專利名稱：一種甜菜夜蛾病毒原藥的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及病毒原藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及ー種甜菜夜蛾病毒原藥的高效制備方法，適用于昆蟲病毒生物農(nóng)藥制備及生物防治。
背景技術(shù)：
甜菜夜蛾(Beetarmyworm)學名 Spodoptera exigua Hiibner 俗稱白菜褐夜蛾，隸屬于鱗翅目、夜蛾科，是ー種世界性分布、間歇性大發(fā)生的以危害蔬菜為主的雜食性害蟲。對大蔥、甘藍、大白菜、芹菜、菜花、胡蘿卜、蘆筍、蕹菜、莧菜、辣椒、豇豆、花椰菜、茄子、芥蘭、番茄、菜心、小白菜、青花菜、菠菜、蘿卜等蔬菜都有危害。甜菜夜蛾的發(fā)生規(guī)律、危害特點初齡幼蟲在葉背群集吐絲結(jié)網(wǎng)，食量小，3齡后，分散為害，食量大增，晝伏夜出，危害葉片成孔缺刻，嚴重時，可吃光葉肉，僅留葉脈，甚至剝食莖桿皮層。幼蟲可成群遷飛，稍受震擾吐絲落地，有假死性。3-4齡后，白天潛于植株下部或土縫，傍晚移出取食為害。一年發(fā)生6-98代，7-8月發(fā)生多，高溫、干旱年份更多，常和斜紋夜蛾混發(fā)，對葉菜類威脅甚大。近年來，隨著全球氣候變暖和其它因素的影響，甜菜夜蛾的發(fā)生和危害呈逐年加重的趨勢。甜菜夜蛾病毒是ー種新型活體病毒殺蟲劑，其殺蟲機理是病毒經(jīng)害蟲取食后直接作用于害蟲幼蟲的脂肪體和中腸細胞核，并迅速復制，導致幼蟲染病死亡。甜菜夜蛾感染病毒后，很快體色由青綠色逐漸變?yōu)辄S緑色，最后變?yōu)榛野咨w節(jié)腫脹，食欲不振，直至死亡，死亡后表皮脆弱，容易液化。該病毒通過病蟲糞便及死蟲感染其他健康甜菜夜蛾，在田間引起“瘟疫”，導致大量幼蟲死亡。該病毒專ー性強，只對靶標害蟲有效，不影響害蟲的天故，不污染環(huán)境，持效期長，是防治目標害蟲的主要生物制劑之一，安全環(huán)保，不殺傷害蟲天故，如草蛉、瓢蟲、馬蜂等，從而達到長期有效控制害蟲種群增長的目的，持效期長達10-15天。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在于提供了一種機械化高效制備甜菜夜蛾病毒原液的方法。方法易行，操作簡便，效率高(是手工エ效的6-8倍)、大幅度減少勞動強度和重復勞動；成本低、投入小，工具簡單易操作。為達到上述的目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施一種甜菜夜蛾病毒原藥的機械化高效制備方法，其步驟是(I)健康甜菜夜蛾幼蟲飼養(yǎng)；將甜菜夜蛾蛹放入產(chǎn)卵箱內(nèi)羽化、產(chǎn)卵，收集產(chǎn)卵紙消毒后，放入孵化器內(nèi)孵化，用優(yōu)選法挑出健壯的幼蟲于人工飼料盤中，每孔2條幼蟲。
(2)制備甜菜夜蛾病毒感染液；將挑選的典型病死蟲經(jīng)研磨、過濾、離心提純(鏡檢無雜質(zhì))后裝入容器內(nèi)作病毒原液置冰箱保存。用血球計數(shù)方法測定病毒原液濃度，用公式原液濃度+所需濃度-I =稀釋倍數(shù)制備5萬PIB/毫升的感染液。(3)人工飼料定量接種病毒；將制備好的病毒感染液用感染器械以每孔0. 05ml的劑量噴入幼蟲飼料盤。
(4)以人工飼料一定比例(0.5-lg飼料/蟲)投放適齡幼蟲至飼料盤內(nèi)；(5)恒溫(23_25°C )、恒濕(60_70% )培養(yǎng)72小時后將帶病幼蟲集中收獲至另一容器內(nèi)任其液化死亡；(6)待其完全死亡后收至冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩Ｗ鳛閮?yōu)選方案，其中所述甜菜夜蛾病毒感染液濃度為5萬PIB/毫升。作為優(yōu)選方案，其中所述定量接種病毒的量為10毫升(200頭甜菜夜蛾幼蟲為標準)。作為優(yōu)選方案，其中所述人工飼料按一定比例投放，此比例為O. Sg飼料/蟲。作為優(yōu)選方案，其中所述集中收集器為真空收集器；作為優(yōu)選方案，其中所述冰箱保存溫度為4°C左右。本發(fā)明具有以下有益效果本發(fā)明根據(jù)甜菜夜蛾幼蟲在感染病毒死亡后表皮脆弱容易液化不好收集的特點，特發(fā)明了一套用于專門機械化高效收集甜菜夜蛾病毒的方法便于得到大量的感病幼蟲，讓其在收集器內(nèi)直接液化從而獲得高含量的病毒原液，因此，本發(fā)明的高效制備甜菜夜蛾病毒的方法在獲得大量甜菜夜蛾病毒原液的同時減少了勞動強度和重復勞動；成本低、投入小工具簡單易操作；并可獲得高達200億PIB/克的病毒原液，為制備病毒原藥節(jié)省時間和成本，是手工工藝工效的6-8倍。每次收集的病毒含量可達到200億PIB/克是原手工工藝的四倍，且純度高。本發(fā)明效率高、大幅度減少勞動強度和重復勞動；成本低、投入小工具簡單易操作，通過多少試驗解決了甜菜夜蛾病毒生產(chǎn)的瓶頸。用機械收集感病幼蟲速度是手工收集速度的6-8倍。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進一步描述。實施例I :一種甜菜夜蛾病毒原藥的機械化高效制備方法，其步驟是A、健康甜菜夜蛾幼蟲飼養(yǎng)；將甜菜夜蛾蛹放入產(chǎn)卵箱內(nèi)羽化、產(chǎn)卵，收集產(chǎn)卵紙消毒后，放入孵化器內(nèi)孵化，用優(yōu)選法挑出健壯的幼蟲于人工飼料盤中，每孔2條幼蟲。B、制備甜菜夜蛾病毒感染液；將挑選的典型病死蟲經(jīng)研磨、過濾、離心提純(鏡檢無雜質(zhì))后裝入容器內(nèi)作病毒原液置冰箱保存。用血球計數(shù)方法測定病毒原液濃度，用公式原液濃度+所需濃度-I =稀釋倍數(shù)制備5萬PIB/毫升的感染液。C、人工飼料定量接種病毒；(將制備好的病毒感染液用感染器械以每孔O.05ml的劑量噴入幼蟲飼料盤)D、以人工飼料一定比例(O. 5-lg飼料/蟲)投放適齡幼蟲至容器內(nèi)；E、恒溫23_25°C )、恒濕(60-70% )培養(yǎng)72小時后將帶病幼蟲集中收獲至另一容器內(nèi)任其液化死亡；F、待其完全死亡后收至冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?br> 實施例2 (I)健康甜菜夜蛾幼蟲飼養(yǎng)；(2)制備甜菜夜蛾病毒感染液5萬PIB/毫升；(3)人工飼 料定量接種病毒10暈升；(4)以人工飼料O. 8克飼料/蟲投放適齡幼蟲至容器內(nèi)；(5)恒溫、恒濕培養(yǎng)72小時后將帶病幼蟲用真空收集器集中收獲至另一容器內(nèi)任其液化死亡；(6)待其完全死亡后收至冰箱內(nèi)4°C保存?zhèn)溆?。表I :不同方法生產(chǎn)甜菜夜蛾病毒效果對照表
方法收集效果(億PIB/克)I用時
手動收集5012小時
真空收集器收集 2001-2小時從表I中可以看出，用真空收集器收集的甜菜夜蛾病毒濃度達到200億PIB/克，是手工收集的4倍，用時是手工收集的6倍。以上僅為本發(fā)明所列舉的較佳實施例，并非用以限制本發(fā)明的保護范圍，所屬技術(shù)領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員運用本發(fā)明所作的等效修飾或變化，均同理應(yīng)屬于本發(fā)明的專利保護范圍。
權(quán)利要求
1.一種甜菜夜蛾病毒原藥的制備方法，其步驟是 (1)健康甜菜夜蛾幼蟲飼養(yǎng)；將甜菜夜蛾蛹放入產(chǎn)卵箱內(nèi)羽化、產(chǎn)卵，收集產(chǎn)卵紙消毒后，放入孵化器內(nèi)孵化，挑出的幼蟲于人工飼料盤中，每孔2條幼蟲； (2)制備甜菜夜蛾病毒感染液；將挑選的病死蟲經(jīng)研磨、過濾、離心提純后裝入容器內(nèi)作病毒原液置冰箱保存，用血球計數(shù)方法測定病毒原液濃度，用公式原液濃度+所需濃 度一 1=稀釋倍數(shù)制備5萬PIB/毫升的感染液； (3)人工飼料定量接種病毒；將制備好的病毒感染液用感染器械以每孔0.05ml的劑量噴入幼蟲飼料盤； (4)以人工飼料一定比例0.5-lg飼料/蟲投放適齡幼蟲至飼料盤內(nèi)； (5)恒溫23-25°C、恒濕60—70%培養(yǎng)72小時后將帶病幼蟲集中收獲至另一容器內(nèi)任其液化死亡； (6 )待其完全死亡后收至冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?br> 全文摘要
本發(fā)明公開了一種甜菜夜蛾病毒原藥的制備方法，其步驟是(1)健康甜菜夜蛾幼蟲飼養(yǎng)；(2)制備甜菜夜蛾病毒感染液；(3)人工飼料定量接種病毒；(4)以人工飼料一定比例投放適齡幼蟲至容器內(nèi)；(5)恒溫、恒濕培養(yǎng)72小時后將帶病幼蟲集中收獲至另一容器內(nèi)任其液化死亡；(6)待其完全死亡后收至冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。每次收集的病毒含量可達到200億PIB/克是原手工工藝的四倍，且純度高。本發(fā)明方法易行，操作簡便，效率高、大幅度減少勞動強度和重復勞動；成本低、投入小,工具簡單易操作。通過多少試驗解決了甜菜夜蛾病毒生產(chǎn)的瓶頸。用機械收集感病幼蟲速度是手工收集速度的6-8倍。
文檔編號C12N7/00GK102613248SQ20121005131
公開日2012年8月1日 申請日期2012年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月1日
發(fā)明者萬福芳, 陳嬌 申請人:武漢武大綠洲生物技術(shù)有限公司