(zhuǎn)化的受體。(I)供試的春小麥品種為隴春23。開(kāi)花授粉后13-14天從受體小麥隴春23植株(生長(zhǎng)期間溫度條件18_28°C)取未成熟種子(幼胚大小L0-1.2mm)，用70%酒精表面消毒1-2分鐘。15-20%次氯酸鈉滅菌15分鐘，無(wú)菌水沖洗4-5次。作為組織培養(yǎng)和遺傳轉(zhuǎn)化的起始材料。(2)用手術(shù)刀切去胚尖，挑出幼胚后盾片向上接種在SD2(MS+3.0%庶糖+1.Omg/LVB1+2.0mg/L2，4-D+150mg/L天門(mén)冬酰胺，pH5.8)培養(yǎng)基上。25°C黑暗條件下培養(yǎng)7天誘導(dǎo)愈傷組織。(3)將預(yù)培養(yǎng)7天的小麥幼胚愈傷組織轉(zhuǎn)移到MS+3.O%蔗糖+0.2M甘露+1.Omg/LVB1+2.0mg/L2,4-D+150mg/L天門(mén)冬酰胺，pH5.8培養(yǎng)基上高滲處理4-6小時(shí)。(4)基因槍轟擊(IIOOpsi，每槍DNA用量Iμg，金粉用量60μg)后繼續(xù)在高滲處理16-18小時(shí)，然后轉(zhuǎn)回到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，25°C黑暗條件下預(yù)培養(yǎng)14天誘導(dǎo)胚性愈傷組織。(質(zhì)粒濃度為ιμg/ui)(5)將胚性愈傷組織轉(zhuǎn)移到1/2MS+0.5mg/LVBl+0.25mg/LVB6+0.25mg/L煙酸+1.Omg/L甘氛酸+50mg/L肌醇+2.O%鹿糖+5.0mg/LZT+2_5mg/LBialophs篩選2-3次(pH5.8)培養(yǎng)基上，25°C光照條件下分化篩選。(6)將抗性再生芽轉(zhuǎn)移到1/2MS+0.5mg/LVBl+0.25mg/LVB6+0.25mg/L煙酸+1.Omg/L甘氨酸+50mg/L肌醇+2.O%鹿糖+0.3mg/LIAA+0.5mg/LMET(多效唑)培養(yǎng)基上(pH5.8)，25°C光照條件下壯苗。三.在小麥轉(zhuǎn)基因株系中染色體的切割的檢測(cè)I.利用熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因是否發(fā)生轉(zhuǎn)化的植株中，為了檢測(cè)轉(zhuǎn)基因是否發(fā)生，利用pWY96[ll]探針雜交Ttl轉(zhuǎn)基因植株(T0-3-18，T0-3-24，)根尖中期染色體，pWY96包含pWY86除去2.6kb端粒序列的其它序列，熒光原位雜交方法參照AkioKato等所設(shè)計(jì)的方案進(jìn)行[13]，結(jié)果顯示，雜交信號(hào)多位于染色體的末端區(qū)域(圖3a，4a)。2.利用雙色熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)化植株的染色體切割我們對(duì)有轉(zhuǎn)基因信號(hào)的同一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行雙色熒光原位雜交來(lái)定位截短的染色體，所用到的質(zhì)粒為PAsl和pScll9.2[17]，結(jié)果顯示在T0-3-18中，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因信號(hào)位于IA染色體，染色體與正常IA染色體比較明顯發(fā)生了截短。而在T0-3-24中，含轉(zhuǎn)基因信號(hào)的3D染色體發(fā)生了明顯的截短，而含有轉(zhuǎn)基因信號(hào)的5A染色體沒(méi)有發(fā)生截短，在有絲分裂中能夠穩(wěn)定存在。利用這些因染色體的切割而產(chǎn)生的小染色體可以容易地進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化等后續(xù)操作(圖3b，4b)。參考文獻(xiàn)[I]譚向紅.21世紀(jì)初基因工程現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì).四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，20:162-171.TanXH.Currentsatusanddevelopingtendencyofgeneticengineeringinthe21century.JournalofSichuanAgriculturalUniversity,2002,20162-171.(inChinese)[2]李紅梅，王林，陳娟.植物基因工程的應(yīng)用與展望.玉溪師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，2287-90.LiHMiWangLiChenJ.Applianceandprospectofvegetablegeneproject.JournalofYuxiTeachersCollege，2006，22:87_90.(inChinese)[3]YuW，HanFiBirchlerJA.Engineeredminichromosomesinplants.CurrentOpinioninBiotechnology，2007，18:425_431.[4]李晨，閆曉紅，楊潔，楊清，魏文輝.植物人工染色體下一代基因工程的載體.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，44(4)[5]YuW，HanF，GaoZ，VegaJM，BirchlerJA.Constructionandbehaviorofengineeredminichromosomesinmaize.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUSA，2007，104:8924_8929.[6]RichardsEJ，AusubelFMisolationofahighereukaryotictelomerefromArabidopsisthaliana.Cell1988，53:127_136[7]CrossSH,AllshireRC，McKaySJ，McGillNI，CookeHJCloningofhumantelomeresbycomplementationinyeast.Nature1989，338:771_774[8]BrownWRMolecularcloningofhumantelomeresinyeast.Nature1989，338774-776[9]FarrC，F(xiàn)antesJ，GoodfellowP，CookeHFunctionalreintroductionofhumantelomeresintomammaliancells.ProcNatlAcadSciUSA1991，88:7006_7010[10]BarnettMA,BuckleVJ,EvansEP,PorterAC，RoutD，SmithAG，BrownWRTelomeredirectedfragmentationofmammalianchromosomes.NucleicAcidsRes1993，2127-36[II]DuncanA，HadlaczkyG.Chromosomalengineering.CurrOpinBiotechnol，2007，18(5)420-424.[D0I][12]CarlsonSR，RudgersGW,ZielerH，MachJM，LuoS，GrundenE，KrolC，CopenhaverGP，PreussD.Meiotictransmissionofaninvitro-assembledautonomousmaizeminichromosome.PlosGenetics，2007，3:1965_1974.[13]AnanievEV,WuC,ChamberlinMA,SvitashevS,SchwartzC,Gordon-KammW,TingeyS.Artificialchromosomeformationinmaize(ZeamaysL)·Chromosoma，2009，118157-177.[14]YuW,HanF，GaoZ，VegaJM，BirchlerJA.Constructionandbehaviorofengineeredminichromosomesinmaize.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUSA，2007，104:8924_8929.[15]YuW，LambJC，HanF，BirchlerJA.Telomere-mediatedchromosomaltruncationinmaize.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUSA，2006，10317331-17336.[16]CheeHT，LuM，etal.Inductionoftelomere-mediatedchromosomaltruncationandtabilityoftruncatedchromosomesinArabidopsisthaliana.ThePlantJournal(2011)，doi10.1111/j.1365-313X.2011.04662.x[17]C.Pedersen,P.Langridge.Identificationoftheentirechromosomecomplementofbreadwheatbytwo-colourFISH，Genome，1997，589—59權(quán)利要求1.在小麥中創(chuàng)建人工小染色體的方法，所述方法包括用含有擬南芥端粒重復(fù)序列的載體轉(zhuǎn)化小麥，所述擬南芥端粒重復(fù)序列在小麥中導(dǎo)致端粒介導(dǎo)的染色體的切割。2.對(duì)權(quán)利要求I中的人工小染色體進(jìn)行檢測(cè)的方法，其中利用熒光原位雜交技術(shù)和/或雙色熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)化植株的染色體切割。3.產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因小麥的方法，所述方法包括用含有擬南芥端粒重復(fù)序列的載體轉(zhuǎn)化小麥，所述擬南芥端粒重復(fù)序列在小麥中導(dǎo)致端粒介導(dǎo)的染色體的切割。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中進(jìn)一步包括轉(zhuǎn)基因操作，以獲得轉(zhuǎn)基因小麥新種質(zhì)。5.小麥育種的方法，所述方法包括根據(jù)權(quán)利要求I的方法在小麥中創(chuàng)建人工小染色體的步驟。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述載體包含與擬南芥端粒重復(fù)序列連接的Ubiquitin啟動(dòng)子。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述擬南芥端粒重復(fù)序列為SEQIDNO4所示的序列。8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述載體優(yōu)選為PWY86-UBI載體。9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)化采用小麥的幼胚進(jìn)行轉(zhuǎn)化。10.人工小染色體，其通過(guò)權(quán)利要求1、4、6-9中任一項(xiàng)的方法獲得。全文摘要本發(fā)明提供小麥人工染色體。本發(fā)明還提供構(gòu)建小麥人工染色體的方法。在本發(fā)明的方法中，用含有擬南芥端粒重復(fù)序列的載體轉(zhuǎn)化小麥，所述擬南芥端粒重復(fù)序列在小麥中導(dǎo)致端粒介導(dǎo)的染色體的切割，從而在小麥中創(chuàng)建人工小染色體。本發(fā)明還提供了對(duì)所獲得的小麥中的人工小染色體進(jìn)行檢測(cè)的方法，本發(fā)明還提供了小麥育種的方法，以及人工小染色體技術(shù)在小麥中的應(yīng)用。本發(fā)明的方法在小麥中構(gòu)建的人工小染色體在有絲分裂中能夠穩(wěn)定存在，利用這些因染色體的切割而產(chǎn)生的小染色體可以容易地進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化等后續(xù)操作。文檔編號(hào)C12N15/29GK102925477SQ20121001156公開(kāi)日2013年2月13日申請(qǐng)日期2012年1月13日優(yōu)先權(quán)日2012年1月13日發(fā)明者韓方普,呂振玲,符書(shū)蘭,胡贊民,宋麗英,裴熙祥申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所